Artículo Original

ISNN: 2810-837X

Panel multiplex PCR como método de identificación

de agentes virales respiratorios en paciente
pediátricos: experiencia en un centro privado
de salud
Multiplex PCR panel as a method of identification of respiratory viral
agents in pediatric patients: experience in a private heath center
Maria Orrego-Manrique 1
, Marcelo Galdos-Bejar 2
, Abel Salinas-Rivas 3

RESUMEN
Objetivo: Determinar la incidencia de virus respiratorios en la población pediátrica hospitalizada en un centro privado
de salud durante el periodo 2022-2023. Metodología: Estudio transversal analítico retrospectivo. Se utilizó la base de
datos del laboratorio de la Clínica Internacional con todos los pacientes a quienes se les realizó la prueba Pneumovir
desde mayo del 2022 hasta abril del 2023. Resultados: El 94% de las pruebas de PCR viral fueron positivas y el 20% de
estas corresponden a coinfección viral; 52.1% fueron mujeres y el 64.7% de la población fue menor de 5 años. Dentro de
los resultados obtenidos, Influenza A, influenza A y B e influenza B corresponden en total al 58.5% de todas las muestras
estudiadas y virus sincitial respiratorio está presente en el 31 % de las muestras obtenidas solo o asociado a otros virus.
Dentro de las coinfecciones, la más común fue Influenza A y VSR, la cual representa el 11.1%. El 94% de la población
oncológica resultó positiva a virus respiratorio y el 100% de pacientes con antecedente de parálisis cerebral infantil resultó
positiva y con coinfección viral. Discusión: Mediante el panel Multiplex PCR se halló un alto porcentaje de infecciones y
coinfecciones virales, esto es por la alta sensibilidad de la prueba, la deuda inmunológica y la tasa baja de vacunación en la
población pediátrica. Conclusión: Es importante seguir realizando estudios de etiología viral mediante pruebas con mayor
sensibilidad lo que nos permite tomar decisiones y establecer medidas de salud pública para disminuir la morbimortalidad
en la población pediátrica a causa de estos agentes.

Palabras clave: Panel Multiplex PCR, infección viral, coinfección.

ABSTRACT
Objective: To determine the incidence of respiratory viruses in the pediatric population hospitalized in a private health
center during the period 2022-2023. Methodology: Retrospective cross-sectional analytical study. The database of the
Clínica Internacional laboratory was obtained with all the patients who underwent the Pneumovir test from May 2022 to
April 2023. Results: 94% of the viral PCR tests were positive and 20% of these correspond to a viral coinfection; 52.1%
were women and 64.7% of the population was under 5 years of age. Among the results obtained, Influenza A, influenza A
and B and influenza B correspond to a total of 58.5% of all the samples studied and respiratory syncytial virus is present
in 31% of the samples obtained alone or associated with other viruses. Among the coinfections, the most common was
Influenza A and RSV, which represents 11.1%. 94% of the cancer population was positive for respiratory virus and 100% of
patients with a history of childhood cerebral palsy were positive and with viral coinfection. Discussion: Using the Multiplex
PCR panel, a high percentage of viral infections and coinfections was found, this is due to the high sensitivity of the test,
the immunological debt and the low vaccination rate in the pediatric population. Conclusion: It is important to continue
carrying out studies of viral etiology through tests with greater sensitivity, which allows us to make decisions and establish
public health measures to reduce morbidity and mortality in the pediatric population due to these agents.

Key words: Multiplex PCR panel, viral infection, viral coinfection.

1
Médico Residente de Pediatría de Clínica Internacional, Universidad Nacional Mayor de San Marcos
2
Médico Cirujano, Universidad de Ciencias Aplicadas
3
Jefe del Departamento de Pediatría de la Clínica Internacional, Universidad Nacional Autónoma de México

Citar como: Orrego-Manrique M, Galdos-Bejar M, Salinas-Rivas A. Panel multiplex PCR como método de identificación de agentes virales respiratorios en
paciente pediátricos: experiencia en un centro privado de salud. Interciencia méd. 2023;13(3): 6-14. DOI: 10.56838/icmed.v13i3.161

Recibido: 07/03/2023 Aprobado: 18/08/2023 Publicado: 10/10/2023

Esta obra está bajo una licencia internacional Creative Commons Atribución 4.0.

