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MÉTODO 8032A

ACRILAMIDA POR CROMATOGRAFÍA DE GASES

1.0 ALCANCE Y APLICACIÓN

1.1 El método 8032 se usa para determinar cantidades traza de monómero de acrilamida (CAS No. 79-06-1) en
matrices acuosas. Este método puede ser aplicable a otras matrices ya otros analitos similares.

1.2 El límite de detección del método (MDL) en una matriz acuosa es de 0,032 µg/L.

1.3 Este método está restringido para ser utilizado por, o bajo la supervisión de, analistas con experiencia en el uso
de cromatógrafos de gases y expertos en la interpretación de cromatogramas de gases. Cada analista debe demostrar la
capacidad de generar resultados aceptables con este método.

2.0 RESUMEN DEL MÉTODO

2.1 El método 8032 se basa en la bromación del doble enlace de acrilamida. El producto de reacción (2,3-
dibromopropionamida) se extrae de la mezcla de reacción con acetato de etilo, después de la salificación con sulfato de
sodio. El extracto se limpia usando una columna Florisil y se analiza por cromatografía de gases con detección de captura
de electrones (GC/ECD).

2.2 La identificación de compuestos debe estar respaldada por al menos una técnica cualitativa adicional. El análisis
utilizando una segunda columna de cromatografía de gases o cromatografía de gases/espectrometría de masas se puede
utilizar para la confirmación del compuesto.

3.0 INTERFERENCIAS

3.1 No se observa interferencia del agua de mar o en presencia de 8,0% de iones de amonio
derivado del bromuro de amonio.

3.2 Las impurezas del bromuro de potasio se eliminan mediante el procedimiento de limpieza de Florisil.

4.0 APARATOS Y MATERIALES

4.1 Sistema de cromatografía de gases

4.1.1 Cromatógrafo de gases adecuado para inyecciones en columna con todos los accesorios necesarios,
incluidos detector, columnas analíticas, registrador, gases y jeringas. Se recomienda un sistema de datos para medir
las alturas de los picos y/o las áreas de los picos.

4.1.2 Columna de GC: columna de vidrio de 2 mx 3 mm, 5 % de FFAP (poliéster de ácidos grasos libres) en
Chromosorb W lavado con ácido de malla 60-80, o equivalente.

4.1.3 Detector - detector de captura de electrones.

4.2 Embudo de decantación - 150 ml.

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4.3 Matraz aforado (Clase A) - 100 mL, con tapón de vidrio esmerilado; 25 ml, ámbar, con tapón de vidrio esmerilado.

4.4 Jeringa - 5 ml.

4.5 Microjeringas: 5 µL, 100 µL.

4.6 Pipetas (Clase A).

4.7 Columna de cromatografía de vidrio (30 cm x 2 cm).

4.8 Agitador mecánico.

5.0 REACTIVOS

5.1 Se utilizarán productos químicos de grado reactivo en todas las pruebas. A menos que se indique lo contrario,
se pretende que todos los reactivos cumplan con las especificaciones del Comité de Reactivos Analíticos de la Sociedad
Química Estadounidense, donde tales especificaciones estén disponibles. Se pueden usar otros grados, siempre que
primero se compruebe que el reactivo tiene una pureza suficientemente alta para permitir su uso sin disminuir la precisión
de la determinación.

5.2 Agua reactiva libre de orgánicos. Todas las referencias al agua en este método se refieren a agua libre de orgánicos.
agua reactiva, tal como se define en el Capítulo Uno.

5.3 Disolventes: todo disolvente debe ser de calidad pesticida o equivalente.

5.3.1 Acetato de etilo, C2H5CO2C2H5

5.3.2 Éter dietílico, C2H5OC2H5 . Debe estar libre de peróxidos como lo indican las tiras reactivas (EM
Quant o equivalente). Los procedimientos para la eliminación de peróxidos se proporcionan con las tiras reactivas.
Después de la limpieza, se deben agregar 20 ml de conservante de alcohol etílico a cada litro de éter.

5.3.3 Metanol, CH3OH

5.3.4 Benceno, C6H6

5.3.5 Acetona, CH3COCH3

5.4 Agua de bromo saturada - Prepárela agitando agua reactiva libre de sustancias orgánicas con bromo
y dejar reposar durante 1 hora, en la oscuridad, a 4EC. Utilice la fase acuosa.

