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    PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA (PDF - Io)

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    Este documento describe cómo preparar una curva de actividad de la protrombina mediante la medición del tiempo de protrombina (TP) de un plasma control normal y sus diluciones. Se asigna un 100% de actividad al TP del plasma puro y se calculan los porcentajes de actividad correspondientes a las diluciones. Luego, se traza una curva gráfica con los valores de TP en el eje Y y los porcentajes de actividad en el eje X. Esto permite interpolar el porcentaje de actividad de muestras de plasma desconocidas mediante la

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    Descripción original:

    protrombina

    Título original

    62. PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA (pdf.io)

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    PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA

    1. Introducción:

    Los resultados de una determinación del tiempo de protrombina (TP) pueden


    expresarse en forma de porcentaje de actividad (índice de Quick).

    Para ello es necesario preparar, previamente, una curva de actividad de


    protrombina y, posteriormente, interpolar en la gráfica trazada el valor en segundos del
    TP determinado en el plasma problema.

    2. Fundamento:

    Para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una batería de


    diluciones, a partir de un plasma control normal, y se mide el TP del plasma control
    normal no diluido y de cada una de las diluciones preparadas.

    Tras ello, se asigna el 100% de actividad al número de segundos medidos en la


    determinación del TP del plasma control normal puro, y se calcula el % que,
    proporcionalmente, les corresponde a los valores de TP determinados en cada una de las
    diluciones de éste.

    Con todos estos datos, se traza una curva de calibrado (curva de actividad de la
    protrombina), anotando, en el eje de ordenadas (el vertical), los valores, en segundos,
    del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones, y, en el eje de
    Abscisas (el horizontal), el % de actividad asignado a cada uno de ellos.

    3. Material:

     8 tubos de ensayo de plástico.


     Un rotulador de vidrio de punta fina.
     Una prepipeta de seguridad.
     Una pipeta graduada de vidrio de 1 ml de capacidad.
     Una pipeta automática capaz de dispensar 100 y 200 μl.
     7 puntas de pipeta automática
     5 cubetas de coagulómetro.
     5 trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas.
     Un coagulómetro.
     Un baño de agua ajustable a 37 ºC
     Un bolígrafo
     Regla
     Una hoja de papel milimetrado.
     Una gradilla.

    4. Reactivos:

     Solución salina al 0,85%


     Tromboplastina cálcica
     Un pool de plasmas normales o plasma control normal.

    A partir del plasma control preparar:

    Plasma control (en μl) 200 200 200 200 200


    Solución salina 0,85% 0 200 400 600 1800
    Dilución 1/1 1/2 1/3 1/4 1/10
    % Actividad 100 50 33 25 10

    Los tubos han de ser rotulados con la cuantía de la dilución que contienen o con
    el % de actividad asignado a cada dilución.

    5. Técnica:

    a) Homogeneizar la tromboplastina cálcica y las diluciones de plasma, sin


    agitarlas bruscamente.
    b) Depositar el volumen total de tromboplastina cálcica que se va a
    necesitar, en un tubo de ensayo de plástico, adecuadamente rotulado.
    c) Atemperar la tromboplastina cálcica a 37 ºC (37 ºC/5-15 minutos).
    d) Introducir un trocito de acero apropiado en 5 cubetas del coagulómetro.
    e) Rotular el extremo superior de una cubeta con el % de actividad de 100,
    el de otra con el de 50, el de otra con el de 33, el de otra con el de 25 y el
    de otra con el de 10.
    f) Verter 100 μl de plasma puro y de cada una de sus diluciones en el
    interior de las cubetas rotuladas con el % de actividad que les
    corresponde.
    g) Incubar el plasma, contenido en cada cubeta, a 37 ºC, entre 3 y 5
    minutos. Para ello, pueden depositarse las cubetas en la placa calefactora
    del coagulómetro.
    h) Colocar, sucesivamente, cada una de las 5 cubetas en la celda de medida
    del coagulómetro y agregar 200 μl de tromboplastina cálcica.
    i) Tomar la lectura de cada una de las determinaciones.

    1. Lectura de los resultados.

    Lo más correcto es determinar 3 veces el TP del plasma control puro y de cada


    una de sus diluciones y dar, como resultado final, la cifra media calculada a partir de
    cada trío de valores.

    Confeccionar la curva tal como vimos en el fundamento. Posteriormente, se


    señalan en la gráfica los puntos en que confluyen cada valor de TP con su % de
    actividad correspondiente. Y, finalmente, se dibuja la línea recta que mejor representa
    los puntos.

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