Manual Practico Analisis Agua 4 Ed
Manual Practico Analisis Agua 4 Ed
Manual Practico Analisis Agua 4 Ed
MANUAL
PRÁCTICO DE
ANÁLISIS DE AGUA
Cuarta edición
Fundación
Nacional Ministerio
de Salud Salud
Fundación Nacional de Salud
Manual Práctico de
Análisis de Agua
4ª edición
Brasilia, 2013
Copyright © 2004 Fundación Nacional de Salud.
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Editor:
Ficha Catalográfica
Origen bacteriana
Fiebre tifoidea y paratifoidea Salmonella typhi
Disentería bacilar Salmonella parathyphi A y B Shigella sp
Cólera Vibrio cholerae
Gastroenteritis agudas y Diarreas Escherichia coli enterotóxica Campylobacter
Yersínia enterocolítica
Salmonella sp
Shigella sp
Origen viral
Hepatitis A y Virus de la hepatitis A y
E Poliomielitis E Virus de la
Gastroenteritis agudas poliomielitis Virus
y crónicas Norwalk Rotavirus
Enterovirus
Adenovirus
Origen parasitaria
Disentería amebiana Entamoeba
Gastroenteritis histolytica Giardia
lamblia
Cryptosporidium
Conceptos:
• Coliformes totales (bacterias del grupo coliforme) – ba-
cilos gram-negativos, aerobios o anaerobios facultativos,
no formadores de esporos, oxidase-negativos, capaces de
desarrollarse en presencia de sales biliares o agentes pen-
sativos que fermentan la lactosa con producción de ácido,
gas y aldehído a 35,0 ± 0,5oC en 24-48 horas, e que pueden
presentar actividad de la enzima ß – galactosa. La mayoría
de las bacterias del grupo coliforme pertenece a los géneros
Tubos de ensayo
a) poner el tubo de Durham en posición invertida dentro del
tubo de ensayo;
b) tapar el tubo de ensayo con una guata de algodón en rama.
Frascos recolectores
a) poner dos gotas (0,1 ml) de Tiosulfato de Sodio a 10%
dentro del frasco;
b) poner un tirante de papel aluminio entre la boca y el tapón
del frasco;
c) involucrar la boca y tapón del frasco en papel aluminio.
Pipetas
a) poner una pequeña guata de algodón en la boca de la
pipeta;
b) involucrarla en papel aluminio o papel madera (Kraft).
Medios de cultivo
a) caldo lactosa;
Medio EC
a) pesar 37,0 gramos del medio deshidratado y disolver en
1000 ml de agua destilada;
b) distribuir en tubos de ensayo en campana Durham inver-
tida, a razón de 10 ml en cada tubo, tapar los tubos;
c) esterilizar a 121oC (1Kg/cm2 de presión) en autoclave
durante 15 minutos;
d) guardar en refrigeración (válido por 96 horas).
Agua de dilución
Solución 1
- pesar 34 gramos de fosfato de potasio monobásico
(KH2PO4) y disolver en 500 ml de agua destilada, ajustar
el pH para 7,2 con solución hidróxidos de sodio, solución
1N y diluir a 1 litro con agua destilada. Normalmente se
demanda 175 ml de NaOH para elevar el pH.
Solución 2
- pesar 81,1 gramos de cloruro de magnesio hexahidrata-
do (MgCl2.6H2O) y disolver en 1 litro de agua destilada.
Solución 3
- adicionar 1,25 ml de la solución 1 y 5 ml de la solución
2 a 1 litro de agua destilada. Distribuir en tubos de
ensayo en cantidad que, luego de la autoclave, puedan
asegurar un volumen de 9 ± 0,2 ml.
- esterilizar en autoclave a 121oC (1Kg/cm2 de presión)
durante 15 minutos.
