Universidad de Guayaquil Facultad

de Ciencias Químicas Carrera:

Química y Farmacia

No. 7- 8 Partes y funcionamiento de un cromatógrafo de gases

Cromatografía de gases. Evaluación del efecto de la temperatura
Nombre: Valeria Damaris Pita Decimavilla.
Objetivos de la práctica de laboratorio:
Funcionamiento de un cromatógrafo de gases:
1) Conocer las partes principales de un equipo de cromatografía de gases previo al estudio
de su funcionamiento.
2) Establecer el trabajo en conjunto de cada parte del equipo y su importancia en el proceso de
análisis y cuantificación para la selección de las condiciones analíticas.
3) Identificar tipos de analitos, muestras y campos de aplicación en los que puede ser utilizado en
un cromatógrafo de gases.
Evaluación de efecto de temperatura
1) Reconocer los componentes del sistema cromatográfico de gases.
2) Identificar los parámetros de optimización cromatográfica por GC.
3) Determinar el efecto de aplicación de programación de temperatura para la separación cromatográfica.
Instrucciones o consideraciones previas:
Definición cromatografía de gases
Se define a la cromatografía de gases como una técnica de separación de mezclas de sustancias con características
volátiles. El proceso de elución se da por el flujo que posee la fase móvil el cual por lo general es un gas inerte,
es decir, en este tipo de cromatografía no existe relación o atracción de acuerdo a la polaridadcon el analito de
investigación. (Skoog F, 2008)
Funcionamiento:
Cromatografía de gases:
Se hace pasar el analito en forma gaseosa a través de la columna, arrastrado por una fase móvil gaseosa, llamada gas
portador. En cromatografía gas-líquido de reparto, la fase estacionaria es un líquido no volatil que recubre la pared interior
de una columna o un soporte sólido .En la cromatografía gas-sólido de adsorción, el analito se adsorbe directamente sobre
las partículas sólidas de la fase estacionaria.
La muestra de un líquido volátil o de un gas se inyecta a través de un septo (diafragma de silicona), en un inyector caliente,
en cuyo interior se evapora rápidamente. El vapor es arrastrado a través de la columna por el gas portador, que puede ser
He, N2 o H2, y los analitos después de separados llegan al detector, cuya respuesta aparece en la pantalla de un ordenador
o en un registrador. La columna debe estar lo suficientemente caliente para que los analitos alcancen una presión de vapor
adecuada y eluyan en un tiempo razonable. El detector se mantiene a una temperatura más elevada que la columna, de
forma que los analitos se encuentren en forma gaseosa (Harris).
Fase móvil: gas (normalmente He, N2 o H2)
Fase estacionaria: normalmente un líquido no volátil, pero también puede ser un sólido. analito: gas o líquido volátil.
La elección del gas portador depende del detector, y de la eficacia y rapidez de separación deseadas (Harris).
Columnas tubulares abiertas
Largas y estrechas , fabricadas de sílice fundida (SiO2) y recubiertas de poliimida (un plástico capaz de resistir 350 °C),
como soporte y como protección contra la humedad atmosférica.3 Los diámetros interiores típicos son entre 0,1 y 0,53 mm,
y las longitudes típicas, de 15 a 100 m. Las columnas estrechas dan mayores resoluciones que las columnas anchas, pero
requieren una presión de trabajo mayor y tienen menos capacidad de muestra , columnas tubulares abiertas son de mayor
resolución, permiten mayor rapidez de análisis, y mayor sensibilidad que las columnas empaquetadas las columnas
tubulares abiertas estrechas tienen mayor resolución que las tubulares más anchas, pero necesitan mayor presión para poder
funcionar, y tienen menor capacidad de muestra (Harris).

Diagrama esquemático de un cromatógrafo de gases (Harris).

