Practica Piruvato
Practica Piruvato
Practica Piruvato
Practica 3 de laboratorio
Materia: Bioquímica
Docente: Orozco Mosqueda Ma. Del Carmen
Fecha de entrega: 20/10/22
Integrantes:
Osorio herrera Erik Ivan N°20031314
Tierrablanca Sánchez Jair N°20031454
Mata Nieto Emily Ghyslaine N°20031451
Guerra Mancera María Fernanda N°20031997
Introducción
La fermentación es una vía muy difundida, pero no es la única forma de obtener
energía de combustibles anaeróbicamente (en ausencia de oxígeno). Algunos sistemas
vivos utilizan en su lugar una molécula inorgánica diferente al O2
O, como el sulfato, como aceptor final en una cadena de transporte de electrones. Este
proceso, llamado respiración celular anaerobia, lo realizan algunas bacterias y
archaeas.
En este artículo, veremos con mayor detalle la respiración celular anaerobia y los
diferentes tipos de fermentación.
Para obtener etanol a partir de piruvato, se usan dos pasos. En el primer paso, al
piruvato se le retira un grupo carboxilo y se libera como dióxido de carbono, con lo que
se produce una molécula de dos carbonos llamada acetaldehído. En el segundo paso,
el {NADH}, dona sus electrones al acetaldehído y regenera el NAD a la vez que
genera etanol.
La fermentación alcohólica de las levaduras produce el etanol de bebidas alcohólicas
como la cerveza y el vino. Sin embargo, el alcohol en grandes cantidades es tóxico
para las levaduras (al igual que para los seres humanos), lo que establece un límite
superior en el porcentaje de alcohol en estas bebidas. La tolerancia de las levaduras al
etanol abarca desde el 5 por ciento hasta el 21 por ciento según la cepa de levadura y
las condiciones ambientales.
Objetivos
• Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura.
• Observar la producción de piruvato mediante cambios de coloración.
• Observar las reacciones enzimáticas de la glucólisis.
• Demostrar la formación de intermediarios glucolíticos.
Materiales
8 tubos de ensayo
1 pipeta 10ml
2 pipetas de 5ml
2 pipetas de 2ml
Termómetro
2 matraz erlenmeyer
Espátula
Gradilla
2 vidrios de reloj
Metodología
A.FORMACIÓN DE PIRUVATO A PARTIR DE GLUCOSA
2 tubos de ensaye como A y B. colocar solución glucosa
Al tubo A agregar 5mL de suspensión de levadura en solución ligeramente alcalina
de Na 2 HPO 4 ; al tubo B, 5mL de suspensión de levadura en solución ácida de
KH 2 PO 4 .
4.- Por último, añadimos gotas NH4OH conc. por paredes a cada tubo.
Metabolismo óxido-reductor
El piruvato es descarboxilado para producir C₂H₆O y CO2. La biomasa microbiana se
incrementa sólo levemente.
Metabolismo oxidativo
Por otra parte, la formación del acetil coenzima A es la primera etapa de
incorporación del piruvato a las rutas del metabolismo respiratorio, a saber:
el ciclo de Krebs y la cadena respiratoria. La activación de este metabolismo
conlleva al consumo de oxígeno. La producción de biomasa aumenta
significativamente respecto al metabolismo oxidativo-reductor, pero se produce
poco C₂H₆O.
La primera imagen, fue tomada en cuanto se le agrego NH 4OH por paredes. Los
tubos mostraron una tonalidad blanquizca con un anillo entre café-anaranjado y un
precipitado blanco.
La segunda imagen, ya no nos muestra el anillo, por lo que la reacción fue
momentánea y la parte del sobrenadante se tornó besh, al igual que el precipitado.
En esta determinación, no obtuvimos los resultados deseados, pues, teníamos que
haber obtenido una coloración ya sea azul o verdosa y la formación de un anillo
rosado.
*Método de berthelot.
Las técnicas indirectas son llamadas así porque no se cuantifica directamente el
metabolito, sino algún producto de degradación del mismo o el de otra reacción. Las
técnicas indirectas para la urea recurren a la enzima ureasa (urea amidohidrolasa,
E.C. 3.5.1.5.) para descomponer la urea en amonio y CO2. Después de la reacción
se cuantifica cualquiera de los dos productos de reacción, principalmente el amonio.
Fundamento: La ureasa hidroliza la urea en amonio y anhídrido carbónico; el
amonio liberado reacciona con fenol e hipoclorito de sodio para formar p-
quinonacloramina; ésta, con una segunda molécula de fenol, produce un compuesto
indofenólico de color azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de urea
presente. La reacción se activa en presencia de nitroprusiato de sodio.
La reacción ha sido modificada para que se pueda introducir a un autoanalizador,
sustituyendo el fenol por salicilato de sodio y activando con nitroprusiato de sodio
para formar el indofenol, por lo que el último paso de la reacción es:
C. Determinación de piruvato con 2,4-dinitrofenilhidrazina.
Al diluir el NaOH con H2O destilada, los tubos resultaron con una coloración rojiza,
la cual nos indica que hay piruvato en esa muestra.