Coliformes totales
Método de los tubos múltiplos (TM)
Material necesario:
a) tubo de ensayo.
b) estante para tubo de ensayo.
c) tubo de Durham.
d) pipeta graduada de 10 ml. e) pipeta graduada de 1 ml.
f) pico de Bunsen o lamparilla de alcohol.
g) caldo Lactosa doble concentración.
h) caldo Lactosa simple concentración.
i) caldo Lactosa Verde Brillante Bilis a 2%.
j) agua de dilución.
k) asa de platina con cable de Kolle.
l) estufa bacteriológica.
Ejecución de la prueba
Prueba presuntiva
a) tomar una batería con 15 tubos de ensayo distribuidos
de 5 en 5;
b) en los primeros 5 tubos, (los que contienen caldo
lactosa doble concentración) inocular con pipeta es-
terilizada, 10 ml de la muestra de agua a ser probada,
en cada tubo. (Dilución 1:1);
Fases de prueba
Inocular en CL o CLT e
inocular por 24 ± 2 h a
35± 0,5OC
(A) Formación de gas o (B) Ausencia de gas o
crecimiento fuerte. producción dudosa. Incubar
Confirmar en VB a 35 ± 0,5OC por + 24 horas
durante 24/48 horas
Ejemplo:
a) en los 5 tubos de la dilución 1:1, se obtuvo 3 tubos po-
sitivos;
b) en los 5 tubos de la dilución 1:10, se obtuvo 2 tubos
positivos;
c) en los 5 tubos de la dilución 1:100, se obtuvo 1 tubo
positivo;
d) se formó, por lo tanto, la combinación 3-2-1;
e) se determina el N.M.P consultándose la tabla 1.
Si no desea trabajar con 15 tubos para determinar el N.M.P.,
hacer tan solo 5 tubos en la dilución 1:1 (10 ml del medio
de cultivo + 10 ml de la muestra) y calcular el N.M.P. con-
sultándose la tabla 2.
Límites
Combinación
N.M.P./100 mL
de positivos
Inferior Superior
0-0-0 <2 - -
0-0-1 2 1.0 10
0-1-0 2 1.0 10
0-2-0 4 1.0 13
1-0-0 2 1.0 11
1-0-1 4 1.0 15
1-1-0 4 1.0 15
1-1-1 6 2.0 18
1-2-0 6 2.0 18
2-0-0 4 1.0 17
2-0-1 7 2.0 20
2-1-0 7 2.0 21
2-1-1 9 3.0 24
2-2-0 9 3.0 25
2-3-0 12 5.0 29
3-0-0 8 3.0 24
3-0-1 11 4.0 29
3-1-0 11 4.0 29
3-1-1 14 6.0 35
3-2-0 14 6.0 35
3-2-1 17 7.0 40
4-0-0 13 5.0 38
4-0-1 17 7.0 45
4-1-0 17 7.0 46
4-1-1 21 9.0 55
4-1-2 22 12 63
4-2-0 26 9.0 56
4-2-1 26 12 65
4-3-0 27 12 67
4-3-1 33 15 77
4-4-0 34 16 80
5-0-0 23 9 86
5-0-1 30 10 110
5-0-2 40 20 140
5-1-0 30 10 120
5-1-1 50 20 150
5-1-2 60 30 180
5-2-0 50 20 170
5-2-1 70 30 210
5-2-2 90 40 250
5-3-0 80 30 250
5-3-1 110 40 300
5-3-2 140 60 360
5-3-3 170 80 410
5-4-0 130 50 390
Límites
Combinación
N.M.P./100 mL
de positivos
Inferior Superior
5-5-0 240 100 940
5-5-1 300 100 1300
5-5-2 500 200 2000
5-5-3 900 300 2900
5-5-4 1600 600 5300
5-5-5 1600 - -
Límites
Combinación
N.M.P./100 mL
de positivos
Inferior Superior
Coliformes termotolerantes
Material necesario:
a) tubos de ensayo con Medio EC;
b) pico de Bunsen o lamparilla a alcohol;
c) asa de platina;
d) baño maría.
