UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA ORGÁNICA

CURSO: PRODUCTOS NATURALES

TRABAJO DE LABORATORIO N° 6

Metabolitos secundarios en plantas

marinas

PROFESOR: Nino Castro, Mandujano

ALUMNOS: Jimenez Zarate, Angelica Jasmin 16070084
Aliaga Cerron, Jhonny Roger 14070066

2021-0
Tabla de contenido
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 3
PARTE EXPERIMENTAL .............................................................................................. 6
Clasificación taxonómica ............................................................................................. 6
Proceso de Recolección ................................................................................................ 6
Proceso de Extracción .................................................................................................. 6
Proceso de Separación .................................................................................................. 6
Análisis Espectroscópico .............................................................................................. 7
Condiciones de equipo ................................................................................................. 7
RESULTADOS Y DISCUSIÓN ...................................................................................... 8
Análisis Espectroscópico .............................................................................................. 9
BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................ 12
INTRODUCCIÓN
El conjunto de reacciones químicas que tienen lugar en un organismo constituye el
metabolismo. La mayor parte del carbono, del nitrógeno y de la energía termina en
moléculas comunes a todas las células, necesarias para su funcionamiento y el de los
organismos. Se trata de aminoácidos, nucleótidos, azúcares y lípidos, presentes en todas
las plantas y desempeñando las mismas funciones. Se denominan metabolitos primarios
(Fig. 1). Pero a diferencia de otros organismos, las plantas destinan una cantidad
significativa del carbono asimilado y de la energía a la síntesis de una amplia variedad de
moléculas orgánicas que no parecen tener una función directa en procesos fotosintéticos,
respiratorios, asimilación de nutrientes, transporte de solutos o síntesis de proteínas,
carbohidratos o lípidos, y que se denominan metabolitos secundarios (también
denominados productos secundarios, productos naturales) (Fig. 2). Los metabolitos
secundarios además de no presentar una función definida en los procesos mencionados,
difieren también de los metabolitos primarios en que ciertos grupos presentan una
distribución restringida en el reino vegetal, es decir, no todos los metabolitos secundarios
se encuentran en todos los grupos de plantas. Se sintetizan en pequeñas cantidades y no
de forma generalizada, estando a menudo su producción restringida a un determinado
género de plantas, a una familia, o incluso a algunas especies.

Figura 1. Elementos básicos del metabolismo primario y en relación con el metabolismo secundario de plantas.
Algunos productos del metabolismo secundario tienen funciones ecológicas específicas
como atrayentes o repelentes de animales. Muchos son pigmentos que proporcionan color
a flores y frutos, jugando un papel esencial en la reproducción atrayendo a insectos
polinizadores, o atrayendo a animales que van a utilizar los frutos como fuente de
alimento, contribuyendo de esta forma a la dispersión de semillas. Otros compuestos
tienen función protectora frente a predadores, actuando como repelentes, proporcionando
a la planta sabores amargos, haciéndolas indigestas o venenosas. También intervienen en
los mecanismos de defensa de las plantas frente a diferentes patógenos, actuando como
pestici das naturales.

Figura 2. Origen de algunos metabolitos secundarios (alcaloides, fenilpropanoides y terpenos) en el

metabolismo primario.

La estructura química entre unos y otros a veces es muy parecida. Es el caso del ácido
kaurenoico y la prolina, metabolitos primarios, mientras que los ácidos abiético y
pipecólico, compuestos muy relacionados estructuralmente con ellos, son metabolitos
secundarios (Fig. 3).
Por otro lado, la distinción entre ambos tipos es difusa en ocasiones si tenemos en cuenta
que la biosíntesis de muchos de ellos comparte numerosos intermediarios que derivan de
las mismas rutas metabólicas. Por lo tanto, la diferenciación entre metabolitos primarios
y secundarios puede no ser del todo adecuada. Las principales rutas de biosíntesis de
metabolitos secundarios derivan del metabolismo primario del carbono (Fig. 4).
Es importante destacar que también reciben la denominación de productos naturales y
tienen un importante y significativo valor medicinal y económico, derivado éste último
de su uso en la industria cosmética, alimentaria, farmacéutica. Un gran número de estos
productos naturales, que ya se usaban en la medicina antigua como remedios para
combatir enfermedades, se utilizan en la actualidad como medicamentos, resinas, gomas,
potenciadores de sabor, aromas, colorantes, etc.

Figura 3. Similitud en la estructura química de prolina y ácido kaurenoico con los

ácidos abiótico y pipecólico, ambos productos secundarios.

Se agrupan en cuatro clases principales.

