Primera Unidad Fundamentos Bioquímicos, Enzimología y Biología Molecular de las membranas biológicas

“AÑO DEL BICENTENARIO DEL PERÚ: 200 AÑOS DE

INDEPENDENCIA”

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FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MEDICINA

TEMA:
ABSORCIÓN DE CARBOHIDRATOS Y GLICEMIA

MATERIA CURRICULAR:

BIOQUÍMICA Y BIOLOGÍA MOLECULAR

INTEGRANTES:
- Chapoñan Bances, Alex Junior
- Huamán Cerna, Jherico Yhurak
- Chiza Vásquez, Franklin
- Gamarra Pretell, Ximena

DOCENTE: Dr. Héctor Filamir Yaipen Gonzales

TRUJILLO

2021 - II

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1. INTRODUCCÓN
2. DESARROLLO
Los hidratos de carbono (carbohidratos) representan un papel fundamental en la dieta humana,
constituyendo la principal fuente de energía para la mayoría de la población mundial. Aportando
entre 55-75% (promedio mundial igual a 63%) de la energía total consumida, siendo mayor su
contribución en los países menos desarrollados.

Son después del agua los componentes más abundantes de los alimentos y los más ampliamente
distribuidos. El origen de todos estos compuestos es la glucosa (del griego gleukos, vino dulce)
proveniente del proceso de fotosíntesis realizado por las plantas. Casi todos los compuestos
orgánicos que se encuentran en las plantas y animales, son derivados de los hidratos de carbono.

Los hidratos de carbono se pueden clasificar según distintos criterios: estructura química, posición
del grupo carbonilo (aldosas y cetosas), número de carbonos en la molécula (triosa, tetrosa,
pentosa, hexosa), abundancia en la naturaleza, uso en alimentos, poder edulcorante, etc.

Algunos de los criterios de clasificación más frecuentes son:

1. Según su estructura química, se pueden clasificar en 3 clases: azúcares, oligosacáridos y
polisacáridos. En esta clasificación los hidratos de carbono se agrupan primero según el tamaño
de las moléculas, según el número de monosacáridos que contienen (grado de polimerización).
Luego cada grupo se subdivide según el número y la composición de las unidades de
monosacáridos.

2. Según su complejidad, se pueden clasificar en hidratos de carbono simples y en hidratos de

carbono complejos. Los primeros pueden contener 1 o 2 unidades de azúcar. Incluyen a los
monosacáridos y los disacáridos, y se conocen comúnmente como azúcares. Los hidratos de
carbono complejos poseen estructuras químicas más complejas, con 3 o más azúcares unidos
entre sí. Incluyen a los oligosacáridos y los polisacáridos.

3. Según sus efectos fisiológicos se pueden clasificar en: hidratos de carbono glucémicos (o
disponibles) e hidratos de carbono no digestibles (o no disponibles). Los primeros son aquellos
que proporcionan hidratos de carbono para el metabolismo. Es decir, corresponden a hidratos de
carbono que se digieren y absorben en el intestino delgado, con lo que aumenta la glucosa en
sangre. Incluyen a los azúcares, las maltodextrinas, los almidones y el glucógeno. Mientras que
los hidratos de carbono no digeribles no son digeridos en el intestino delgado, por lo que no se
produce una respuesta glucémica en sangre (es decir, no se produce un aumento de glucosa en
sangre).

Este grupo comúnmente se conoce como fibra dietética. Incluyen a los polisacáridos no
amiláceos, almidón resistente, oligosacáridos resistentes con 3 o más unidades monoméricas y
otros componentes no digeribles, pero cuantitativamente menores que están asociados con los
polisacáridos no digestibles, especialmente lignina.