Material necesario
a) placa de Petri;
b) pipeta graduada;
c) pico de Bunsen o lamparilla de alcohol;
d) plate Count Agar;
e) estufa bacteriológica;
f) contador de colonias.
Notas:
a) antes de iniciar las pruebas, desinfectar la bancada del
laboratorio utilizando solución de alcohol etílico a 70%
u otro desinfectante que no deje residuo;
b) todas las muestras a ser probadas deben ser homogenei-
zadas al menos 25 veces;
c) no olvidar flamear la boca de los tubos de ensayo conte-
niendo medios de cultivo, antes de utilizarlos;
d) el bisulfato de sodio a 10% puesto en los frascos de re-
colección es para neutralizar la acción del cloro;
e) las placas de Petri deben ser puestas en posición invertida
para evitar la condensación de agua en la superficie del
agar;
f) hacer el recuento estándar de bacterias heterotróficas,
siempre en duplicata.
Coliformes totales
Material necesario:
a) equipo de filtración con porta filtro;
b) placa de Petri esterilizada de Ø 47 mm;
c) filtros de membrana de Ø 47 mm y porosidad de
Material necesario:
Coliformes termotolerantes
Material necesario
a) equipo de filtración con porta filtro;
b) placa esterilizada de Ø 47 mm;
c) filtros de membrana de Ø 47 mm y porosidad de
0,45µm, con tarjeta absorbente;
d) medio de cultivo (m FC Broth Base);
e) agua de dilución estéril;
f) pinza de acero inoxidable;
Material necesario:
Técnica
Prueba de presencia/ausencia
Método del sustrato cromogénico
Material necesario:
Esterilización
Los siguientes materiales deben ser esterilizados: frascos de
recolección de muestra, pipetas, placas de Petri de vidrio,
frascos y tubos con agua de dilución y medios de cultivo.
Alcalinidad total
Alcalinidad total de un agua es dada por la suma de diferentes
formas de alcalinidad existentes, es decir, es la
concentración de hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos,
expresada en tér- minos del carbonato de calcio. Se puede
decir que la alcali- nidad mide la capacidad del agua en
neutralizar los ácidos.
Método de determinación
Material necesario:
Técnica
Cálculo:
Indicador
3 gotas, Titular con
si colorea
Método de determinación
Material necesario:
a) bureta de 50 ml;
b) frasco Erlenmeyer de 250 ml; c) pipeta volumétrica de
100 ml; d) tapón de goma;
e) hidróxido de sodio 0,02N;
f) fenolftaleína.
Técnica
Dónde:
Fc = factor de corrección.
Para calcular el CO2 total, aplicar la siguiente fórmula:
mg/l CO2 total = A + 0,44(2B + C)
Donde:
Indicador de
100 ml Fenolftaleína
de
muestra
Cloruros
Generalmente los cloruros están presentes en aguas brutas y
tratadas en concentraciones que pueden variar de pequeños
trazos hasta centenas de mg/l. Están presentes en forma de
cloruro de sodio, calcio y magnesio. El agua del mar tiene
elevada concentración de cloruros que está alrededor de
26.000 mg/l. Altas concentraciones de cloruros pueden res-
tringir el uso del agua en razón del sabor que le confieren
y por el efecto laxativo que pueden provocar. La Portaría nº
2.914/2011 del Ministerio de Salud establece la concentra-
ción de 250 mg/l como el valor máximo permitido para el
agua potable. Los métodos convencionales de tratamiento
Material necesario:
a) bureta de 50 ml;
b) Becker de 250 ml;
c) frasco Erlenmeyer de 250 ml;
d) medidor de pH;
e) probeta de 100 ml;
f) solución estándar de nitrato de plata 0,0141N;
g) solución indicadora de cromato de potasio K2CrO4;
h) hidróxido de sodio 1N;
i) ácido sulfúrico 1N;
j) cloreto de sodio 0,0141 N.
