Guìa de La Pràctica 1. Preparación de Diluciones Seriadas

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO
A.- DATOS GENERALES DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO
Asignatura: INMUNOLOGÍA 2
N° de Guía: 1 Código Materia: INMUNOLOGIA 2 (A19)
Fecha: …Hora de inicio:……………Hora de finalización:………….
Profesor Responsable: Lcda. Graciela Lucía Uzcanga Urbina PhD.
Nivel al que va dirigido la Guía: 5 do Paralelo: A-B
B.- DATOS ESPECÍFICOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO
● TÍTULO DE LA PRÁCTICA
EJERCICIOS DE DILUCIONES SERIADAS
● OBJETIVOS DE APRENDIZAJE
Objetivo general:
Adquirir destrezas en los cálculos para la preparación de diluciones simples y

seriadas
⋅
Objetivos específicos:
1. Dominar los métodos de cálculo de diluciones simples y seriadas.

2. Dominar los métodos para establecer los volúmenes necesarios de cada
disolución para realizar los ensayos inmunológicos.
● TIEMPO PLANIFICADO PARA LA PRÁCTICA DE LABORATORIO.
60 minutos.
● RECURSOS PARA REALIZAR EL TALLER:

Laboratorio, computadora y conexión a internet
Tubos de ensayo de 5 ml
Solución de glucosa
Colorantes de cocina
Micro pipetas
Puntas de micropipetas
Espectrofotómetro
● SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
Hay muchas situaciones en que las cantidades de sustancia necesarias para ver un
efecto son extremadamente pequeñas (por ejemplo un fármaco para tratar una
enfermedad, una hormona para estudiar su efecto en un animal de
experimentación, etc) y difícilmente se pueden pesar o medir en esas
proporciones tan pequeñas. En esas situaciones es necesario recurrir a la
preparación de una solución de alta concentración (o solución de stock o solución
madre) y hacer diluciones seriadas a partir de ésta.
¿Cómo se preparan las diluciones seriadas?

En general se parte de una solución concentrada y se preparan series de
diluciones al décimo (1:10) o al medio (1:2). De esta manera se obtiene una serie
de soluciones relacionadas por ejemplo por un factor de dilución 10 es decir 1:10;
1:100; 1:1000 y así sucesivamente. O la otra serie es 1:2; 1:4; 1.8; 1:16; 1.32 etc.
Qué quiere decir 1:10, que por cada parte de soluto pondremos 9 partes de
disolvente para alcanzar 10 partes en el volumen final.
Por ejemplo: si partimos de una solución de 50 mg/ml de una sustancia (Solución

A)
a. Dilución 1/10: 1ml de la solución A + 9 ml de agua= una solución de 5 mg/ml

(dilución 1:10)
b. Dilución 1/2: 5 ml de la solución A + 5 ml de agua= una solución de 25 mg /ml
(dilución 1:2)
Veremos dos ejemplos:

1) diluciones seriadas de una proteína
2) diluciones seriadas de un neurotransmisor
1) El primer ejemplo que veremos es una proteína. La albúmina sérica bovina es la

proteína que más usualmente se emplea como patrón para calcular la cantidad de
proteínas totales en una muestra incógnita. Las unidades que habitualmente se
usan para la solución de stock son mg/ml, y en general una solución de 1 mg/ml
puede resultar adecuada para realizar diluciones seriadas y medir luego la
concentración de proteínas en una muestra. Las diluciones se harán al medio en
una serie de tubos rotulados 1; 0,5; 0,25; 0,12; 0,06; 0,03; 0,015, a todos se les
agrega 2 ml de agua destilada y luego la solución correspondiente:
tubo concentración ml de H2O ml solución x dilución
1 0.5 mg/ml 2 ml 2ml solución madre (1mg/ml) 1:2
2 0.25 mg/ml 2 ml 2ml de la solución 0.5mg/ml 1:4
3 0.125 mg/ml 2 ml 2ml de la solución 0.25mg/ml 1:8
2) El otro ejemplo es un neurotransmisor, como por ejemplo la noradrenalina, ya

que las concentraciones que se emplean para producir un efecto biológico suelen
ser tan pequeñas que es necesario hacer diluciones muy grandes de la sustancia.
Por ejemplo, se parte de una solución madre 0,1 M y se hacen diluciones 1:10
hasta 10-9 M.
3) En los ensayos inmunoenzimáticos los conjugados suelen emplearse a
diluciones muy altas 1:10.000 hasta 1:100.000 y esto requiere del uso de
diluciones seriadas.
Las diluciones seriadas permiten evitar errores asociados al uso de instrumento
de medición por debajo de su nivel de error, errores en el uso de micropipetas y
ahorros de reactivos.
● DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Observe el video que encontrará en el siguiente Link