5.5 Sulfato de sodio (anhidro, granular), Na2SO4 . Purifique este reactivo calentándolo a 400°C durante 4 horas en
una bandeja poco profunda o limpiando previamente el sulfato de sodio con cloruro de metileno. Si el sulfato de sodio se
limpia previamente con cloruro de metileno, se debe analizar un método en blanco, demostrando que no hay interferencia
del sulfato de sodio.

5.6 Tiosulfato de sodio, NaSO 223 , Solución acuosa 1 M.

5.7 Bromuro de potasio, KBr, preparado para análisis infrarrojo.

5.8 Ácido bromhídrico concentrado, HBr, gravedad específica 1.48.

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5.9 Monómero de acrilamida, H2C:CHCONH2 , grado reactivo de electroforesis, pureza mínima del 95 %.

5.10 Ftalato de dimetilo, CH (COOCH),

64 99,0% de3pureza.
2

5.11 Florisil (malla 60/100): Prepare Florisil activándolo a 130°C durante al menos 16 horas.
Alternativamente, guarde Florisil en un horno a 130°C. Antes de usar, enfríe Florisil en un desecador. Envasar 5 g de
Florisil, suspendido en benceno, en una columna de vidrio (Sec. 4.8).

NOTA: El benceno es tóxico y solo debe usarse en una campana de laboratorio ventilada.

5.12 Solución estándar madre

Prepare una solución estándar madre de monómero de acrilamida como se describe a continuación. Cuando
se determina que la pureza del compuesto es del 96% o más, el peso se puede usar sin corrección para calcular la
concentración del estándar de reserva. Los estándares preparados comercialmente se pueden usar en cualquier
concentración si están certificados por el fabricante o por un organismo independiente.
fuente.

Disolver 105,3 mg de monómero de acrilamida en agua reactiva libre de orgánicos en un matraz volumétrico
de 100 mL y diluir hasta la marca con agua reactiva libre de orgánicos. Diluir la solución de monómero de acrilamida
para obtener soluciones estándar que contengan 0,1 - 10 mg/L de acrilamida
monómero

5.13 Estándares de calibración

Diluya la solución madre de acrilamida con agua reactiva libre de orgánicos para producir soluciones
estándar que contengan 0,1 - 5 mg/L de acrilamida. Antes de la inyección, los estándares de calibración reaccionan
y se extraen de la misma manera que las muestras ambientales (Sec. 7.0).

5.14 Normas internas

El estándar interno sugerido es ftalato de dimetilo. Preparar una solución que contenga 100 mg/L de ftalato
de dimetilo en acetato de etilo. La concentración de ftalato de dimetilo en los extractos de muestra y los estándares
de calibración debe ser de 4 mg/L.

6.0 OBTENCIÓN, CONSERVACIÓN Y MANIPULACIÓN DE MUESTRAS

6.1 Consulte el material introductorio de este capítulo, Analitos orgánicos, sec. 4.1.

7.0 PROCEDIMIENTO

7.1 Brominación

7.1.1 Pipetee 50 ml de muestra en un matraz con tapón de vidrio de 100 ml. Disolver 7,5 g de bromuro de
potasio en la muestra, con agitación.

7.1.2 Ajustar el pH de la solución con ácido bromhídrico concentrado hasta que el pH sea
entre 1 y 3

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7.1.3 Envuelva el matraz con papel de aluminio para excluir la luz. Añadir 2,5 mL de agua saturada de bromo, con
agitación. Guarde el matraz y el contenido en la oscuridad, a 0°C, durante al menos 1 hora.

7.1.4 Después de hacer reaccionar la solución durante al menos 1 hora, descomponer el exceso de bromo
agregando solución de tiosulfato de sodio 1 M, gota a gota, hasta que la solución se vuelva incolora.

7.1.5 Agregar 15 g de sulfato de sodio y agitar vigorosamente con un agitador magnético.

7.2 Extracción

7.2.1 Transfiera la solución a un embudo de decantación de 150 ml. Enjuague el matraz de reacción tres veces
con alícuotas de 1 mL de agua reactiva libre de orgánicos. Transfiera los enjuagues al embudo de decantación.

