UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD INDUSTRIAL

“BIORREMEDIACIÓN DE AGUAS RESIDUALES EN EL DISTRITO DE SAN

MARTÍN DE PORRES MEDIANTE LA BACTERIA BACILLUS SUBTILIS”

CURSO MICROBIOLOGÍA
BO122F

EXHIBICIÓN DE PRESENTACIÓN
VIERNES DE 08:00 A 10:00

DOCENTE: INTEGRANTES:
MSc. Blgo.Alvaro Martin Gaspar Trejo, Benny Brayhan(cód. 20225008C)
Martínez Vila Noa Osores, Alex Santiago(cód. 20211492E)
Gómez Garibay José Armando (20212211J)
Bryan Alex Cerna Ramirez (20211018A)
INDICE I. RESUMEN................................................................... 4
II. INTRODUCCIÓN........................................................ 4

III. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA....................... 8

IV. MARCO TEÓRICO................................................... 22
V. MATERIALES – MEDIOS - EQUIPOS.................. 22
VI. MÉTODO, TÉCNICA E INSTRUMENTOS............. 22
VII. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES...................... 22
VIII. LUGAR DE EJECUCIÓN Y MUESTREO................ 22
IX. OBJETIVOS............................................................... 22
X. HIPÓTESIS................................................................ 23
XI. ASPECTOS LEGALES - NORMAS......................... 22
XII. IMPORTANCIA......................................................... 22
XIII. JUSTIFICACIÓN....................................................... 22
XIV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL...................... 22
XV. RESULTADOS........................................................... 22
XVI. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.............................. 22
 RESUMEN
En este proyecto de investigación titulado como “Biorremediación

de aguas residuales en el distrito de San Martín de
Porres mediante la bacteria bacillus” se han evaluado las aguas residuales mediante la presencia y concentración de
indicadores como estreptococos o enterococos en el distrito de San Martín de Porres, estas aguas han sido separadas a
un medio aislado de tal manera que se procedió con el proceso de biorremediación para el cual se ha empleado la
bacteria Bacilus, la cual tiene una gran eficiencia en temas de biorremediación de aguas residuales. Este proyecto de
investigación tiene una gran importancia debido a que la presencia de aguas residuales en el distrito mencionado es de
gran magnitud y relativamente existe un problema de abastecimiento de agua y alcantarillado, por lo que la reutilización
de estas aguas es algo favorable para aquellos que no cuentan con agua en sus hogares y pueden optar por ella a un
precio más cómodo.
 INTRODUCCIÓN

Existen varios aspectosque deben ser considerados dentro del enfoquede ecoeficiencia por parte de un gobierno municipal.
En el campo del tratamiento de las aguas residuales se plantean un conjunto de programas y planes de implementación,
cuyo objetivo, enfocado en la ecoeficiencia, recae en la introducción y aplicación de buenas prácticas, aplicación de la
reingeniería de procesos y el análisisdel ciclo de vida del agua. La implementación de la ecoeficiencia se inicia con la
mejorade los procesos, aplicando medidas de eficiencia energética, ahorro de agua, buena disposición de residuos sólidos y
tóxicos, evitando arrojarlos al alcantarillado. Por otro lado, el análisis del ciclo de vida aplicado al caso del agua implica ver
su origen, su uso como medio de transporte de material contaminante, su tratamiento y su reuso. En ese contexto resulta vital
impulsar la recirculación del agua, dentro de procesos productivos. Es importante incluir como partede los objetivos de la
gestión Municipal o Regional, un Plan de “reuso de las aguas residuales tratadas”, tal que permita el aprovechamiento
integral de losrecursos hídricos dentro del ciclo de vida del agua. Allí donde los recursos hídricos son particularmente
escasos, el reuso de las aguas residuales coincide con dos objetivos fundamentales: protección a la salud y la gestión
ambiental de los recursos hídricos. Laecoeficiencia aplicada al tratamiento de aguas residuales no discrimina las tecnologías
existentes o empleadas, sino propicia mejorar la articulación de los componentes, para crear operaciones y procesos que, en
conjunto, sean más económicos, tengan mejor eficiencia y sean ambientalmente amigables al ser empleados en la
depuración de las aguas residuales.