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 Panel Multiplex PCR Orrego-Manrique M.

Introducción Materiales y métodos

Los virus respiratorios se encuentran muy presentes Diseño de estudio

en la población pediátrica y tienen una gran variedad Se realizó un estudio transversal analítico
de manifestaciones clínicas,1 siendo el proceso febril retrospectivo. Para la realización de este estudio
una de las más importantes, incluso en subpoblaciones se utilizó la base de datos que proporcionó el
especiales, tales como pacientes oncológicos y laboratorio de la Clínica Internacional con todos los
pacientes con antecedes neurológicos.2 pacientes hospitalizados a quienes se les realizó la
prueba Pneumovir desde mayo del 2022 hasta abril
Son los principales causantes de las infecciones del 2023. La información clínica de cada paciente fue
respiratorias agudas las cuales lideran en mortalidad y complementada en base a la revisión de las historias
morbilidad en el mundo. La incidencia en la población clínicas virtuales.
pediátrica es parecida en países desarrollados y en
desarrollo; sin embargo, la tasa de mortalidad es mayor Los pacientes que no fueron considerados en
en estos últimos.3 este estudio fueron los pacientes ambulatorios y
de emergencias no hospitalizados, los pacientes
El diagnóstico preciso de los virus asociados con la que pidieron retiro voluntario y los pacientes con
enfermedad en los pacientes pediátricos se considera información incompleta.
de vital importancia en el ambiente hospitalario, ya
que la presentación clínica no logra distinguir las La Clínica Internacional es uno de los principales
diferentes etiologías incluyendo las bacterianas. Es así, centros privados de salud de la ciudad de Lima, con
que las pruebas de laboratorio son fundamentales para servicios de hospitalización, Unidad de Cuidados
determinarla.4 Intensivos (UCI) neonatal y UCI pediátrica.

Existen diferentes métodos para determinar Definición de variables

infección viral, sin embargo, dentro de todos, la El test CLART Fast PneumoVir,7 permite
tecnología molecular tiene una mayor sensibilidad; la detección y genotipado de múltiples virus
y el desarrollo de amplificaciones múltiples permite mediante RT-PCR multiplex (Adenovirus, Bocavirus,
detectar un panel más amplio de virus en un solo Coronavirus, Enterovirus, H1N1, H3N2, Influenza A - C,
método diagnóstico, además de detectar coinfecciones Metapneumovirus A-B, Parainfluenza 1-4, Rhinovirus
virales. Los adenovirus (ADV), los virus de la y RSV A - B). Todas las pruebas fueron realizadas por
parainfluenza (PIV), los enterovirus (EV), pero también personal de laboratorio capacitado aplicando medidas
los coronavirus (HCoV) y los bocavirus (HBoV) ahora higiénicas y de bioseguridad.
pueden detectarse mediante ensayos múltiples.5
Dentro de este estudio se consideraron a todos los
Ampliar el diagnóstico viral, puede ayudar al pacientes a quienes se le realizaron el test, incluyendo
personal médico a no infravalorar el papel de los virus, pacientes oncológicos, con antecedentes de
incluso en poblaciones especiales y de esta manera convulsiones y asma. También se incluyeron variables
usar de manera racional los antibióticos, implementar de signos y síntomas presentes en el momento de la
tratamientos antivirales tempranos si están disponibles, exploración (fiebre, tos, disnea, sibilancias y ronquidos),
prevenir la trasmisión del virus, y establecer políticas de y variables asociadas con el tratamiento (antibióticos,
vacunación.6 corticosteroides y agonistas B-2). Otras variables fueron
el diagnóstico (neumonía, bronquiolitis, infección no
El objetivo de esta investigación es determinar la especificada) y la presencia de coinfección. Se definió
incidencia viral hallada mediante el panel múltiplex coinfección como la identificación de dos virus distintos
RT-PCR en los pacientes hospitalizados en el área de en un mismo paciente, no considerando distintos
pediatría de un centro privado de salud. serotipos de un mismo agente viral como coinfección.

