Técnicas de Investigación en Neurofisiologia

UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA
PROGRAMA ACADÉMICO DE CIENCIAS y FILOSOFÍA

INFORME DE LABORATORIO
PARA OBTENER EL GRADO DE BACHILLER EN CIENCIAS CON MENCION EN BIOLOGIA
TÉCNICAS DE INVESTIGACIÓN EN NEUROFISIOLOGIA
1972
JAIME ARIAS CONGRAINS
INTRODUCCION
Durante el segundo semestre de 1970 realicé un adiestramiento en técnicas de investigación en Neurofisiología, en el
Departamento de Fisiología de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile.
Dicho adiestramiento fue dentro de dos proyectos distintos de investigación. El primero estaba a cargo del Dr. Hugo
Adrián y concernía a un proyecto de investigación de la neurofisiología de la audición. En este proyecto trabajé tres
mesas. El segundo, estaba a cargo del Dr. Arístides Rojas y concernía a un proyecto de investigación de la acción de
psicofármacos sobre respuestas biológicas de la rata y duró un mes.
I. INVESTIGACION DE NEUROFISIOLOGÍA DE LA AUDICIÓN
1. OBJETIVOS
El objetivo primordial era aprender la confección de micro electrodos para poder registrar las respuestas neuronales
del gato. Así como las técnicas de disección del mismo y el manejo de los generadores de estímulos sonoros, amplifi-
cadores, osciloscopios, la computadora analógica y el equipo estereotáxico.
De manera secundaria participaba en el esclarecimiento de los mecanismos neuronales qua intervienen en la localiza -
ción espacial de los sonidos. Esto es, el esclarecimiento de los mecanismos por los cuales el gato, puede localizar en
el espacio la procedencia de un sonido. Si bien existen vas y núcleos diversos qua intervienen en tal función. Intervi -
ne en el estudio de las neuronas auditivas del colliculus.
2. MATERIAL
Se utilizó gatos adultos. Equipo estándar de disección y craneotomía. Un aparato estereotáxico. Acrilico. Uretano al
25% A. D. Capilares de 0.8 mm de diámetro. Indium. Vaso Pyrex. Hornilla. Alambre de acero de 0.4 mm de diáme-
tro. Solución al 10% de cloruro de Oro. Solución al 0.4% de cloruro de Platino. Un microscopio estereoscópico con
ocular micrométrico. Reloj. Un jalador de pipetas automático. Una batería de 6 voltios. Agua destilada. Una bomba
de vacío. Un generador de sonidos. Un desfasador de frecuencias. Un osciloscopio de doble barrido. Un amplifica-
dor. Una computadora análógica LYNK. Una máquina transcriptora.
Métodos
La confección de microelectrodos se realizaba conectando el capilar de vidrio por uno de sus extremos a una bomba
de vacío, por el otro era sumergido rápidamente en un vaso Pyrex con indium fundido a 500ºC, de tal manera que
todo el capilar se llenaba de indium por dentro. Luego este capilar era estirado en el jalador de pipetas automático, el
cual mediante un aro incandescente calentaba el punto medio del mismo. Quedando así un microelectrodo con una
punta en forma de cono truncado. Antes que el Indium se enfriase, se insertaba dentro del capilar un alambre de ace-
ro. Luego se verificaba en el microscopio el diámetro de la punta del microelectrodo que debía estar entre las 2 y 4
micras. Dicho microelectrodo era conectado al polo positivo de una batería por intermedio del alambre de acero, lue -
go era sumergido en la solución de cloruro de oro, que estaba conectada con el polo negativo por un tiempo de 30 se-
gundos. Se lavaba la punta del electrodo con agua destilada y se repetía la operación, pero utilizando cloruro de pla -
tino y por un tiempo de 15 segundos. Luego el microelectrodo era revisado al microscopio y se veía un capilar de vi -
drio con una forma cónica truncada en la punta, rellena de indium por dentro y que en la punta misma tenía una fina
capa de ore y encima otra de platino.
Al gato se le realizaba una craneotomía y los bordes de la misma se sellaban con acrílico. Se le colocaba en un apara -
to estereotáxico. La anestesia del gato se realizaba con una inyección peritoneal de uretano al 25% y en cantidad de 5
ml / kg.
El microelectrodo era colocado en un carril de forma rectangular y era introducido por las coordenadas que indicaba
el mapa estereotáxico del gato, hasta llegar al colliculus.
Los oídos del gato eras estimulados por un generador de sonidos y que llegaban al mismo por audífonos dinámicos
tipo TFH 39 (TC). Este generador de sonidos pasaba por un desfasador de frecuencias de tal manera que los sonidos
llegaban a cada oído del gato desfasados, esto constituía el modelo experimental de lo que sucede, cuando un sonido
