UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA AMBIENTAL - LABORATORIO

INFORME DE LABORATORIO N°9

TÍTULO: ‘‘Determinación de nitratos’’

GRUPO N° 4
Apellidos y Nombres Código Firma

Gonzales Tarazona Valeria 20200174

Verenice

Palacios Pupuche, Paola Andrea 20191179

Paucar Leyva, Jeremy Alesandro 20191183

Roque Ponce, Jazmín Milagros 20200201

Facultad y especialidad: Ciencias - Ingeniería Ambiental

Profesor de laboratorio: Mg. Sc. Diego Enrique Suárez Ramos

Fecha de la práctica: Miércoles 21 de diciembre del 2022

Fecha de entrega del informe: Miércoles 28 de diciembre del 2022

LA MOLINA - LIMA – PERÚ

I. OBJETIVOS
 1.1 Determinar la concentración de nitratos en una muestra tomada de un cuerpo de agua
por espectrofotometría UV-Visible.

1.2 Comparar los resultados obtenidos con diferentes estándares de calidad ambiental para
agua en función de la categoría de clasificación.

II. MARCO TEÓRICO

2.1 Generalidades del nitrógeno

El nitrógeno es un elemento esencial que necesitan todos los seres vivos para mantenerse
con vida. Forma parte de moléculas importantes como las proteínas y el ADN. Este alimento
se encuentra en abundancia en la atmósfera de la Tierra en forma gaseosa como dinitrógeno
(N 2 ); más del 70% de la composición del aire es nitrógeno. Esta molécula es muy estable
químicamente, porque la unión entre los dos átomos de nitrógeno forma un triple enlace difícil
de romper; ya que, para ello se requiere una gran cantidad de energía, por tal motivo no
reacciona fácilmente con otras moléculas (Sandoval, 2017).

Según Sawyer et al (2004) Los compuestos de nitrógeno presentan una gran importancia en
la atmósfera y en los procesos vitales de las plantas y animales. Debido a los diferentes
estados de oxidación que puede tomar genera que la química del nitrógeno sea compleja.
Estos cambios en el estado de oxidación (en total 7) son inducidos por las bacterias y pueden
ser positivos o negativos dependiendo de las condiciones aeróbicas o anaeróbicas.

En el sistema acuático predomina el nitrógeno en pocos estados de oxidación

(N H 3 , N 2 , N 2 O3 y N 2 O5) en los cuales pueden afectar a la calidad del agua (Sawyer et al,
2004).

En la naturaleza existe un grupo de organismos que han desarrollado la capacidad de utilizar

el nitrógeno directamente de la atmósfera mediante un proceso bioquímico que convierte el
nitrógeno gaseoso a una forma más fácil de asimilar, a este proceso se le llama fijación
biológica del nitrógeno (Sandoval, 207)

2.1.1 Fijadores de nitrógeno simbióticos

La presencia ubicua de bacterias fijadoras de nitrógeno denominadas diazotrofas que poseen

la enzima nitrogenasa capaz de romper el triple enlace del N molecular y transformarlo a
amonio (NH4). Una vez fijado este elemento en la biomasa bacteriana es incorporado y
reciclado al interior del ecosistema, quedando disponible para las plantas. Se piensa que más
del 97 % de la entrada de N a ecosistemas terrestres prístinos es producto de la fijación
biológica del nitrógeno. Las bacterias diazotrofas pueden ser de vida libre y son en su
mayoría heterótrofas y otras como cianobacterias se encuentran en simbiosis con hongos
para formar líquenes, o formando asociaciones simbióticas facultativas con plantas
vasculares y con plantas pequeñas, no vasculares, denominadas briófitas. Es así como
justamente se han llegado a registrar tasas de FSN mayores a 50 kg N ha-1 año-1 en
bosques templados y en la sabana tropical (Troncoso et al., 2013) .