Enzimas digestivas y sus propiedades

Las enzimas se clasifican como intracelulares o extracelulares, según actúen dentro o fuera de las
células a nivel del medio celular. Casi todas las enzimas actúan en el organismo
intracelularmente, salvo una importante excepción, las enzimas digestivas. Todas las enzimas
digestivas son consideradas como extracelulares, ya que actúan en la luz del tubo digestivo fuera
de las células del organismo. Químicamente todas se consideran hidrolasas porque catalizan la
hidrólisis de las
moléculas de los alimentos, es decir la ruptura de las mismas empleando agua.

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Propiedades de las enzimas digestivas:

Las enzimas son de acción específica, es decir, sólo actúan sobre un sustrato específico. Esto se
atribuye a un mecanismo de acción semejante a “una llave y su cerradura”, en el que la
configuración de la molécula enzimática encaja perfectamente con la configuración de alguna
parte de la molécula del sustrato.

Las enzimas funcionan óptimamente a un pH específico, inactivándose si éste se desvía más allá
de unos estrechos límites. Este efecto se produce porque algunos cambios en la concentración
del ión hidrógeno (H+) influyen en las atracciones químicas que sostienen todas las moléculas
proteicas, incluidas las enzimas, en sus formas multidimensionales y complejas.

Las distintas enzimas digestivas necesitan diversas concentraciones de H+ en su entorno para

que su funcionamiento sea óptimo. Este efecto obedece a que la concentración de H+ depende de
la forma de cada molécula enzimática. La amilasa, la principal enzima de la saliva, funciona mejor
con pH neutro o ligeramente ácido, como el que caracteriza a la saliva. Esta enzima se va
inactivando de forma gradual por la acidez del jugo gástrico. Por el contrario, la pepsina, una
enzima del jugo gástrico, es inactiva hasta que exista suficiente ácido clorhídrico en el medio. Por
tanto, en enfermedades que cursan con hipoacidez gástrica (anemia perniciosa), se administra
ácido clorhídrico diluido antes de comer por vía oral.

La mayoría de las enzimas catalizan una reacción química en ambos sentidos, regulándose el
sentido y la proporción de la reacción por la ley de acción de masas. Las enzimas son destruidas
o eliminadas continuamente en el organismo, por lo que deben sintetizarse sin cesar, aunque no
se consuman en las reacciones que catalizan. La mayoría de las enzimas digestivas son
sintetizadas como proenzimas inactivas.

A pesar de que nosotros ingerimos seis tipos principales de sustancias químicas (carbohidratos,
proteínas, grasas, vitaminas, sales minerales y agua), sólo las tres primeras requieren una
digestión química para ser absorbidas.

Examen de glicemia:

Es un análisis que mide la cantidad (concentración) de glucosa presente en la sangre. Este

análisis sobre todo se realiza para estudiar la posible presencia de una diabetes mellitus.
(HABLAR UN POCO MÁS DE GLICEMIA, VALORES NORMALES)

3. OBJETIVOS:
 Demostrar la digestión y absorción de la glucosa, cuantificando la glicemia pre y
postprandial, por el método de Glucosa oxidasa en personas normales.

 Demostrar la digestión y absorción de la glucosa, cuantificando la glicemia pre y

postprandial, por el método de Glucosa oxidasa en casos patológicos.

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PRACTICA N° 03a
- ABSORCIÓN DE CARBOHIDRATOS Y GLICEMIA - -

INTRODUCCION:
La glucosa es la fuente de energía más importante del organismo, especialmente para algunos tejidos altamente especializados
como el cerebro y los glóbulos rojos que constituyen su única fuente de energía. Por tanto, nuestro organismo dispondrá de una
compleja maquinaria metabólica que asegure mantener constante la concentración de glucosa en la sangre y con ello, el aporte
permanente de este sustrato a los tejidos.

La glucosa sanguínea, proviene de dos fuentes: una de origen exógeno de los alimentos, y otra de origen endógeno del hígado
por glucogenólisis y de la gluconeogénesis. Se ha demostrado que la glucosa se gasta cuando es removida de los tejidos
periféricos (para su consumo) y por excreción renal por la orina; por tanto, la concentración de glucosa sanguínea dependerá
del balance entre el aporte y el gasto de la misma en el organismo.