En cuanto a los sistemas de tratamiento biológico de agua residual, encontramos lo siguiente:

-UNIDADES DE PRE TRATAMIENTO O TRATAMIENTO PRELIMINAR
-UNIDADES DE TRATAMIENTO PRIMARIO
-TRATAMIENTO SECUNDARIO
 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Ante una mayor demanda de productos por

la población de San Martín de Porres,
debido a que es uno de los distritos más
populosos de Lima Metropolitana, distrito el
cual genera por cada habitanteuna
cantidad aproximada a 145 litros de aguas
residuales al día. Así también, el Perú
genera aproximadamente 2 217 946 m3 por
día de aguas residuales descargadas a la
red de alcantarillado de las EPS
Saneamiento donde el 32% de estas
recibetratamiento y en Lima, se genera
aproximadamente 1 202 286 m3 por día de
aguas residuales descargadas a la red de
alcantarillado de las EPS Saneamiento.
 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

DESCARGAS DE AGUAS GENERACIÓN DE AGUA RESIDUAL EN PORCENTAJE DE TRATAMIENTO DE

RESIDUALES DOMESTICAS LIMA METROPOLITANA, SEGÚN AGUAS RESIDUALES, SEGÚN EMPRESA
SIN TRATAMIENTO 2008-2016 FORMAS DE TRATAMIENTO 2007-2016 PRESTADORA DE SERVICIOS 2008-2016
 MARCO TEÓRICO

LA BIORREMEDIACION

La biorremediación es una tecnología que utiliza el potencial metabólico de los microorganismos y plantas para limpiar terrenos o
aguas contaminadas, también puede definirse como el uso de organismos vivos,componentes celulares o enzimas libres con el fin de
realizar una mineralización, transformación parcial o humificación de residuos o agentes contaminantes.

Debe tenerse en cuenta que el tipo de tratamiento biorremediador empleado, así como su éxito, dependerá de las condiciones del
recurso afectado, de las capacidades de las tecnologías remediadoras, del proceso de tratamiento, del pH, de los tiempos de
retención y de las concentraciones en el agua tratada, entre otros.

La biorremediación, dependiendo del organismo utilizado, se diferencia en ficorremediación, fitorremediación, rizorremediación y

bioadsorción principalmente, expresa además en su investigación que los tratamientos biológicos, muestran una serie de ventajas y
limitaciones, en comparación con otras tecnologías convencionales (métodos fisicoquímicos).

Ventajas:
Son efectivos en cuanto a sus costos.
Sus tecnologías no son dañinas para el medio ambiente y los contaminantes generalmente son eliminados.
Se requiere un mínimo o ningún tratamiento posterior.

Desventaja:
Los tiempos de los tratamientos son mayores, y no pueden emplearse si el tipode agua – suelo(sustrato) no favoreceel crecimiento
microbiano.
 MARCO TEÓRICO

TIPOS DE BIORREMEDACION:

BIORREMEDACION MICROBIANA
Existe la posibilidad del uso de bacterias con la propiedadde acumular o metabolizar metales pesados. La
utilización de microorganismos que transforman diferentes compuestos nocivos en otros de menor
impactoambiental ha experimentado un gran desarrollo reciente. Aunque las bacterias son las más
empleadas en el proceso de biorremediación, también se han empleado otros microorganismos tales como
hongos, algas, cianobacterias y actinomicetes para la degradación de compuestos tóxicos en el suelo.

FITORREMEDA
La fitorremediación utiliza las plantas para remover, reducir, transformar, mineralizar, degradar, volatilizar
o estabilizar contaminantes. Se han identificado una amplia diversidad de especies que se emplean para
este fin. Las fitotecnologías se basan en los mecanismos fisiológicos básicos que tienen lugar en las
plantas y en los microorganismos asociados a ellas, tales como: traspiración, fotosíntesis, metabolismo y
nutrición.
 MATERIALES, MEDIOS Y EQUIPOS

LOS MATERIALES A UTILIZAR SON:

