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    Práctica 2 Preparados Biología

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    Christopher Cardenas
    Este documento describe dos tipos de preparaciones microscópicas: preparados en fresco y preparados en seco. Los preparados en fresco permiten observar muestras vivas sin tratamiento, mientras que los preparados en seco requieren fijación y tinción para estudiar detalles morfológicos con objetivos de inmersión. El documento explica los pasos para realizar ambos tipos de preparaciones y sus diferencias en términos de muestras, objetivos utilizados, almacenamiento y uso de colorantes.

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    Este documento describe dos tipos de preparaciones microscópicas: preparados en fresco y preparados en seco. Los preparados en fresco permiten observar muestras vivas sin tratamiento, mientras que los preparados en seco requieren fijación y tinción para estudiar detalles morfológicos con objetivos de inmersión. El documento explica los pasos para realizar ambos tipos de preparaciones y sus diferencias en términos de muestras, objetivos utilizados, almacenamiento y uso de colorantes.

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    Preparaciones microscópicas

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    Este documento describe dos tipos de preparaciones microscópicas: preparados en fresco y preparados en seco. Los preparados en fresco permiten observar muestras vivas sin tratamiento, mientras que los preparados en seco requieren fijación y tinción para estudiar detalles morfológicos con objetivos de inmersión. El documento explica los pasos para realizar ambos tipos de preparaciones y sus diferencias en términos de muestras, objetivos utilizados, almacenamiento y uso de colorantes.

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    Christopher Cardenas
    Este documento describe dos tipos de preparaciones microscópicas: preparados en fresco y preparados en seco. Los preparados en fresco permiten observar muestras vivas sin tratamiento, mientras que los preparados en seco requieren fijación y tinción para estudiar detalles morfológicos con objetivos de inmersión. El documento explica los pasos para realizar ambos tipos de preparaciones y sus diferencias en términos de muestras, objetivos utilizados, almacenamiento y uso de colorantes.

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    UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

    FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

    ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

    PRÁCTICA 2

    PREPARACIONES MICROSCÓPICAS

    Estudiante : Cardenas Palacios, Jose Luis Christopher

    Ccanto Cmacllanqui, Keico Julissa

    Nuñez Llantoy, Ricardo Miguel

    Vilcahuaman Huanca, Ada Venecia

    Cátedra : Biología Celular y Molecular

    Docentes : Dra. Custodio Villanueva, María

    Dr. Huaraca Meza, Fisher

    Año académico : 2020 – I

    Ciclo : Tercero

    Huancayo, 2020
    PRÁCTICA 2
    PREPARACIONES MICROSCÓPICAS
    OBJETIVOS:
    ● Conocer las diferentes preparaciones microscópicas de uso más frecuente
    ● Diferenciar un preparado en fresco de un preparado en seco.
    ● Valorar la importancia que tienen estos tipos de preparaciones en la
    identificación de muestras biológicas.

    SOPORTE TEÓRICO:

    Preparado en fresco:

    El preparado en fresco es la forma más simple de preparado para el examen


    microscópico, este preparado no necesita un tratamiento en el que se maten las
    células (como es la fijación o la inclusión), sirve para poder observar
    microorganismos vivos.

    El preparado fresco comprende ciertos pasos:

    1. Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro del


    portaobjetos con la ayuda de una pipeta.
    2. Y si la muestra es sólida colocamos primero unas gotas de agua destilada o
    de solución salina sobre el portaobjetos y a continuación un fragmento de la
    muestra con la ayuda de unas pinzas.
    3. Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus lados
    sobre el portaobjetos de modo que forme un ángulo de aproximadamente 45
    grados.
    4. A continuación, podemos soltar con cuidado el cubreobjetos de modo que
    quede colocado sobre el líquido que hemos depositado anteriormente.
    (Mediante este procedimiento se evita la formación de burbujas dentro de la
    muestra).
    5. En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos
    podemos eliminarlo mediante papel absorbente.

    Se puede distinguir dos técnicas de preparados en fresco según el tiempo de


    conservación.