❑ Terpenos. Entre los que se encuentran hormonas, pigmentos o aceites esenciales.
❑ Compuestos fenólicos. Cumarinas, flavonoides, lignina y taninos.
❑ Glicósidos. Saponinas, glicósidos cardiacos, glicósidos cianogénicos y
glucosinolatos.
❑ Alcaloides.

Figura 4. Elementos del metabolismo del carbono en relación con las rutas de síntesis
de metabolitos secundarios.
PARTE EXPERIMENTAL

Tomado del articulo “ EXTRACCIÓN, SEPARACIÓN Y ELUCIDACIÓN

ESTRUCTURAL DE DOS METABOLITOS SECUNDARIOS DEL ALGA MARINA
Bostrychia calliptera”
Clasificación taxonómica

❑ Reino: Plantae
❑ Filo: Rhodophyta
❑ Clase: Florideophyceae
❑ Orden: Ceramiales
❑ Familia: Rhodomelaceae
❑ Género: Bostrychia
❑ Especie: Bostrychia calliptera
Figura 5. Bostrychia calliptera

Proceso de Recolección

Las muestras de B. calliptera, fueron recolectadas en la Bahía de Buenaventura (Valle

del Cauca, Colombia) entre los meses de Junio a Agosto de 2003. Las muestras se lavaron
con agua desmineralizada y se envolvieron en toallas de papel humedecido con agua
desmineralizada, se empacaron en bolsas de polietileno y se transportaron al laboratorio
de biología marina de la Universidad del Valle para su identificación y conservación a
una temperatura de -6 ºC hasta el momento de su extracción.
Proceso de Extracción

Las muestras fueron transportadas al laboratorio de Química de Productos Naturales de

la Universidad del Cauca donde 5 kg. de Bostrychia calliptera recolectados fueron
secados a una temperatura de 40 ºC, obteniéndose 2 kg. de alga secos, los cuales se
sometieron a un proceso de extracción con una mezcla de etanol:agua (90:10). El extracto
etanolico:agua (29.775g) se fraccionó inicialmente con hexano (4x100 mL) (7.735 g),
luego con cloruro de metileno (4x500 mL) (9.965 g) y finalmente con etanol (3.900 g).
Teniendo en cuenta la cantidad de muestra obtenida en la fracción de cloruro de metileno
se decide abordar su separación.
Proceso de Separación

La fracción de cloruro de metileno (9.897 g) fue fraccionada por cromatografía líquida

en columna (CC) sobre Gel de silice usando como fase móvil hexano, acetato de etilo y
etanol, con elución en gradiente, obteniendo: 1.084 g de subfracción de hexano (SFCH),
4.1700 g de subfracción de acetato de etilo (SFCAE) y 0.735 g de subfracción de etanol
(SFCE). La subfracción de acetato de etilo presentó en cromatografía en capa fina (CCF)
desarrolla con fase móvil hexano: acetal de etilo (7:5) la mayor cantidad de compuestos;
igualmente se llevaron a cabo pruebas fitoquímicas preliminares indicando la presencia
de terpenos, saponinas y taninos. 1.577g de SFCAE se fraccionaron sobre Gel de sílice
mediante elución en gradiente empleando como solventes hexano, acetona, acetato de
etilo y etanol en diferentes proporciones, obteniéndose ocho subfracciones.
Posteriormente, dos de ellas fueron sometidas a dos fraccionamientos bajo similares
condiciones obteniéndose las fracciones SFCAE6,9,6 (13.4 mg , compuesto 1) y SFCAE6*-
4 (6.60 mg, compuesto 2).
Análisis Espectroscópico

Los compuestos 1 y 2 purificados a través de cromatografía en columna fueron llevados

a sequedad, rotulados y empacados bajo atmósfera de nitrógeno. Estos fueron enviados a
la Universidad de Santiago de Compostela (España) para el análisis espectroscópico de
RMN mono y bidimensional.

Condiciones de equipo

Equipo Espectrómetro Bruker AMX-400 MHz usando secuencia de pulsos estándar

Como solvente de referencia para el análisis espectroscópico se empleó CDCl3

Condiciones
cuyas resonancias características son (H 7.25, C 77.0).
Los compuestos fueron separados a través de cromatografía líquida en
Condiciones columna utilizando como fas e estacionaria Gel de sílice (Typ 60) y elución
en modo gradiente

