UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD DE CIENCIAS Y EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN QUÍMICA
BIOLOGÍA MOLECULAR
Docente: Luis Francisco Becerra Galindo

Ruiz, Jorge E1; Hurtado, Laura F2; Rodriguez, Eduardo3.

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EXTRACCIÓN DE DNA.

RESUMEN

En el siguiente informe de laboratorio se exponen las bases teóricas y prácticas sobre el DNA y
técnicas para su extracción. Se hace uso en la parte práctica de una muestra biológica de origen
vegetal entre los cuales se encuentra la fresa, el brócoli y la espinaca ,utilizando una serie de reactivos
caseros como detergente, zumo de piña y alcohol refrigerado para llevar a cabo el proceso de la
extracción de ADN de forma casera, de tal manera que puedan darse rompimientos de los lípidos y
cromosomas que contienen la proteína para identificar el producto aislado obteniendo en sí los
precipitados correspondientes que son la muestra de DNA. Además se trabaja en un simulador virtual,
en donde se extrae DNA de una muestra de células bucales, allí paso a paso se explica y observa lo
que sucede a nivel procedimental y molecular. Se obtuvo a partir de la experimentación casera una
cantidad considerable de DNA para las muestras de fresa y espinaca de tal forma se concluye que es
posible adoptar metodologías y explicar el fundamento de la extracción de ADN mediante
experimentos caseros, además de probarse que la técnica es eficaz a la hora de realizar la extracción
de DNA.

PALABRAS CLAVES.
ADN, Extracción de ADN, Proteína, Precipitado.

ABSTRACT

The following laboratory report sets out the theoretical and practical bases on the preparation of
biological samples of plant origin such as strawberry, broccoli and spinach using a series of
homemade reagents such as detergent, pineapple juice and refrigerated alcohol where DNA is sought
in a homemade way so that it can break the lipids and chromosomes containing the protein to identify
the isolated product obtaining the corresponding precipitates that are the sample itself DNA where a
considerable amount is observed in samples such as strawberry and spinach in such a way it is
concluded that it is possible to adopt methodologies and explain the basis of DNA extraction through
home experiments.

KEYWORDS

1
Estudiante de Licenciatura en Química en la Facultad de Ciencias y Educación de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas en Bogotá.
Cód. 20171150072 [email protected]
2
Estudiante de Licenciatura en Química en la Facultad de Ciencias y Educación de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas en Bogotá.
Cód. 20171150012. [email protected]
3
Estudiante de Licenciatura en Química en la Facultad de Ciencias y Educación de la Universidad Distrital Francisco José de Caldas en Bogotá.
Cód. 20171150012. [email protected]
DNA, DNA Extraction, Protein, Precipitate.
INTRODUCCIÓN. de las proteínas, y las células que lo
ADN conforman, utilizando de esta manera los
El ADN es la base de los organismos vivos y cambios que se han presentado en el
este a su vez contiene el código o las organismo al paso del tiempo, esta
instrucciones que lo constituyen. El ADN se información que se hereda será muy útil para
compone de dos cadenas, cada una formada la próxima generación puesto que les
por nucleótidos. Cada nucleótido, a su vez, proporcionará los cambios que se han
está compuesto por azúcar (desoxirribosa), un mantenido y generará las adaptaciones
grupo fosfato y una base nitrogenada. Las necesarias para sobrevivir en el medio donde
bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), encuentran alimento y nutriente fundamentales
timina (T), citosina (C), y guanina (G), y para su reproducción.
siempre una A se enfrenta a una T y una C se
enfrenta a una G en la doble cadena. Las bases EXTRACCIÓN DE ADN
enfrentadas se dice que son complementarias. La extracción consiste en el aislamiento y
El ADN adopta una forma de doble purificación de moléculas de ADN y se basa
hélice,donde los lados son cadenas de azúcares en las características fisicoquímicas de la
y fosfatos conectadas a las bases nitrogenadas. molécula. El ADN está constituido por dos
La molécula de ADN se asocia a proteínas, cadenas de nucleótidos unidas entre sí
llamadas histonas, y se encuentra muy formando una doble hélice. Los nucleótidos
enrollada y compactada para formar el están integrados por un azúcar (desoxirribosa),
cromosoma. (1) un grupo fosfato y una base nitrogenada
(adenina, guanina, timina o citosina). La unión
de los nucleótidos ocurre entre el grupo fosfato
y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster,
dando lugar al esqueleto de la molécula. Las
bases de cadenas opuestas se unen mediante
puentes de hidrógeno y mantienen estable la
estructura helicoidal.(2)

