Reporte de Práctica #5

Tecnológico Nacional de México
Instituto Tecnológico de Boca del Río

Lic. en Biología
Mtra. Mijal Ahinoam Costales Rodriguez
Materia:
Microbiología
Reporte de práctica No.5

RECUENTO DE BACTERIAS AEROBIAS EN MUESTRAS DE
SUELO POR LA TÉCNICA DE DILUCIONES
Alumnos:
Cesta Bautista Paulina
Martinez Ucha Antonio
Santos Montes Fernanda
02/04/2023
PRACTICA N.5
RECUENTO DE BACTERIAS AEROBIAS EN MUESTRAS DE

SUELO POR LA TÉCNICA DE DILUCIONES
Objetivo
1. Aprender y realizar la técnica de las diluciones.
2. Estimar cualitativa y cuantitativa del contenido microbiano aerobio y
anaerobio facultativo de las muestras de suelo.
Introducción
Los microorganismos generalmente se encuentran en la naturaleza como

poblaciones mixtas y para poder caracterizar e identificar un tipo particular de
microorganismos, este debe de ser aislado y conservado como un cultivo puro o
axénico, que significa que está formado por microorganismos de la misma especie.
Para el aislamiento de microorganismos se cuenta con varios métodos, los más
usados son el método de la estría cruzada, vaciado en placas, dispersión y el
método de las diluciones para el conteo de microorganismos.
El método de las diluciones consiste en hacer una serie de diluciones, generalmente
decimales, de las cuales se toman alícuotas que se siembran depositando la
alícuota en el fondo de una caja de Petri estéril y vertiendo inmediatamente
medio de cultivo fundido a 45 °C , agitar en forma de ochos y dejar enfriar .
Las colonias aisladas presentan características morfológicas diferentes debido a
que cada grupo filogenético de microorganismos tiene características peculiares que
se ven influidas por las condiciones del medio. Una colonia se desarrolla en un
medio sólido y procede de una sola bacteria, o agrupación de microorganismos de
la misma especie, a los que se denominan unidades formadoras de colonias
(UFC).
Para determinar el número de UFC en una muestra procesada por el método de las
diluciones, (Ortigoza. F.J, Rubiola de L.S. 1998).se cuenta el número de colonias
formadas en las placas y de preferencia aquellas que tengan entre 25 y 250 se
calcula el número de UFC contenidas en un mililitro de la dilución usada para
inocular cada placa y se multiplica por la inversa de la dilución correspondiente.
Metodología
Para la toma de muestra con pipeta. se rompe el papel de su envoltura cerca de la
boquilla cuidadosamente colocando el bulbo, para, propipeta, ó cualquier otro
dispositivo de succión controlable, se destapa el tubo y/o matraz y se flamea
rápidamente la boca , a continuación se introduce en el líquido la punta de la
pipeta, succionando el volumen deseado, aforando a la marca correspondiente, se
retira sin tocar las paredes, se flamea y tapa el recipiente manteniendo la punta de
la pipeta dentro de la zona de seguridad del mechero. se toma el recipiente al que
se va a transferir el líquido y se descarga el volumen contenido en la pipeta dentro
del recipiente Esta operación debe ser muy rápida, pues el calor del mechero hace
que el aire dentro de la pipeta se dilate y expulse el líquido, lo que causa derrames
indeseables sobre la mesa, la bata u otro recipiente.
La pipeta se debe desechar introduciéndose en un recipiente con una solución
desinfectante, después de lo cual se pueden lavar ó si se quiere se puede esterilizar
con todo el material sucio en la autoclave. Alternativamente, se puede colocar
nuevamente la envoltura de papel en la que se esterilizó mientras se termina el
trabajo y se dispone la esterilización de todo el material sucio.
En caso de tener que transferir un volumen de líquido con una pipeta a una caja de
petri se coloca la caja sobre la mesa, junto al mechero.
Material
● 1 gradilla
● mechero
● 10 Pipetas de 1 , 5 y 10 mL estériles.
● 10 Cajas de Petri estériles
● 1 Balanza y 1 espátula
● Propipeta
Reactivos
● Un matraz con 90 mL. de agua destilada estériles.