• 3 Erlenmeyer de 500 mL

• 1 Magneto

• Plancha de calentamiento y agitación

• Balanza analítica

• Espátula

• Probeta 50 mL

•3 frascos Boecos de 250 mL

•Vortex

•20 tubos de ensayo tapa rosca

•Pipeta graduada de 10 mL
 MATERIALES, MEDIOS Y EQUIPOS

LOS MATERIALES A UTILIZAR SON:

• 1 Gradilla

•1 Micropipeta de 100- 1000µL con puntas

•3 Capsulas de porcelana

•1 Horno

•5 Asas de vidrio

•1 Beaker 250 mL

•Papel aluminio

•1 Vidrio reloj

•1 Microespátula

•2 Mecheros
 METODO TECNICAS E
INSTRUMENTOS

1. Tipo de investigación: Investigación aplicada pues este sostiene que dicho tipo de
investigación tiene como objetivo generar conocimiento con aplicación directa a los problemas
de la sociedad
2. Diseño de investigación:Es experimental, pues este sostiene que dicho tipo de investigación
tiene como objetivo generar conocimiento con aplicación directa a los problemas de la sociedad

CAUSA: El distrito de San Martín es uno de los distritos con mayor población en Lima y la alta
demanda de la población por agua genera con ello una gran cantidad de aguas residuales que
pueden ser tratadas para su reutilización.

EFECTO: La aplicación de la bacteria Bacilus subtilis en el proceso de biorremediación de las

aguas residuales generará una alternativa para las industrias y la población a un menor precio.
Variable independiente (el investigador manipula): Aplicación de la bacteria Bacilus subtilis en
la biorremediación de aguas
Variable dependiente: (la respuesta del participante depende de la manipulación)
Variación de los parámetros fisicoquímos como el pH, temperatura y densidad; microbiólicos
como la carga microbiana por coliformes totales, coliformes fecales o coliformes
termotolerantes.
 METODO TECNICAS E
INSTRUMENTOS

Universo, población, muestra y muestreo

a. Universo:
El volumen de agua presente en el río Chillón que tiene 126km de extensión.

b. Población:
Se considera como población en este presente trabajo a la cantidad de agua que pasará al
tratamiento mediante biorremediación, el cual consistirá de 50 litros en un flujo de 100ml/s.

c. Muestra:
Se considera una muestra de 500ml de algua tratada y se someterá bajo el procedimiento de
filtración por membrana para reconocer su eficiencia mediante la detección de coliformes
fecales como el E. Coli.

 METODO TECNICAS E
INSTRUMENTOS

Técnica:
El presente trabajo será desarrollado a partir del análisis documental a través de la
recopilación de información de diversos documentos que facilitarán la aplicación y uso de
estos para la extensión sobre la problemática considerada en la investigación

Instrumentos:
Matriz el cual permitirá evidenciar la base de datos en su totalidad, esto quiere decir que
los elementos principales serán los resultados que obtuvieron en la Biorremediación de
aguas con respecto a los parámetros y porcentajes de remoción del contaminante.
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

LUGAR DE EJECUCIÓN Y MUESTREO

 OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
EXPLICAR EL PROCESO DE BIORREMEDIACIÓN EN AGUAS QUE HAN SIDO CONTAMINADAS Y ALTERADOS POR
DIVERSOS FACTORES, ASÍ MISMO NUMERAR DE MANERA BREVE ALGUNOS TIPOS DE BIORREMEDIACIÓN QUE
EXISTAN, MENCIONAR LAS CAUSAN QUE CONDUCEN EL DETERIORO DE LAS AGUAS Y LA IMPORTANCIA DE
USAR PROCESOS BIOTECNOLÓGICOS PARA REPARAR LOS DAÑOS.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
O1. DEMOSTRAR QUE LA BACTERIA BACILLUS SE EMPLEA EN EL PROCESO DE BIORREMEDIACIÓN, ASÍ MISMO
EXPLICAR SUS PROPIEDADES Y CAPACIDADES BIORREMEDIADORAS QUE PRESENTAN, Y LAS CONDICIONES QUE
NECESITAN PARA PODER CUMPLIR CON EFICACIA LOS OBJETIVOS DE ESTE PROCEDIMIENTO.

