LÍQUIDO PLEURAL

Estudio microbiológico del Líquido

• pleural del estudio microbiológico
El rendimiento
es superior al aumentar el líquido pleural
procesado.
• El líquido pleural se centrifuga y su
sedimento se emplea para las coloraciones
y cultivos.
• Las coloraciones pueden proporcionar
resultados incluso en las primeras horas,
lo que orientaría el tratamiento
antibiótico inicial.
 Estudio microbiológico del Líquido
pleural
Coloración de Gram
*Es de gran utilidad, en los empiemas que
tienen varias especies bacterianas (aerobias
y anaerobias).
*Los cultivos muestren un resultado negativo.
Coloración con naranja de acridina
*Cuando ha habido tratamiento antibiótico
previo, puede ser más útil que la coloración de
Gram, dado que la morfología del
microorganismo puede estar alterada.
 Cultivo de Líquido
• El rendimiento de los cultivos es
muy variable, oscila cercano al 60%.
• El cultivo será negativo, por varias razones:
*tratamiento previo con antibióticos
*incorrecto manejo de las muestras, sobre
todo en el estudio de anaerobios.
*por la propia necrosis de los
microorganismos en la pus.
• La rendimiento de los cultivos
bacterianos puede aumentar en un 21%
sembrando
2-5 ml de liquido pleural en frascos
 Cultivo de Líquido
de hemocultivos.
 Cultivo de Líquido
• Para el aislamiento de bacterias
convencionales es suficiente con unos 5
ml de líquido pleural.
• Para el estudio de bacterias anaerobias:
• Inocular en frascos de hemocultivo
para aerobios y anaerobios
• Enviar la jeringa eliminando el aire
y ocluyendo con un tapón el
orificio.
• Para el estudio de micobacterias y hongos
se requiere un volumen de líquido mayor,
como mínimo 15 ml.
 Cultivo de Líquido
*La incubación requiere (mínimo):
• 24 – 48 horas para microorganismos aerobios.
• Hasta por 4 días para anaerobios.
• Mas de 1 semanas para Legionella
spp., Nocardia spp., y hongos
• Mínimo 2 meses para micobacterias
*Para diagnosticar micobacterias (rara vez
produce empiema) se realiza coloraciones
específicas y cultivo (del líquido y de
biopsia).
*Para descartar Nocardia sp. puede
 Cultivo de Líquido
utilizarse una tinción de Ziehl modificada y
cultivo.
 Cultivo de Líquido
Coloración de Gram Coloración de Ziehl Neelsen

Agar Sangre Agar chocolate Agar Mac Conkey Frasco de hemocultivo

Löwenstein-Jensen Cultivo de anaerobios
Cultivo de Líquido
LÍQUIDO ASCITICO
 Diagnóstico
*El diagnóstico se establece por el análisis del
líquido ascítico.
Estudio microscópico.
Cultivo del líquido
ascítico.
*La obtención es por PARACENTESIS:
Siempre por punción, con técnica aséptica.
Antes de iniciar el tratamiento antibiótico.
*Si la infección es confirmada se
recomienda repetir la paracentesis y el
análisis completo del líquido a las 72 horas
 Diagnóstico
de instaurar el tratamiento para valorar la
respuesta.
 Diagnóstico
• Examen macroscópico:
Normal: transparente o
levemente amarillo
Turbio o purulento: abundante leucocitos
Hemorrágico: hematíes
Lechoso: alta concentración
de triglicéridos.
Verdoso: contaminación biliar.
 Diagnóstico Microbiológico
Examen microscópico:
*Recuento de PMN < 250/µL :
– Con cultivo negativo: ascitis
– Con cultivo positivo: bacterascitis
(solo 38% evolucionan a PBE)
*Recuento de PMN ≥ 250/µL :
– Con cultivo positivo (70%): peritonitis (PBE)
*Recuento de PMN ≥ 500/µL:
– Con cultivo negativo: ascitis neutrocítica
(se recomienda tratamiento)
– Cultivo negativo debido a baja carga bacteriana.
 Coloración de
*En las peritonitis primaria:
 La observación microscópica suele ser
infructuosa.
 Se observa un solo tipo de microorganismos.
*En las peritonitis secundaria:
 El examen microscópico suele ser positivo. .
 Se observa distintos tipos de microorganismos.
 Entrada masiva de microorganismos.

