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    Practica 3

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    Carolina Lachira Tapia
    Este documento describe la técnica de la reacción de floculación para realizar la prueba de VDRL para detectar sífilis. La prueba se basa en la formación de un precipitado visible al microscopio cuando las "reaginas" presentes en la muestra de suero de un paciente infectado con Treponema pallidum se unen al antígeno cardiolipínico del reactivo VDRL. El documento explica el procedimiento de la prueba, la interpretación de los resultados, y limitaciones como resultados falsos positivos en otras enfermedades.

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    Practica 3

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    Carolina Lachira Tapia
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    Este documento describe la técnica de la reacción de floculación para realizar la prueba de VDRL para detectar sífilis. La prueba se basa en la formación de un precipitado visible al microscopio cuando las "reaginas" presentes en la muestra de suero de un paciente infectado con Treponema pallidum se unen al antígeno cardiolipínico del reactivo VDRL. El documento explica el procedimiento de la prueba, la interpretación de los resultados, y limitaciones como resultados falsos positivos en otras enfermedades.

    Descripción original:

    PRACTICA DE INMUNOLOGIA

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    REACCIÓN DE FLOCULACIÓN

    Precipitación
    Práctica 3

    1. Introducción
    Los precipitados inmunológicos son complejos insolubles formados por la unión de
    anticuerpos (precipitinas) y antígenos (precipitógenos) que se encuentran en solución.
    Para la formación de una malla de precipitado se requiere que tanto las precipitinas
    como los precipitógenos sean al menos bivalentes.
    Esta reacción tiende a ocurrir más rápido con el aumento de la temperatura, aunque
    la precipitación más completa es obtenida usualmente a temperaturas bajas (0-4ºC).
    Está determinada por el fenómeno de zona, lo cual quiere decir que la máxima
    precipitación ocurre en un punto o zona de equivalencia que para poder ser visible es
    necesario determinar las proporciones óptimas de los reactivos.

    2. Objetivos
    - Comprender las bases teóricas de la reacción de precipitación
    - Conocer los diferentes factores que contribuyen a la reacción
    - Conocer las distintas formas de reacciones basadas en la precipitación de Ag-Ac
    - Conocer las aplicaciones clínicas de la precipitación

    3. Alcance
    Al final de la práctica se pretende que el estudiante tenga una visión clara del
    fenómeno de precipitación del complejo antígeno-anticuerpo y que adquiera las
    destrezas para aplicar diferentes metodologías basadas en dicha reacción.

    4. Antecedentes
    La precipitación de los complejos antígeno-anticuerpo en solución, ha sido utilizada
    desde 1920 para la cuantificación de antígenos y anticuerpos.
    Todas las reacciones de precipitación están basadas en los mismos principios físico-
    químicos. Los aspectos básicos de exceso y de equivalencia de antígeno o anticuerpo
    son de particular importancia; de hecho, la relativa solubilidad de los complejos con un
    exceso significativo de cualquiera de los reactantes y la insolubilidad de los mismos en
    la zona cercana a la equivalencia (proporciones óptimas), son críticos para el proceso
    de visualización.
    La reacción de precipitación tiene base en la reacción fundamental antígeno-
    anticuerpo in vivo, ya que la formación de este complejo es el primer paso en la
    remoción de agentes infecciosos del cuerpo por el sistema inmune. Estos complejos
    forman precipitados que pueden ser depurados por diversos mecanismos.

    Técnica de VDRL
    Las "reaginas" presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en
    suero por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado conocido
    como reactivo de VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory). Si la muestra
    contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación visible en
    microscopio. Una técnica modificada es la de USR (UnheatedSerumReagin) en la que
    no es necesario inactivar la muestra y disminuye las reacciones inespecíficas con el
    empleo de antígeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina.

    Interpretación de los resultados


    Reactivo: presencia de floculación.
    No reactivo: ausencia completa de floculación.
    Prueba semicuantitativa: el título estará dado por la inversa de la última dilución que se
    observe reactiva.

    Limitaciones de la prueba
    Resultados falsamente positivos pueden ser observados en individuos con cuadros
    patológicos diversos como hepatitis, influenza, brucelosis, lepra, malaria, asma,
    tuberculosis, cáncer, diabetes y enfermedades autoinmunes.
    Estos casos no son muy comunes y generalmente presentan reacciones con títulos
    bajos y una historia clínica que no coincide con las características de sífilis.
    Es imprescindible por estos motivos ante toda prueba cualitativa reactiva realizar la
    prueba semicuantitativa.
    Resultados falsamente negativos pueden observarse cuando se presenta el
    fenómeno de prozona.

    5. Materiales
    - Alcohol al 70%
    - Algodón
    - Agua destilada
    - Beaker con cloro al 5%
    - Cloro al 5%
    - Láminas de reacción de VDRL
    - Micropipetas automáticas y puntas de 5-50 μl
    - Muestras desconocidas.
    - Papel aluminio
    - Reactivo de VDRL
    - Toallas de papel

    6. Procedimiento
    Floculación: Reacción de VDRL
    - Tomar la placa e identificar los pozos como control positivo, control negativo y
    muestra.
    - Colocar una gota de reactivo de VDRL en cada pozo
    - Con la pipeta colocar una gota de la muestra (pozo de Mx) y una de control
    (pozo control)
    - Mover la placa suavemente
    - Observar en el microscopio la formación de precipitado y cuantificar por cruces,
    utilizando el aumento de 10x.

    7. Interpretación:

    Reactivo No reactivo

    8. Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad


    Tener en mente que trabaja con materiales biológicos, potencialmente infecciosos.
    Aplicar las medidas de bioseguridad tanto personales, como en el descarte de los
    materiales.

    9. Formato de presentación de resultados


    Presentar los resultados en forma gráfica y en forma escrita, con una discusión de
    los mismos.

    10. Bibliografía de referencia


    - Rose NR et al. Manual of Clinical Laboratory Immunology. 6th ed. Washington,
    ASM, 2000.
    - Stites D et al. Inmunología Clínica. México, El Manual Moderno, 1998.

    11. Cuestionario
    1. De la sífilis investigue
    a. Agente causal
    b. Etapas clínicas de la enfermedad
    2. ¿Qué diferencia existe entre la prueba de VDRL y RPR?
    3. Explique,¿Por qué el VDRL no es una prueba confirmatoria para sífilis?
    4. Qué otras enfermedades autoinmunes pueden dar un falso positivo en la prueba de
    VDRL
    5. ¿Qué otras pruebas inmunológicas se pueden utilizar para el diagnóstico de sífilis?,
    mencione por lo menos dos
    6

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