Guía Práctica de Laboratorio No. 2 Transporte A Través de Membrana

UNIVERSIDAD LIBRE
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA DE ENFERMERÍA
LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
GUÍA PRÁCTICA DE LABORATORIO No. 2

TRANSPORTE A TRAVÉS DE MEMBRANA
Objetivo General
Diferenciar en experimentos in vitro, los fenómenos de difusión, diálisis, ósmosis y presión

osmótica asociándolos con los procesos de transporte de la célula.
Fundamentos Teóricos
Todas las partículas, electrolitos y moléculas presentes en los líquidos

celulares se mueven o se desplazan en medio de otras, mediante un
fenómeno que se ha denominado difusión. La difusión es ocasionada
por el aumento de la concentración de soluto en un sitio determinado
de un solvente puro o de una solución, siempre y cuando el soluto
tenga cierta afinidad con el solvente. Este aumento de la
concentración de soluto en un punto determinado del solvente, crea
una diferencia de concentración que se ha denominado gradiente de
concentración.
El fenómeno de la difusión reviste particular importancia a escala

celular y su comprensión sirve para explicar el transporte de
partículas, electrolitos y moléculas a través de la membrana celular.
Hay partículas, electrolitos y moléculas que para atravesar la membrana requieren de la

participación directa de una o más proteínas de transporte localizadas en la membrana y no
requieren de gasto de energía.
Se ha visto que hay moléculas que pueden atravesar libremente la membrana celular, sin gasto de
energía por la célula y sin intervención alguna de proteínas de membrana. En estos dos últimos
casos, se trata de un tipo de transporte conocido como transporte pasivo. Cuando los solutos
atraviesan libremente las membranas, sin intervención alguna de proteínas de membrana el
transporte es por difusión simple y cuando las moléculas requieren para su transporte por la
membrana, de proteínas sin gasto de energía, el transporte es por difusión facilitada.
Se ha observado que, en las células, los solutos pueden desplazarse desde lugares de menor
concentración hasta sitios de mayor concentración a través de las membranas, esto es, en contra
de un gradiente de concentración, requiriendo gasto de energía por la célula. Este tipo de
transporte facilitado que requiere de un gasto de energía por parte de la célula, se denomina
transporte activo. Este mecanismo es usual en todos los casos en que el movimiento se realiza
en contra de un gradiente de concentración.
El fenómeno de la difusión a través de la membrana, es importante porque explica el

mantenimiento de las concentraciones internas constantes dentro de la célula, el equilibrio hídrico y
la presión osmótica que depende de la concentración de electrolitos al interior de la célula. En
general la difusión por una membrana semipermeable puede ser de solutos o también de
solventes.
Protocolos
En esta práctica, se utilizarán cuatro experimentos para comprobar los fenómenos fisicoquímicos
naturales relacionados con el transporte pasivo de sustancias: Ósmosis, Presión Osmótica,
Diálisis y Difusión.
¡RECUERDA ¡Antes de realizar la práctica debes haber realizado una consulta previa del tipo
de reactivos que vas a emplear: ¡su uso, las precauciones en el manejo, y los resultados
esperados tras las reacciones! Esto puede ser evaluado al inicio de la práctica.
Sustancias, Muestras o Reactivos Materiales