En los pacientes en que la clínica no permita diferenciar con claridad si se trata de una
peritonitis primaria o secundaria, la tinción de Gram del líquido ascítico constituye una
prueba rápida de gran valor para el diagnóstico diferencial
 Diagnostico Microbiológico:
*La positividad del cultivo no supera el 70 %.
*Se recomienda emplear volúmenes
grandes de muestra para obtener buenos
resultados.
• Inocular 10-15 ml de muestra repartidos entre dos
frascos de hemocultivos (aerobio y anaerobio).
*También se cultivará, en medios sólidos, para
hacer una estimación cuantitativa e identificar
los cultivos como puros o mixtos.
*Se recomienda la toma simultánea de
hemocultivos para aumentar las
 Diagnostico Microbiológico:
posibilidades diagnósticas (40%-70%
positivos).
 Diagnóstico
Los resultados del recuento celular y el cultivo permiten establecer las cuatro
categorías de: ascitis, bacterascitis, peritonitis y ascitis neutrocítica con cultivo negativo

Medicine 1998; 7(78): 3644-3646

 Peritonitis
*Ante una sospecha de peritonitis tuberculosa la
coloración de Ziehl-Neelsen del líquido ascítico
tiene muy baja sensibilidad por lo que no es útil
para el diagnóstico.
*El diagnóstico de tuberculosis peritoneal
suele hacerse por laparoscopia e histología y
estudio microbiológico de la biopsia
peritoneal.
*Si se hace el cultivo del líquido ascítico éste
debe inocularse en medios líquidos
especiales para el aislamiento de
 Peritonitis
Mycobacterium.
 Cultivo de Líquido
Coloración de Gram Coloración de Ziehl Neelsen

Frasco de hemocultivo Agar Sangre Agar Mac

Conkey
Cultivo de Líquido
Löwenstein-Jensen Cultivo de anaerobios
LÍQUIDO CEFALORRAQUIDEO
 Diagnóstico de la meningitis bacteriana
*Desde el punto de vista bacteriológico
el diagnóstico de la meningitis debe
basarse en:
1. Investigación de antígenos bacterianos
solubles en el LCR.
2. Los métodos clásicos de coloración de Gram
y cultivo de LCR y hemocultivos (método de
referencia).
3. Técnicas moleculares en LCR.

El diagnóstico microbiológico no contemplaría el estudio del LCR en exclusiva, sino

también el de la sangre y el de cualquier otro foco parameníngeo que pudiera
estar involucrado (sobre todo en la enfermedad neumocócica).
 Coloración de Gram en
*Recomendable para todos los pacientes.
*Tiene una especificidad de 97 %.
*Sensibilidad de 60 – 90%, dependiente
de la especie:
• 90 % en Streptococcus pneumoniae
• 86 % en Haemophilus influenzae
• 75 % en Neisseria meningitidis
• 50 % en Bacilos gran negativos
• 30 % en Listeria monocytogenes
*Si ya se iniciaron antibióticos la
sensibilidad se reduce a menos de 20
 Coloración de Gram en
%
 Coloración de Gram en
*La probabilidad de que se visualice algún
microorganismo mediante la coloración
de Gram se correlaciona con la
concentración bacteriana en el líquido
cefalorraquídeo:
• Una concentración de 103UFC/ml se asocia
a un 25% de positividad de la tinción de
Gram.
• Una concentración de 103-105 UFC/ml
se asocia a un 60% de positividad.
• Una concentración mayor de 105 UFC/ml se
correlaciona con el 97% de casos con tinción
de Gram positiva.
Coloración de Gram en
 Coloración de Gram en

Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis

Según la morfología y el resultado de la coloración, se puede identificar al agente etiológico.

Podemos encontrar cocos gramnegativos (meningococo), cocos grampositivos (neumococo y
Staphylococcus), bacilos gramnegativos (Haemophilus influenzae), bacilos grampositivos
(Listeria).
 Coloraciones especiales en
*Coloración de tinta china: LCR
• Cryptococcus neoformans.
• Criptococosis meníngea: pacientes
con HIV/SIDA.