El mantenimiento constante de la concentración de glucosa sanguínea depende de la interacción de diversos factores como la
absorción, producción endógena de glucosa, así como la utilización y excreción de la misma. El transporte de glucosa a través
de la membrana apical de las células de la mucosa intestinal se realiza ligado al sodio, en un mecanismo dependiente de
energía empleando una proteína transportadora para ambas moléculas llamada SGLT, requiriendo de alta concentración de
sodio en la luz intestinal para que se realice dicho mecanismo.

El transporte de glucosa al interior de las células se realiza por un mecanismo diferente al que se lleva a cabo en las células
intestinales; en el caso del hepatocito, célula muy permeable a la glucosa, el mecanismo estará asociado a difusión simple;
mientras que, en la mayoría de los demás tejidos, en particular en el tejido adiposo, corazón y músculo esquelético dicho
transporte estará dado por difusión controlada mediada por receptores asociados a la familia GLUT.

El conocimiento de la concentración de glucosa en sangre (glicemia) es importante no sólo porque permite tener una idea
integral del mecanismo de homeostasis metabólica existente, sino porque las variaciones de ella son expresiones de diversos
estados patológicos que se deben investigar y diagnosticar para su tratamiento. Los valores normales de glicemia son variables
de acuerdo al método utilizado; según el método de Folin Wu los niveles varían entre los 80 – 120 mg%; mientras que con el
método de la glucosa oxidasa la concentración varía entre 70 – 110 mg/dl.

FUNDAMENTACIÓN DE LA TECNICA.
La técnica empleada en la determinación de la glucosa en sangre es una técnica enzimática, basada en la siguiente reacción:
GOD POD
Glucosa + O2 + H2O ácido glucónico + H2O2; 2H2O2 + 4-AF + 4-Hidroxibenzoato Quinonimina roja

COMPETENCIA A LOGRAR POR EL ESTUDIANTE.

 Comprende como se demuestra la digestión y absorción de la glucosa, cuantificando la glicemia pre y posprandial por el
método enzimático.

MATERIAL, EQUIPO y REACTIVOS.

 Material de vidrio: tubos de ensayo, pipetas milimétricas.
 Equipo de extracción de muestra: guantes, alcohol, algodón, agujas N° 20, jeringas x 5 cc.
 Equipos: centrífuga, micropipetas, baño maría, espectrofotómetro.
 Reactivos:
 Reactivo A: Solución conteniendo glucosaoxidasa, peroxidasa, aminofenazona, hidroxibenzoato y buffer fosfato
pH: 7
 Estándar: solución de glucosa 1g/l. (100 mg/dl)

PROCEDIMIENTO.
1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa
hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20 en dos momentos:
 La primera extracción se realizará con la persona en ayuno de 4 a 8 horas.
 La segunda se realizará después de la ingesta alimenticia, una hora después como máximo.

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2) Una vez obtenidas las muestras, colocarlas en tubos de ensayo y dejarlas reposar durante 10 minutos.

3) Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a 3000 RPM durante 10 minutos.

4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.

5) Rotular previamente los tubos de ensayo y preparar el siguiente sistema agregando lo que se indica:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
B S Dpre (1) Dpos (2)
Estándar -- 10 ul -- --
Muestra 1 (suero preprandial) -- -- 10 ul --
Muestra 2 (suero posprandial) -- -- -- 10 ul
Reactivo A 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Incubar 5 minutos a todos los tubos de ensayo en baño maría a 37 °C
Observar los resultados en cada uno de los tubos (considerar cambio de color).
Leer en espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a cero con el blanco. Anotar los
resultados. RESULTADOS.
1) Luego del Incubado:

B S D1 D2

2) Lecturas del espectrofotómetro: de las muestras de un paciente adulto en ayunas y posingesta alimenticia.
Glucosa [505 nm]
Muestra Muestra
Blanco Estándar
Preprandial Postprandial
0.000 0.220 0.225 0.298

ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO.