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 Panel Multiplex PCR Orrego-Manrique M.

Ética
Los autores declaramos que esta investigación Tabla 1
Características y tratamiento recibido (n = 217)
cumplió con todos los aspectos éticos establecidos
en la declaración de Helsinki. Al ser un estudio de n %

análisis de una base de datos no requirió la solicitud Sexo

de consentimiento informado. La información fue Masculino 104 47.9

manejada únicamente por los autores, y los datos Femenino 113 52.1

personales fueron codificados. Edad

0 a 5 meses 29 13.4

Análisis estadístico 6 a 11 meses 20 9.3

1 a 4 años 91 42.1
Se recopilaron los datos en Microsoft Excel para
5 a 10 años 58 26.9
Microsoft365 versión 2023, estos datos se exportaron
Más de 10 años 18 8.3
a Stata v1604.8
Antecedentes
Ninguno 149 68.7
Se utilizaron frecuencias absolutas para la
Oncológico 18 8.3
descripción de variables y la prueba estadística de
Parálisis Cerebral
Chi cuadrado para la asociación de signos, síntomas, infantil
6 2.8

resultado de Pneumovir o agentes etiológicos. Asma 33 15.2

Para poder realizar el análisis multivariado se Otros 11 5.1
utilizó regresión de Poisson posterior a cumplir los Resultado Pneumovir
supuestos. Positivo 205 94.5
Negativo 12 5.5
Resultados Coinfección
Si 41 20.0
Durante el tiempo de recolección de datos, fueron No 164 80.0
estudiadas las 217 muestras de RT-PCR viral del Procedencia
servicio de hospitalización de Pediatría de la Clínica Emergencia 6 2.8
Internacional, sede San Borja. La Tabla 1 muestra que Hospitalización 211 97.2

el 52.1% de las muestras tomadas correspondieron Tratamiento antibiótico

a pacientes femeninas. El 64.8% correspondían a Si 41 18.9

población menor de 5 años. No 176 81.1

Tratamiento B2 agonistas

El 94.5% de las pruebas resultaron positivas, Si 73 33.6

correspondiendo al 20% de estas con coinfección No 144 66.4

(dos virus diferentes en la misma prueba). Dentro Tratamiento Corticoides

de los antecedentes, el 68.7% de los pacientes no Si 64 29.5

No 153 70.5
presentaba patología previa, el 15.2% de los pacientes
tenía antecedente de asma diagnosticada, 8.3%
antecedentes oncológicos y 2.8% antecedentes de
En la Tabla 2 se muestra que, en análisis bivariado,
parálisis cerebral infantil. En cuanto a manejo inicial el
las sibilancias se asociaron a no coinfección, y en el
18.9% recibió antibiótico, 33.6% B2 agonistas y 29.5%
análisis multivariado en el cual se utilizó la regresión
corticoide, los mismos que pudieron ser suspendidos
de Poisson, las pacientes femeninas presentaron
al identificarse la etiología viral y al no estar incluidos
13% menos riesgo de presentar coinfección, y los
en grupos de riesgo determinados.
pacientes con antecedentes de parálisis cerebral
infantil tienen 40% más posibilidad de riesgo de tener
coinfección.

