Coloración de Ziehl Neelsen

COLORACIÓN DE ZIEHL
NEELSEN
Institución
Daniel Alcides Carrión
Titulo
Coloración de Ziehl Neelsen
Alumna:
De La Cruz campos, Magaly F.
Profesor
Tasayco Torres, Josue Enrique
INTRODUCCION
El diagnóstico definitivo de las enfermedades infecciosas causadas por
micobacterias se basa en la demostración de su agente etiológico. Esto se
consigue, entre otras formas, por histopatología, mediante la tinción de los
bacilos ácido alcohol resistentes (BAAR) en los tejidos obtenidos in vivo o en la
autopsia.
Las técnicas de coloración para micobactenas son conocidas desde hace más
de un siglo y han sido ampliamente difundidas. Vanos laboratorios de patología
del país tienen dificultad para demostrar en los tejidos estos BAAR,
principalmente el M. leprae.
El Grupo de Patología del Instituto Nacional de Salud, desde su creación en
1933, ha reunido considerable experiencia en el estudio de enfermedades por
estos agentes. Esta publicación suministra aspectos generales de la coloración
de Ziehl-Neelsen (Z.N.), en tejidos humanos y de animales, obtenidos por
biopsia o durante la autopsia; se analiza su origen, fundamento y formas de
realización, con el objeto de que este procedimiento se constituya en un
método de diagnóstico sencillo, confiable, rápido, eficaz, reproducible en
cualquier laboratorio del país. El método de Z.N. para esputos y otras
secreciones se describe en otra publicación del INS.
MARCO TEORICO
La coloración o tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de coloración que ha
permitido identificar numerosas mycobacterias (champiñones microscópicos).
Se descompone en tres tiempos: la aplicación de un colorante (que puede
hacerse en frío o en caliente), una serie de decoloraciones (con ayuda de un
ácido y después alcohol) y una decoloración que pone en evidencia diferencias
de contraste. Este método hoy en día tiende a desaparecer porque hace correr
importantes riesgos al manipulador que está en contacto con colorantes
altamente tóxicos (fucsina, por ejemplo).
ACIDO CLOHIRIDICO
El ácido clorhídrico es un líquido transparente y tóxico. Es un químico cáustico
y es altamente corrosivo, lo que significa que ocasiona daño grave e inmediato
a los tejidos, como quemaduras, al contacto.
AZUL DE METILENO
El azul de metileno se usa como tintura para teñir ciertas partes del cuerpo
antes o durante la cirugía. Su uso es principalmente como antiséptico tópico y
cicatrizante interno. También se utiliza como colorante en las tinciones para la
observación en el microscopio, y para teñir resultados en los laboratorios.
FUCSINA FENICADA
La presente “Fucsina fenicada en solución según Ziehl-Neelsen - para
microscopía” es utilizado para el diagnóstico celular en la medicina humana, se
empleó en el examen bacteriológico de muestras de origen humano.
MÉTODOS Y MATERIALES
Materiales:
 Mango de asa de siembra.
 Mechero de alcohol.
 Pipeta con agua destilada.
 Puente de coloración.
 Aceite de inmersión
 Solución de limpieza de objetivos.
 Encendedor o fósforos
 Lamina portaobjetos
 Pinza de madera
 Microscopios
 Muestras de esputo BK
 Bajalengua
 Fenol al 5%
 Pipetas Pasteur
REACTIVO:
 Ácido Clorhídrico – alcohol 96%
 Azul de metileno
 Fucsina fenicada
EQUIPO:
 MICROSCOPIO
PROCEDIMIENTO 1:
 Destapar cuidadosamente el envase colocándolo cerca al mechero.
 Colocar la partícula útil sobre el portaobjeto y extender, haciendo

movimientos de vaivén, hasta lograr que el extendido sea homogéneo
(ni muy fino ni muy grueso), que no llegue a los bordes de la lámina.
 Dejar secar la lámina, y luego fijar al calor con la ayuda de la llama de un

mechero.
 Procederemos a realizar la coloración:
o Cubrir el extendido con la fucsina básica fenicada, previamente

filtrado.
o Calentar suavemente con la llama de un mechero hasta la

emisión de vapores, dejar enfriar. Repetir el proceso 3 veces, no
debe hervir la preparación. El tiempo de coloración debe ser de 5
minutos.
o Eliminar la fucsina y lavar con agua corriente para eliminar el
colorante.
o Cubrir la superficie del extendido con la solución de alcohol ácido

y decolorar hasta que el extendido tenga una coloración clara o
rosa pálido.
o Lavar nuevamente la lámina con agua.
o Cubrir la superficie con azul de metileno, previamente filtrado,
durante 30 segundos a un minuto.
o Eliminar el azul de metileno y lavar la lámina con agua. Dejar

secar
 Una vez seca la muestra la llevamos al microscopio en objetivo de 40x.
 Luego pasamos aplicarle aceite de inmersion y objetivo 100x
Muestra en el microscopio
para proceder a observar.
Observación de la lámina:
 Los bacilos aparecen como bastoncitos delgados, ligeramente curvos, teñidos
de rojo, aislados, en parejas o en grupos sobre un fondo azul claro.
Resultados:
• Se utiliza la siguiente escala semicuantitativa:
Negativo: No se encuentran bacilos ácidos alcohol resistentes (BAAR) en 100
campos microscópicos observados
Positivo 1+: Menos de un BAAR por campo, en 100 campos observados (de
10-99 BAAR).
Positivo 2+: 1 a 10 BAAR por campo, en 50 campos observados.
Positivo 3+: Más de 10 BAAR por campo en 20 campos observados.
CONCLUSIONES:
Este método de la tinción ZN nos sirve para poder identificar a las bacterias
ácido-alcohol resistentes (bacilos de la tuberculosis, lepra y otras
micobacterias) logrando así observar de color rojo sobre el contraste azul de
otras células bacterianas o restos celulares pertenecientes a los organismos
sensibles a esta decoloración ácida.
BIBLIOGRAFIA:
file:///C:/Users/USER/Downloads/lgomez,+vol8no3y4_Parte9.pdf
https://tusconsejosrapidos.com/cual-es-la-funcion-de-la-fucsina-fenicada/
https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002498.htm
https://respuestasrapidas.com.mx/que-es-azul-de-metileno-y-para-que-sirve/

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 Colocar la partícula útil sobre el portaobjeto y extender, haciendo

 Dejar secar la lámina, y luego fijar al calor con la ayuda de la llama de un

o Cubrir el extendido con la fucsina básica fenicada, previamente

o Calentar suavemente con la llama de un mechero hasta la

o Cubrir la superficie del extendido con la solución de alcohol ácido

o Eliminar el azul de metileno y lavar la lámina con agua. Dejar

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