Columna tubular abierta de pared recubierta (WCOT): La fase estacionaria líquida recubre el interior de la columna.
Columnas tubulares abiertas recubiertas de soporte (SCOT): La fase estacionaria líquida recubre a un soporte sólido,
que se encuentra unido a la pared interior de la columna.
Columna tubular abierta de capa porosa (PLOT): la pared interior está recubierta de una fase estacionaria sólida
• Al disminuir el grosor de la fase estacionaria:
1. disminuye la altura de plato
2. disminuye el tiempo de retención
3. disminuye la cantidad de analito que se puede analizar (Harris).
a. Dimensiones típicas de las columnas tubulares abiertas utilizadas en cromatografía de gases.
b. Columna cromatográfica de sílice fundida. El diámetro del rollo es de 0,2 m y la longitud típica de las columnas es entre
15-100 m.
c. Sección transversal de columnas de pared recubierta de fase estacionaria liquida, sólida y de capa porosa (Harris).
Fases estacionarias de uso frecuente en cromatografía de gases capilar

Polaridad de solutos

FUENTE: Adaptado de H. M. MCNAIR y E. J. BONELLI, Basic Gas Chromatography (Palo Alto, CA: Varian
Instrument Division, 1968).
 Columnas empaquetadas
Las columnas empaquetadas contienen un soporte sólido de partículas finas recubiertas de una fase estacionaria líquida
no volátil, o el sólido mismo es la fase estacionaria. A pesar de su menor eficacia, las columnas empaquetadas son útiles
para separaciones preparativas, en las que se precisa una gran cantidad de fase estacionaria, o para separar gases que no
son muy retenidos. Las columnas, de ordinario, son de acero inoxidable, níquel o vidrio, y sus dimensiones típicas son 3-
4 mm de diámetro y 1-5 m de longitud. El soporte sólido, frecuentemente, son tierras de diatomeas - esqueletos silíceos
de algas - que se silanizan , para reducir enlaces con compuestos polares , por puentes de hidrogeno . En el caso de solutos
que se unen con mayor fuerza , un soporte útil es el teflón , cuyo uso esta limitado a temperaturas menores 200 grados
centígrados (Harris).

Programación de temperatura y de presión

Programación de temperatura y de presión La programación de temperatura consiste en aumentar la temperatura de la

columna durante la separación para aumentar la presión de vapor de los solutos , y de este modo disminuir los tiempos de
retención de los componentes que se eluyen al final (Harris).
Inyección de muestra
Después de limpiar la jeringa varias veces con el disolvente , se aspira aire, después disolvente, luego aire, a continuación
muestra, y finalmente mas aire Cuando se introduce la aguja a través del septo de silicona en el inyector caliente del
cromatógrafo, la muestra no se evapora inmediatamente, porque en la aguja no hay muestra. Si hubiera muestra en la aguja,
los compuestos más volátiles comenzarían a evaporarse, y desaparecerían antes de inyectar la muestra. La burbuja de aire
detrás de la porción de muestra impide que se mezclen la muestra y el disolvente. La porción siguiente de disolvente lava
la aguja, eliminando restos de muestra, y la última porción de aire elimina los restos de disolvente en la aguja. Muchos
automuestreadores son capaces de realizar este tipo de inyección «sándwich».
Inyección con división
los analitos que interesan constituyen > 0,1% de la muestra , de ordinario, es preferible una inyección con división para
introducir la muestra en la columna. En trabajos que requieren gran resolución los mejores resultados se obtienen con la
mínima cantidad de muestra menor igual 1 mL que pueda detectarse bien (Harris).
Inyección con división
apropiada para análisis de trazas de analitos, que constituyen menos de 0,01% de la muestra. El tubo interior guía es un
tubo recto vacio , sin cámara de mezcla se inyecta lentamente (aproximada- mente durante 2 s) dentro de la guía un volumen
grande (—2 mL) de disolución diluida en un disolvente de bajo punto de ebullición, con la válvula de escape cerrada.
(Durante la inyección y la separación cromatográfica se mantiene un pequeño caudal a través de la purga del septo, para
eliminar los vapores que se puedan escapar de la guía de inyección.) La temperatura del inyector en la inyección sin división
es menor (220 *C) que en la inyección con división, porque la muestra pasa mucho más tiempo en el inyector (Harris).