2.1.2 Fijadores de nitrógeno de vida libre

Según Tejo (2008), entre los seres vivos, los únicos capaces de llevar a cabo la fijación de N
son organismos procariotas. Estos organismos fijadores de N o diazotrofos llevan a cabo este
proceso gracias al complejo enzimático nitrogenasa que se encuentra exclusivamente en
organismos procariotas y cataliza la siguiente reacción:
 N2 + 16 ATP + 10 H+ + 8 e- → 2 NH4+ + H2 + 16 Pi + 16 ADP

Este complejo enzimático es muy sensible al oxígeno. Sin embargo, muchos de estos
organismos presentan adaptaciones que les permiten fijar N en condiciones muy diversas.
Se encuentran bacterias anaerobias estrictas, como Clostridium, y facultativas, como
Klebsiela, pero también aerobias como Azotobacter, Beijerinckia y Azospirilum. También se
encuentran las arqueobacterias como Methanosarcina y Methanococcus, bacterias
fotosintéticas como Rhodospirillum y Chromatium) y cianobacterias con (Oscillatoria y
Gloeothece) y sin heterocistos (Nostoc y Anabaena) (Tejo, 2008).

2.2 Ciclo del nitrógeno

Los seres vivos necesitan nitrógeno. Este es un elemento base en las proteínas. Como el
carbono, el nitrógeno se mueve en ciclos a través de los ecosistemas (FlexBooks, 2021).

Las relaciones que existen entre las diferentes formas de compuestos nitrogenados y los
cambios que presentan en la naturaleza se ilustran mejor en el diagrama conocido como ciclo
del nitrógeno. En el se puede observar que la atmósfera sirve como reservorio, donde se
puede extraer el nitrógeno constantemente por la acción de una descarga eléctrica y de las
bacterias que fijan el nitrógeno. Durante las tormentas eléctricas, grandes cantidades de
¿
nitrógeno son oxidadas a N 2 O 5 y su unión con el agua produce HN O 3 ¿, que es
transportado a tierra por lluvia (Sawyer et al.,2004) . El ciclo del nitrógeno consta de 5 etapas
fundamentales, las cuales se menciona a continuación:

2.2.1 Fijación de nitrógeno

Esta etapa consiste en la incorporación del nitrógeno atmosférico, a las plantas, gracias a
algunos microorganismos, principalmente bacterias y cianobacterias que se encuentran
presentes en el suelo y en ambientes acuáticos. Esta fijación se da por medio de la
conversión de nitrógeno gaseoso (N2) en amoniaco (NH3) o nitratos (NO3-). Estos
organismos usan la enzima nitrogenasa para su descomposición. Sin embargo, como la
nitrogenasa sólo funciona en ausencia de oxígeno, las bacterias deben de alguna forma
aislar la enzima de su contacto. En el medio acuático la fijación de nitrógeno es realizada por
cianobacterias. Algunas especies de helechos de agua, como la Azorella, tienen cavidades
en las cuales viven cianobacterias en una manera comparable a la asociación de Rhizobium
con las leguminosas. La cantidad de nitrógeno fijado por estas bacterias es impresionante:
200 millones de toneladas anuales (CICEANA, 2019).

2.2.2 Nitrificación

Solamente existen dos formas de nitrógeno que son asimilables por las plantas, el nitrato
(NO3-) y el amonio (NH4+). Las raíces pueden absorber ambas formas, aunque pocas
especies prefieren absorber nitratos que amoníaco. El amonio es convertido en nitrato
gracias a los microorganismos por medio de la nitrificación. La modificación de NH4+ a NO3-
depende de la temperatura del suelo. La transformación, es decir, la conversión se da más
rápida cuando la temperatura está por encima de los 10° C y el pH está entre los 5.5-6.5;
asimismo, este proceso se ve completado entre dos a cuatro semanas. Esta fase es
realizada en dos pasos por diferentes bacterias: primero, las bacterias del suelo
Nitrosomonas y Nitrococcus convierten el amonio en nitrito (NO2-), luego otra bacteria del
suelo, Nitrobacter, oxida el nitrito en nitrato. La nitrificación les entrega energía a las bacterias
(CICEANA, 2019).