En la homogeneización mediante agentes

químicos, la muestra se mantiene en solución a
altas temperaturas en presencia de detergentes,
proteasas y agentes caotrópicos que rompen
las uniones entre las células o que incluso
pueden perforar la membrana celular. La
disgregación química es recomendable para
Imagen 1. molécula de ADN formada por dos bacterias, muestras pequeñas de tejidos frescos
hebras de nucleótidos. Alberts, B., Johnson, o sangre. Durante el proceso de lisis las
A., Lewis, J., et al. (2002) interacciones entre las moléculas que
conforman la pared, la membrana celular y
Es así como se puede transmitir de una nuclear se modifican o destruyen permitiendo
generación a otra, se les conoce como los que los ácidos nucleicos se liberen. Se utilizan
ladrillos puesto que cada base nitrogenada, soluciones básicas, detergentes o agentes
cada fosfato, y cada azúcar que forma parte de caotrópicos que permiten disolver la
la estructura del ácido desoxirribonucleico membrana celular, así como inhibidores para
cumple la función de conservar la información inactivar las enzimas que degradan el ADN.
Muchas soluciones de lisis contienen también
EDTA, que forma un complejo con los iones 12. Se lleva el tubo a la centrífuga.
de Mg 2+ e impide el funcionamiento de las 13. Luego de centrifugar se retira el tubo y
DNasas. (2) Los componentes celulares no con una micropipeta se extrae el
solubles como el material fibroso y proteínas líquido sobrenadante obtenido.
que permanecen en solución se separan del
ADN por centrifugación. Extracción casera: En este procedimiento se
le extrajo el DNA a una muestra de origen
METODOLOGÍA vegetal, se empleó brócoli y fresa. Para llevar
Para el desarrollo del laboratorio se realizó una a cabo la extracción se llevó a cabo el
simulación virtual y un experimento casero. siguiente procedimiento:

Simulador: En este se explica en qué consiste 1. Procesar el vegetal en la licuadora,

la extracción de ADN, su posible agregando un poco de agua y ⅛ de
funcionalidad en la detección de enfermedades cucharada de sal.
genéticas en recién nacidos, en el análisis de 2. A la sustancia obtenida se le agrega
pruebas forenses o en el estudio de un gen detergente líquido y se agita.
involucrado en el cáncer. Se siguieron los 3. Se deja reposar por 15 minutos.
siguientes pasos en el simulador para llevar a 4. Se procede a agregar un poco de
cabo la extracción de ADN: enzima, en este caso se emplea jugo de
piña.
1. Recoger células de las mejillas con el 5. Mezclar la solución.
hisopo bucal y recolectar muestra. 6. Inclinar el recipiente con la mezcla
2. Colocar el hisopo en un tubo 70° y agregar alcohol.
eppendorf. Mirar de cerca el hisopo. 7. Dejar reposar.
Tener en cuenta que está cubierto con
cientos de pequeñas células de las RESULTADOS
mejillas. Dentro de cada célula de la Simulador.
mejilla hay un núcleo, y dentro del A través de cada pestaña de la interfaz del
núcleo está el ADN. simulador se dio la explicación de cómo la
3. Se debe cortar el extremo del hisopo extracción de ADN, es funcional dentro de
para que pueda cerrar el tubo. diferentes procesos, además se profundizó en
4. Usar la micropipeta para añadir un qué sucede a través de cada paso de la
poco de solución de lisis a el tubo. extracción a nivel molecular y como cada
5. Colocar el tubo en el baño de agua sustancia al interactuar sobre la muestra, tiene
tibia. determinado efecto sobre esta. Genetic GSLC
6. Sacar el tubo y añadir solución de sal en la Universidad de Utah (2006).
concentrada.
7. Llevar el tubo a la centrífuga y
centrifugar.
8. Sacar el tubo. Se observa que se forma
un precipitado y queda un
sobrenadante.
9. Usar una micropipeta y remover con
cuidado el líquido e introducirlo en
Imagen simulador 1. Análisis forense
otro tubo.
utilizando muestras de sangre y muestras
10. Al tubo con sobrenadante se le agrega
biológicas.
alcohol isopropilico.
11. Se agita el contenido del tubo.
Imagen simulador 2. En la célula
Imagen simulador 7. Solución Lysis obliga a
encontramos el núcleo que alberga los
las células a estallar y separar las histonas
cromosomas.

Imagen simulador 3. En los cromosomas se Imagen simulador 8. solución salina

encuentra el DNA con las histonas las cuales introducida en la muestra
comprimen el tamaño de la cadena.

Imagen simulador 4. Desenrollamiento del Imagen simulador 9.

DNA formando una doble hélice.

Imagen Simulador 10. Extracción de

Imagen simulador 5. Laboratorio con los impurezas que dejó a su paso la sal debido a
implementos parra la extracción del DNA. que junto con las proteínas

Imagen simulador 6. Extracción de La

muestra para su posterior análisis. Imagen simulador 11. Separación por medio
de alcohol isopropilico.
Imagen simulador 12. Una vez que se retira
el líquido y se deja secar el ADN, puede
volver a disolverlo en la solución de su
elección. Puede almacenarlo en el congelador
durante muchos años Imagen 3. Muestra de ADN de fresa, extraída
por precipitación.