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Tabla 2
Análisis bivariado y regresión de Poisson sobre coinfección en pacientes pediátricos de una institución privada de Lima, Perú

Coinfección Análisis multivariado

Si No Valor de Valor de
ORa IC 95%
n (%) n (%) P P

Sexo
Masculino 16 (39.0) 83 (50.6) Ref 0.76 -
0.184 0.04
Femenino 25 (61.0) 81 (49.4) 0.87 0.99
Edad
0 a 5 meses 8 (19.5) 20 (12.2) Ref
0.89-
6 a 11 meses 3 (7.3) 16 (9.8) 1.19 0.234
1.59
0.84-
1 a 4 años 16 (39.0) 71 (43.3) 1.09 0.509
0.738 1.41
0.81-
5 a 10 años 12 (29.3) 44 (26.8) 1.07 0.604
1.44
0.72-
Más de 10 años 2 (4.9) 12 (7.3) 1.02 0.878
1.47
Antecedentes
Ninguno 32 (78.0) 109 (66.5) Ref
0.85-
Oncológico 2 (4.9) 15 (9.1) 1.14 0.38
1.54
1.09-
Parálisis Cerebral infantil 6 (3.7) 1.40 0.009
0.523 1.81
0.87-
Asma 6 (14.6) 27 (16.5) 1.05 0.576
1.27
0.77-
Otros 1 (2.4) 7 (4.3) 1.05 0.747
1.43
Fiebre
Si 31 (75.6) 119 (72.6) Ref
0.736 0.92-
No 10 (29.4) 44 (26.8) 1.10 0.268
1.31
Sibilancias
Si 20 (48.8) 53 (32.3) Ref
0.04 0.98-
No 21 (51.2) 111 (67.7) 1.16 0.08
1.38
Roncantes
Si 10 (24.4) 41 (25.0) Ref
0.936 0.83-
No 31 (75.6) 123 (75.0) 0.98 0.766
1.14
Tos
Si 33 (56.1) 112 (68.3) Ref
0.125 0.98-
No 8 (43.9) 52 (31.7) 1.13 0.09
1.31
Disnea
Si 23 (56.1) 95 (57.9) Ref
No 0.832 0.78-
18 (43.9) 69 (42.1) 0.93 0.404
1.11
Diagnóstico
Neumonía 16 (39.0) 87 (53.0) Ref
Bronquiolitis 0.62-
12 (29.3) 26 (15.9) 0.80 0.08
0.259 1.03
Infección respiratoria 0.71-
no especificada 13 (31.7) 48 (29.3) 0.88 0.191
1.07

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La Tabla 3 muestra la distribución de los resultados corresponden en total al 58.5% de todas las muestras
obtenidos, siendo la más frecuente influenza A en estudiadas, mientras que VSR A y B, VSR A y VSR B al
un 32.7% e influenza A y B en un 22.1%, virus sincitial 15.2% de las muestras. Dentro de las coinfecciones, la
respiratorio A y B corresponde a un 12.9 % como agentes más común fue Influenza A y VSR, la cual representa
únicos, mientras que la coinfección viral de Influenza A, el 11.1%.
VSR A y B se halló en un 8.8%. No obstante, la presencia
de virus influenza y VSR solo o asociados se encuentra La participación de influenza como agente único o
presente en el 77.2% y en el 31% respectivamente de en coinfección estuvo presente en el 77.2% de todas
todas las muestras obtenidas. las muestras obtenidas, mientras que virus sincitial
respiratorio en el 31%.
Tabla 3
Distribución de los virus respiratorios detectados en los Nuestro porcentaje de pruebas positivas resulta
217 niños hospitalizados en la clínica Internacional sede
San Borja Mayo 2022-Abril 2023
similar con el realizado en Myanmar, donde se
encontró un 88% de pruebas positivas. Sin embargo,
Virus Aislados Frecuencia Porcentaje
este estudio encontró que los virus con mayor
Adenov 1 0.5
incidencia fueron VSR B y rinovirus, mientras que
Bocav,InfA,metnv 1 0.5
la coinfección más frecuente fue VSR y rinovirus; 9
InfA 71 32.7
difiere también al estudio realizado en Kenia, donde
InfA,Parainf1 1 0.5
los virus aislados con mayor frecuencia fueron
InfA,Parainf3 1 0.5
rinovirus y parainfluenza,10 y de los hallados en el
InfA,Parainf4 3 1.4
sur de Brasil donde rinovirus y adenovirus tuvieron
InfA,Parainf4,VSRB 1 0.5
mayor incidencia.11 Por otro lado, muestran similitud
InfA,VSRAyB 19 8.8
a los hallados en Ecuador y en México, en donde el
InfA,VSRB 5 2.3
virus sincitial respiratorio e influenza fueron los que
InfAyB 48 22.1
InfAyB,Parainf4 1 0.5
presentaron mayor porcentaje.12,13 Se debe tener en
InfAyB,VSRAYB 4 1.8
cuenta que estos estudios fueron realizados antes
InfAyB,VSRB 1 0.5
del desarrollo de la pandemia de COVID-19, por lo
InfB 8 3.7
que la incidencia de virus podría variar posterior a la
pandemia.
InfB,VSRAyB 3 1.4
Ninguno 13 6.0
Parainf1,VSRB 1 0.5
Comparando con un estudio local realizado en
Parainf2 1 0.5
una institución pediátrica pública, el porcentaje de
Parainf4 1 0.5
muestras positivas fue menor, y la etiología más
VSRA 1 0.5 frecuente fue la de VSR A, seguido de virus de Influenza
VSRAyB 28 12.9 A. Sin embargo, las pruebas utilizadas para el estudio
VSRB 4 1.8 fueron la combinación de inmunofluorescencia y PCR
Total 217 100.0 viral.14