    Técnica de montaje húmedo o en fresco simple: que consiste en colocar una gota
    de líquido con los microorganismos sobre un portaobjetos y a continuación cubrirla
    con un cubreobjetos.
    http://biologialuiscasta.blogspot.com/2011/09/laboratorio-observacion-de-celulas.htm​l

    Técnica de la gota pendiente: se realiza colocando una gota del material en un


    cubreobjetos y cubriéndolo con un portaobjetos excavado centralmente(portaobjetos
    excavado); después se debe que sellar la preparación con vaselina alrededor de la
    excavación, la ventaja de esta técnica, es que la muestra puede ser observada
    durante un tiempo más largo.

    http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_directo.htm​l

    Preparado en seco:

    El preparado en seco se caracteriza por:


    1. Entre el lente del objetivo de inmersión y la muestra existe aceite de
    inmersión, un líquido transparente de alto índice refractivo, que se usa para
    obtener imágenes con alto grado de resolución. Se basa que los índices de
    refracción de estos tres elementos sean casi iguales. El aceite de inmersión
    más habitual es aceite de cedro.
    2. La muestras susceptibles a observación han recibido un procesamiento
    previo:La fijación en el medio de montaje y tinción; así como el posterior
    montaje en un portaobjetos que estará cubierto por un cubreobjetos para
    mantener la muestra mayor tiempo o permanentemente.
    3. Se realizan cuando se necesita conocer detalles morfológicos de
    microorganismos que en preparaciones en fresco presentan dificultades
    para su observación, debido al índice de refracción semejante al medio de
    montaje y transparencia.
    4. Se ayuda de dos modalidades: La extensión y el frotis de muestras fijadas y
    teñidas.

    Los pasos para el manejo de microscopio y el objetivo de inmersión:

    Se baja totalmente la platina, para evitar el choque con el objetivo,abrimos el


    condensador para visualizar de forma clara y nítida el círculo que se ilumina en la
    muestra, este círculo indicará el área para la aplicación de solo una gota del aceite
    de inmersión. Se gira el revólver hasta quedar en la posición media entre el objetivo
    de inmersión y el anterior, para aplicar el aceite fácilmente.
    Posicionar el revólver para colocar el objetivo de inmersión, observando desde fuera
    del microscopio, acercamos la platina al objetivo hasta que la lente frontal del
    objetivo entre en contacto con el aceite de inmersión. Este acercamiento debe ser
    lento y en cuento el aceite y la lente entren en contacto se detiene el acercamiento.
    Al observar a través del ocular, se enfoca la muestra con el tornillo micrométrico
    hasta verla con claridad. Cuando finalizamos la observación de la preparación y
    queramos retirarla, primero se debe bajar la platina y girar el revólver para dejar el
    objetivo de menor aumento en posición de trabajo. Esta acción permite retirar la
    preparación con menor riesgo de dañar algún objetivo y de forma más cómoda.
    Finalmente, antes de guardar el microscopio, limpiamos el objetivo de inmersión y
    los oculares con papel especial que absorba el aceite y evite rayar la lente.
     

    Extensión:

    Es el deslizamiento que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo


    con el objetivo de separar lo más posible los microorganismos, porque si aparecen
    agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. La
    extensión de la muestra sobre el portaobjetos se hará de diferentes maneras,
    depende de la procedencia de la muestra a examinar. Si es líquida, se deposita
    una pequeña cantidad del material en el centro del portaobjetos y se extiende con
    otro portaobjetos hasta conseguir una capa fina y homogénea. Si el material de
    estudio es sólido, se usará en una gota de agua destilada o solución salina estéril,
    colocado en el centro del portaobjetos, y se extiende de la misma forma que una
    muestra líquida.
    Los pasos que se deben tener en cuenta son los siguientes:
    1. Colocar una gota de agua estancada (muestra) sobre el centro de un
    portaobjetos estéril
    2. Realizar la extensión mediante el asa de platino estéril o un palillo
    mondadientes estéril.
    3. Cubrir la muestra con un cubreobjetos estéril.
    4. Fijar el preparado a temperatura ambiente o al calor del mechero, pasándolo
    2 o 3 veces por la llama; esto determinará que la muestra quede firmemente
    adherida a la lámina porta objetos. Tiene el objetivo de que la muestra no se
    pierda en el proceso de tinción.
    5. Añadir un colorante ácido o básico (principalmente la tinción GRAM) por un
    tiempo de 1 a 3 minutos
    6. Lavar, ​procurando que el chorro no caiga con fuerza sobre la preparación y
    secar al aire o mediante absorción con papel.
    7. Observar al microscopio, con objetivo de inmersión (de preferencia),
    utilizando una gota de aceite de cedro.

    Frotis:

    Se denomina frotis a la extensión de una muestra de fluido corporal (animal o


    humana) sobre un portaobjeto formando una capa muy fina lo que permite su
    estudio clínico mediante un ​microscopio​.

    En cuanto al frotis de sangre, se utiliza para la identificación de las cantidades


    relativas de leucocitos circulantes, al igual que eritrocitos y trombocitos. Además,
    los frotis de sangre también se utilizan para detectar parásitos de la sangre tales
    como Babesia, Anaplasma y Trypanosoma.