Figura 6. Espectrómetro Bruker AMX-400 MHz

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Del proceso de extracción del alga Bostrychia calliptera se obtuvo tres fracciones de
diferente polaridad: apolar (hexano), medianamente polar (cloruro de metileno) y polar
(etanol). Sin embargo, en éste estudio se considera la fracción de cloruro de metileno para
llevar a cabo el proceso de separación y purificación.
La separación de la fracción de cloruro de metileno a través de gel de sílice, empleando
hexano, acetato de etilo y etanol como fase móvil dio origen a tres subfracciones.
Se continuó el proceso de separación con la subfracción de acetato de etilo (SFCAE)
teniendo en cuenta que fue la subfracción de mayor peso y de polaridad intermedia.
Al fraccionar 670 mg de ésta sobre gel de sílice y una elución en gradiente con hexano:
acetona (7:3), acetona y etanol, se recolectaron volúmenes de elución de
aproximadamente 6 mL, desarrollando CCF con fase móvil de hexano: acetona (1:1),
obteniendo de esta forma ocho subfracciones. En CCF se empleó como revelador ácido
fosfomolíbdico debido a que éste es un revelador general.
Se consideró la subfracción SFCAE6 (220 mg) para continuar el proceso de separación
por presentar valores diferenciables de RF (0.85, 0.68, 0.51, 0.26) en CCF desarrollada
con una fase móvil de hexano: acetato de etilo (7:5). Dicha fracción se sometió a dos
separaciones sucesivas sobre Gel de sílice por medio de una elución en gradiente con
hexano y acetato de etilo obteniendo la subfracción SFCAE la cual mostró una sola
mancha en CCF con un RF de 0.26 al ser revelada con luz UV y ácido fosfomolíbdico, y
un espectro de absorción tomado en acetato de etilo con dos longitudes de onda: 210 nm
y 280 nm como máxima de absorción (Figura 7), permitiendo establecer que hubo
separación, por lo que ésta subfracción fue almacenada para posterior análisis por RMN.

Figura 7. Espectro UV de SFCAE6,9,6

Seguidamente, se abordó nuevamente la subfracción SFCAE (907 mg) empleando un
gradiente de polaridad con hexano, acetato de etilo y etanol sobre Gel de sílice, se
eluyeron ocho subfracciones SFCAE1* - SFCAE8*, de éstas se consideró la subfracción
SFCAE6* (178 mg) por observarse más limpia en CCF desarrollada con hexano: acetato
de etilo (7:5) y por presentar valores de RF de: 0.36, 0.24, 0.12, 0.07 indicando la
presencia de compuestos de tendencia polar, para una nueva separación bajo las mismas
condiciones obteniendo la subfracción SFCAE6*-4 que registro un RF de 0.36 en CCF
desarrollada con hexano: acetato de etilo (7:5), empleando como reveladores luz UV y
ácido fosfomolíbdico y un espectro UV-Vis tomado en acetato de etilo con longitudes de
onda de absorción de 210 y 280 nm (Figura 8), indicando que hubo separación, por lo que
se almacenó para posteriormente realizar su análisis de RMN.

Figura 8. Espectro UV de SFCAE6*-4

Análisis Espectroscópico

La subfracción SFCAE6,9,6 (compuesto 1) se aisló prácticamente puro por CC como un

aceite café. Los resultados espectroscópicos se muestran en la tabla 1.
El espectro RMN 1H mostró a campo bajo cinco señales entre 5.40 y 6.52 ppm que son
características de protones oleofínicos, una señal a 4.21 ppm de un protón metínico
geminal a un grupo hidroxilo, una señal singlete a 3.66 ppm que integra para tres
característica de protones del grupo metóxilo. A campo alto se observó señales entre
1.31 y 2.34 ppm características de protones metilénicos y una señal a 0.98ppm que integra
para tres correspondiente a protones metílicos.
El espectro de RMN 13C mostró 17 señales de carbono cuyas multiplicidades se dedujeron
a través de un experimento DEPT. Las resonancias de carbonos a 35.41, 34.06, 29.46,
29.03, 27.67, 24.88, 20.73 ppm corresponden a grupos metilénicos (–CH2), a 135.19,
135.04, 132.87, 127.75, 125.82, 123.77, 72.11 ppm resuenan grupos metinos (–CH), a
51.4, 14.18 ppm resuenan grupos metilos (–CH3) y a 174.30 ppm resuena un carbono
cuaternario. El triplete alrededor de 77 es característico de CDCl3. Las resonancias a
174.30, 72.11, 51.4 y 14.18 ppm sugieren la presencia de un grupo COO-, C-OH, CH3O-
y CH3-R respectivamente.
 Tabla 1. Resultados de RMN 13C, 1H, HMQC, HMBC de SFCAE6,9,6.