Nuestros resultados muestran similitud a los

hallados en países de latinoamericanos de México y
Discusión Argentina y una marcada diferencia a países asiáticos
y africanos.10 En cuanto a la población oncológica
El 94% de las pruebas fueron positivas y el 20% estudiada, si bien fue una población pequeña, se
de estas corresponden a coinfección viral; 52.1% de halló la presencia de al menos un virus respiratorio
pacientes positivos fueron mujeres y el 64.7% de la en un 94% y coinfección viral en un 12%. Los estudios
población fue menor de 5 años. Dentro de los virus en esta población son reducidos. Sin embargo, se
aislados la Influenza A, influenza A y B e influenza B ha demostrado la presencia de virus Influenza A en

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pacientes oncológicos con proceso febril.15 En cuanto más rápida hasta un 50% más virus respiratorios
a la población con antecedentes de parálisis cerebral comparados con otras pruebas como el cultivo o la
infantil, todos los pacientes presentaron coinfección inmunofluorescencia indirecta.25
viral, lo cual se podría relacionar a las características
propias de esta subpoblación que son aspiración Por estas razones, ratificamos la importancia de un
recurrente, alteración de la depuración de las vías estudio continuo de la etiología viral en la población
respiratorias, deformidad espinal y torácica, función pediátrica, ya que son una de las principales causas
pulmonar deteriorada y desnutrición.16 de morbi- mortalidad, ocasionando problemas tanto
sociales como económicos. Más aún, la utilización
Adicionalmente, es importante mencionar que el de métodos de estudio que nos permitan tener una
periodo en el cual se realizó el estudio abarca 2022 y mayor sensibilidad, tal como es el RT-PCR para virus.
2023, periodo en el cual ya se había retomado las clases Estos, nos permiten tener una base para poder tomar
presenciales y las medidas sanitarias establecidas por medidas preventivas basadas en evidencia, como
el COVID-19 se habían disminuido,17 por lo que hay que la implementación de vacunas para casos de virus
tener en cuenta ese factor al momento de analizar los específicos como la vacuna bivalente 26 para virus
datos y hacer comparaciones con estudios realizados sincitial respiratorio y las vacunas para influenza, así
en el periodo 2020 – 2021 donde se observa una como anticuerpos monoclonales específicos contra
disminución de más del 80% de virus hallados y de VSR en grupos de riesgo como prematuros, displasia
hospitalizaciones causadas por estos.18-19 Sin embargo, broncopulmonar y/o cardiopatía congénita; además
para esta temporada, se observa una tendencia del de enfatizar y promover las medidas de salud pública
aumento de casos de infecciones virales, tal como que disminuyó de manera significativa los casos
lo publica la Organización Panamericana de la Salud de infecciones por virus respiratorios, tal como se
en su Boletín Semanal de Influenza, en donde ha demostró durante la pandemia del COVID-19.
señalado que existe un incremento de la actividad de
Influenza A seguido de VSR en Brasil y cono sur,20 El no subestimar las infecciones virales mediante
situación que también se ve reflejada en Argentina.21 un diagnóstico oportuno permite al clínico considerar
un uso racional de antibióticos incluso en poblaciones
