Cromatografía de Capa Fina en Pigmentos Vegetales

Análisis de pigmentos en plastos mediante cromatografía en papel.
Joseth V. Romero a, Michelle S. Hinojosa a, Jenniffer M. Gonzalez a, Kerly E. Mendoza a

a
Ingeniería en Biotecnología, Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Santo Domingo de los Tsáchilas, Ecuador.
INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO ABSTRACT
Keywords: La cromatografía de capa fina es una técnica de laboratorio empleada para la separacion
e identificacion de los analitos presentes en una muestra, de acuerdo a las diferencias de
Cromatografia afinidad que estos presenten por la fase estacionaria (muy polar) y la fase móvil (menos
Fase movil polar), en la presente práctica de laboratorio se empleó la cromatografía de capa fina
Fase estacionaria para la separación de pigmentos vegetales, para lo cual se tomaron como muestras hojas
Pigmento de espinaca, hojas amarillas y hojas rojas, las cuales se maceraron y se mezclaron con
Analito sulfato de magnesio formando una pasta, a esta se le agrego acetona y se procedió a
centrifugar, de cada una de las muestras resultantes se tomó con un capilar una pequeña
cantidad y se colocó en el papel cromatográfico (Fase estacionaria), se colocó en un
frasco junto con el diluyente (Fase móvil), finalmente se observó la separación de los
pigmentos de cada muestra (analitos) y se procedió a calcular el RF.
1. Introducción gas, un líquido o un fluido supercrítico. Cabe recalcar que en la

CCF únicamente se pueden utilizar fases móviles líquidas
La cromatografía en capa fina (CCF) es una de las técnicas más (Kouznetsov y Vargas, 2020)
comunes y vitales usadas durante procesos de separación y
purificación de los metabolitos; anteriormente, los químicos Método
usaban esta técnica usando un tubo de vidrio que estaba
contenido de partículas inorgánicas, esta muestra se colocaba El desarrollo de esta técnica se realiza comúnmente por un
en la parte superior del tubo y posteriormente, se añadía un método ascendente, con esto, un eluyente asciende por una
disolvente, generando así que los constituyentes logren placa puesta en vertical, por acción de la capilaridad, con lo que
separarse. Por ejemplo, al aplicar un análisis a una muestra de arrastra a diferentes velocidades a los compuestos, también
pigmentos, el pigmento azul podía salir primero, después el considerando el grado de adsorción de cada uno de estos; la
rojo y finalmente el verde, consiguiendo una separación cromatografía se realiza en una cubeta con tapa, con lo que la
efectiva (Kouznetsov y Vargas, 2020) fase estacionaria se ubica sobre un plano que forma una capa de
partículas sólidas, extendida sobre un soporte, como puede ser
Fue en el año de 1956 que el químico Egon Stahl, quien le una placa de vidrio o aluminio. El parámetro de un compuesto
colocó el nombre de cromatografía de capa fina, generalizando en la CCF es el factor de retención Rf el cual expresa su
los procesos a seguir, los equipos usados y adsorbentes, posición sobre una placa y como una fracción decimal mide la
propiciando el auge de esta técnica simple, económica y retención de un componente, es así como la distancia recorrida
eficiente (Kouznetsov y Vargas, 2020) por el compuesto, se mide desde el centro de la mancha
(Kouznetsov y Vargas, 2020)
Cromatografía líquida en columna y cromatografía de capa
fina
Estos métodos pueden tener en común que incluyen el uso de

una fase estacionaria (adsorbente) y una fase móvil, la
separación de los componentes requeridos se logra cuando
atraviesas un adsorbente mediante un flujo constante de una
fase móvil, que se consigue gracias a las diferencias en las
velocidades de migración de los disolventes que pueden ser un
1
J.V. Garcia et al. ESPE
Figura 1. Montaje de la cromatografía de capa fina y sus

componentes.
Fuente: Pássaro (2016)
Alcance de la cromatografía de capa fina
Esta técnica se ha convertido en una de las más importantes en