1) Cálculos de los resultados:
 Cálculo del factor:
100mg /dl
F=
S
 Cálculo de la concentración de glucosa. (de cada una de las muestras).
Glucosa (mg/dl) = D x F
Muestra preprandial:
100 mg/dl
1. 225 x =¿ 102. 3
0.220
Muestra postprandial:
100 mg/dl
1. 298 x = 135. 5
0.220
2) Interpretación de los resultados.
 Valores Referenciales:
 Suero o Plasma (adultos): 74 – 106 mg/dl.

3) Explique bioquímicamente lo encontrado.

De acuerdo a los valores resultantes del procedimiento, se puede decir que la concentración de glucosa en sangre del
paciente se encuentra dentro del rango normal tanto en la muestra preprandial como en la postprandial, ya que en esta
última se debe tener en cuenta que previamente se ingirió alimento por lo que existe una elevación pero esta no excede los
140mg/dl que es lo normal; por lo que el paciente no padece diabetes actualmente, sin embargo, aparentemente debe

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mejorar su alimentación, ya que los valores están cerca al extremo de lo normal, lo que puede significar que de no corregir
su dieta, en el futuro puede llegar a ser un paciente con diabetes.

PREGUNTAS DE APLICACIÓN.
1) Identifique las variables que intervinieron en el experimento realizado en la práctica.
Variable dependiente: mg/dl de glucosa
Variable independiente: Condición pre y post prandial
2) Mediante un mapa mental, identifique los componentes del sistema enzimático empleado en la práctica y
señale sus principales características.
PRIMERA ECUACIÓN:
Sustrato: Glucosa
Enzima: Glucosa oxidasa (GOD)
Productos: Ácido glucónico y H2O2
SEGUNDA ECUACUIÓN:
Sustrato: 2H2O2
Enzima: Peroxidasa
Producto: Quinonimina roja

Finalidad de la reacción:
Se realiza la reacción para que el peróxido de hidrógeno obtenido en la primera reacción, sea empleado en la segunda
como sustrato y así obtener la quinonimina roja, la cual se puede evidenciar en los tubos de ensayo ya que proporciona la
coloración. Formar un producto coloreado dependiente de la glucosa. Eso permite la absorción de la longitud de onda que
proyecta el espectrofotómetro. Más coloración, más glucosa, más absorbancia de la muestra.
3) Confeccione un cuadro comparativo explicando cómo afecta el ayuno y el estado posprandial a la
concentración de la glucosa en sangre y que vía metabólica activa.
4) Esquematice un transportador de glucosa de la familia SGLT y GLUT, señalando sus componentes.
5) Analice los datos. Mujer de 54 años, que acude con las siguientes lecturas de absorbancia: Estándar =
0.240, Muestra preprandial = 0.446 y muestra postprandial = 0.523. Interprete y de una explicación bioquímica.
VALORES NORMALES PARA LA EDAD:
Glucosa preprandial:
0. 446 x 100/0.240 = 185. 8

Glucosa postprandial:
0. 523 x 100/0.240 = 217. 9
 En el caso de la paciente, se puede evidenciar que los niveles de glucosa en sangre en la muestra pre y postprandial
se encuentran elevadas, superan el rango normal, por lo que es una posible candidata a padecer diabetes, sin
embargo, puede hacer falta otros exámenes para confirmar y adjuntarlo a los síntomas que puede presentar.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) ADA, estándares para Diabetes 2020. Diabetes Care.
Disponible: https://care.diabetesjournals.org/content/44/Supplement_1
3) Vademecum Wiener Lab, Rosario, Argentina. Disponible: http://files.wiener-lab.com/Vademecum_completo_espanol.pdf
4) Alpaca H, J García. Guía de Práctica de Bioquímica. UNT 2007.
5) Huamán J. Laboratorio clínico. Procedimiento e interpretación. 2° edición, Trujillo 2018.