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UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ MARÍA ARGUEDAS

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA PROFESIONAL INGENIERÍA AMBIENTAL

Práctica 4
Asignatura:
Microbiología ambiental

Docente:
Dr. Julia Iraida Ortiz Guizado
Estudiante:
Maucaylle Palomino, Emerson – 1006120212

Ojeda Camacho, Jhon Brayan - 1005820212

Peceros Cespedes Oscar Orlando - 1000620212

Venegas Mallma Hector Hipolito - 10011320212

Sarmiento Vilchez Junior Arturo – 1112920212

Carrasco Mallma, Franklin William - 1011420212

Escuela: Ingeniería ambiental


Semestre: Cuarto
ANDAHUAYLAS – APURÍMAC – PERÚ
2023
Universidad Nacional José María Arguedas
Facultad de Ingeniería
Escuela Profesional de Ingeniería Ambiental

INDICE

I. INTRODUCCIÓN 3

II. MARCO TEORICO 4

2.1 Diversidad microbiana 4

2.2 Tipos de microrganismos en aguas estancadas 5

2.2.1 El nostoc comune 5

2.2.2 Diatomeas 6

2.2.3 Los paramecium caudatum 6

2.2.4 Euglena viridis 7

III. OBJETIVOS: 8

IV. MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRAS 8

V. PROCEDIMIENTO 9

5.1 PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO 12

VI. RESULTADOS 14

VII. DISCUSIONES 15

VIII. CONCLUSIONES 17

IX. CUESTIONARIO 18

X. ANEXOS 21

XI. REFERENCIAS 22
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I. INTRODUCCIÓN

Las bacterias y las algas son organismos unicelulares que pertenecen a reinos
distintos de los seres vivos y tienen unas propiedades morfológicas y fisiológicas muy
diferentes. Las bacterias son organismos procariotas unicelulares, que se encuentran en
casi todas las partes de la Tierra. Son vitales para los ecosistemas del planeta. Algunas
especies pueden vivir en condiciones realmente extremas de temperatura y presión. El
cuerpo humano está lleno de bacterias, de hecho, se estima que contiene más bacterias
que células humanas. La mayoría de bacterias que se encuentran en el organismo no
producen ningún daño, al contrario, algunas son beneficiosas.
En la siguiente práctica se realizó la identificación y caracterización de la
diversidad de microorganismos que se pueden encontrar en diferentes ambientes, para lo
cual se realizaron muestreos de diferentes lugares (muestra de Laguna de Pacucha y
muestra biológica de las algas). Para el análisis y la observación de las estructuras de las
bacterias se utilizó un microscopio óptico, que con ayuda de diferentes tipos de tinción se
pudo caracterizar los microorganismos encontrados en las muestras de las aguas y algas.
En cada una de las muestras se observaron diferentes tipos de microorganismos como
algas y bacterias.
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II. MARCO TEÓRICO

2.1 Diversidad microbiana


Los microorganismos
Los microorganismos son los seres más primitivos y numerosos que existen en la
Tierra, colonizan todo ambiente: suelo, agua y aire, participan de forma vital en todos los
ecosistemas y están en interacción continua con las plantas, los animales y el hombre.
Los microorganismos son clave para el funcionamiento de los sistemas biológicos
y el mantenimiento de la vida sobre el planeta, pues participan en procesos metabólicos,
ecológicos y biotecnológicos de los cuales dependemos para sobrevivir y enfrentar los
retos del futuro (Montaño, Sandoval, Camargo, & Sanchez, 2010).
Diversidad microbiana