O2: ADQUIRIR UNA PERSPECTIVA DIFERENTE DE LA MICROBIOLOGÍA, COMPRENDER LA PARTE BUENA DE LOS
MICROORGANISMOS ACERCA DE LOS MUCHOS BENEFICIOS QUE PUEDAN BRINDARNOS.

O3: EVALUAR LA EFECTIVIDAD DE CADA TRATAMIENTO PARA EL ESTABLECIMIENTO DEL PROCESO DE

BIORREMEDIACIÓN
 HIPÓTESIS

1. El establecimiento de las condiciones óptimas de

crecimiento de bacillus permitirá producir intensivamente
la cepa para su aplicación en campo.
2. Se obtendrán mejores resultados de biorremediación en las
muestras de agua modelo debido a la menor complejidad
estructural del agua
La aplicación de la La aplicación de la 3. Mediante la biorremediación de aguas residuales se
bacteria Bacillus bacteria Bacillus disminuye el impacto ambiental de los contaminantes del
agua
Subtilis en la Subtilis en la 4. La aplicación de la bacteria Bacillus Subtilis en la
biorremediación de biorremediación de biorremediación del agua permite la reducción de
partículas contaminantes microbiológicas de manera más
las aguas residuales las aguas residuales efectiva y económica que el método convencional.
del río Chillón del río Chillón 5. La aplicación de la bacteria Bacillus Subtilis representa una
técnica aplicable en esta parte de la línea de tratamiento
ubicado en el distrito ubicado en el distrito de aguas residuales.
de San Martín de de San Martín de 6. Mediante la biorremediación de aguas residuales aplicando
la bacteria Bacillus Subtilis se reducirá la concentración de
Porres no presenta Porres influye materia orgánica presente en el agua
efectos positivos en positivamente en los
los resultados de los resultados de los
parámetros parámetros
fisicoquímicos y fisicoquímicos y
microbiológicos del microbiológicos del
agua tratada agua tratada,
resultando ser una
opción viable para
VARIABLE INDEPENDIENTE VARIABLE DEPENDIENTE
tratar las aguas Dosis de bacteria Bacillus Subtilis aplicado en Parámetros Fisicoquímicos,
la biorremediación de aguas residuales.. Microbiológicos y de campo
residuales.
 ASPECTOS LEGALES Y NORMAS

MASCARILLAS
PROTOCOLOS DE BIOSEGURIDAD − FFP1 (filtro de
partículas tipo P1):
FFP2 (filtro de
partículas tipo P2):
EN EL CAMPO:
Es preferible reunirse al aire libre,
lavarse las manos con agua y jabón
por lo menos 20 segundos,
especialmente después de ir al baño,
antes de comer y después de toser,
estornudar o soplarnos la nariz.

FFP3 (filtro de partículas tipo P3):

ANTE EL COVID 19:
Guarde al menos 1 metro de distancia
entre usted y otras personas, a fin de
reducir su riesgo de infección cuando
150 otros tosen, estornudan o hablan.
Mantenga una distancia aún mayor
entre usted y otras personas en
espacios interiores. Cuanto mayor
distancia, mejor.
ASPECTOS LEGALES Y NORMAS

MARCO LEGAL
LEY ORGANICA PARA EL APROVECHAMIENTO SOSTENIBLE DE LOS
RECURSOS NATURALES (Ley N° 2681)

LEY QUE REGULA EL USO DE AGUA EN LOS PROYECTOS

ESPECIALES ENTREGADOS EN CONCESIÓN (Ley N° 28029)

LEY DE REFORMA CONSTITUCIONAL QUE RECONOCE EL DERECHO DE ACCESO AL

AGUA COMO DERECHO CONSTITUCIONAL (Ley N° 30588)

LEY DE LOS RECURSOS HÍDRICOS (Ley N°29338)

LEY GENERAL DEL AMBIENTE:

DECRETO SUPREMO N° 004-2017-MINAM

DISPOSICIONES COMPLEMENTARIAS FINALES
Primera.- Aplicación de los Estándares de Calidad Ambiental para Agua en
los instrumentos de gestión ambiental aprobados
Segunda.- Del Monitoreo de la Calidad Ambiental del Agua
Tercera.- Métodos de ensayo o técnicas analíticas

