Práctica 02 y 03
Práctica 02 y 03
Práctica 02 y 03
CARBOHIDRATOS, LÍPIDOS
PRÁCTICA 03: PROTEINAS Y ÁCIDOS NUCLEICOS
2.1 INTRODUCCIÓN
Las biomoléculas son componentes esenciales en los sistemas biológicos. Entre estas se encuentran los
carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Los carbohidratos son los compuestos orgánicos más
abundantes y a su vez los más diversos. Los carbohidratos o hidratos de carbono o también llamados
azúcares están integrados por carbono, hidrógeno y oxígeno, de ahí su nombre con frecuencia en la
proporción Cn(H20)n, por ejemplo, glucosa C6(H2O)6. Son parte importante de nuestra dieta, es decir, el
conjunto de alimentos consumidos en un día (no confundir con el régimen que se sigue para bajar de peso
o tratar algunas enfermedades). Casi todas las plantas y animales sintetizan carbohidratos, los emplean
para almacenar energía y suministrarlo controladamente al organismo para que realice sus actividades
celulares, como la síntesis de sus propias moléculas.
Estos compuestos, abarcan sustancias muy conocidas y al mismo tiempo, bastante disímiles como azúcar
común, papel, madera y algodón, todos ellos son carbohidratos en su totalidad o están presentes en una
alta proporción. La glucosa, no solamente la utiliza el organismo como fuente de energía, también puede
transformarse en otras macromoléculas: como el glucógeno, que se acumula en el hígado y músculos
como reserva energética. Si se ingieren excesos de carbohidratos estos se transforman en grasas y son
acumuladas en los tejidos adiposos. Dependiendo de su composición, los carbohidratos pueden
clasificarse en:
a. Simples
- Monosacáridos: glucosa, fructosa y galactosa.
- Disacáridos: formados por la unión de dos monosacáridos iguales o distintos: lactosa, maltosa,
sacarosa, celobiosa, etc.
- Oligosacáridos: polímeros de hasta 20 unidades de monosacáridos.
b. Complejos
- Polisacáridos: están formados por la unión de más de 20 monosacáridos simples.
- Función de reserva: almidón, glucógeno y dextranos.
- Función estructural: celulosa y xilanos.
Las biomoléculas son componentes esenciales en los sistemas biológicos. Entre estas se encuentran los
carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. Las proteínas son grupos de péptidos constituidos
fundamentalmente por aminoácidos unidos mediante enlace peptídico. Son componentes esenciales de
toda la materia viva y elementos indispensables en la dieta, necesarios para la formación de tejidos, ácidos
nucleicos y en la síntesis de enzimas, hormonas y componentes proteicos de la sangre. Cumplen variadas
funciones biológicas:
- Proteínas estructurales: Forman parte principal de todas las unidades estructurales de plantas y
Biología Molecular De La Célula III ciclo Facultad de Ciencias
animales. Glucoproteínas, α - queratina, colágeno
- Proteínas reguladoras: hormonas - involucradas en la regulación de las múltiples reacciones
bioquímicas necesarias para la vida. Insulina, HHC, HEF, HL.
- Proteínas de transporte: Intervienen en el transporte de sustancias alimenticias, desperdicios.
Hemoglobina, seroalbúmina.
- Reserva: Ovoalbúmina, caseína.
- Protectoras o defensa: Anticuerpos, complemento.
- Catalíticas. Enzimas, ribozimas.
- Contráctiles. Miosina, actina.
Los lípidos son componentes que existen en forma natural en animales y plantas, los cuales son
importantes en procesos biológicos (lípidos esenciales) y forman parte de la membrana celular
(fosfolípidos). Entre ellos tenemos: grasas aceites, fosfolípidos, triacilgliceroles, esteroides, colesterol,
prostaglandinas, carotenos, vitaminas (A, D, E y K) y otros. Los encontramos en los productos lácteos, las
carnes, los aceites y las frutas secas. Su aporte son los ácidos grasos esenciales (linoleico (ω 6), linolénico
(ω3), ácido araquidónico). Representan el 10 % del peso corporal por lo cual necesitamos ingerir 56g diarios
para mantener esta proporción. Las principales de las proteínas son:
- Protección para vasos sanguíneos, nervios y otros órganos
- Componentes de la membrana celular
- Estimulantes del apetito
- Vehículos para la absorción de vitaminas A, D, K y E
- Componentes del tejido nervioso
- Fuente de energía
2.3 FUNDAMENTO
La oxidación de una aldosa o de una cetosa da origen a los azúcares ácidos; estos pueden sufrir oxidaciones
por la acción de alguna enzima o por medio de agentes oxidantes. A los azúcares capaces de oxidarse se
les llama azúcares reductores. Según el grupo carbonilo presente en el monosacárido, se dividen en
aldosas (si está en el extremo de la molécula) como la glucosa y cetosas (si está en medio de la molécula)
como la ribulosa.