    Los pasos a realizar son los siguientes:

    1. Se coloca una pequeña gota de sangre con una micropipeta o tubo capilar en
    un extremo del portaobjeto limpio.
    2. Se extiende la gota a través de la corredera utilizando otro portaobjeto a un
    ángulo de 45º con un movimiento ligeramente rápido, uniforme y de una sola
    pasada, evitando así coagulaciones; esto nos permitirá obtener una capa
    uniforme individual de los elementos formes de la sangre.
    3. Realizar el secado al aire y temperatura ambiente.
    4. Teñir con un colorante neutro, que por lo general se utiliza la tinción de wright
    5. Finalmente se lavar con suficiente cantidad de agua y se seca. Este
    preparado se observará al microscopio con un objetivo de inmersión.

    El mejor sitio para estudiar la estructura de las células sanguíneas es el borde más
    delgado del frotis donde los eritrocitos están en una monocapa, uno al lado del
    otro, apenas tocándose pero sin encimarse. Un método es observar primero a los
    elementos celulares más pequeños, las plaquetas e ir avanzando en tamaño hacia
    los eritrocitos y luego los leucocitos.
    RESULTADOS:

    PREPARADO EN PREPARADO EN SECO


    FRESCO

    DEFINICIÓN Preparado microscópico Preparado microscópico


    para ​observar para observar los detalles
    microorganismos vivos. morfológicos de
    microorganismos con
    mayor detenimiento.

    ¿QUÉ OBJETIVOS EN Depende de la muestra Objetivo de inmersión


    EL MICROSCOPIO SE 10x y 40x 100x
    USAN? El más alto

    ¿CÓMO ESTÁ LA Viva Muerta


    MUESTRA EN LA Microorganismos que se Ha pasado por procesos
    OBSERVACIÓN? desenvuelven en su de fijación y tinción
    medio

    ¿SE PUEDE No Sí
    ALMACENAR ?

    ¿USA COLORANTES? Sí: Sí


    Azul de metileno Extensión: Tinción GRAM
    Verde Jano Frotis: Tinción Wright
    Rojo Congo
    Rojo neutro

    EJEMPLOS ​Trichomonas vaginalis Frotis sanguíneo


    VISTA AL
    MICROSCOPIO ÓPTICO

    http://biologialuiscasta.blogspot.com/20
    11/09/laboratorio-observacion-de-celula
    s.html

    http://campus.usal.es/~micromed/Pr
    acticas_odontologia/unidades/labv/La
    bMicro/Diag_directo.html

    CONCLUSIONES:

    Existen diversas preparaciones microscópicas, esenciales para observar


    microorganismos y sus respectivas estructuras,las de uso más frecuente son las de
    preparado en fresco y en seco.
    El preparado en fresco se emplea para observar la movilidad, tamaño y forma de
    agrupación de los microorganismos en su estado natural. El inconveniente de la
    observación en fresco es que no permite aumentar el contraste de la preparación;
    por tanto, su uso, con un microscopio óptico de campo claro. Además de que al ser
    manipulada se corre el riesgo de perder la muestra, ya que no está adherida
    fijamente a la superficie del portaobjetos.
    El preparado en seco permite observar microorganismos sin movimientos, pero con
    mayor detalle de su estructura y morfología, además la tinción mejora
    considerablemente el contraste. Aunque, la muestra presenta un ligero
    encogimiento de la célula y requiere de una muy delgada capa para observarse
    mejor, las imágenes presentan una notoria resolución. Dentro de los preparados en
    seco encontramos dos modalidades de trabajo: extensión, el deslizamiento de una
    muestra (mayormente bacteriana); y el frotis, que tiene la finalidad de cuantificar
    generalmente los elementos sanguíneos.
    Por lo visto, muchos microorganismos requieren de una preparación especial antes
    de ser examinados en un microscopio óptico; esto es debido a que poseen poco
    contraste natural. Entonces, las preparaciones microscópicas son fundamentales si
    se desean obtener imágenes óptimas para su observación y posterior estudio.
    BIBLIOGRAFÍA:

    ● https://curiosoando.com/como-utilizar-el-microscopio-optico
    ● https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35695/preparacion_de
    _un_frotis_bacteriano.pdf
    ● https://biologiacomociencia.weebly.com/elaboracioacuten-de-preparacio
    nes-microscoacutepicas.html
    ● https://www.mundomicroscopio.com/preparacion-de-muestras/
    ● http://aulavirtual.usal.es/aulavirtual/demos/microbiologia/unidades/docu
    men/uni_02/56/cap304.htm
    ● https://es.scribd.com/document/268981766/PREPARADOS-MICROSCOPI
    COS-EN-FRESCO-Y-EN-SECO-pdf

    ANEXOS:

    Reunión a través de la plataforma Zoom


    Interacción por la plataforma de Drive

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