2.2.3 Asimilación
La asimilación ocurre cuando las plantas absorben a través de sus raíces, nitrato (NO3-) o
amoniaco (NH3), elementos formados por la fijación de nitrógeno o por la nitrificación. Luego,
estas moléculas son incorporadas tanto a las proteínas, como a los ácidos nucleicos de las
plantas. Cuando los animales consumen los tejidos de las plantas, también asimilan
nitrógeno y lo convierten en compuestos animales (CICEANA, 2019).

2.2.4 Desnitrificación

La reducción de los nitratos (NO3-) a nitrógeno gaseoso (N2), y amonio (NH4+) a amoniaco
(NH3), se llama desnitrificación, y es llevado a cabo por las bacterias desnitrificadoras que
revierten la acción de las fijadoras de nitrógeno, regresando el nitrógeno a la atmósfera en
forma gaseosa. Este proceso ocasiona una pérdida de nitrógeno para el ecosistema; ocurre
donde existe un exceso de materia orgánica y las condiciones son anaerobias, además de
que hay poca disponibilidad de agua y un alto pH, aunado a los escurrimientos de los
fertilizantes al suelo. El fenómeno de la desnitrificación se debe, a que en condiciones de
mucha humedad en el suelo, la falta de oxígeno obliga a ciertos microorganismos a emplear
nitrato en vez de oxígeno en su respiración (CICEANA, 2019).

2.2.5 Amonificación

Los compuestos proteicos y otros similares, que son los constitutivos en mayor medida de la
materia nitrogenada aportada al suelo, son de poco valor para las plantas cuando se añaden
de manera directa. Así, cuando los organismos producen desechos que contienen nitrógeno
como la orina (urea), los desechos de las aves (ácido úrico), así como de los organismos
muertos, éstos son descompuestos por bacterias presentes en el suelo y en el agua,
liberando el nitrógeno al medio, bajo la forma de amonio (NH3). En este nuevo proceso de
integración de nitrógeno al ciclo, las bacterias fijadoras llevan a cabo la digestión enzimática,
por lo que el amonio se degrada a compuestos aminados, como proteosas, peptonas y al
final, en aminoácidos. Es por esta razón que el proceso se llama amonificación o aminización
(CICEANA, 2019).

2.2 Nitratos en cuerpos de agua

Desde que se confirmó que el agua era un vehículo para la transmisión de enfermedades, se
empezaron a realizar análisis de las diferentes formas de nitrógeno en agua potable. Esto
sirve para juzgar la calidad sanitaria del agua (Sawyer et al., 2004)

Los niveles de nitratos y nitritos en aguas naturales son un indicador importante de la calidad
del agua. Ambos se encuentran relacionados con el ciclo del nitrógeno de suelo y plantas
superiores aunque los nitratos son añadidos por medio de fertilizantes que puede ocasionar
que los niveles de estos aumenten. Los nitritos también se forman durante la biodegradación
de nitratos, nitrógeno amoniacal u otros compuestos orgánicos nitrogenados y se utilizan
como indicador de contaminación fecal en aguas naturales (Molina et al., 2003).

Los nitratos no se consideran en sí tóxicos, pero la ingesta de grandes cantidades produce

un efecto diurético. Por otra parte, los nitritos pueden producir compuestos cancerígenos, las
nitrosaminas, por su reacción con aminas secundarias o terciarias, además de interaccionar
con los glóbulos rojos de la sangre produciendo metahemoglobinemia que impide el
transporte de oxígeno al cuerpo (Molina et al., 2003).