7.2.2 Extraiga la solución acuosa dos veces con porciones de 10 mL de acetato de etilo durante 2 min cada
extracción, utilizando un agitador mecánico a aproximadamente 240 golpes por minuto. Se seca la fase orgánica con 1 g
de sulfato de sodio.

7.2.3 Transferir la fase orgánica a un matraz volumétrico ámbar de 25 mL. Enjuague el sulfato de sodio con tres
porciones de 1,5 ml de acetato de etilo y combine los enjuagues con la fase orgánica.

7.2.4 Agregue exactamente 100 µg de ftalato de dimetilo al matraz y complete la solución hasta la marca de 25 ml
con acetato de etilo. Inyecte una alícuota de 5 µL de esta solución en el cromatógrafo de gases.

7.3 Limpieza de Florisil: siempre que se observen interferencias, las muestras deben limpiarse de la siguiente manera.

7.3.1 Transferir el extracto seco a un recipiente de evaporación con 15 mL de benceno.

Evaporar el solvente a 70°C bajo presión reducida y concentrar la solución a aproximadamente 3 mL.

7.3.2 Agregue 50 mL de benceno y someta la solución a cromatografía en columna Florisil a una velocidad de flujo
de 3 mL/min. Eluir la columna primero con 50 mL de éter dietílico/benceno (1:4) a un caudal de 5 mL/min y luego con 25
mL de acetona/benceno (2:1) a un caudal de 2 mL/min . Deseche todo el primer eluato y la porción inicial de 9 mL del
segundo eluato, y use el resto para la determinación, usando ftalato de dimetilo (4 mg/L) como estándar interno.

NOTA: El benceno es tóxico y solo debe usarse en una campana de laboratorio ventilada.

7.4 Condiciones cromatográficas de gases

Velocidad de flujo del gas portador de nitrógeno: 40 ml/min

Temperatura de la columna: 165 °C.
Temperatura del inyector: 180EC Temperatura del
detector: 185EC.
Volumen de inyección: 5 µL

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7.5 Calibración

7.5.1 Inyecte 5 µL de un método en blanco (agua reactiva libre de sustancias orgánicas

procedimientos de almacenamiento, manipulación, bromación y extracción de muestras) en el GC.

7.5.2 Prepare un mínimo de cinco soluciones estándar de acrilamida como se describe en la Sec.
5.13.1. Un estándar debe estar cerca del límite de detección del método. Los cuatro estándares restantes
deben incluir las concentraciones de muestra esperadas y cubrir el rango de trabajo lineal del instrumento.
Bromine y extraiga cada solución estándar como se describe en las Secs. 7.1 y 7.2.

7.5.3 Inyecte 5 µL de cada uno de los estándares bromados y extraídos y registre la respuesta del
instrumento.

7.5.4 Calcular el factor de respuesta en relación con el estándar interno para cada estándar de calibración
de acuerdo con las instrucciones de la Sec. 7.0 del Método 8000.

7.5.5 Calcule la media, la desviación estándar y la desviación estándar relativa de los factores de
respuesta de los cinco estándares de calibración, utilizando las ecuaciones que se encuentran en la Sec. 7.0
del Método 8000.

7.5.6 Si la RSD de los factores de respuesta es menor o igual al 20 %, se puede suponer que la
calibración es lineal y se puede usar un factor de respuesta promedio para calcular los resultados de la muestra.
Si la RSD es superior al 20 %, consulte el Método 8000 para obtener enfoques alternativos para la calibración.

7.6 Análisis de muestras

7.6.1 Inyectar porciones de 5 µL de cada extracto de muestra (que contiene 4 mg/L de estándar interno)
en el cromatógrafo de gases. En la Figura 1 se muestra un ejemplo de cromatograma GC/ECD.

7.6.2 La concentración de monómero de acrilamida en la muestra se calcula de acuerdo con la siguiente

ecuación.

(Hacha )(Cis)(D)(Vi )
Concentración (µg/L) '
(Ais)(RF)(Vs )(1000)

dónde:

A X= Área (o altura) del pico del analito en la muestra.