https://www.youtube.com/watch?v=D3HPDoCaVNg
Al final del video realice el cálculo de las diluciones realizadas para determinar
cuál es la concentración final del soluto. Debe evidenciar sus cálculos.
Usted recibirá en la práctica, una tira de 8 pocillos y un tubo con que contiene,
una solución de glucosa de 5 mg/ml y un colorante diluido 20 % v/v. Realice las
siguientes diluciones seriadas y complete la tabla calculando la concentración de
la glucosa y del colorante después de cada dilución.
Recuerde que necesita al menos 1 ml de cada dilución para medir en el
espectrofotómetro.
Grupos A-A1 y A-A2

Solución 1:10 1:3 1:2 1:3 1:2
concentrada
5 mg/ml y 20 %
v/v de colorante
absorbancia
Grupo B-B1 y B-B2

Solución 1:10 1:2 1:2 1:3 1:2
concentrada
5 mg/ml y 20 %
v/v de colorante
absorbancia
Ustedes deberán leer la absorbancia en el espectrofotómetro y registrar sus

valores. En el informe de la práctica debe reportar una figura que contenga la
gráfica de concentración en función de la absorbancia obtenida. Reporte cuánto
se ha diluido la solución inicial hasta llegar a la última dilución.
EJERCICIOS DE DISOLUCIONES
ESTOS EJERCICIOS SON PARA QUE USTED PRACTIQUE, SI TIENE DUDAS SOLICITE UNA TUTORÍA. ESTO
SERÁ EVALUADO COMO PARTE DEL TRABAJO AUTÓNOMO MEDIANTE UNA LECCIÓN DE RESOLUCIÓN
DE EJERCICIOS.
Realice los siguientes ejercicios, explicando el razonamiento del procedimiento que empleo, recuerde
usar las fórmulas de diluciones seriadas, si tiene dudas revise el video al aula virtual. RECUERDE LAS
UNIDADES DE :
MASA:
Kilogramo 10³ g (kg)
Hectogramo 10² g (hg)
Decagramo 101 g (dag)
gramo, 1 g (g)
decigramo, 10−1 g (dg)
centigramo, 10−2 g (cg)
miligramo, 10−3 g (mg)
microgramo, 10−6 g (µg)
nanogramo, 10−9 g (ng)
picogramo, 10−12 g (pg)
VOLUMEN:
1 milímetro cúbico.
1 μL = 10–6 L = 1 mm³
Equivalencias
1 μL = 1000 nanolitros (nL)
1 μL = 0,001 mililitros (mL)

1 μL = 0,0001 centilitros (cL)
1 μL = 0,00001 decilitros (dL)
1 μL = 0,000001 litros (L)
CONCENTRACIÓN: Siempre es masa entre volumen. Ejemplo, ng/mL o µg/mL
1.- Usted tiene un stock de IgE a una concentración de 200 µg/ml y debe tener 200 µl de cada solución
de IgE de la curva patrón. Se le pide que genere la siguiente curva patrón
500 ng/ml 50ng/ml 20 ng/ml 10 ng/ml 5 ng/ml 1 ng/ml.
Calcule las diluciones y defina sus volúmenes de trabajo
2.- A usted le llegó un conjugado liofilizado, contiene 0.5 µg del reactivo. Decida en cuanto lo va a diluir
para preparar un stock de 100 ng/ml. Usted debe colocar 5 ng en cada pocillo del ELISA, ¿cuál dilución
haría del conjugado? Recuerde que se coloca 100 µl en cada pocillo y usted tiene 96 pocillos.
3.- Usted debe titular el suero de un paciente para evaluar su respuesta de anticuerpos frente al COVID
-19. Si a una dilución de 1:160 o mayor el suero del paciente aun contiene suficientes anticuerpos que
reconozcan antígenos del virus, el paciente tiene inmunidad frente al COVID. Usted requiere de 50 µl de
cada dilución.
Proponga las diluciones seriadas que realizaría y los volúmenes que emplearía.
4.- A usted le llegó un conjugado liofilizado, contiene 1 µg del reactivo. Decida a qué concentración va a
preparar su stock. Usted debe colocar 2 ng en cada pocillo del ELISA, ¿cuál dilución haría del conjugado?
Recuerde que se coloca 100 µl en cada pocillo y usted tiene 96 pocillos.
5.- Usted debe realizar un ELISA de sándwich o de captura de antígeno. El kit trae los dos anticuerpos
uno para sensibilizar la placa que debe diluir 1:200 y otro para detectar el antígeno capturado que usted
debe diluir 1:1000. Cómo prepararía cada dilución para evaluar los sueros de 10 pacientes. Recuerde que
debe hacer duplicados y que debe color 100 µl pocillo.
6.- Usted tiene un stock de IgA a una concentración de 500 µg/ml y debe tener 200 µl de cada solución
de IgA de la curva patrón. Se le pide que genere la siguiente curva patrón
0.5 ng/ml 1 ng/ml 2 ng/ml 4 ng/ml 16 ng/ml 64 ng/ml 128 ng/ml.
Calcule las diluciones y defina sus volúmenes de trabajo. Usted debe usar diluciones seriadas para
realizar este ejercicio.
7.- Usted tiene un stock de IgA a una concentración de 300 µg/ml y debe tener 200 µl de cada solución
de IgA de la curva patrón. Se le pide que genere la siguiente curva patrón
1 ng/ml 5 ng/ml 25ng/ml 50 ng/ml 150 ng/ml 300 ng/ml.
Calcule las diluciones y defina sus volúmenes de trabajo. Usted debe usar diluciones seriadas para
realizar este ejercicio.
8.-Usted debe titular el suero de un paciente para evaluar su respuesta de anticuerpos anti nucleares.
Habitualmente, 1/40 y 1/80, se considera un resultado negativo, e incluso 1/160 si no existen otros datos
que justifiquen la enfermedad. Títulos muy elevados, como 1/1280, suelen indicar que nos encontramos
ante un paciente con una enfermedad reumatológica autoinmune. Usted requiere de 20 µl de cada
dilución.
Proponga las diluciones seriadas que realizaría y los volúmenes que emplearía.
9.- A usted le llegó un conjugado liofilizado, contiene 0.4 µg del reactivo. Decida en cuanto lo va a diluir
para preparar un stock de 200 ng/ml. Usted debe colocar 2 ng en cada pocillo del ELISA, ¿cuál dilución
haría del conjugado? Recuerde que se coloca 50 µl en cada pocillo y usted tiene 96 pocillos.
10:- Realice la diluciones seriadas de un suero para obtener 300 o más micro litros de cada una de las
soluciones que se indican a continuación.
1:50----1:200---1:600---1:1800