que proviene da un cierto lugar del espacio es localizado, ya que debido al espacio que separa a los oídos, el sonido
llega a cada uno con la frecuencia desfasada.
La respuesta neuronal era registrada por el electrodo y enviada al amplificador y luego al osciloscopio, en cuyo barri -
do superior aparecía la descarga neuronal, en el barrido inferior aparecía la señal de estimulo.
Luego de encontrar con el microelectrodo a la neurona que respondiese con un mayor voltaje a una determinada fre-
cuencia, desfasada una cierta cantidad de grados, se le estimulaba unas 20 veces y las respuestas que aparecían en el
osciloscopio eran enviadas a la computadora, que integraba y promediaba los potenciales, así como efectuaba la me-
dición de sus componentes y los procesaba estadísticamente y los transcribía al teletipo conectado.
4. RESULTADOS
Además de haber adquirido la destreza en el manejo del instrumental de investigación, los resultados parciales del
proyecto señalaba, que en el colliculus del gato existen neuronas especializadas en dar una óptima respuesta para una
determinada frecuencia y un determinado desfasaje de frecuencia y que dichas neuronas están probablemente organi-
zadas estructuralmente según dichas características, de manera análoga a como se encuentran distribuidas topográfi-
camente en los núcleos, con respecto a las frecuencias puras.
II. INYESTIGACIÓN EN LA ACCIÓN DE PSICOFÁRMACOS SOBRE EL ELECTRO-RETINOCRAMA
(ERG) DE LA RATA.
1. OBJETIVO
El objetivo primordial era aprender a manejar el instrumental necesario para registrar el electroretinograma de la rata.
De manera secundaria participaba en el esclarecimiento de la acción de psicofármacos con acción alucinósena, sobre
el electroretinograma (ERG). El ERG era comparado en su respuesta normal, como cuando se inyectaba la Dietilami-
da del Acido Lisérgico (LSD), la Harmalina o el Tetrahidrocannabinol. El ERG es un potencial evocado que tiene
tres componentes: uno negativo, rápido de pequeño voltaje, llamado onda a, uno positivo, lento, de alto voltaje lla-
mado onda b, y otro positivo de aparición mas tardía, lento, de mediano voltaje llamado onda c. La onda a y b expre-
san la actividad de los conos y bastones y la onda c expresa la actividad del epitelio pigmentario de la retina.
2. MATERIAL
Una vez anestesiada la rata con el uretano, en una cantidad de 5 ml. por Kg, se le sujetaba en el aparato estereotáxi -
co, se le disecaba el párpado, se le instilaba en el ojo una gota de la solución de atropina, luego se le colocaba el aro -
electrodo de plata. El foto -estimulador enviaba la luz Blanca a través de la fibra óptica, que era colocada a 3 cm. de
la córnea de la rata. El electrodo de plata enviaba la respuesta positiva del potencial al amplificador y al osciloscopio.
Usándose como electrodo de referencia uno colocado en la oreja de la rata.
La computadora analógica era la encargada de registrar y procesar los potenciales avocados del ERG. Estos se com -
paraban con la rata en estado normal, y luego de la inyección de 100 ug de LSD po Kg de peso vía intraperitoneal.
Se estimulaba a la rata unas 6 veces por minuto y cada 20 respuestas eran integradas y procesadas.
3. RESULTADOS
Aparte de adquirir la habilidad pare montar dicha técnica en el Perú, los resultados parciales revelaron que los aluci -
nógenos aumentan la magnitud y duración de la onda a, disminuyen el tamaño pero aumentan la duración de la onda
b y disminuyen la amplitud de la onda c del ERG de la rata. Lo que fue interpretado como una acción retardadora de
los alucinógenos sobre la transmisión sináptica en el sistema visual de la rata. Y parece que la intensidad de esta ac -
ción guarda correlación directa con la intensidad de su acción en la retina.
BIBLIOGRAFIA
1. ADRIAN H O, W M, LIFSCHITZ Y col. Activity of neural units in medial geniculate body of cat an rabbit. J.
Neurophysiol. 29: 1046 - 1060. 1966.
2. VILLOUTA GH. ADRIAN y col. Responses evoked by Ipsolateral and Contralateral Ear Estimulation in the audi-
tory cortex of the cat. Tesis Post Doctoral. Universidad de Chile. Facultad de Medicina Veterinaria. 1966.
3, BROWN K. The Electroretinogram: Its components and their origins. Vision Res. Vol 8, pp 633 - 677, 1968.
4, ROJAS A. y col. Effects of Harmaline on the Visual System of the rat. Vision Res. Supplement N°3 pp 437 445.
1971.

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