Inyección en columna
La inyección en columna se usa con muestras que se descomponen por encima de su punto de ebullición, y es la forma
preferida en análisis cuantitativo. La disolución se inyecta direc- tamente en la columna, sin pasar por un inyector caliente
(figura 24.11). La temperatura ini- cial de la columna es suficientemente baja para que condensen los solutos en una banda
estrecha. La cromatografía se inicia calentando la columna. De este modo se somete la muestra a la temperatura más baja
posible, y se pierde poco soluto. La aguja de una jeringa están- dar, de microlitros, se acopla directamente dentro de una
columna, típicamente, de 0,53 mm de diámetro, aunque ésta no da una resolución óptima. Se obtiene una mejor resolución
con columnas de 0,25 a 0,30 mm de diámetro, pero necesitan jeringas especiales de sílice (Harris).
Detectores
Para análisis cualitativo, dos detectores que pueden identificar compuestos son el espectrómetro de masas y el
espectrómetro de infrarrojos con transformada de Fourier (apartado 20.5). Un pico se puede identificar comparando su
espectro con los de una librería de espectros guardados en un ordenador. Un método menos sofisticado de identificar un
pico es comparar su tiempo de retención con el de una muestra auténtica del compuesto que se sospecha. El modo más
fiable de comparar tiempos de retención es por co-cromatografía, es decir, añadiendo una muestra auténtica a la muestra
desconocida. Si el compuesto añadido es idéntico a un componente de la muestra desconocida, el área del pico
correspondiente aumentará. La identificación es sólo aceptable cuando se hace la prueba con una sola columna, pero es
 más segura si se utilizan varias columnas con diferentes clases de fases estacionarias. El análisis cuantitativo se basa en el
área del pico cromatográfico. Se suelen escoger condiciones en las que la respuesta es lineal, es decir, cuando el área de
pico es proporcional a la cantidad de ese componente (Harris).
Tabla 1. División del detector con su lectura y gas de apoyo

Detector Lectura de Gas de apoyo Selectividad

concentración
Ionización de Flujo de masa Hidrógeno y aire Compuestos
llama (FID) orgánicos
Captura de Concentración Make up Haluros,
electrones (ECD) nitratos,nitrilos,
peróxidos.
Foto-ionización Concentración Make up Alifáticos,
(PID) aromáticos,cetonas.

Fotometría de Flujo de masa Hidrógeno y aire. Azufre, fósforo,

llama (FPD) estaño.

Nitrógeno Flujo de masa Hidrógeno y aire Nitrógeno, fósforo

fósforo

Reactivos de laboratorio:

▪ Dimetil sulfóxido (calidad reactivo)

▪ Benceno (estándar certificado)
▪ Butanol (estándar certificado)
Materiales de laboratorio:

▪ Columna Capilar de tipo Zebron ZB-5ms (30 m x 0.25 mm x 0.50 um)

Equipos de laboratorio:
▪ Cromatógrafo de gases
▪ Detector FID, Gas de arrastre Helio, Inyector split
Actividades por desarrollar/ técnica operatoria o procedimiento:
Informe 7:
• Elaboración de un esquema donde indique las partes y su función principal dentro del proceso de
separación, análisis y cuantificación.

Cromatografo de gases

Inyector: es un puerto destinado Columna: el analito ingresa en

a inyectar las muestras: esta se la columna y se separa en
divide en dos partes una componentes individuales ,
minoritaria que se trasnfiere a la dependiendo de su afinidad con
columna y otra mayoritaria que la fase estacionaria y la movil
se expulsa que es la fase del gas portador.

Gas de arrastre o fase movil: se Software de deteccion : Detector:

usa para transportar la muestra procesa los cambios registrados es donde se determina la
por la columna del a traves de la deteccion composicion y concentracion del
cromatografo. registrada por el detector. analito.