la industria farmacéutica por la intervención en gran medida en
la determinación de pureza de productos farmacéuticos, además
de su uso en laboratorios clínicos y en ensayos bioquímicos.
Finalmente cabe destacar la ventaja de esta técnica y es que se
destaca por su rapidez y el bajo coste en los experimentos Figura 2. Observación de la pigmentación de las muestras en la
(Skoog et al., 2018) placa de cromatografía.
2. Resultados 3. Discusiones
De cada una de las hojas se efectuaron los parámetros que se Los principales componentes de las hojas de espinaca son el
miden de la cromatografía plana, la cuál se denomina relación de betacaroteno y la clorofila, sin embargo también presenta
frentes, Rf y representa la distancia de recorrido del analito sobre xantofilas en cantidades menores. El betacaroteno es de color
la fase estacionaria con respecto a la distancia que recorre la fase amarillo, mientras que la clorofila es verde en dos variantes, a
móvil en la cromatografía, se muestra en la tabla 1. (de color verde azulado) y b (de color verde amarillento), con
la diferencia de que tiene un grupo metilo en el anillo de
Tabla 1. Resultados de la distancia recorrida de los pigmentos porfirina y b un grupo formilo. La pérdida de iones Mg++ en la
clorofila conduce a la formación de feofitina (a y b). La
Carril Muestra Distancia recorrida xantofila, por otro lado, es una clase de compuestos derivados
Rf de los carotenoides que contienen átomos de oxígeno en su
Muestra Solv estructura y está presente en menor proporción en las hojas de
ente espinaca que el betacaroteno y la clorofila (Rodriguez &
A B C D A B C E
Martinez, 2015).
1 H. roja 0.4 0.5 0.6 — 7 0.057 0.071 0.086
2 H. 0.5 0.6 5.9 — 7 0.071 0.086 0.84 Si bien es cierto los pigmentos clorofílicos son el pigmento
amarilla biológico más abundante en la tierra, esto se debe a la
3 H. verde 0.3 0.4 0.5 6 7 0.043 0.057 0.071 0.86 capacidad de absorber las fracciones azul y roja de la luz solar,
conocidas también como espectro magnético, siendo una
Nota: Se denotan las distancias recorridas de cada pigmento con
pequeña proporción el espectro visible. La presencia de los
su respectivo Rf.
diferentes colores o pigmentos biológicos se debe a los
diferentes componentes que presentan las frutas, verduras,
hojas, entre otras. En el caso de la espinaca, principalemnte se
encuentran las clorofilas a y b correspondientes al color verde
oscuro y claro respectivamente, puesto que la clorofila absorve
los espectros de 450nm a 475 nm y luego a 650 nm-700 nm,
también contienesn xantofilas de color amarillo con una
absorción de 350 nm a 500 nm y carotenos color naranja que
absorve los espectros de 375nm a 525nm. En cuanto a el
β-caroteno, éste absorbe los espectros de luz de 375 nm a 525
nm, además de contener en pequeñas cantidades xantofilas y
clorofilas. Y las antocianinas mismas que abarcan un color de
entre el azul y rojo con un rango de absorción entre 250 nm a
700 nm, adicionalmente también se encuentran en menor
cantidad la presencia de clorofilas y xantofilas.
2
4. Conclusiones
La cromatografía de capa fina consiste en la separación de los

analitos que componen una muestra según la diferencia de
afinidad que estos tengan por la fase móvil y la fase estacionaria,
permitiendo la identificación tentativa de compuestos no
deseados o extraños en un producto, por lo que la técnica puede
ser empleada para comprobar la pureza de una muestra.
Se obtuvieron varios pigmentos de las tres muestras, de las hojas

de espinaca se observaron principalmente clorofilas, mientras que
de las hojas amarillas se observaron más xantofilas, la separación
de estos se pudo apreciar gracias a la diferencia de polaridad que
presentan. Figura 4. Secado de la placa cromatográfica luego de haber sido
5. Materiales y métodos introducida en el tanque cromatográfico.
En primera instancia se cortaron pequeños trozos de las hojas de
espinaca que se encontraban previamente lavadas y secas.
Luego, se pesaron 2 gramos de hojas de espina sin nervaduras y
se trituró junto con 2 g MgSO₄ en el mortero. Posteriormente,
se trasvasó la pasta obtenida de la trituración a un tubo de ensayo
y se añadieron 8 mL de acetona, se tapó y envolvió con papel
aluminio. Luego, se agitó constantemente durante 10 minutos.
Finalmente se introdujo el tubo de ensayo en la centrifugadora.
Se llevó a cabo el mismo procedimiento con las hojas amarillas y
rojas.
Fig 5. Revelación de los pigmentos a través de luz UV.
6. Referencias
Kouznetsov, V., & Vargas, L. (2020). Defensa química en la

naturaleza: Aspectos químicos de las toxinas en plantas
y animales terrestres (2.a ed.). Universidad Industrial de
Santander.
https://books.google.com.ec/books?id=Jl4DEAAAQB
AJ&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_sum
mary_r&cad=0#v=onepage&q&f=false
Figura 3. Cromatografía de los tubos de ensayos con los
distintos compuestos. Noelia. (2015, February 1). Los colores de las plantas y las algas
| Bionesia: Las islas de la vida. Gobierno de Canarias.
Luego, con ayuda de un bisturí se cortó las placas
cromatográficas a un tamaño de 5x8cm posteriormente se marcó Retrieved June 1, 2022, from
con lápiz 1 cm de distancia del borde inferior y superior de la https://www3.gobiernodecanarias.org/medusa/ecoblog/
placa, además se marcaron tres puntos a 1 cm. Después, con ncarroq/2015/02/01/los-colores-de-las-plantas-y-las-alg
ayuda de un tubo capilar se extrajeron y colocaron los respectivos as/
pigmentos en la placa cromatografía, luego se introdujo la placa Pássaro, C., Rivera, C., & Román, M. (2016). GUÍA SOBRE
en el tanque cromatográfico durante 30 minutos. Transcurrido los PRINCIPIOS BÁSICOS DE CROMATOGRAFÍA Y
30 minutos, se retiró la placa y se marcó el punto alcanzado por
la fase móvil, con ayuda de una pinza se colocó sobre el aire SUS APLICACIONES. repositorio.sena.edu.com.
https://repositorio.sena.edu.co/bitstream/handle/11404/
4694/guia_cromatograf%EDa.pdf;jsessionid=DEBCC2
E470DFD9010A3AF0EAF8EE9664?sequence=1
Rodriguez, S., & Martinez, G. (04 de abril de 2015).
EXTRACCIÓN DE LOS PIGMENTOS DE LAS HOJAS
DE ESPINACA. Obtenido de Natubeata:
https://natubeata.blogspot.com/2015/04/laboratorio-extr
accion-de-los-pigmentos.html
Skoog, D., West, D., & Holler, F. (2018). Fundamentos de
química analítica. (4.a ed., Vol. 2). Editorial Reverté.
https://books.google.com.ec/books?id=8LP1DwAAQB
3
AJ&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_sum
mary_r&cad=0#v=onepage&q&f=false

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Kouznetsov, V., & Vargas, L. (2020). Defensa química en la

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