Fluorometria
Fluorometria
Fluorometria
AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA
ANÁLISIS DE FÁRMACOS Y
MATERIAS PRIMAS II
Tema: FLUOROMETRÍA
Nombre: Hernández Buitrón Monserrath
Grupo: 1552
Fluorometría
Fundamento
Técnica espectrofotométrica que se basa en la absorción de radiación por parte del
analito a medir en una muestra y su posterior emisión. Su fundamento es la fluorescencia
que es la emisión de radiación por electrones excitados.
En el fenómeno de fluorescencia, una molécula absorbe radiación electromagnética y
debido a ello los electrones pasan de un estado basal a otra fase de excitación.
La molécula desciende luego a uno de los distintos niveles de vibración del estado
electrónico basal, emitiendo un fotón en el proceso. Como las moléculas pueden caer a
cualquiera de los diferentes niveles de vibración en el estado basal, los fotones emitidos
tendrán diferentes energías y, por lo tanto, frecuencias. Así pues, mediante el análisis de
las diferentes frecuencias de luz emitida por espectrometría de fluorescencia, junto con
sus intensidades relativas, se puede determinar la estructura de los diferentes niveles de
vibración.
Características instrumentales
Diversas fuentes de luz pueden ser utilizadas como fuentes de excitación, incluyendo el
láser, fotodiodos y lámparas; arcos de xenón y lámparas de vapor de mercurio. Un láser
sólo emite luz de alta irradiancia en un intervalo muy estrecho de longitudes de onda, por
lo general a 0,01 nm, lo que hace innecesario el monocromador de excitación o el filtro. La
desventaja de este método es que la longitud de onda de un láser no se puede cambiar
mucho. Una lámpara de vapor de mercurio es una lámpara lineal, lo que significa que
emite luz cerca del pico de longitudes de onda. Por el contrario, un arco de xenón tiene un
espectro de emisión continuo con intensidad casi constante en el rango de 300-800 nm, y
una irradiancia suficiente para las mediciones hasta justo por encima de 200 nm.
Siendo I0 la intensidad de radiación del haz que incide sobre la disolución, I la intensidad
después de atravesar una longitud b del medio, IF la intensidad de fluorescencia y K’ una
constante que depende de la eficacia cuántica del proceso de fluorescencia. Con el objeto
de relacionar IF con la concentración c de la especie fluorescente se considera la ley de
Beer como:
El término exponencial puede desarrollarse como una serie de McLaurin de tal forma que
absorbancias suficientemente bajas Ecuación 3 se puede reescribir como:
Referencias bibliográficas
Pérez G. Espectrometría de fluorescencia [Internet]. Espectrometria.com. [citado el 7 de
septiembre de 2022]. Disponible en:
https://www.espectrometria.com/espectrometra_de_fluorescencia.
Castilla PJF. 2. fluorometría [Internet]. Slideshare.net. [citado el 7 de septiembre de 2022].
Disponible en: https://es.slideshare.net/PedroJoseFragosoCastilla/2-fluorometria.
Espectroscopía de Fluorescencia de Tiempos de Vida Media (FTVM) [Internet]. Ubu.es.
[citado el 7 de septiembre de 2022]. Disponible en: https://www.ubu.es/parque-cientifico-
tecnologico/servicios-cientifico-tecnicos/espectrometria/espectroscopia-de-fluorescencia-
de-tiempos-de-vida-media-ftvm