Los microorganismos son los seres vivos más diversos y versátiles en


comparación con los macroorganismos vivientes en el planeta tierra debido a su historia
evolutiva y a su rápida capacidad para adaptarse a los cambios ambientales. La diversidad
microbiana puede clasificarse en términos de la variedad estructural y funcional, tal como
sus variaciones en el tamaño celular, así mismo en la morfología, en la división celular, o
bien en la capacidad metabólica y de adaptación. Sin embrago, en la actualidad gracias a
métodos más modernos en la identificación de microorganismos, en conjunto con el
desarrollo tecnológico, se pueden clasificar de acuerdo a su material genético (adn y arn),
este último sistema de clasificación revela la existencia de miles de millones de especies
microbianas.
Los microorganismos se agrupan en dos categorías: procarióticos y eucarióticos. En la
primera están las archaeas y las bacterias, mientras que en la segunda se encuentran
hongos, algas y protozoarios. De acuerdo a (Montaño, Sandoval, Camargo, & Sanchez,
2010) En general, de los microorganismos se han descrito 30,800 especies de
protozoarios, 70,000 de hongos y 45,000 de bacterias; aunque se pronostican hasta 2
millones de especies de hongos y de tres a diez millones de especies bacterianas.
gracias a su gran capacidad de adaptación los microrganismos habitan zonas que abarcan
desde los polos en ambientes debajo del punto de congelación, hasta ambientes secos
como los desiertos, o los muy húmedos como las selvas lluviosas (Montaño, Sandoval,
Camargo, & Sanchez, 2010).
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2.2 Tipos de microrganismos en aguas estancadas

2.2.1 El nostoc comune

El Nostoc está formado por colonias de cianobacterias verde azuladas, verde oliva
o marrón (el color verde viene de su contenido de clorofila, el azul, de un pigmento
denominado Ficocianina) que tienen relación con la fotosíntesis.
También se presenta como colonias laminares de geometría irregular. Estas
colonias de bacterias pueden atrapar el nitrógeno del aire y fijarlo en sus células, de allí
su importancia en la agricultura como abono natural. Suelen vivir en climas extremos,
con temperaturas bajo cero, prosperando en alturas sobre 3000 m sobre el nivel del mar,
habiéndose encontrado hasta 5000 m en atmósferas pobres en oxígeno. Son resistentes a
radiación ultravioleta, lo que favorece su fotosíntesis
Por otro lado, El Nostoc es un alimento de fácil acceso a los pobladores de los
Andes, se consume desde tiempos inmemoriales y proporciona un buen complemento
nutricional (Ponce, 2014) .

Figura n°1: CONJUNTO DE NOSTOC COMUNE;

https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fecuador.inaturalist.org%2Fta
xa%2F968428-Nostoc-muscorum&psig=AOvVaw08-
fOMcDi8u0jsU2eypWKO&ust=1670257996388000&source=images&cd=vfe&ved=0C
BAQjRxqFwoTCLjE34iy4PsCFQAAAAAdAAAAABAX
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2.2.2 Diatomeas

(colaboradores de Wikipedia, 2022) define a las


diatomeas (taxón Diatomea, Diatomeae o Bacillariophyceae sensu lato) como un grupo
de algas unicelulares que constituyen uno de los tipos más comunes de fitoplancton.
Contiene actualmente unas 20 000 especies vivas, las cuales son importantes
productores dentro de la cadena alimenticia. Muchas diatomeas son unicelulares,
aunque algunas de ellas coexisten en forma de filamentos o cadenas celulares (e.g.
Fragillaria), abanicos (e.g. Meridion), zigzags (e.g. Tabellaria), estrelladas (e.g.
Asterionella). Las diatomeas se distinguen por encontrarse en cualquier cuerpo de agua,
es decir ambiente marino, dulceacuícola, e incluso terrestre sobre superficies húmedas.
Las comunidades de diatomeas son una herramienta usada recurrentemente para la
vigilancia de las condiciones medioambientales, de la calidad del agua y en el estudio de
los cambios climáticos.

Figura n°2: Diatomea;


https://www.webconsultas.com/sites/default/files/styles/wc_adaptive_image medium/
public/media/2020/08/18/diatomea.jpg
2.2.3 Los paramecium caudatum

Los paramecios (género Paramecium) son protistas ciliados con forma ovalada,
habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia orgánica, como charcos y
estanques. Son los macroorganismos más comunes encontradas en aguas estancadas. El
paramecio es un protozoo de forma ovalada que puede tener una longitud de 50-300 µm
en función de la especie.
(colaboradores de Wikipedia, 2022)
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Figura n°3: paramecium caudatum;


https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/7/71/Grupo_de_Paramecium_
caudatum.jpg/800px-Grupo_de_Paramecium_caudatum.jpg
2.2.4 Euglena viridis