Se han desarrollado una gran cantidad de métodos para la cuantificación de estos analitos en
aguas y en otro tipo de muestras como alimentos y fluidos biológicos. Muchos de los
métodos están basados en cromatografía iónica, la EPA recomienda la determinación de
nitratos y nitritos por este método, aunque existen varios métodos enfocados a la
cromatografía líquida de alta presión o a la electroforesis capilar (Molina et al., 2003).
 2.3 Método de determinación de nitratos en agua (método espectrofotométrico)

Según la Revista de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Colombia (2014),

se presenta una nueva técnica colorimétrica para la cuantificación de la concentración del ión
nitrato. El método se basa en la reacción de nitración del ácido salicílico en medio ácido
(H2SO4) con la formación de un compuesto con un pico de absorción en 412 nm. El ión
nitrato con el ácido salicílico en medio ácido forma el ácido 5-nitrosalicílico, el cual resulta ser
una tonalidad amarilla en presencia de hidróxido de sodio, cuya intensidad de color medida
espectrofotrómetricamente es proporcional a la concentración de nitratos presente en la
muestra de agua. La absorción máxima de compuesto formado se presenta a los 412 nm.

El color obtenido es estable por lo menos durante 30 minutos luego de adicionar el NaOH. La
gran mayoría de las técnicas publicadas para la determinación del nitrato sufren una marcada
interferencia por el cloruro; a través de diferentes pruebas de laboratorio adicionando
distintas concentraciones de cloruro, se observa un ligero incremento de la absorbancia en la
reacción.

Análogamente suceden interferencias por nitritos en técnicas tales como fotométricas,

cromatográficas y electroquímicas. Para la determinación de nitrato, este método presenta
una fuerte interferencia por el nitrito. Dicha interferencia es directamente proporcional y lineal
a la concentración de nitrito.

2.4 Interferencias y limitaciones:

● La materia orgánica disuelta, los agentes tensoactivos, el NO2 y el Cr6+ interfieren.

● Varios iones inorgánicos que normalmente no se encuentran en aguas naturales, tales como
clorito y clorato, pueden interferir. Se pueden preparar curvas de corrección individuales para
compensar la interferencia de las sustancias inorgánicas, por medio de análisis
independientes de sus concentraciones.
● El método espectrofotométrico requiere una muestra ópticamente limpia, por la cual las
muestras turbias se deben filtrar a través de un filtro de membrana de 0,45 µm de diámetro
de poro. Ensayar los filtros para contaminación por nitrato.

2.5 Estándares nacionales

Cuadro N°1. Estándar de calidad ambiental (ECA) para la Categoría 1: Poblacional y
recreacional.
Subcategoría A: Aguas superficiales destinadas a la producción de agua potable

A1 A2 A3

Unidad de Aguas que pueden Aguas que pueden ser

Parámetros Aguas que pueden
medida ser potabilizadas potabilizadas con
ser potabilizadas con
con tratamiento
tratamiento avanzado
desinfección convencional
Nitratos
−¿¿
NO 3 mg/L 50 50 50
Fuente:Decreto Supremo N° 004-2017-MINAM

Cuadro N°2. Estándar de calidad ambiental (ECA) para la Categoría 1: Poblacional y

recreacional.
Subcategoría B: Aguas superficiales destinadas para recreación
Parámetros Unidad de B1 B2
 medida Contacto primario Contacto secundario

Nitratos
NO−¿−
2
NO¿
mg/L 50 **
Fuente:Decreto Supremo N° 004-2017-MINAM

Cuadro N°3. Estándar de calidad ambiental (ECA) para la Categoría 2: Extracción,

cultivo y otras actividades marino costeras y continentales.
C1 C2 C3 C4
Extracción y
Actividades marino
cultivo de Extracción y cultivo
Parámetro Unidad de portuarias, Extracción y cultivo
moluscos, de otras especies
s medida equinodermos hidrobiológicas en industriales o de de especies
saneamiento en hidrobiológicas en
y tunicados en aguas marino
agua marino lagos y lagunas
aguas marino costeras
costeras
costeras
Nitratos
−¿¿
NO 3 mg/L 16 16 ** 13
Fuente:Decreto Supremo N° 004-2017-MINAM