Técnica
Dónde:
Método de determinación
Material necesario:
a) bureta de 50 ml;
Técnica
ml de EDTA x 1000 x Fc
Dureza Total en mg/l CaCO3 =
ml de la muestra
Medir 25 ml 1 a 2 ml Transferir
de muestra p/ Erlenmeyer Añadir Titular con
Solución
y diluir p/50 de 250 ml Indicador EDTA 0,01M
Tampón
Material necesario:
a) potenciómetro;
b) cubetas;
c) frasco lavador;
d) papel absorbente;
e) solución tampón de pH conocido;
Técnica
Método de determinación
Comparación visual
Material necesario:
a) comparador colorimétrico;
b) cubetas de vidrio o de acrílico;
c) DPD para cloro libre en cápsula;
Técnica
Resultado
Color
El color del agua proviene de la materia orgánica como, por
ejemplo, sustancias húmicas, taninos y también por metales
como hierro y manganeso y residuos industriales
fuertemente coloridos. El color, en sistemas públicos de
abastecimiento de agua, es estéticamente indeseable. Su
medida es de fun- damental importancia, ya que agua de
color elevado provoca su rechazo por parte del consumidor
Método de determinación
Material necesario:
a) tubos de Nessler forma alta de 50 ml;
b) soporte de madera;
c) solución estándar de Cloroplatinato de Potasio (500
Unidades de Color);
Técnica
Aluminio
La prueba de aluminio es indicada para estaciones de trata-
miento donde se usa el sulfato de aluminio como coagulante.
En pH básico:
[OH-] -
Al(OH)3 AlO33 + nH2O
Material necesario
Reactivos
Material necesario
Reactivos:
Técnica
Turbidez
La turbidez del agua se debe a la presencia de materiales
sólidos en suspensión, que reducen su transparencia. Puede
ser provocada también por la presencia de algas, plancton,
materia orgánica y muchas otras sustancias como el cinco,
hierro, manganeso y arena, resultantes del proceso natural
de erosión o de desechos domésticos e industriales.
Método Nefelométrico
Material necesario:
A x (B + C)
uT =
C
Dónde:
20 x (40 + 10)
UT = UT = 100
10
Temperatura
La temperatura tiene que ver con el aumento del consumo
de agua, con la fluoruración, con la solubilidad e ionización
de las sustancias coagulantes, con el cambio del pH, con la
desinfección, etc.
Material necesario:
a) termómetro;
b) becker de 250 ml.
Técnica
Método Scott-Sanchis
Material necesario
a) tubo de Nessler de 100 ml;
b) soporte para tubo de Nessler;
c) termómetro;
Solución
Patrón
Reactivo
Scott-Sanchis
5 ml en cada tubo
Muestra
Termómetro
Balón de
Destilación Condensador
Balón
Volumétrico
Pico
de Bunsen
Volumen Tiempo
Parámetros Recipientes mínimo (mL) Preservación máximo
Vidrio o
Alcalinidad 200 Refrigerar 24h/14d
polietileno
Análisis
CO2 “ 100 -
inmediato
Tempera- Análisis
- - -
tura inmediato
Vidrio o Proteger
Turbidez 200 24h
polietileno de la luz
Cloro Vidrio o Análisis
500 30min/2h
Residual polietileno inmediato
Análisis
pH “ 200 -
inmediato
Material necesario:
10 5 7 3 4
15 7 10 4 6
20 9 14 5 8
25 12 17 7 10
30 14 20 8 12
40 18 27 10 15
50 25 34 13 19
Fuente: Técnicas de Suministro y Tratamiento de Agua – vol. II/Cetesb – SP
* caso no haya alcalinidad natural.
Método de determinación
Ensayo del mármol
Material necesario:
Reactivo
Carbonato de calcio
Técnica
Conclusión
Material necesario:
Técnica
(A-B) x N x 35,45
% de cloro = P x 10
dónde:
A = ml de bisulfato gasto en la titulación de la muestra;
B = ml de bisulfato gasto en el blanco;
N = Normalidad del bisulfato;
P = Peso o volumen del producto.