DISPOSICIONES COMPLEMENTARIAS TRANSITORIAS

Primera.- Instrumento de gestión ambiental y/o plan integral en trámite ante
la Autoridad Competente
Segunda.- De la autorización de vertimiento de aguas residuales tratadas
Tercera.- De la aplicación de los Estándares de Calidad Ambiental para
Agua en cuerpos naturales de agua no categorizados
IMPORTANCIA

Título del proyecto de investigación: “Biorremediación de aguas

residuales en el distrito de San Martín de Porres mediante la bacteria
Bacillus subtilis”.
Encontramos una importancia en nuestro proyecto de investigación
titulado “Biorremediación de aguas residuales en el distrito de San
Martín de Porres mediante la bacteria Bacillus subtilis” en el sentido
que las aguas residuales en nuestra comunidad van en aumento año
tras año en el distrito de San Martín de Porres y estas aguas terminan
siendo vertidas en gran parte sobre el río Chillón, causando su
contaminación así como otros problemas como eutrofización y
problemas para filtrar el agua para que llegue a las viviendas o centros
donde se usa agua potable pudiendo originar problemas de
intoxicación o seguridad alimentaria, lo cual involucra a nuestra carrera
profesional como ingenieros de Higiene y Seguridad Industrial, donde
gracias a la biorremediación con la bacteria bacilus lograremos
reutilizar el agua que en algún momento fue desechada por los
pobladores, esto será de suma importancia ya que alrededor de 1.4kg
de aguas residuales son vertidas por persona.
El agua para consumo humano es usada para el desarrollo de
actividades domésticas, comerciales e industriales y esto termina
generando aguas
residuales municipales. Estas últimas que no son descargadas a una
red de alcantarillado sino es usada en terrenos estériles o son usados
para
regar cultivos. Este trabajo de investigación tiene como importancia
determinar los tipos de organismos que debemos aplicar o incluir al
ecosistema de las aguas
domésticas proveniente de cada casa, así poder remediar algunas
consecuencias provenientes de estos microorganismos.
 JUSTIFICACIÓN

La biorremediación de aguas residuales

genera un modelo de negocio sostenible ya
que empresas, fábricas o industrias mineras o
de cualquier otra especialización requieren de
agua para sus procesos y muchas veces
contaminan el agua en el que se encuentran
realizando sus procesos como al momento de
realizar lavado de minerales.
 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Los microorganismos empleados para este estudio fueron seleccionados de acuerdo a

los siguientes criterios: productividad metabólica y distribución. La cepa de Bacillus
subtilis se aisló a partir de una muestra del río Chillón, en San Martin de Porres

Aislamiento
El aislamiento de la bacteria se realizó mediante una dilución primaria de 1 ml de muestra en 5 ml de agua destilada
estéril. Se agitó vigorosamente por 20 segundos y se colocó 1 ml de dilución resultante en 3 tubos de ensayo con 9 ml
de medio selectivo caldo MRS previamente preparado. Se colocaron en incubación a una temperatura de 35 ºC durante
un lapso de 48 h, esto con la finalidad de obtener crecimiento únicamente de microorganismos del género Bacillus.

Tinción Gram:
Fue seleccionada la colonia más definida y uniforme para realizar tinción Gram, la cual permitió
observar si las bacterias pertenecen al grupo Gram positivas o Gram negativas. Se utilizó violeta
de genciana, lugol, alcohol acetona y safranina . Los microorganismos se observaron en
microscopio óptico a 100x con aceite de inmersión
Pruebas presuntivas y bioquímicas:

Se realizaron las pruebas presuntivas catalasa y oxidasa, además se aplicaron pruebas las
bioquímicas Citrato, Triple Sugar Iron (TSI), Lisina Hierro Agar (LIA), Oxígeno Fermentativa (O/F),
Rojo de Metilo-Voges Proskauer (MR-VP) y Arginina; para confirmar las características de género
y especie de Bacillus subtilis, presente en el medio de cultivo
 RESULTADOS

En la caracterización inicial del agua residual (Cuadro 6), se pueden observar valores de 534.5 mg/L.