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A.- DATOS GENERALES DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

N° de Guía: 1 Código Materia: INMUNOLOGIA 2 (A19)

Fecha: …Hora de inicio:……………Hora de finalización:………….

Profesor Responsable: Lcda. Graciela Lucía Uzcanga Urbina PhD.

Nivel al que va dirigido la Guía: 5 do Paralelo: A-B

B.- DATOS ESPECÍFICOS DE LA PRÁCTICA DE LABORATORIO

EJERCICIOS DE DILUCIONES SERIADAS

Adquirir destrezas en los cálculos para la preparación de diluciones simples y

1. Dominar los métodos de cálculo de diluciones simples y seriadas.

● TIEMPO PLANIFICADO PARA LA PRÁCTICA DE LABORATORIO.

● RECURSOS PARA REALIZAR EL TALLER:

¿Cómo se preparan las diluciones seriadas?

Por ejemplo: si partimos de una solución de 50 mg/ml de una sustancia (Solución

a. Dilución 1/10: 1ml de la solución A + 9 ml de agua= una solución de 5 mg/ml

Veremos dos ejemplos:

1) El primer ejemplo que veremos es una proteína. La albúmina sérica bovina es la

2) El otro ejemplo es un neurotransmisor, como por ejemplo la noradrenalina, ya

Observe el video que encontrará en el siguiente Link

Grupos A-A1 y A-A2

Grupo B-B1 y B-B2

Ustedes deberán leer la absorbancia en el espectrofotómetro y registrar sus

Kilogramo 10³ g (kg)

Hectogramo 10² g (hg)

Decagramo 101 g (dag)

decigramo, 10−1 g (dg)

centigramo, 10−2 g (cg)

miligramo, 10−3 g (mg)

microgramo, 10−6 g (µg)

nanogramo, 10−9 g (ng)

picogramo, 10−12 g (pg)

1 μL = 1000 nanolitros (nL)

1 μL = 0,001 mililitros (mL)

1 μL = 0,00001 decilitros (dL)

1 μL = 0,000001 litros (L)

CONCENTRACIÓN: Siempre es masa entre volumen. Ejemplo, ng/mL o µg/mL

500 ng/ml 50ng/ml 20 ng/ml 10 ng/ml 5 ng/ml 1 ng/ml.

Calcule las diluciones y defina sus volúmenes de trabajo

0.5 ng/ml 1 ng/ml 2 ng/ml 4 ng/ml 16 ng/ml 64 ng/ml 128 ng/ml.

1 ng/ml 5 ng/ml 25ng/ml 50 ng/ml 150 ng/ml 300 ng/ml.

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