La euglena viridis es un diminuto gusano verde y flagelado. Su cuerpo alcanza un


tamaño mediano entre 40-65 micras de largo y 14-20 micras de ancho. Cuando se mueve
la Euglena viridis adopta una forma de huso; pero su cuerpo es extraordinariamente
plástico, a veces, cuando está quieta cambia en mil formas y se pueden apreciar en su
interior los pequeños cloroplastos granulares dispuestos más o menos radialmente.
Euglena viridis es de distribución cosmoplita, y suele habitar en aguas bastante cargadas
de materia orgánica, principalmente en lagunas y estanques. Es muy destacable que utilice
como fuente de nitrógeno el amonio y hoy muy probablemente debido a las escorrentías
y filtraciones de purines que llegan a las aguas en las que habita (Guillen, 2019)

Figura n°4: euglena viridis;


https://www.google.com/url?sa=i&url=https%3A%2F%2Fwww.youtube.com%2Fwatc
h%3Fv%3DmdrxazSdyI&psig=AOvVaw3jlxMZ0QX3q0Y0ZWKWNcxZ&ust=167025
8300238000&source=images&cd=vfe&ved=0CBAQjRxqFwoTCIi-
yJ2z4PsCFQAAAAAdAAAAABAD
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III. OBJETIVOS:

● Identificar la diversidad de las bacterias en el ambiente.

● Determinar las características principales de las bacterias al observarse en el


microscopio.

IV. MATERIALES, EQUIPOS Y MUESTRAS

Equipos de Muestras de agua


protección de laguna de
personal Pacucha

Pinzas para
especímenes
Vaso precipitado

Microscopio Alcohol

Laminas porta Muestras


objetos biológicas de
algas
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Estereoscopio Pipetas

V. PROCEDIMIENTO

Primero, alistar todos los materiales para determinar la característica. (Imagen 1)

Elegir un espacio geográfico de charcos, ríos, manantiales

a. Nombre del lugar

La muestra n° “1” fue recogido de la Laguna de Pacucha (Imagen 1) y la


muestra n° “2” fue determino del Rio Chumbao. (Imagen 2).

Imagen 1.- Muestra de Pacucha. Imagen 2.- Muestra del rio chumbao
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b. Temperatura, humedad, radiación

⮚ La temperatura, de la muestra n° “1” es de 21.79 °C

⮚ La humedad, de la muestra n° “1” es de 52%

⮚ La radiación, de la muestra n° “1” es Vmaximo (cielo despejado y medio


dia solar). (Imagen 3).
⮚ La temperatura, la muestra n° ”2” es 20°C

⮚ La humedad, de la muestra n° “1” es de 52%

⮚ La radiación, de la muestra n° “1” es Vmaximo (cielo despejado y medio


dia solar). (Imagen 4).

Imagen 3: Los parametros de la muestra n° “1” en Pacucha.

Imagen 4: Los parámetros de la muestra n° “2” del Rio Chumbao.


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c. Altitud y ubicación
Muestra n° “1”

▪ Altitud: 3126 msnm

▪ Ubicación: Laguna de Pacucha

Muestra n° “2”

▪ Altitud: 2846 msnm

▪ Ubicación: Frente a la Escuela Militar

d. Zona de vida, ecorregión o piso altitudinal

De acuerdo a las clasificaciones de las zonas de vida del Perú, en el área


del trabajo se idéntico la zona: Laguna de Pacucha y Rio Chumbao que están
ubicados en el departamento de Apurímac, provincia de Andahuaylas en el cual
se determinó que ambas muestras se encuentran en una ecorregión, “quechua”; se
caracteriza por tener un clima húmedo al 52% y frio.
e. Aspectos geomorfológicos

El área de estudio presenta una topografía variable y se reconoce un


ambiente morfológico.La morfología actual muestra una dinámica
moderadamente activa en algunos sectores cuyos procesos erosivos son el
resultado de la acción del hombre y la naturaleza, los cuales producen el deterioro
del suelo mayormente en las laderas de las vertientes montañosas en ambas
márgenes de los ríos y quebradas afluentes.
f. Clima