Informe 8:

▪ Preparar una solución de patrón benceno y butanol (solución mezcla) del orden de 50 ppm de concentración.
▪ Encender el sistema cromatográfico y abrir el paso del gas de arrastre.
▪ Revisar la literatura para definir las condiciones de temperatura de ebullición de los compuestos a
analizar, peso molecular, polaridad. Así también características de la columna cromatográfica.
Benceno Butanol
Temperatura de ebullición: 80,1 °𝐶 Temperatura de ebullición: 117,7 °𝐶
PM: 78,11 g/mol PM: 74,12 g/mol
Polaridad: Apolar Polaridad: Polar

▪ Colocar en el software las condiciones básicas del método analítico

▪ Temperatura del inyector: 250°C
▪ Temperatura del detector: 250°C
▪ Flujo de gas de arrastre: 55 cm/seg
 ▪ Volumen de inyección: 1 uL
▪ Inyección Split 50:1
▪ Inyectar en el sistema cromatográfico 1 uL de la solución patrón condiciones de temperatura de columna.
▪ Registrar los tiempos de retención de los compuestos.
▪ Registrar y analizar los datos de las mediciones cromatográficas conforme a los artículos
científicos proporcionados por el docente.
Anchura de pico
A) 1 = 0,1 2 = 0,1 min
min

B) 1= 0,02 2 = 0,02 min

min

C) 2= 0,03 1 = 0,02 min

min

D) 2= 0,02 1 = 0,02min
min

Semialtura

A) 1 = 0,05 min 2 = 0,05 min

B) 1 = 0,01 min 2 = 0,01 min

C) 1 = 0,015 min 2 = 0,01 min

D) 1 = 0,01 min 2 = 0,01 min

 Tm
A) 3,75 min
B) 2,6 min
C) 2,17 min
D) 2,03 min

Volumen de retención
Formula: Vr = tr * flujo
A) Vr = tr * flujo = 225 sec*55cm/sec = 12375 cm Vr = tr * flujo = 237sec*55cm/sec = 13035 cm
B) Vr = tr * flujo = 156 sec*55cm/sec = 8580 cm
C) Vr = tr * flujo = 130,2 sec*55cm/sec = 7161 cm Vr = tr * flujo = 131,4 sec*55cm/sec= 7227 cm
D) Vr = tr * flujo = 121,8 sec*55cm/sec = 6699 cm Vr = tr * flujo = 124,2 sec*55cm/sec= 6831 cm

Retención relativa o alfa

𝑡´𝑟2
A) α= =0
𝑡´𝑟1
𝑡´𝑟2
B) α= = 0
𝑡´𝑟1
𝑡´𝑟2
C) α= =0
𝑡´𝑟1
𝑡´𝑟2
D) α= =0
𝑡´𝑟1

Factor de capacidad k
A)
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´1 = =0
𝑇𝑚
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´2 = = 0,053
𝑇𝑚
B)
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´1 = =0
𝑇𝑚
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´2 = =0
𝑇𝑚
C)
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´ = =0
𝑇𝑚
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´ = = 0,009
𝑇𝑚
D)
𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´ = =0
𝑇𝑚

𝑇𝑟 − 𝑇𝑚
𝑘´ = = 0,019
𝑇𝑚
Resolución
𝑇𝑟2 − 𝑇𝑟1
𝑅1 = =2
0,5(𝑊1 + 𝑊2)

𝑇𝑟2 − 𝑇𝑟1
𝑅2 = =0
0,5(𝑊1 + 𝑊2)
𝑇𝑟2 − 𝑇𝑟1
𝑅3 = = 0,4
0,5(𝑊1 + 𝑊2)
𝑇𝑟2 − 𝑇𝑟1
𝑅4 = = 2,5
0,5(𝑊1 + 𝑊2)
Resultados obtenidos:
TABLA DE DATOS

Compuesto Condiciones de Temperatura de Temperatura de

temperatura ensayadas inyector detector
Ensayo 1 Programa isotérmico a 30 250°C 250°C
°C, rampa de 0°C/min
Ensayo 2 Programa a 30 °C, 0 min 250°C 250°C
rampa de10°C/min
Ensayo 3 Programa a 30 °C,0 min, 250°C 250°C
rampa de 20°C/min
Ensayo 4 Programa a 30 °C, 0 min , 250°C 250°C
rampa de30°C/min