Cuadro N°4. Estándar de calidad ambiental (ECA) para la Categoría 4: Conservación

del ambiente acuático.
E3: Ecosistemas costeros y
E2: Ríos marinos

Unidad de E1: Lagunas Costa y

Parámetros medida y lagos sierra Selva Estuarios Marinos

Nitratos
NO3- mg/L 13 13 13 200 200
Fuente:Decreto Supremo N° 004-2017-MINAM

Donde:
El símbolo ** dentro del cuadro significa que el parámetro no aplica para esta Subcategoría.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 Materiales:
- Tubos de ensayo
- Vaso de precipitado
- Fiola de 25 mL
- Pipeta de 1 mL
- Pipeta de 10 mL

3.2 Equipos:
- Espectrofotómetro UV-visible
- Agitador vortex

3.3 Reactivos:
- Solución stock de nitrato de potasio KNO3 de 500 mg/L.
- Ácido salicílico al 5% (p/v). Proteger de la luz, almacenar la solución en un frasco
color ámbar a 4oC y usar en un periodo no mayor a las 48 horas.
- Solución de hidróxido de sodio 2N.
 3.4 Método
- Preparar 25 mL de soluciones estándar de nitrato (N-NO 3-) de 20, 50, 80, 100, 200 y
500 mg/L N-NO3- en fiolas de 25 mL.
- Tomar alícuotas de 0.1 mL de las soluciones estándar de trabajo en un tubo de
ensayo, añadir 0.4 mL de solución de ácido salicílico y mezclar en el agitador vortex
por 1 minuto. Después de unos 15 minutos de reposo, a temperatura ambiente,
añadir lentamente 9.5 mL de NaOH 2N para obtener soluciones de 0.2, 0.5, 0.8, 1, 2
y 5 N-NO3- .
- Repetir el segundo paso utilizando el blanco y la muestra problema.
- Finalmente, medir la absorbancia máxima a 412 nm en un espectrofotómetro UV-
visible.

IV. RESULTADOS

Cuadro N° 5: Preparación de diluciones

Mesa Concentración inicial de la Volumen de la Volumen de alícuota a
solución estándar de NO3- fiola (mL) sacar de la solución
(ppm) estándar (mL)

1 Blanco 25 0

2 20 25 1.0

3 50 25 2.5

4 80 25 4.0

5 100 25 5.0

6 200 25 10

7 500 25 25
(Fuente: Elaboración propia)

Cuadro N° 6: Absorbancia a 412 nm por dilución

Mesa Concentración de diluciones a partir Absorbancia
de la solución estándar (ppm)

1 Blanco -

2 20 0.018

3 50 0.345

4 80 0.442

5 100 0.652

6 200 1.246

7 500 2.873

Muestra 17.750 0.115

(Fuente: Elaboración propia)
 Gráfico N° 1: Curva de calibración y Muestra

(Fuente: Elaboración propia)

Cuadro N° 7: Ecuación obtenida por curva de calibración

Ecuación Donde:

Y = mX + b m = Pendiente
b = Intersección
Y = 0.0058 X + 0.0115 Y = Absorbancia
X = Concentración mg N-NO3-/L
(Fuente: Elaboración propia)

Donde a partir del cuadro N°6, se observa que el valor de la absorbancia de la muestra es 0.155,
aplicando la ecuación obtenida en el cuadro N°7, se obtiene:

0.115=0.0058x + 0.0115 → x= 17.84 mg N-NO3/L

V. DISCUSIONES

En la presente práctica de laboratorio se determinó la concentración de nitratos en una

muestra de agua disuelta en una fiola de 25 mL con agua destilada. En el cuadro N°5 se
observa las concentraciones de diluciones preparadas a partir de la solución estándar, que
varía desde 20 hasta 500 ppm, incluyendo la muestra en blanco.