Dependiendo del número de átomos de Carbono presentes en la molécula, pueden ser triosas, tetrosas,
pentosas, hexosas, etc. Los términos pueden ser combinados, por ejemplo, la glucosa es una aldohexosa
mientras que la ribulosa es una cetopentosa. La glucosa es la única aldosa que aparece en forma libre en
la naturaleza como monosacárido. Otros monosacáridos (D-gliceraldehído, D-ribosa y D-galactosa), son
importantes componentes de otras biomoléculas. Las azúcares L son mucho menos abundantes en la
naturaleza que las D. Los polisacáridos son macromoléculas que por hidrólisis producen muchos
monosacáridos (glucosa y fructosa, entre 100 y 90,000 unidades) como el almidón, glucógeno, celulosa y
otros.
b) Laboratorio - CARBOHIDRATOS:
- Pisetas, pipetas de 1, 5 y 10 mL, propipeta, 4 vasos de precipitados de 500 ml, pinza de
madera para tubos.
- Solución al 1% de glucosa, fructosa, sacarosa y almidón
- Fehling A y Fehling B, agua destilada.
- 10 tubos de ensayo, 1 gradilla.
- Baño maría o mecheros
c) Laboratorio: LÍPIDOS
- Reactivos: Alcohol, cloroformo, acetona, agua destilada.
- Pisetas, gradillas, pipetas de 1, 5 y 10 mL, mecheros de gas o cocinas de plancha, pinza de
madera y 4 tubos de ensayo.
PROCEDIMIENTO: Prepare 6 tubos como se indica en el cuadro, marcar y rotular los tubos e
introduzca en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos o calentar en mechero, e interprete
sus observaciones.
Fuente:https://www.nku.edu/~whitsonma/Bio120LSite/Bio120LReviews/Bio120LRevMolec.html
Reactivo de
Fehling A 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
Reactivo de
10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
Fehling B
Resultados
y
observacion CALENTAR
es
Fuente: https://www.youtube.com/watch?v=zA2DIuJqbyU
Reactivo de
10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
Seliwanoff
Resultados y
observaciones
- Muestra 1 0.5 ml
- Muestra 2 0.5ml
- Muestra 3 0.5ml
- Lugol 2 o 3 gotas 2 o 3 gotas 2 o 3 gotas 2 o 3 gotas
- Resultados
Observados
Fuente: Tomado de
https://faculty.ksu.edu.sa/sites/default/files/Qualitative%20test%20of%20Lipids%20II.pdf
PRUEBA DE SOLUBILIDAD
- FUNDAMENTO: Se basa en la propiedad de los lípidos de ser solubles en solventes orgánicos.
Solubilidad es la cualidad de soluble (que se puede disolver). Se trata de una medida de la
capacidad de una cierta sustancia para disolverse en otra. La sustancia que se disuelve se
TUBO 1 2 3 4 5
Agua
Bilis Cloroformo Acetona NaOH 20%
Solvente destilada
2 mL 2 mL 2 mL 2 ml
2 mL
Aceite 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas 10 gotas
Resultado
Nota: Muestra problema (aceites) agregar gota a gota agitando constante al solvente.
- BURRAN, SUSAN AND DESROCHERS, DAVID, "Principles of Biology I Lab Manual" (2015).
Biological Sciences Open Textbooks. 3. Dalton State College. University System of Georgia.
- DARREL S, VODOPICH RANDY MOORE. 2017. Biology laboratory manual. Eleventh edition.
McGraw-Hill Education, New York
- LEAL-CALDERON F. (2012) Emulsified lipids: formulation and control of end-use properties. OCL;
19(2): 111-119.
- ROBYT, J.F., (1998). Essentials of Carbohydrate Chemistry. Springer, New York.
- MARTÍN-SÁNCHEZ, MANUELA, MARTÍN-SÁNCHEZ, MARÍA TERESA, & PINTO, GABRIEL. (2013).