● 1 matraz con 200 ml de Agar nutritivo estéril y fundido
● Muestra de suelo o agua estancada
Metodología
1. Colocar un matraz erlenmeyer con 90 mL de agua destilada estériles.

2. Pesar 10 g de la muestra de suelo y adicionar al matraz erlenmeyer con 90 mL
de agua estéril.
3. Agitar vigorosamente y dejar reposar 10 minutos.
4. Tomar con una pipeta estéril 1 mL del agua sobrante y adicionar al tubo 1,
homogeneizar y dejar sedimentar la muestra durante 2 ó 3 minutos.
5. Realizar una serie de diluciones decimales hasta la dilución 10-10 (tubo 10)
usando 1 mL como volumen de transferencia. Lo ideal es utilizar una pipeta
estéril para cada transferencia y agitar con un vortex en cada paso. Con
muestras que contienen microorganismos patógenos o sustancias tóxicas no es
recomendable usar las pipetas con la boca, debe usarse una Propipeta, o
bulbo, o un instrumento de succión automática.
Las siguientes operaciones deberán hacerse por duplicado o triplicado.
Seguir las instrucciones del profesor.
6.- Marcar en la base las cajas de Petri con la dilución correspondiente.
Colocar 1 mL de las diluciones 10-1 a 10-10 en el fondo de las cajas de petri .
7.- Agregar el medio fundido y estéril, aprox. 20 mL a cada caja de petri
8.- Agitar suavemente en forma de ochos por ocho veces
9.- Esperar a que se solidifique el medio perfectamente.
10.-Envolver las cajas de Petri con la tapa hacia abajo, marcar el paquete e
incubar a 28 °C durante 24 a 48 horas.
Esquema
Resultados
Mue 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 Res Red
stra ulta ond
do o
A 15 0 0 0 2 1 3 4 2 5 30
B 6 3 5 1 3 2 5 6 0 1 32
Tabla 0.4 De resultado (U.F.C. / gr. o ml.)
Cuestionario
1. ¿Si esperas que la muestra no esté muy contaminada que diluciones
sembrarías?
La mejor manera de prevenir o de controlar la propagación de
microorganismos es negándole a las esporas la humedad necesaria para su
germinación. Por lo tanto, regular el ambiente, especialmente la humedad
relativa, es esencial para prevenir el deterioro de la colección de un museo
por acción de microorganismos.
2. Mencione dos técnicas de enriquecimiento físicas y dos químicas para

microorganismos que estén en baja concentración en una muestra.
Físicas: Por temperatura de crecimiento o por radiaciones.
Químicas: Por pH y/o salinidad.
Conclusión:
Los microorganismos se encuentran en gran variedad de ecosistemas en la
naturaleza, pero poder hacer un conteo y identificarlos estos
microorganismos requieren de un método de cultivo ya sea cultivo puro o
axénico , provocando una gran formación de microorganismos permitiendo
determinar el número de células microbianas
Lecturas recomendadas
1.- Ortigoza. F.J, Rubiola de L.S. 1998. Microbiología Práctica. Departamento de
Microbiología. Instituto Politécnico Nacional. Esc. Nacional de Ciencias Biológicas.
2° edición. México.
2.- Norma Oficial Mexicana NOM-110-SSA1-1994.Bienes y Servicios. Preparación y
Dilución de Muestras de Alimentos para su Análisis Microbiológico.

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Los microorganismos generalmente se encuentran en la naturaleza como

● Un matraz con 90 mL. de agua destilada estériles.

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2. Mencione dos técnicas de enriquecimiento físicas y dos químicas para

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