Estandarización de la solución
Poner 50 ml de una solución de carbonato de sodio 0,02 N
en un frasco Erlenmeyer de 250 ml y adicionar 4 gotas del
indicador metil-orange. Titular con H2SO4 0,02N hasta el
viraje del indicador para leve coloración rojizo. Tomar nota
del volumen de ácido gasto.
N’ X
V’ N =
V
donde:
Indicador metil-orange
Pesar 0,100 gramos de metil-orange y disolver en 200 ml
agua destilada.
Fenolftaleína
a) disolver 1 gramo de fenolftaleína en un poco de agua
destilada y diluir a 200 ml.
b) adicionar gotas de NaOH 0,02 N hasta la aparición de
leve coloración rosa.
Fenolftaleína
a) disolver 1 gramo de fenolftaleína en un poco de agua
destilada y diluir a 200 ml.
b) adicionar gotas de NaOH 0,02N hasta la aparición de
leve coloración rosa.
dónde:
Fc = factor de corrección.
Vp = Volumen de AgNO3 gasto en la titulación.
Fc = factor de corrección;
Vp = Volumen de EDTA gasto en la titulación.
Ácido ascórbico
Reactivo zirconio-alizarina
Reactivos Scott-Sanchis
Arsenito de sodio
Material necesario:
a) bureta de 50 ml;
b) frasco Erlenmeyer de 250 ml;
c) pipeta graduada de 1 ml.
d) pipeta volumétrica de 10 ml.
Procedimiento:
1
Normalidad =
ml de tiosulfato consumido
Regla 1
Cuando el volumen consumido de solución a titular sea igual
al volumen de la solución estándar tomada para la titulación,
significa que aquella está exacta. Ej.: 10 ml de HCl 0,1N han
sido consumidos para titular 10 ml de Na2CO3 0,1N.
Regla 2
Cuando el volumen consumido de la solución a titular sea
menor que el volumen del patrón tomado, significa que
la solución a titular se encuentra más concentrada. En ese
caso, la corrección se hace de la siguiente manera: Ej.: Se
gastó en la titulación de 10 ml de Na2CO3 0,1N; 8,3 ml de
HCl 0,1 N. Aplicándose la siguiente ecuación, tenemos: 8,3
Regla 3
En el caso en que el volumen de la solución a titular sea ma-
yor que el de la solución estándar, significa que la solución
a titular se encuentra más diluida. En ese caso, calculase el
factor de corrección de la siguiente manera:
Procedimiento de lavado
Equipos
a) autoclave vertical, capacidad para 18, 24, 48 o 72 litros,
110/220 voltios;
b) estufa para cultivo bacteriológico, con termostato regula-
ble en la franja de 30 a 65oC, tamaño 45X45X40 cm de
ancho, profundidad y altura, respectivamente, equipada
con bandeja regulable para tres posiciones;
c) balanza analítica, eléctrica, capacidad para 160 g, sen-
sibilidad de 1/100 mg, cinco casas decimales, 110/220
voltios;
d) balanza de precisión, con doble escala, pesaje máximo
200 gramos, sensibilidad de 0,1 g;
e) destilador de agua, capacidad para 2 litros/hora, 110/220
voltios;
f) baño maría capacidad para 50 tubos de ensayo, con
termostato regulable en la franja de 35 a 65oC, 110/220
voltios;
Materiales diversos
a) asa de platina calibrada con 3 mm de diámetro;
b) cable de Kolle para asa de platina;
c) algodón en rama para bacteriología;
d) lapis dermográfico;
e) caldo lactosa, deshidratado, envase de 100 o 500 gramos;
f) caldo lactosa, verde brillante bilis a 2%, deshidratado,
envase de 100 o 500 gramos;
g) medio ENDO MF, para coli total, envase de 100 o 500
gramos;
h) medio EC MF, para coli fecal, envase de 100 o 500 gramos;
Material utilizado
a) Frasco de polietileno o vidrio ámbar, con capa-
cidad para 1000 ml;
b) Equipos de protección individual (guantes, botas
y máscara);
Material necesario
2. Intervinientes
3. Seguridad
El peligro de contaminación biológica asociada y el riesgo
de infección por quistes y ooquistes son elevados en este
método, ya que involucra la manipulación de muestras con-
centradas de organismos patogénicos vivos (activos). Por lo
tanto, deben ser manoseadas con guantes;
4. Equipos y materiales
Nota: Marcas o proveedores citados son únicamente para refe-
rencias. Desempeño equivalente puede ser logrado utili-
zándose marcas alternativas, sin embargo, se debe obser-
var la adecuación de los insumos utilizados.