A es= Área (o altura) del pico del patrón interno.
C es= Concentración del patrón interno en el extracto de muestra concentrado
(µg/L).
re = Factor de dilución, si la muestra o extracto se diluyó antes del análisis. Si no se hizo
dilución, D = 1. El factor de dilución siempre es adimensional.
Vi = Volumen del extracto inyectado (µL). El volumen de inyección para muestras y estándares de
–– calibración debe ser el mismo.
RF = factor de respuesta medio de la calibración inicial.
Vs = Volumen de la muestra acuosa extraída o purgada (mL). Si se utilizan unidades de litros para
este término, multiplique los resultados por 1000.

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El 1000 en el denominador representa el número de µL en 1 mL. Si la inyección (Vi ) se expresa en ml, se puede omitir el
1000.

El uso de las unidades especificadas aquí para estos términos dará como resultado una concentración en unidades de ng/
mL, que es equivalente a µg/L.

8.0 CONTROL DE CALIDAD

8.1 Consulte el Capítulo Uno y el Método 8000 para conocer los procedimientos específicos de control de calidad (QC).
Los procedimientos de control de calidad para garantizar el funcionamiento adecuado de las diversas técnicas de preparación y/o
introducción de muestras se pueden encontrar en los Métodos 3500 y 5000. Cada laboratorio debe mantener un programa formal
de garantía de calidad. El laboratorio también debe mantener registros para documentar la calidad de los datos generados.

8.2 Los procedimientos de control de calidad necesarios para evaluar el funcionamiento del sistema GC se encuentran en
el Método 8000, Sec. 7.0 e incluye evaluación de ventanas de tiempo de retención, verificación de calibración y análisis
cromatográfico de muestras.

8.3 Demostración inicial de competencia: cada laboratorio debe demostrar competencia inicial con cada combinación de
preparación de muestras y métodos determinativos que utilice, generando datos de exactitud y precisión aceptables para los
analitos objetivo en una matriz limpia. El laboratorio también debe repetir las siguientes operaciones siempre que se capacite
nuevo personal o se realicen cambios significativos en la instrumentación. Ver Método 8000, Sec. 8.0 para obtener información
sobre cómo realizar esta demostración.

8.4 Control de calidad de muestras para preparación y análisis: el laboratorio también debe contar con procedimientos
para documentar el efecto de la matriz en el desempeño del método (precisión, exactitud y límite de detección). Como mínimo,
esto incluye el análisis de muestras de control de calidad, incluido un método en blanco, una matriz, un duplicado y una muestra
de control de laboratorio (LCS) en cada lote analítico.

8.4.1 La documentación del efecto de la matriz debe incluir el análisis de al menos una muestra de matriz y un
duplicado de muestra sin enriquecer o un par de duplicados de matriz/punta de matriz.
La decisión de preparar y analizar muestras duplicadas o un duplicado de la matriz/punta de la matriz debe basarse en el
conocimiento de las muestras en el lote de muestras. Si se espera que las muestras contengan los analitos objetivo,
entonces los laboratorios pueden usar un análisis de matriz y un análisis duplicado de una muestra de campo sin análisis.
Si no se espera que las muestras contengan los analitos objetivo, los laboratorios deben utilizar un par duplicado de pico
de matriz y pico de matriz.

8.4.2 Se debe incluir una muestra de control de laboratorio (LCS) con cada lote analítico.
El LCS consta de una alícuota de una matriz limpia (control) similar a la matriz de la muestra y del mismo peso o volumen.
El LCS se enriquece con los mismos analitos en las mismas concentraciones que el enriquecimiento de la matriz. Cuando
los resultados del análisis de picos de matriz indican un problema potencial debido a la propia matriz de muestra, los
resultados de LCS se utilizan para verificar que el laboratorio puede realizar el análisis en una matriz limpia.

8.4.3 Ver Método 8000, Sec. 8.0 para obtener detalles sobre cómo llevar a cabo el control de calidad de la muestra
procedimientos de preparación y análisis.

8.5 Se recomienda que el laboratorio adopte prácticas de garantía de calidad adicionales para usar con este método. Las
prácticas específicas que son más productivas dependen de las necesidades del

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laboratorio y la naturaleza de las muestras. Siempre que sea posible, el laboratorio debe analizar materiales de referencia
estándar y participar en estudios de evaluación de desempeño relevantes.

9.0 RENDIMIENTO DEL MÉTODO

9.1 Los siguientes datos de desempeño han sido generados bajo las condiciones descritas en este método:

9.1.1 Se ha encontrado que la curva de calibración para el Método 8032 es lineal en el rango
0-5 µg/L de monómero de acrilamida.

