Practica 1 - Determinación de Carbohidratos Formato - Análisis Industriales

MANUAL DE PRÁCTICAS DE
ANÁLISIS INDUSTRIALES.
NOMBRE DEL ALUMNO:
GRUPO:
FECHA:
TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
Determinación de carbohidratos solubles por el método No. de PRÁCTICA 1
fenol-sulfúrico.
ASIGNATURA: Análisis Industriales.
UNIDAD TEMÁTICA: Análisis de alimentos.
TEMA: Pruebas bioquímicas.
NÚMERO DE PARTICIPANTES RECOMENDABLE: 4
DURACIÓN: 3 módulos
personas.
LUGAR: Laboratorio de Análisis Instrumentales.
OPERACIONES PARA REALIZAR: Observar, inferir y deducir.
OBJETIVO:
Detectar la presencia de carbohidratos.
PRINCIPIO O FUNDAMENTO O MARCO TEÓRICO:

El método de fenol-ácido sulfúrico fue ideado por Dubois (1956) es un método colorimétrico eficaz y confiable.
La reacción es sensible y el color es estable; el fenol en presencia de ácido sulfúrico puede utilizarse para la
determinación colorimétrica cuantitativa de azúcares y sus derivados metílicos, oligosacáridos y polisacáridos.
La adición de ácido sulfúrico causa una deshidratación de las pentosas a furfural y las hexosas a hidroximetil
furfural; el resultado de la catálisis ácida de los azúcares tiene como producto varios derivados del furano que
se condensan con fenoles y desarrollan un color amarillo-naranja.
REACTIVOS, MATERIALES Y EQUIPOS:
1 Piseta con Agua destilada 6 Tubos de ensayo

Fenol (C6H6O) al 5% 1 Gradilla
Glucosa (C6H12O6) 2 Vidrio de reloj
Ácido Sulfúrico, concentrado 98% 2 Matraz aforado de 100mL
1 Celda de policarbonato para espectrofotómetro 2 Agitador de vidrio
1 Micropipeta de 1 mL. 1 Vaso pp. de 50 mL.
1 Pipeta graduada de 5 mL. 1 Vaso pp. de 100 mL.
1 Pipeta volumétrica de 1 mL. 1 Perilla
Espectrofotómetro UV-VIS GENESYS ™ 10 THERMO 1 Espátula
HOJA DE DATOS DE SEGURIDAD:

Investigar las Hojas de Seguridad para los compuestos: Fenol, Glucosa y Ácido sulfúrico.
EQUIPO DE PROTECCIÓN PERSONAL (EPP):
Guantes resistentes o papel para manejar los componentes corrosivos.
APLICACIONES:
RESPONDER:
¿Porque es necesario conocer acerca de los carbohidratos?
INSTRUCCIONES/ PROCEDIMIENTO/DESARROLLO:
Preparación de fenol a 5%.

Se disuelve 5 mg de fenol y se aforo a 100 mL con agua destilada. Esta solución tiene una concentración de 5%
fenol.
Preparación de patrón glucosa.