Reactivo de Lugol: Historia de su descubrimiento y aplicaciones didácticas.
REACCIÓN DE BIURET
- FUNDAMENTO: El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina de NaOH. La
reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de
un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del
nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídico, dando un complejo de color violeta.
TUBO 1 2 3 4 5
Agua
Ovoalbúmina 1 Ovoalbúmina 2 Leche tarro Leche caja
Solvente destilada
2 mL 2 mL 2 mL 2 ml
2 mL
NaOH 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas 5 gotas
Resultado
EXTRACCIÓN DE ADN
3.5 INTRODUCCIÓN
Todo organismo vivo presente en nuestro planeta Tierra, contiene como material genético responsable de
la transmisión de los caracteres hereditarios al ácido desoxirribonucleico (ADN), este se halla libre en el
citosol en el caso de los procariotas y asociado a proteínas básicas (histonas y protaminas) formando la
cromatina en el interior de una estructura denominada núcleo.
El ADN, almacena las instrucciones necesarias para que un organismo se desarrolle y adapte a su entorno.
Estas instrucciones son replicadas durante el proceso de división celular para ser distribuidas entre las
células hijas. Además, estas instrucciones son transcritas a otro tipo de ácido nucleico, llamado ácido
ribonucleico (ARN) en el cual la adenina del ADN es transcrita como uracilo. Este ARN es el que al final es
traducido a proteínas en el citosol, con la participación de una nanoestructura biológica, el ribosoma
(ribonucleoproteína) que traduce el idioma de los nucleótidos (ácidos nucleicos) al idioma de los
aminoácidos (proteínas).
Entonces el ADN, almacena esa información que hace posible la construcción de un organismo. Para el
estudio de su composición y características fisicoquímicas se han desarrollado diversas técnicas que
permiten su identificación. Donde su característica ácida y su comportamiento en solventes orgánicos son
considerados para el desarrollo de estas técnicas. Cabe resaltar que la calidad de ADN extraído es crucial
para aplicar diversas técnicas moleculares.
- Liberar el ADN en forma soluble por medio de la destrucción de la pared celular y de los sistemas
membranosos de las células (membrana celular y carioteca).
- Separar los complejos de nucleoproteína por desnaturalización de la parte proteica y protección
del ADN.
- Separación del ADN de las otras macromoléculas por solubilidad diferencial.
- Eliminación de ARN mediante reacción enzimática.
- Precipitación del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
3.7 FUNDAMENTO
El procedimiento inicia con la trituración del tejido, seguidamente se lisan las células mediante un
detergente, vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el
ADN. Las cargas negativas del ADN atraen los iones salinos permitiendo su disolución y posterior
extracción de la célula. El detergente a su vez fracciona las proteínas separándose del ADN. En ese
momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,
proteínas y otras sustancias en menor proporción. Finalmente, el ADN es extraído de la mezcla de
tampón y detergente, usando su insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
3.8 MATERIALES
a) Alumno
- 250 gr de fresas frescas o
- 250 gr de plátano de seda o
- 250 gr tomate.
- Palitos de madera o de plástico (brocheta o de chupetín)
- Tres bolsas tipo ziploc o mortero y pilón para triturar la muestra.
- Colador plástico o de metal
- Papel filtro y Colador (aberturas lo más fino posible)
- 1 cucharita y cuchara sopera
- sal común y detergente líquido de manos
b) Laboratorio
- 100 ml de Etanol 96° helado (colocado en el congelador durante 4 horas)
- Solución lisis (agua destilada o embotellada sin gas,) y vasos de precipitados de 50, 250 y 500
ml.
3.9 PROCEDIMIENTO
- Paso 1: Colocar el alcohol etanol 96° en el freezer o congelador de la refrigeradora.
- Paso 2: Disponga de los demás materiales en la mesa.
- Paso 3: Preparar la solución de lisis en un vaso evite la formación de abundante espuma
- Vierta 100 ml de agua (de preferencia agua destilada, o agua embotellada) en un vaso de
precipitado (250ml).
- Coloque 1 cuchara colmada de cloruro de sodio (“sal de mesa”, NaCl) en el vaso con agua
- NOTA: Repita este procedimiento para cada muestra biológica. Si va utilizar el mismo material, lave
bien cada uno antes de cada procedimiento. Utilice los mismos volúmenes y los mismos tiempos.
Práctica 3