4.1 Galones o recipientes plásticos (polietileno) para reco-
lección de muestras con volumen entre 10 y 50 litros.
El material de recolección debe ser, preferiblemente,
desechable (reciclable);
Nota: Opcionalmente, se puede optar por la esterilización de
los galones de recolección por el lavado con 200 ml de
solución de hipoclorito de calcio 12,5% (agitar de modo
consistente para esparcir la solución), esperar de 8 a 12h
(overnight), desechar la solución de hipoclorito de calcio y
lavar, primeramente, con 200 ml de solución de tiosultafo
de sodio (52%) y enseguida enjaguar con agua destilada
(agua reactiva).
4.2 Agitador de tubos (tipo Vortex);
5. Reactivos
5.3 Acetona;
5.4 Glicerol;
5.5 Etanol;
5.6 Metanol;
6. Recolección de muestra
7. Identificación de la muestra
7.1.2 Registrar datos del análisis: fecha del inicio del análisis,
volumen analizado y volumen de lo centrifugado;
8. Filtración
9. Elución
Nota: El proceso de elución, aquí descrito, utiliza estación de la-
vaje Filta-Max®. Se debe consultar las instrucciones del fa-
bricante para dominio de montaje y operación del equipo.
Opcionalmente se puede utilizar un Stomacher.
9.1 Procedimiento de elución en la estación Filta-Max®;
10. Centrifugación
11.4 Enjaguar dos veces con agua reactiva al tubo que lleva el
concentrado (o submuestra), de modo a que el volumen
final en el tubo de Leighton sea de 12 ml.
12. Coloración
calidad
del agua potable. 2. ed. Ginebra, 1995. v.1.
. Guias para a calidad Del agua potable. 1. ed. Ginebra, 1998. v.3.
. Guias para a calidad Del agua potable. 3. ed. Ginebra, 2004. v.1.
Colaboradores
Osman de Oliveira Lira/Suest/PE/Funasa
Nilce Bazzoli/Suest/MG/Funasa
Júlio César Reis da Silva/Suest/MA/Funasa
Raimundo Rodrigues dos Santos Filho/Suest/MA/Funasa
Miguel Crisóstomo Leite Brito/Densp/Funasa
Coordenación
Maria Fernanda Bittencourt/Densp/Funasa
Revisión técnica
Felizana M.M. da S. Palhano
Girlene Rodrigues Leite
Vilma Ramos Feitosa/Densp/Funasa
Marinaldo da Silva Valente/Suest-Am/Funasa
Revisión da 3ª Edición
Ana Maria Moreira Dias – Cocag/Desam/Funasa
Aristeu de Oliveira Junior – Cocag/Desam/Funasa
Antonio Carlo B. Brandão – Cocag/Desam/Funasa
Demétrius Brito Viana – Consultor OPAS/Funasa
Osman de Oliveira Lira – URCQA/Sesam/Suest-PE/Funasa
Ilustración
Leonardo Ribeiro da Silva Terra/Coesc/Gab/Presi/Funasa
Diagramación
Eduardo dos Santos – Diedi/Coesc/Gab/Funasa
Revisión bibliográfica
Raquel Machado Santos –/Coesc/Gab/Presi/Funasa
Solange de Oliveira Jacinto –/Coesc/Gab/Presi/Funasa