Condiciones
de análisis
Ensayos Temperatura Tiempo Rampa Temperatura Tiempo Tiempo de
inicial inicial final final análisis
Ensayo 1 Programa a 30 0 min Programa 30°C 4,3 min 4 min

°C isotérmico
a 30 °C,
rampa
de 0°C/min
Ensayo 2 Programa a 0 min Programa a 30 57°C 2,70 min 2,63 min

30 °C, rampa de
°C 10°C/min
Ensayo 3 Programa a 0 min Programa a 30 76°C 2,31 min 2,2 min

30 °C, rampa de
°C 20°C/min
Ensayo 4 Programa a 0 min Programa a 30 96°C 2,2 min 2,1 min

30 °C, rampa de
°C 30°C/min
 Ensayo 2 (rampa Ensayo 3 (rampa de Ensayo 4 (rampa de
de 10°C) 20°C) 30°C)
tiempo Temperatura tiempo Temperatura tiempo Temperatura
0 30°C 0 30°C 0 30°C
1 40°C 1 50°C 1 60°C
2 50°C 2 70°C 2 90°C
2,1 51°C 2,1 72°C 2,1 93°C
2,2 52°C 2,2 74°C 2,2 96°C
2,3 53°C 2,3 76°C
2,4 54°C 2,4 78°C
2,5 55°C 2,5 80°C
2,6 56°C
2,7 57°C

Tiempo de retención (min)

Compuesto
Ensayo 1 Ensayo 2 Ensayo 3 Ensayo 4
1. Benceno 3,75 min 2,6 min 2,19 min 2,07 min
2. Butanol 3,95 min 2,6 min 2,17 min 2,03 min
Orden de elución

Ensayos Orden de elución

Ensayo 1 Benceno eluye primero Benceno eluye primero
Ensayo 2 En el mismo tiempo eluyen En el mismo tiempo eluyen
ambos compuestos ambos compuestos
Ensayo 3 Butanol eluye primero Butanol eluye segundo
Ensayo 4 Butanol eluye primero Butanol eluye segundo
Características de la Fase Estacionaria:

Columna: Zebron ZB-5MSi

Dimensión: 30 meter x 0.25 mm x 0.25 𝜇𝐿

Part No: 7 HG-G018-11

Volumen de inyección: Split 40: 1@250 °𝐶 , 1 𝜇𝐿

Gas: Helium @ 1.2 mL/min ( constant Flow)

Programación: 100°𝐶 to 180 °𝐶 @ 5 °𝐶/ min to 320 °𝐶 @ 5 °𝐶/min

Detector: MSD @ 180 °𝐶 , 45-450 amu

Composición: 95% dimetilpolisiloxano , y 5 % fenil

Sample: Analytes are 50 ppm in acetone

Usos: Drugs , EPA Methods , FAMEs , Nitrosamines , Pesticides , Phenols.

Conclusiones:
La cromatografía de gases es una técnica de separación en el cual se utiliza para determinar diferentes
componentes de una muestra que tengan compuestos volátiles ,sim embargo es importante aplicar una correcta
temperatura debido que si no se aplica correctamente puede alterar el orden de elución de los compuestos , además
que es fundamental usar según la aplicación los tipos de columnas sean capilares o empacadas , en nuestro caso
se usa las capilares , ya que las columnas estrechas dan mayores resoluciones que las columnas anchas , de la
misma forma se debe observar con que tipo de detector se trabaja para determinar la salida del analito por el final
de la columna.

Recomendaciones:
• Usar una fase móvil adecuado y de bajo coste.
• Colocar una temperatura adecuada.
• Realizar la preparación de la muestra.
• Usar las normas de bioseguridad.
Bibliografía
Harris, D. (s.f.). Análisis químico cuantitativo (3a.ed). Barcelona , Spain. Obtenido de
https://elibro.net/es/ereader/uguayaquil/46773
Skoog F., D. (2008). Principio de análisis intrumental. México: Cengage Learning.