Se disuelve 100 mg de glucosa y se aforo a 100 mL con agua destilada. Esta solución tiene una concentración
de 100 mg/mL (Dubois, et al. 1956).
Preparación de soluciones estándar para las curvas de calibración.
Se utilizó la glucosa como estándar para establecer la curva de calibración con modificaciones que han sido
propuesto por Matissek. et al. (1992). Se enumeró tubos de ensayo del 1 al 5 colocando los reactivos en el
orden que se describe en la tabla siguiente:
TUBO (mg/ml) Sol. Glucosa (ml) Agua (ml) Fenol (ml) H2SO4 (ml)
Blanco 0 0 1.0 1 5
1 20 0.2 0.8 1 5
2 40 0.4 0.6 1 5
3 60 0.6 0.4 1 5
4 80 0.8 0.2 1 5
5 100 1.0 0.0 1 5
Tabla 1 Preparación de los estándares para la curva patrón del método Fenol- ácido sulfúrico
En el tubo etiquetado como blanco se colocó agua destilada y fenol con las cantidades que se indica en la tabla
12. Se continuó con el resto de los tubos de ensayo etiquetados del 1 al 5 colocando la cantidad indicada del
patrón de glucosa, agua destilada y la cantidad fenol que se muestra en la tabla 12. Se procedió agitar los
tubos, después se dejó reposar los estándares por 15 minutos. A continuación, se colocó en los respectivos
tubos de ensayo la cantidad de ácido sulfúrico indicada, se agitó para tener una solución uniforme y se dejó
reposar por 15 minutos. Finalmente se procedió a leer la absorbancia a (λ=490nm) utilizando un
espectrofotómetro UV/VIS GENESYS ™ 10 THERMO, en celdas de 2.5 mL.
Procedimiento del método.
El método de Dubois et al. (1956), tiene como procedimiento que, a 2 mL de una solución de azúcares, se
agrega 1 mL de una solución de fenol al 5%; posteriormente, se deben agregar 5 mL de ácido sulfúrico
concentrado, realizando el procedimiento rápidamente entre cada una de las adiciones de los reactivos. Se
debe asegurar la adición de los reactivos directamente sobre el líquido y no por las paredes del tubo. Los tubos
de ensayo se dejan en reposo durante 15 min, seguido de una agitación durante 30s, y su posterior reposo en
un baño de agua a temperatura ambiente durante 15 min. Finalmente, la medición se realiza en el
espectrofotómetro utilizando una longitud de onda de 490 nm.
TRATAMIENTO DE RESIDUOS: Los residuos agregarlos en el bote de residuos ácidos.
CRITERIO DE DESEMPEÑO QUE SE EVALUARÁ:
Proactivo, Responsable, Trabajo en equipo. Capacidad de síntesis y Solución de problemas.
CÁLCULOS Y/O APLICACIÓN DE FÓRMULAS:
Se calcula la cantidad de carbohidratos totales que corresponde al contenido de almidón (Nielsen, 2003)
presente en las muestras a partir de la curva patrón de la solución estándar de glucosa. Por medio de las
lecturas de absorbancia y en base a la gráfica (absorbancia vs concentración), se despeja la ecuación de la
recta para la determinación de carbohidratos.
Dónde (y) es la absorbancia obtenida de la muestra, y (x) es la concentración de la glucosa en mg/mL. Las
absorbancias obtenidas de las muestras se remplazarán en la ecuación (y) una vez obtenida la concentración
se calcula la cantidad de carbohidratos presentes en 100g, y se determina el resultado en base seca según la
siguiente ecuación (Badui Dergal, 2012).
100
Base seca=base humeda ×
100−% humedad
INFORME DEL ALUMNO

RESULTADOS:
Entregar un reporte de la práctica con sus respectivos valores obtenidos.
OBSERVACIONES y CONCLUSIONES:
¿Cuál es tu opinión acerca del desarrollo de la práctica, antes, durante y posterior del desarrollo de la
práctica?
CUESTIONARIO:
1. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de este método para determinar los carbohidratos totales?
Resultados de la Hoja de Calibración de Glucosa.
HOJA DE DATOS DE DESTILACIÓN HEMPEL
Concentración de
TUBO A 490nm
Glucosa (µg/2ml)
B
1
2
3
4
5
Muestra de naranja
Muestra de naranja
Muestra de naranja
ESQUEMAS O GRÀFICOS O FOTOGRAFÌAS:
Elaborar la gráfica correspondiente en Hoja Milimétrica, deben indicar la pendiente, su punto en el origen y la
correlación no menor de 0.90.
BIBLIOGRAFÌA:
 McClean R. Quintero R. y Sevillano A. (2016) Guía de Laboratorio de química y análisis de alimentos.
Universidad Tecnológica de Panamá.
 Menchú M. y Méndez H. Tabla de composición de alimentos de Centroamérica. INCAP, Serviprensa,
S.A.

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Preparación de fenol a 5%.

Preparación de patrón glucosa.

Preparación de soluciones estándar para las curvas de calibración.

Procedimiento del método.

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Entregar un reporte de la práctica con sus respectivos valores obtenidos.

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