El clima que se determinó de los lugares de Laguna de Pacucha y Río


Chumbao, resulta del conjunto de las condiciones atmosféricas que se presenta a
lo largo del año, como son: la temperatura, humedad, precipitación y viento; e
influye enormemente en todos los aspectos de la vida vegetal, animal y en el
desenvolvimiento de los seres humanos.
Este clima condiciona las diferentes actividades que realizan los pobladores, es
por esta razón que gran parte de la zona es aprovechada para realizar la actividad
agrícola con productos de corto período vegetativo propios de la zona, como son:
papa, trigo cebado, maíz, haba, arvejas, hortalizas y tubérculos, los cuales están
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adaptados al clima del lugar. Hay presencia de heladas en algunos sectores


principalmente en la cima de la montaña y en el fondo del valle que se presentan
esporádicamente en los meses más fríos, las cuales ocasionan la perdida de sus
cosechas en la última etapa de su madurez, afectando sobre todo los cultivos de
granos, como la cebada y el trigo cuya cosecha termina en los meses de julio-
agosto.
g. Componentes geográficos
Agua
La Laguna de Pacucha es considerada como una de las más grandes y
bellas lagunas del Perú. Su importancia radica en virtud a que su volumen y
componentes nutritivos de sus aguas son productivos, además de ser tibias y casi
dulces. Asimismo, en la actualidad se vienen explotando diferentes especies como
la trucha, pejerrey lacustre, generando por consiguiente nuevas fuentes de
alimentación y de trabajo en beneficio de los habitantes del lugar.
Suelo

El área de estudio, está considerada como tierras aptas para la producción


forestal de calidad agrícola baja, limitado por su condición climática y tierras aptas
para producción de pastos de calidad agrícola media, limitado por ser erodabilidad
y no así para la actividad agrícola. Por lo general estas tierras cuentan con una
calidad agrícola media a baja en donde se realiza una actividad agrícola sin ningún
criterio de conservación con especies estaciónales de corto período vegetativo
adaptadas al clima del lugar.
Aire

La temperatura del aire es de 20° C, nubosidad, pequeña lluvia, presión de aire


1009 hPa/mBar (757 mmHg), humedad del aire 61%, velocidad del viento de 4
m/s (con ráfagas de 4 m/s).
h. Intervención antrópica

Son las actividades antrópicas, que realizan los pobladores del distrito de
Pacucha, por ejemplo: la deforestación, la pesca, la agricultura, la mayoría de las
emisiones de gases de carbono a la atmósfera (de origen vehicular, etc.). Los
cuales fueron los principales factores que intervinieron en la contaminación de la
Laguna y esto genera una disminución de especies, entre otros.
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5.1 PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO

1. Disponer un telescopio óptico sobre la superficie de trabajo

Imagen 1. Microscopio para observar diferentes reinos

2. Separar las muestras:

Muestra n°1:

Agua del rio Chumbao

Imagen 2. Muestra del rio Chumbao

Muestra n°2:

Agua de la laguna de pacucha


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3. Tomar un portaobjetos y una pipeta. Esta última introducir en la muestra del rio
chumbao, seguidamente dejar caer una muestra significativa sobre el
portaobjetos
4. Con la ayuda de la pipeta esparcir la muestra por el portaobjetos

5. Cubrir la muestra con el cubreobjetos

6. Antes de colocar el portaobjetos sobre la apertura del microscopio, fijarse que el


aumento con mínima resolución este apuntando a la misma.
7. Colocar el porta objetos en el microscopio y sujetarlo son el clip de escenario

Imagen 3. Observación de los diferentes reinos

8. Ajustar los torillos macrométricos y micrométricos hasta obtener una visión


clara y nítida de la muestra

Imagen 4. Ajustar los tornillos para una visión clara


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9. Observar los resultados

*repetir estos procedimientos para las dos muestras*

VI. RESULTADOS

Las diferentes muestras que fueron extraídos de los 4 puntos de la laguna de


pacucha, se lograron observar en el laboratorio de ciencias básicas con un microscopio
los diferentes reinos y se caracterizó en el siguiente cuadro.
Cuadro n°1