*Coloración de Ziehl Neelsen:

• Mycobacterium tuberculosis
• Meningitis tuberculosa
• Uso de los colorantes fluorescentes
Auramina y Rodamina para visualizar los
bacilos utilizando Microscopía de
fluorescencia.
 Cultivo de líquido cefalorraquídeo (LCR)

*Positividad del cultivo:

• 70 – 85 % cuando no se ha iniciado tratamiento con antibióticos.
• 10 – 20 % después del inicio del tratamiento con antibióticos.
*Los medios de cultivo rutinarios son:
• Agar (TSA, Columbia, BHI) con 5% de sangre de carnero.
En pacientes neonatos se puede agregar
• Agar chocolate. un medio para bacilos gramnegativos
como por ejemplo agar McConkey.
• Medio líquido como caldo BHI o un caldo
tioglicolato sin indicador (opcionalmente
en un frasco de hemocultivo).
 Diagnóstico de la meningitis bacteriana
Muestra de LCR

< de 1 hora > de 1 hora

Centrifugar a 2000 rpm/20 Inocular en medio de
minutos transporte

Sobrenadante Sedimento
Incubar a 35 °C en CO2

Aglutinación Subcultivo en
con látex
Coloración Cultivo Agar sangre y Agar
de Gram primario en chocolate
Agar sangre y
Agar chocolate
 Cultivo de líquido cefalorraquídeo (LCR)
• *Los medios sólidos deben ser incubados a 35°C, en 5-10%
CO2 durante 72 horas.
• *Los caldos se incuban durante 5 días
• Subcultivo inicial a ciegas a las 24 horas (evitar la pérdida de cepas de S.
pneumoniae).
• También se pueden utilizar los frascos de hemocultivos de
métodos automatizados (detección precoz del crecimiento
bacteriano).
• *Frente a la sospecha epidemiológica
de Meningitis tuberculosa se agregaran
medios para micobacterias como Agregar medio para anaerobios si en la
coloración de Gram se vieran bacterias
 con morfología compatible con

Lowenstein Jensen.
LÍQUIDO AMNIOTICO
 Estudio microbiológico del Líquido
• Las infecciones intraamnióticas son a
menudo polimicrobianas
• La tinción de Gram proporciona un
diagnóstico rápido para establecer la
estrategia terapéutica más adecuada en el
manejo clínico de la paciente (INDUCCION
AL PARTO)
• El cultivo del líquido amniótico es el “patrón
de referencia” para el diagnóstico de la
infección intrauterina. (Membranas fetales)
• (20% vs. 9%) – MF - LA
 Estudio microbiológico del Líquido
• El cultivo del líquido amniótico (Gold
Standard)
• Cultivo de líquido amniótico y de las
membranas de la placenta. (URO + HEMO)
• Streptococcus beta-hemolítico de grupo B
• Cándidas (Mal pronóstico)
• La recogida de líquido amniótico para
estudios microbiológicos se realiza por
amniocentesis transabdominal, aspiración
con aguja en el momento de la cesárea o a
través de un catéter transcervical
intrauterino. (1ml)
 Estudio microbiológico del Líquido
• Las muestras de placenta son únicas y las
de líquido amniótico de difícil obtención
por los riesgos que conlleva su extracción
para la paciente. (No rechazar las
muestras)
• El líquido amniótico se debe centrifugar a
1200x g durante 5-10 minutos.
• Las muestras de placenta se debe n
fraccionar con bisturí en una placa de Petr i
estéril. Después cada trozo se debe tritura
en un mortero estéril.
 Cultivo de Líquido Amniotico
COLORACION GRAM COLORACION GRAM

Agar Sangre Agar chocolate Agar Mac Conkey Cultivo de anaerobios

 Estudio microbiológico del Líquido
• Los microorganismos especialmente virulentos e invasivos,
como S. agalactiae, E. coli (u otras enterobacterias) o L.
monocytogenes que son microorganismos capaces de
escapar de los tejidos, causar una infección generalizada y
una elevada respuesta inflamatoria
• G. vaginalis, Streptococcus spp., bacilos gramnegativos
anaerobios como Prevotella spp., Bacteroides spp.,
Fusobacterium spp. y grampositivos anaerobios como
Peptostreptococcus spp., Clostridium spp., deben valorarse
como clínicamente significativos
• S. aureus, Haemophilus influenzae, Enterococcus spp.,
Capnocytophaga spp. Actinomyces spp. o cualquier especie
del género Candida.
• Se valorarán los microorganismos de la microbiota de la piel
como los estafilococos coagulasa negativa o
Propionibacterium spp. como microorganismos de baja
virulencia que no inducen una elevada respuesta inflamatoria