De acuerdo con los resultados de la determinación de grasas y

aceites, y fósforo total, los valores obtenidos fueron 65.0 y 8.3
mg/L respectivamente
 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

La bacteria aislada e identificada para el BRMS fue Bacillus subtilis. Al

ser inoculada en condiciones estériles el IVL obtenido indica que el
metabolismo de la bacteria logró adaptarse rápidamente al sustrato
suministrado.

Para la evaluación de la calidad del agua se consideró los ECA con la

finalidad de tener los parámetros de acuerdo a la normativa para el río
Chillón ya que, presenta niveles de los parámetros fisicoquímicos y
biológicos según de donde se tome la muestra, esto se debe a su
diferente clasificación
PRESUPUESTO

 CONCLUSIONES

Mediante el uso de tratamientos físicos, químicos y biológicos mediante la biorremediaciòn con la bacteria Bacillus
subtilis aplicados en las aguas residuales se logrará la reutilización del agua manteniendo un equilibrio entre
innovación, desarrollo y contaminación.

Es importante asegurar el crecimiento de la productividad de los cultivos sin explotar el recurso agua. El control de
saneamiento del agua significa un factor fundamental para la salud del consumidor de los productos a beneficiarse
de las aguas tratadas.

El tipo de correlación que existe entre las dosis de la bacteria Bacillus subtilis con los parámetros fisicoquímicos
fueron muy distintos para cada uno. observándose que para DBO y DQO sí hubo correlación directa con la dosis de la
bacteria Bacillus subtilis esto indica que cuanto más haya de la presencia de esta bacteria y sea agregado al agua
residual mayor será el contenido de DBO y DQO, esto debido a que en la solución acuosa que comprende, hay mayor
concentración de materia orgánica, esto hace que la DBO se incremente.

Se observó la dispersión de datos los que no guardaron relación para aceites y grasas ya que este parámetro bien se
incrementó o disminuyó no dependiendo de las dosis de la bacteria Bacillus subtilis, debemos tener en cuenta que
cuando los microorganismos se encuentran en una etapa de crecimiento y reproducción, donde la cantidad de
microorganismos se incrementa exponencialmente, se produce el consumo de nutrientes del medio acuoso compuesto
de minerales, materia orgánica, aceites y grasas, etc., entonces para el aprovechamiento de los nutrientes los
microorganismos producen lipasas, conocidos como inductores, que pertenece al grupo de compuestos oleosos,
haciendo así que la concentración de aceites y grasas se incremente o disminuya indistintamente, esto depende del
comportamiento que tenga las bacterias fotosintéticas específicamente rhodopseudomonas spp.
 RECOMENDACIONES

Para enviar muestras al laboratorio deben estar por debajo de 5 ° C. Para ello se utilizan bolsas de gel. Se
recomienda congelar las muestras unos días antes de enviarlas, para luego trasladarlas al sitio de muestreo y
utilizarlas inmediatamente después. las muestras se recogen en el lugar; la transferencia debe transportarse en una
nevera adecuada.

Para obtener y registrar datos de campo, en este caso la temperatura, el pH, el oxígeno disuelto y la conductividad
requieren el uso de equipos multiparamétricos, por lo que además de la verificación en sitio, es necesario verificar
que el equipo esté calibrado y óptimo para hacer el muestreo . y que el equipo esté en su mejor momento, Por lo
tanto, se recomienda llevar consigo el búfer de verificación, si no está calibrado, utilice el búfer de calibración en
cualquier momento que se lo requiera para este propósito y finalmente haga que la medición y los datos
proporcionados sean confiables para la investigación y tengan un marguen de error mínimo para evitar afectar la
confiabilidad de nuestros resultados.

Considere factores climáticos, como lluvia, tormenta, niebla u otros factores similares, ya que estos factores afectarán
el equipo utilizado, ya que el contacto del agua con el equipo para evitar averías en los equipos , cables o tomas de
corriente puede causar actividades de desarrollo de riesgo de descarga eléctrica y hasta provocar la muerte de uno
de los trabajadores ; por esta razón, se recomienda diseñar la estructura para evitar el contacto con el piso, de
manera que se evite el contacto con el agua que fluye a través del piso.
GRACIAS
Por su atención