Integrantes Características específicas Características del

Reino nombre biotopo


científico y
nombre vulgar

Es una colonia de algas Las características


Nombre verdeazuladas que pueden del biotopo del
científico: permanecer inactivas hasta que la reino monera y
Nostoc primera lluvia las humedece, protista que fue
commune formando esferas parecidas a extraído de dos
Nombre uvas de 10 a 25 mm de diámetro. puntos distintos
vulgar: Está ubicado en las estribaciones tanto del sector de
¨mierda¨ de de los Andes a una altitud de más anccopaccha y la
Monera brujas de 3000 metros. salida de santa
- - elena que están
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Son: Pequeños, unicelulares, ubicados en la


algunos formando grupos, pocos laguna de pacucha
o muchos individuos, todos se puede
iguales; simetría asimétrica o mencionar que
Nombre bilateral, radial o esférica. En viven o habitan en
científico: algunas especies, suele ser esa zona que está
Protozoarios constante, elíptica, alargada, ubicado en la
esférica u otras formas. laguna de pacucha
Protista Nombre son organismos eucariontes,
científico: unicelulares cuyo tamaño puede
Diatomeas variar entre más o menos 10 y
200 µm (0.01 a 0.2 mm)
Las algas se definen como
Nombre organismos similares a las
científico: Algas plantas, fotosintéticos y
Verdes acuáticos, pero a diferencia de las
plantas, carecen de verdaderas
raíces, tallos, hojas o tejido
vascular y tienen formas simples
de reproducción.
Nombre Tiene un periplasma muy
científico: prominente y rígido con una
Phacus banda espiral, muchos plastos
verdes y una mancha ocular roja
muy prominente cerca de la base
del carpelo.
Fungi - - -
- - -
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VII. DISCUSIONES

La diversidad microbiana en un ambiente acuático estancado suele sorprender a


estudiantes novatos recién iniciados en las áreas de las ciencias biológicas. Durante la
parte procedimental de la práctica de reconocimiento de la diversidad microbiana
mediante el uso del microscopio óptico, se identificó un conjunto de microorganismo,
bacterias en la mayoría de los casos, que obedecen al marco teórico presentado
anteriormente.
Al analizar muestras de agua estancadas con características claras de contener
materia organiza, lodo, etc. Se pudieron observar microorganismos con características
comunes en ambientes similares. según Guillen (2019) la euglena viridia habita aguas
bastante cargadas de materia orgánica, principalmente en lagunas y estanques, y
efectivamente, el agua analizada se obtuvo de un ambiente estancado con presencia
considerable de materia orgánica. Así mismo las demás bacterias encontradas tales como
Los paramecium caudatum y las diatomeas habitan aguas con las características de la
muestra estudiada.
Es preciso distinguir el nostoc comune, de los demás microorganismos
identificados, pues de acuerdo a (Ponce, 2014) estos microorganismos, habitan ambientes
por encima de los 3000 m.s.n.m., y efectivamente la laguna de pacucha, lugar de donde
se obtuvieron las muestras de agua estudiadas, se encuentra a una altura aproximada de
3147 m.s.n.m. lo que da razón a lo que el autor describe.
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VIII. CONCLUSIONES

En esta práctica de laboratorio se logró identificar a distintos tipos de bacterias de


lo cual también se determinó la diferencia por la diversidad que tiene cada uno.
Se concluye que, el microscopio juega un papel importante en la ciencia, también
al momento de observar ya que nos permite analizar y determinar muestras o cultivos de
bacterias que a simple vista no se alcanza a observar.
Se observaron distintas formas de bacterias como: esféricas, alargadas, espirales,
etc. De los cuales se determinó las características principales, los cuales fueron
determinados mediante el microscopio.
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IX. CUESTIONARIO

a) Diferencias entre hongos y protozoarios


Cuadro n°2
Hongos Diferencias Protozoarios
Eucariota Tipos de célula Procariota
Presentes, entre ellos el
núcleo, vacuolas, aparato Organelos Ausentes
de Golgi, retículo
endoplasmático
Microscópicas: 10 a 50 Tamaños Microscópicas: de 0,5 a 3
Cilios, pseudopodos, Flagelos compuestos por
flagelos compuestos por Aparatos de locomoción flagelina
microtúbulos.
No posee pared celular, su Pared celular: formada por
envoltura es la membrana Envoltura celular peptidoglicano
plasmática y la glucocálix.
Variadas: Ovaladas, Variadas: cocos, bacilos,
estrellas, formas de Formas espirilos, vibrios.
campana, alargados y
irregulares.
Organismos heterótrofos Nutrición Dos tipos: autótrofa y

heterótrofa.
Asexual: fisión binaria,
gemación y esporulación.
Sexual: conjugación y
Reproducción Asexual: por fisión binaria
fusión de gametos
(isogamia y anisogamia)
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b) Diferencias entre algas y hongos