9.1.2 En análisis anteriores, se encontró que el límite de detección para una matriz acuosa es de 0,032 µg/L.

9.1.3 Se ha encontrado que los rendimientos del compuesto bromado son 85,2 ± 3,3% y
83,3 ± 0,9%, a concentraciones de fortificación de 1,0 y 5,0 µg/L, respectivamente.

9.2 La Tabla 1 proporciona las recuperaciones de monómero de acrilamida del agua de río, efluentes de aguas
residuales y agua de mar.

9.3 La recuperación del producto de bromación en función de la cantidad de potasio

bromuro y ácido bromhídrico agregados a la muestra se muestra en la Figura 2.

9.4 El efecto del tiempo de reacción en la recuperación del producto de bromación se muestra en
Figura 3. El rendimiento fue constante cuando el tiempo de reacción fue superior a 1 hora.

9.5 La Figura 4 muestra la recuperación del producto de bromación en función del pH inicial de 1 a 7.35. El rendimiento
fue constante dentro de este rango de pH. El uso de soluciones tampón convencionales, como acetato de sodio - solución
de ácido acético o solución de fosfato, provocó una disminución significativa en el rendimiento.

10.0 REFERENCIAS

1. Hashimoto, A., "Método mejorado para la determinación de monómero de acrilamida en agua mediante cromatografía gas-
líquido con un detector de captura de electrones", Analyst, 101:932-938, 1976.

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TABLA 1

RECUPERACIÓN DE ACRILAMIDA DE MUESTRAS DE AGUA COMO 2,3-DIBROMOPROPIONAMIDA

acrilamida Cantidad de Brominación Recuperación de

a
Muestra Monómero 2,3-DBPA /µg Recuperación acrilamida
b b b
Matriz Adicionado/µg Calculado Encontrado % Monómero (%) RSD (%)

Estándar 0,05 0,162 0,138 85,2 - 3.3

0,20 0,649 0,535 82,4 - 1.0
0,25 0,812 0,677 83,3 - 0.9

Agua de Río 0.20 0.649 0.531 81.8 99.4 2.5

Aguas residuales

Efluente 0.20 0.649 0.542 83.5 101.3 3.0

Agua de mar 0.20 0.649 0.524 80.7 98.8 3.5

a
2,3-dibromopropionamida

b
Media de cinco determinaciones repetidas

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FIGURA 1

Cromatogramas de gases típicos del producto de bromación obtenido a partir de una solución acuosa de
monómero de acrilamida:

A. Sin tratar B. Con

limpieza de Florisil BL.
Cromatograma de blanco, concentrado cinco veces antes del análisis cromatográfico de gases.

Picos:

1. 2,3-Dibromopropionamida 2. Ftalato
de dimetilo 4-7. Impurezas del bromuro
de potasio

Tamaño de la muestra = 100 ml; monómero de acrilamida = 0,1 µg

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FIGURA 2

Efecto de (A) bromuro de potasio y (B) ácido bromhídrico en el rendimiento de la bromación.

Tamaño de la muestra = 50 ml;

Monómero de acrilamida = 0,25 µg

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FIGURA 3

Efecto del tiempo de reacción sobre la bromación. Condiciones de reacción:

50 ml de muestra;
0,25 µg de monómero de acrilamida; 7,5
g de bromuro de potasio;
2,5 mL de agua saturada de bromo

Condiciones de extracción:

15 g de sulfato de sodio;
extracción a pH 2;
solvente = 10 mL de acetato de etilo (X2)

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FIGURA 4

Efecto del pH inicial sobre la bromación. Condiciones de reacción y extracción como en la Figura
3. El pH se ajustó por debajo de 3 con ácido bromhídrico concentrado ya 4 - 5 con ácido
bromhídrico diluido. La reacción a pH 6 fue en agua destilada. Se logró un pH de 7,35 mediante
la adición cuidadosa de solución diluida de hidróxido de sodio. La línea discontinua muestra el
resultado obtenido por el uso de solución tampón de acetato de sodio - ácido acético.

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MÉTODO 8032A
ACRILAMIDA POR CROMATOGRAFÍA DE GASES

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MÉTODO 8032A
continuado

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