Extracción casera: Muestra de fresa. Extracción: casera muestra espinaca

Se obtuvieron los siguientes resultados al Para la extracción de ADN de espinaca, se
realizar el proceso de extracción de DNA para obtuvo la formación de una “hebra”
la fresa: blanquecina en la parte superior de la solución,
al agregar el jugo de piña y seguidamente de
Inicialmente al agregar el detergente a la esto el alcohol.
muestra constituida por fresa, se observa como
comienza a aparecer un precipitado de color
blanco. Esto se expone en la siguiente imagen:

Imagen 4. Muestra de ADN de espinaca

origen vegetal, extraída por precipitación.

Extracción casera: Muestra de brócoli.

Imagen 2. Muestra de fresa con detergente. Se obtuvieron los siguientes resultados al
realizar el proceso de extracción de DNA para
Luego de que se dejó reposar la muestra y se le el brócoli:
agregó el jugo de piña y el alcohol frío, se
observa la formación de una “hebra” blanca en Se tiene al inicio del proceso, la muestra de
la parte superior de la solución: brócoli ya procesada, se le agregó a esta el
jabón y se agitó. De lo anterior se observó la
formación de pequeñas tiras blancas dentro de
la solución como se observa a continuación:
 Al introducir el alcohol etílico se separa al
instante y se acumula en la parte superior casi
al instante, y nos muestra como se puede
obtener su código genético único.
Una vez separado puede permanecer estable
suspendido en la superficie de nuestro
recipiente.

En este experimento se observó que el jabón

Imagen 5. Muestra de brócoli con detergente.
rompe las membranas moleculares
desenrollando la cromatina, la cual protege y
Al agregar el jugo de piña y el alcohol, se
envuelve el DNA de la membrana la cual
observa la formación de una “hebra”
protege los genes, es necesaria para almacenar
blanquecina, correspondiente al ADN del
el DNA puesto que sin esta el DNA se
brócoli:
enredaria y sufriría rompimiento, al estar
envolviendo esta molécula delgada pero
extensa hace posible que cada celular y cada
membrana contenga un rastro de

Una de las características principales que se

deben tener en cuenta al utilizar el zumo de
piña como tampón de lisis para la mejora de
degradación de componentes celulares para la
extracción es que esta sustancia contiene una
proteína llamada papaína. Esta enzima es la
Imagen 6. Muestra de ADN de brócoli, encargada de degradar el resto de componentes
extraída por precipitación. celulares lo cual permite separar un material
genético visible e íntegro como se observa en
los resultados.

ANÀLISIS DE RESULTADOS Se debe tener en cuenta la preparación de los

materiales y reactivos ya que el alcohol etílico
Durante la extracción de ADN es necesario el se debe dejar refrigerando en un lapso
uso de sal de esta forma cuando el ADN promedio de un día con el fin que pueda
salado entra en contacto con el alcohol se precipitar el ADN dado que es insoluble en la
precipita formando un hilo blanco de esta mezcla que contiene alcohol y sal.
forma es visible , se utilizaron partes de
espinacas y fresas como fuente, al pasar por el El alcohol etilico deshidrata el ADN y deja
procesador de alimentos se rompen las capas expuestos los grupos fosfato cargados
externas e internas permitiendo una extracción negativamente. Contra-iones como el Na+ se
más sencilla, y de esta forma puede observarse unen a los grupos cargados reduciendo las
el desprendimiento de las proteínas y la fuerzas de repulsión entre las moléculas y
acumulacion de acido desoxirribonucleico este permitiendo la formación del precipitado como
en las capas superiores donde se encuentra el lo observamos en imagen 3,4 y 6. Por lo tanto
alcohol frío. la precipitación del ADN con este reactivo
solo puede llevarse acabo en presencia de
cationes disponibles y en cantidad suficiente
para neutralizar la carga de los residuos de ● Extracción de ADN. UTAM (2006)
fosfatos expuestos. https://learn.genetics.utah.edu/content/
labs/extraction/
CONCLUSIONES ●
● Se logra extraer el DNA rompiendo la
membrana celular con jabón, con un
poco de NaCl cambiando la
solubilidad de los filamentos de DNA
posteriormente precipitando con
alcohol para lograra su identificación a
simple vista como una hebra blanca.

● El simulador nos permite Mediante

observaciones gráficas e interactivas
el uso y la manipulación que tiene el
extraer muestras de DNA, para el
análisis forenses así como los equipos
utilizados y los reactivos empleados
para la extracción sin contaminantes

● Se deduce que al extraer el DNA de

las muestras vegetales hay que tener
en cuenta que no se obtendrá una
muestra pura ya que muy
probablemente se encuentren
pequeños residuos de componentes
celulares y fragmentos de RNA ya que
la literatura indica que los
procedimientos utilizados son
susceptibles de contaminación, errores
por tiempos de preparación y
cantidades aún así se evidencia la
versatilidad que emplea el método
para extraer DNA de forma casera y
sencilla.

BIBLIOGRAFÍA

● Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., et

al. (2002).
● Molecular Biology of the Cell. 4th
edition. New York: Garland Science.
The Structure and Function of DNA.
Disponible en: ncbi.nlm.nih.gov/