Cuadro n°3
Hongos Diferencias Plantas
Algas, musgos, hepáticas,
Levaduras, mohos, setas ¿Que son? antoceros, helechos,
gimnospermas, y
angiospermas
Desde microscópicos hasta Variable desde
no mayores de 10 cm. Tamaño microscopios hasta
aproximadamente 100 m.
Filamentosa, cenocítica,
Filamentosa, cenocítica y psedotisular, algunas con
pseudotisular. organización completa, con
Organización corporal
órganos y tejidos
verdaderos.
Heterótrofa Nutrición Autótrofa
Ausentes Cloroplastos y clorofila Presentes
Sexual y asexual, no Reproducción Sexual y asexual, producen

producen semillas. semillas

c) Diferencias entre protozoarios y algas.


Cuadro n°4
Protozoarios Diferencias Algas

Unicelulares, células Presentan núcleo


apenas diferenciadas, delimitado por una doble
asimétricos o con simetría membrana, mitocondrias,
Organización corporal
esférica (flotación, nadar) cloroplastos, retículo
endoplásmico, complejo de
Golgi y lisosomas
Heterótrofos Nutrición Autótrofas
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Asexual: Relacionada con Pueden multiplicarse


procesos de mitosis. vegetativamente o
Fisión simple: Se reproducirse sexual o
producen dos individuos. asexualmente
Binaria: Resultan dos Reproducción
células de tamaño
parecido.
Podemos encontrar Variadas: los flagelados,
filamentosas, con forma de Formas los ciliados, los esporozoos
arbusto, en cintas o y los rizópodos.
cilíndricas

d) Importancia ecológica de las algas, hongos y protozoarios, en los ambientes


acuáticos.
Cuadro n°5
Algas Hongos Protozoarios
Desde un punto de Los hongos cumplen Los protozoos juegan

vista ecológico, las una función un papel ecológico


algas son ecológica muy importante: forman un
extremadamente importante ya que eslabón de la cadena
importantes. Están en descomponen la alimenticia, son
el fondo de la red materia orgánica para productores de materia
alimentaria, que regrese al orgánica,
producen oxígeno ecosistema como depredadores
que permite a materia prima para naturales de bacterias

muchos organismos los nutrientes del (principalmente Gram


acuáticos respirar, productor, negativas), conforman
Importancia absorber dióxido de manteniendo así el el zooplancton en
carbono y servir de flujo de nutrientes mares, océanos y
refugio y hábitat a necesarios para que cuerpos de agua.
miles de especies. la vida continúe.
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X. ANEXOS

Imagen 1. Zona paramétrica Imagen 2. Descripción del punto de muestreo.

Imagen 3. Muestra del rio Chumbao. Imagen 4. Diferentes muestras en los tobos de
ensayo.

Imagen 5. Tuvo duranh positivo.


Imagen 6. Observación de muestra con
microscopio.
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XI. REFERENCIAS

colaboradores de Wikipedia. (20 de noviembre de 2022). Diatomea.


Obtenido de
https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Diatomea&oldid=14745
4858

colaboradores de Wikipedia. (20 de octubre de 2022). Paramecium. Obtenido de


https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Paramecium&oldid=146778955

Guillen, A. (02 de febrero de 2019). Euglena viridis. Obtenido de [Entrada


de blog]: https://www.biodiversidadvirtual.org/micro/Euglena-
viridis-img3454.html

Montaño, N., Sandoval, A., Camargo, R., & Sanchez, Y. (febrero de 2010). Los
microorganismos: pequeños gigantes. Elementos: ciencia y cultura, 17, págs. 15-
23. Obtenido de
http://redalyc.uaemex.mx/src/inicio/ArtPdfRed.jsp?iCve=29411989003

Ponce, E. (23 de mayo de 2014). NOTAS CIENTIFICAS. Nostoc: un alimento


diferente y su presencia, 32, págs. 115-118. Obtenido de
https://scielo.conicyt.cl/pdf/idesia/v32n2/art15.pdf

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