 Rojo Congo Concentrado (0,5 mL por equipo)
 1 pipeta de vidrio de 1 mL
 Solución de sacarosa sobresaturada con rojo
 1 Beaker de 250 mL
congo (10 mL por equipo). (Cuidado, no es la
misma solución anterior) concentrado (Rotulada
como RCS)  1 soporte universal
 Agua destilada (200 mL)  4 tubos de diálisis de 10 cm.
 Azul de metileno concentrado (5 mL por equipo)
 4 pipetas Pasteur
 Elodea DEBE SER ADQUIRIDA POR EL GRUPO,
 Banditas de caucho para brackets
LA PUEDEN COMPRAR EN UN SITIO DONDE  Cinta transparente.
VENDAN PECES ORNAMENTALES
 2 varillas de agitación de vidrio
 Solución hipertónica
 Láminas portaobjetos y cubreobjeto
 Solución hipotónica
 Microscopio
 Lugol
 Almidón al 2%
Protocolo 1. Ósmosis y Presión Osmótica
1. Le será entregado el montaje completo para iniciar el experimento. Una pipeta graduada de
1 mL estará sujetada a un soporte universal, en forma vertical mediante una pinza,
2. Tendrá a disposición una bolsa de diálisis con 4 mL de la solución de RCS en su interior.
3. La parte inferior de la pipeta que se encuentra fija en el soporte universal estará dentro de
la solución contenida en la bolsa de diálisis mencionada en el punto anterior, de tal forma
que no haga contacto con la pared ni con el fondo de la misma.
4. La parte superior de la bolsa de diálisis estará fijada a la pipeta con cinta adhesiva
transparente, evitando que el aire escape.
5. USTED deberá introducir la punta de la pipeta junto con la bolsa y su contenido, en un
Beaker de 250 mL. Tenga cuidado de que el sistema no quede apoyado o en contacto con
el fondo y/o las paredes del recipiente. Deje en reposo durante algunos minutos hasta que
tenga la seguridad de que ha quedado herméticamente sellado.
6. Por último, adicione agua destilada dentro del
Beaker hasta cubrir las dos terceras partes
de la bolsa.
7. Tenga en cuenta el nivel (o altura inicial), tome
una fotografía de modo que la cámara esté
alineada a la altura de la solución contenida
dentro de la pipeta (ver figura). Observe a
intervalos de 15 minutos, durante una hora y
media (90 minutos) las variaciones en la altura
de la columna y registre los resultados en una
tabla de datos. (La primera lectura tiene como
altura 0 divisiones y tiempo 0 minutos).
Preguntas orientadoras de la discusión:

 ¿Por qué ingresa agua a la bolsa de diálisis y no sale la solución RCS?
 ¿Por qué es necesario que el nivel de agua adicionado al Beaker cubra las dos terceras
partes de la bolsa de diálisis?
 ¿Qué determina la altura del nivel de la solución de RCS en el interior de la pipeta?
 ¿El nivel de la solución subirá hasta rebosar la pipeta?
 ¿Qué está ejerciendo fuerza en las paredes internas de la bolsa de diálisis?
Protocolo 2. Diálisis.
Para los ensayos de diálisis proceda de la siguiente manera:
1. Le serán entregadas dos bolsas de diálisis listas para iniciar el experimento, cerradas en
sus extremos con banditas de caucho.
2. Una de las bolsas de diálisis, tiene en su interior 4 mL de solución concentrada de azul

de metileno y la otra 4 mL de solución RCS.
3. Cada bolsa estará cerrada y adherida a una varilla de agitación, la cual, a su vez, se fijará
con una pinza al soporte universal (en el lado opuesto donde armó el experimento del
protocolo 1). Coloque cada montaje, por separado y en reposo, durante 5 minutos en dos
Beaker de 150 mL vacíos. Asegúrese que ambas bolsas hayan quedado herméticamente
selladas por ambos lados.
4. Rotule cada vaso con las palabras (Azagregue agua destilada en el Beaker hasta cubrir
completamente las bolsas, asegurándose que el nivel del agua pase la línea de llenado
de cada uno. Observe cada 5 minutos durante media hora.

 ¿Qué características químicas y moleculares tiene el Azul de Metileno que le permiten o no
pasar a través de la Membrana del Tubo de diálisis?
 ¿Cree usted que en ambos experimentos ingresó agua a la bolsa de diálisis?, explique
muy bien.
 ¿Qué características químicas y moleculares tiene el rojo congo que le permiten o no pasar
a través de la Membrana del Tubo de diálisis?
 ¿Cómo se explican las diferencias entre los resultados de los dos experimentos, el de Azul
de Metileno y el de Rojo Congo?
Protocolo 3. Difusión simple de un soluto en un solvente polar
1. En un Beaker de 50 mL (Rotulado como Caliente), que contiene 40 mL de agua
destilada caliente (Sacarlo del baño maría previamente), adicione una sola gota de rojo
congo, deje totalmente quieto el montaje mientras ocurre el fenómeno. Cronometre el
tiempo y observe los cambios que ocurren cada dos minutos, durante 10 minutos.
2. Al mismo tiempo, en otro Beaker de 50 mL (Rotulado como Frío) que contiene 40 mL de
agua Fría, adicione una sola gota de rojo congo. Deje totalmente quieto el montaje
mientras ocurre el fenómeno. Cronometre el tiempo y observe los cambios que ocurren
cada dos minutos, durante 10 minutos.