Este aumento es consecuencia de la llamada especiales como son los pacientes oncológicos donde
“deuda inmunitaria”, en donde la implementación de puede ser considerado la infección viral como causa
medidas estrictas dirigidas a disminuir la trasmisión de fiebre en esta población, así como se considera
de SARS-CoV-2, permitió que durante periodos a la infección bacteriana como fúngica; además
prolongados la población pediátrica y sus madres no de continuar los estudios para el uso de antivirales
estén expuestos a diferentes patógenos, ocasionando en esta población que puede disminuir el riesgo
escasez o disminución de la inmunidad protectora de desarrollo de neumonía y de las coinfecciones
frente a estos virus; ocasionando el resurgimiento de bacterianas.2
los virus que se ha dado incluso fuera de temporada
e inusualmente más virulentos.22,23 Otra causa es Este estudio presenta algunas limitaciones. Entre
la disminución de la vacunación en la población estas podemos mencionar que la población incluida
infantil a causa de la pandemia, que en nuestro país perteneció a un solo centro hospitalario y que el
disminuyó un 7.8%.24 Adicionalmente al porcentaje mayor porcentaje de los pacientes era población
elevado de resultados positivos en este caso se sin antecedentes cardiovasculares o nefrológicos,
puede deber al método de estudio diagnóstico que por lo que se debe tener en cuenta al extrapolar
se utilizó. El multiplex PCR es una estrategia validada los resultados. Adicionalmente las subpoblaciones
para la detección rápida y la identificación precisa de estudiadas fueron pequeñas, por lo que se necesitan
numerosos virus respiratorios y coinfecciones entre realizar estudios con mayor población para poder
ellos con una alta sensibilidad y especificidad. Con tomar decisiones en base a los resultados obtenidos.
el uso de este panel se pueden hallar de manera El múltiplex PCR, ha demostrado tener una alta

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precisión diagnóstica para la mayoría de los virus,

menos para el adenovirus, por lo que se debe
tomar en cuenta esta información para realizar
conclusiones o para toma de decisiones. En cuanto
a las coinfecciones virales, la prueba diagnóstica
utilizada nos permite hallar en mayor porcentaje
estas, permitiendo una mejor recolección de datos, no
obstante, es probable que su interpretación necesite
de estudios cuantitativos para discriminar realmente
las coinfecciones verdaderas.1

Cabe resaltar que el estudio presentado es el

primero a nivel nacional donde se utiliza el panel
multiplex PCR como único método de aislamiento
viral, por lo que consideramos que estos resultados
pueden servir como base para estudios posteriores.

Agradecimientos

Al Dr. Sergio Gerardo Ronceros jefe de laboratorio

Clínico de Internacional por su apoyo en las facilidades
brindadas para el acceso a la información de los datos
de laboratorio requeridos.

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Financiamiento
El estudio no contó con financiamiento.
Conflictos de interés
Ninguno declarado por los autores.

Correspondencia:
María Orrego Manrique
Clínica Internacional Sede San Borja,
Av. Guardia Civil 421 - 433. Lima - Perú
E-mail: [email protected]

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