En el cuadro N°6 se observa los resultados de absorbancia una vez que las muestras fueron
colocadas en el espectrofotómetro, según menciona la Revista de la Facultad de Medicina de
la Universidad Nacional de Colombia (2014), en ella se determina la cantidad de nitratos en
forma de ácido 5-nitrosalicílico, el cual resulta ser una tonalidad amarilla en presencia de
hidróxido de sodio y su intensidad varía conforme la concentración de nitratos. Del mismo
modo en el presente cuadro, se observa que la absorbancia varía directamente proporcional
a la concentración de nitratos. Antes de determinar la concentración y absorbancia de la
muestra de interés a través del espectrofotómetro, se apreció que dicha muestra se
encontraba en el rango de 0 a 20 ppm, puesto que, su color amarillo brindó indicios de ellos.
Una vez con los resultados, se confirmó que dicha muestra presentaba 17.75 de
concentración y una absorbancia de 0.115. En el gráfico N°1 se aprecia que las
concentraciones en ppm y la absorbancia presentan un grado de correlación de 0.9952,
 siendo esta considerada ‘’muy alta y positiva’’ según Pearson. El punto de color rojo
representa la muestra analizada.

Por otro lado, evaluando el ECA para agua, según la normativa nacional, dicha concentración
(17.75 mg/L) no sobrepasa los valores fijados en la Categoría 1: Poblacional y
recreacional,dentro de las subcategorías A y B (Cuadro N° 1 y N° 2), por tanto la muestra
puede ser potabilizada con desinfección y otros tratamientos, además de poder ser un agua
recreacional de contacto primario y secundario. Analizando otras categorías de los ECA,
como la Categoría 2: Extracción, cultivo y otras actividades marino costeras y continentales
(Cuadro N° 3), se encuentra que la muestra sobrepasa los valores fijados; por lo tanto el
agua no puede ser usada para dichas actividades. Analizando la Categoría 4: Conservación
del ambiente acuático (presentes en el cuadro N°4), se encuentra que los valores de la
muestra hallados en el laboratorio de Química Ambiental tiene un exceso de nitratos dentro
de las subcategorías E1 y E2, superando así dichos parámetros. Sin embargo, en la
subcategoría E3: Ecosistemas costeros y marinos, los valores de nitratos están dentro de los
parámetros.

VI. CONCLUSIONES
● De acuerdo a la curva de calibración, se determinó a simple vista que la muestra se
encontraba dentro del rango de 0 y 20 ppm. Ello fue corroborado luego con el
espectrofotómetro, dándonos un valor de 17.75 ppm y una absorbancia de 0.155, en
la cual se determinó que existe 17.84 mg N-NO3/L en la muestra.
● Se compararon los resultados con los estándares de calidad ambientales
provenientes del MINAM, con la Categoría 1, 2 y 4, donde se determinó que la
muestra problema no supera los valores de nitratos en la Categoría 1 y subcategoría
E3 de la Categoría 4, pero si supera los valores dentro de la Categoría 2 y las
subcategorías E1 y E2 de la categoría 4, fijados en esta normativa nacional.

VII. BIBLIOGRAFÍA

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Norteamérica (CICEANA).
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nitritos en agua. Comparación de costos entre un método de flujo continuo y un
método estándar. Revista de la Sociedad Química, México.
https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0583-
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Unidos, McGraw Hill, 569-579 p.

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Troncoso. (2013). Desarrollo de la fijación simbiótica de nitrógeno en una cronosecuencia

primaria en la Isla Santa Inés, Región de Magallanes, Chile. Scielo Chile.
https://scielo.conicyt.cl/pdf/rchnat/v86n3/art11.pdf

VIII. ANEXOS

Figura 1. Solución estándar Figura 2. Toma de alícuota Figura 3. Muestra en agitador

de nitrato en fiola de 25 mL de 0.1mL y 0.4mL. vortex

Figura 4. Curva de calibración colorimétrica Figura 5. Resultados de

espectrofotómetro UV-visible.