 ¿Qué efecto tuvo la temperatura alta en el fenómeno observado en el Beaker?
 ¿Qué efecto tuvo la temperatura baja en el fenómeno observado en el Beaker?
 ¿Qué efectos tiene la temperatura en el cambio de energía cinética de una sustancia?
 ¿Qué importancia tiene, para efecto del proceso de Difusión simple en nuestro cuerpo,
el hecho de que la temperatura interna del mismo sea de 37 ºC?
Protocolo 4. Difusión de un soluto a través de una membrana semipermeable
1. Le será entregado un tubo de diálisis sellado

con 4 mL de una solución de almidón al 2%.
2. Introduzca la bolsa en un Beaker de 150

mL vacío y observe que no haya ningún
escape del contenido.
3. Adicione agua hasta el límite de 100 mL,

agregue 3,0 mL de Solución de Lugol y
observe lo que sucede de 10 a 20 minutos,
acorde con los tiempos solicitados para el
informe.

 ¿Hubo algún cambio de coloración de la
solución de almidón que se encontraba al
interior de la bolsa de diálisis?, si lo hubo;
¿a qué se debió?
 Como ya lo comprobaste en la primera
práctica de laboratorio de Biomoléculas, el
almidón es un polisacárido, ¿Es probable
que éste haya salido de la bolsa de
diálisis?, si/no por qué.
 Investiga qué tamaño de poro tiene una
bolsa de diálisis como la de papel celofán
que usaste en la práctica. ¿Qué
importancia tuvo el tamaño de las
moléculas de una u otra sustancia (Almidón y Lugol) en el resultado obtenido al final?
 ¿Podría afirmarse que la membrana fue permeable a alguno de los dos solutos?, ¿a
cuál y por qué?
Protocolo 5. Ósmosis en una célula vegetal
1. Para este protocolo usted deberá aplicar lo aprendido en el laboratorio anterior, referente al
manejo del microscopio.
2. Usted utilizará trocitos de hojas de ELODEA, planta acuática común en estanques.
3. El estudiante del equipo que vaya a realizar el protocolo tendrá a disposición un
microscopio y tres montajes diferentes sobre placas portaobjetos. Cada una está rotulada
con las siglas ISO, HIPO e HIPER, lo cual indica tres soluciones diferentes así: isotónica,
hipotónica e hipertónica, que fueron adicionadas previamente al montaje de la ELODEA.
Cada muestra fue cubierta con una laminilla cubreobjetos, previa la adición de cada
solución.
4. Empiece el protocolo montando la placa marcada como ISO en el microscopio y
observe las características de la membrana de la célula con el aumento de 40X (recuerde
SIEMPRE que el primer lente que debe utilizar es el de 4X, luego 10X y por último
40X) y dibuje lo observado.
5. Cambie a la placa marcada como HIPO y observe las características de la membrana de
la célula con el aumento de 40X (recuerde SIEMPRE que el primer lente que debe
utilizar es el de 4X, luego 10X y por último 40X) y dibuje lo observado.
6. Finalmente, cambié a la placa marcada como HIPER y observe las características de la
membrana de la célula con el aumento de 40X (recuerde SIEMPRE que el primer lente
que debe utilizar es el de 4X, luego 10X y por último 40X) y dibuje lo observado.
Preguntas orientadoras de la discusión para su informe

 ¿Qué importancia tuvo el gradiente de concentración del NaCl dentro y fuera de la
célula de la elodea para que se presentara uno u otro resultado?
 ¿Cuándo una célula pierde agua?
 ¿Cuándo una célula gana agua?
 Si en vez de NaCl, se usara una solución de Glucosa sobresaturada en uno de los
experimentos; ¿se habría obtenido el mismo resultado?

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Diferenciar en experimentos in vitro, los fenómenos de difusión, diálisis, ósmosis y presión

Todas las partículas, electrolitos y moléculas presentes en los líquidos

El fenómeno de la difusión reviste particular importancia a escala

Hay partículas, electrolitos y moléculas que para atravesar la membrana requieren de la

El fenómeno de la difusión a través de la membrana, es importante porque explica el

Sustancias, Muestras o Reactivos Materiales

Protocolo 1. Ósmosis y Presión Osmótica

Preguntas orientadoras de la discusión:

Para los ensayos de diálisis proceda de la siguiente manera:

2. Una de las bolsas de diálisis, tiene en su interior 4 mL de solución concentrada de azul

Preguntas orientadoras de la discusión:

Preguntas orientadoras de la discusión:

Protocolo 4. Difusión de un soluto a través de una membrana semipermeable

1. Le será entregado un tubo de diálisis sellado

2. Introduzca la bolsa en un Beaker de 150

3. Adicione agua hasta el límite de 100 mL,

Preguntas orientadoras de la discusión:

Preguntas orientadoras de la discusión para su informe

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