Los experimentos bidimensionales HMQC y COSY 1H- 1H permitieron establecer las

correspondientes correlaciones carbono-hidrógeno y protón-protón. De esta forma, se
confirmó que la señal a un  51.44 ppm estaba directamente unido a los protones de  3.66
y por lo tanto constituyen un grupo metilo unido a un átomo de oxígeno. Así mismo, se
pudo determinar que los protones a desplazamientos de 5.41, 5.97, 6.52, 5.69, 5.40, 5.56
ppm estaban directamente unidos a los carbonos oleofínicos que se registran a
desplazamientos de 123.77, 127.75, 125.82, 135.04, 132.87, 135.19 ppm
respectivamente. El experimento COSY 1H-1H mostró las correlaciones protón-protón,
permitiendo establecer las uniones adecuadas de los sistemas carbono-protón formados
con HMQC, para de esta forma proponer el fragmento de la Figura 9. Así, los protones a
desplazamiento de 2.34 ppm se correlacionan con los de  1.60 ppm, estos a su vez se
correlacionan con los de  1.32 ppm y así sucesivamente. El valor de las constantes de
acoplamiento para los protones metilicos a desplazamientos de 5.41 y 5.97 ppm de 11.0
Hz y para los de desplazamiento a 5.40 y 5.56 ppm de 10.7 Hz (Tabla 1), demuestran la
presencia de sistemas oleofínicos alifáticos con isomería geométrica Z ya que están
alrededor de 11.00 Hz que es el valor teórico. Mientras que los protones a  6.52 y 5.69
ppm registran una constante de acoplamiento de 15.2 Hz, que indica una isomería E para
este sistema oleofínico.

Figura 9. Fragmento de la estructura sugerida para 1 formado empleando los experimentos HMQC y
COSY.

El fragmento ya constituido se unió al grupo metoxilo ya propuesto, a través del carbono

cuaternario (174.30 ppm) cuyo desplazamiento corrobora la existencia de un grupo éster,
para finalmente proponer la estructura de la Figura 10.
 Figura 10. Estructura sugerida para el compuesto 1.

Esta estructura verifica la multiplicidad y las correlaciones a larga distancia carbono –

protón registrado por el espectro RMN 1H y HMBC (Tabla 1), muestra claramente las
correlaciones HMBC del carbono a 174.30 ppm con los protones metílicos y con los que
se encuentran en posición a y b con respecto al carbonilo.
La estructura sugerida se denomina 10-hidroxi-(6Z,8E,12Z)-trienohexadecanoato de
metilo, la existencia de los grupos COO-, HO- y los dobles enlaces confirman la polaridad
intermedia que presentó la subfracción cuando se obtuvo a través CC, ya que fue eluida
con una mezcla de fase móvil de hexano: acetato de etilo (7:4). De igual forma, al único
sistema de doble enlace conjugado que presenta la molécula se le atribuye la capacidad
de absorber luz UV, que fue la característica observada en el revelado de la placa en CCF
desarrollada para esta subfracción en el momento de la separación. Se puede considerar
un monoterpeno irregular derivado de la vía biosintética del ácido mevalónico con la
intervención de dos unidades de isopreno (C5), isopentenil pirofosfato (IPP) y dimetilalil
pirofosfato (DMAPP). Este tipo de compuestos se encuentran en la naturaleza y son
excepciones a la regla del isopreno en la cual se condensan sucesivas unidades de
isopreno a través de una unión cabeza cola 1-4 produciendo compuestos de fórmula (C5)n.
Este estudio constituye un aporte significativo a la composición del alga marina
Bostrychia calliptera, especie de la cual no hay reporte en la literatura y es un organismo
que se proyecta como un indicador biológico y como fuente importante de carragenanos,
que son compuestos empleados ampliamente en la industria.
La presencia de metabolitos secundarios como flavonoides, taninos, saponinas,
triterpenos y derivados antracénicos establecida a través de las pruebas preliminares
realizadas en cromatografía de capa fina a la subfracción de acetato de etilo de la fracción
de cloruro de metileno del alga marina Bostrychia calliptera proyectan este organismo
como una fuente excepcional de compuestos con actividad biológica.
BIBLIOGRAFÍA

[1] https://www.darwinfoundation.org/es/datazone/checklist?species=1365

[2] V LAL, Ma D, Trujillo C. EXTRACCIÓN , SEPARACIÓN Y ELUCIDACIÓN

ESTRUCTURAL DE DOS METABOLITOS SECUNDARIOS DEL ALGA
MARINA Bostrychia calliptera . Sci Tech. 2007;(33):97–102.

[3] Ávalos A, Elena G. Metabolismo secundario de plantas. Reduca. 2009;2(3):119–45.

[4] Sierra Sarmiento M, Barros Algarra R, Gómez Paternina D, Mejía Terán A, Suarez
Rivero D. PRODUCTOS NATURALES: METABOLITOS SECUNDARIOS Y
ACEITES ESENCIALES. 1st ed. Bogota: UNIAGRARIA; 2018.