Curso: BIOLOGÍA CELULAR I1

Grupo: 03 (Subgrupo 02)

Práctica N°9: Extracción de ADN

Integrantes del Equipo:

Camero Zúñiga, Christopher Adrián
Calcina Pinto, Claudia Katrina
Flores Quispe, Duilio Guillermo
Phacsi Tapia, Yhosva Naryi

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INTRODUCCIÓN
En la antigüedad el concepto de ADN era asociado con el de cromosomas, pero hoy en
día sabemos que los cromosomas no solo contienen ADN, sino que también proteínas, de
las cuales no se sabía, cuál de las dos era la encargada de decodificar la información
genética. [7]
Incluso antes del descubrimiento del ADN, los científicos lograron diferenciar sus
componentes, que se trataban de 4 nucleótidos, estos están conformados por un azúcar de
cinco carbonos, o desoxirribosa, tres grupos fosfato y una de las siguientes bases
nitrogenadas; guanina, timina, adenina y citosina. La timina y la citosina se denominan
pirimidinas (por sus anillos de carbono únicos), y la adenina y la guanina se llaman
purinas (anillos dobles de carbono). Así mismo en 1952, se descubrió que la cantidad de
adenina es igual a la cantidad de tiina en nuestro organismo, y por lo tanto la de guanina
es igual a la de citosina. [6]
En 1953 se propuso una estructura de doble hélice para el ADN, estructura que se siguió
estudiando, para terminar comprobando que en efecto es doble hélice, y que las bases
nitrogenadas se unen entre sí por un enlace puente de hidrógeno. [8]
La extracción de ADN ejecutada en la práctica, es uno de los muchos métodos que
existen para el proceso; es importante tener las diferentes características del proceso
presentes a la hora de elegir uno, una de las características principales a tener en cuenta,
debe ser el trabajo con una muestra que se encuentre libre de proteínas, para evitar que
estas interrumpan el proceso de extracción; la extracción de ADN es crucial para realizar
estudios moleculares, por lo que es importante que este esté libre de cualquier tipo de
contaminación, como lo son sales o solventes con los que se trabaja. [9]
Para realizar la extracción debemos comenzar con la colección de la muestra, luego se
debe homogeneizar y luego lisar la muestra para liberar el ADN y librarnos de todos los
componentes celulares libres, luego sigue la degradación de las proteínas del citoplasma
y las unidas al ADN mediante la proteasa K, después los componentes celulares son
separados del ADN con solventes orgánicos, y sigue la precipitación mediante etanol, o
con centrifugación, como solo queremos el ADN, y el etanol también precipita al ARN,
debemos colocar una ARNasa con el fin de degradarlo para que solo quede ADN;
finalizando el ADN debe ser resuspendido en agua pura para poder ser manejado mejor, y
debe ser cuantificado mediante equipos especiales. [10]
La práctica se realizó con una muestra de hígado de pollo y una muestra de fresa, en las
que se separó el ADN por centrifugación, la muestra de hígado mostró con más claridad
el ADN que la muestra de fresa.

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MATERIALES Y MÉTODOS

Materiales:
Biológico
● Hígado de pollo.
Equipos
● Láminas portaobjetos y cubreobjetos
● Microscopio óptico
● Probeta o Varilla de vidrio
● Vasos de precipitado
● Centrífuga
Reactivos
● Alcohol 96 %
● SDS al 10 %
● Cloruro de sodio 2M
Métodos:
Extracción del ADN: Para poder observar el material de las muestras, se tuvo que licuar
hasta que se forme una especie de papilla, luego filtrar con una gasa, para separar los
restos de tejidos, luego colocar a baño maría por 10 minutos, luego añadir alcohol y
colocar a la centrifuga por 5 minutos, después recolectar la muestra y colocarlo en un
portaobjetos, finalmente podremos observar las muestras a través del microscopio óptico
en los objetivos 10x y 20x.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Figura 1 y 2: Obtención de ADN (hígado de pollo), después de centrifugar.

Después de haber realizado el procedimiento final de centrifugación, se retira el tubo cónico.

Analizando el tubo que contenía muestras de hígado de pollo, se observan “fibras”
blanquecinas, que serían las muestras de ADN. Se hallan principalmente en el fondo del tubo.

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 Figura 3: Obtención de ADN (fresa), después de centrifugar.

Se realiza el mismo procedimiento con la muestra de fresa. Para una mejor visualización, se
retira el líquido, quedando las “fibras” de ADN en la parte inferior del tubo cónico, de igual
manera tiene un aspecto blanquecino.

Figura 4 y 5: Muestra de ADN (Hígado de pollo) en beaker.

En este caso para el análisis de los resultados, se realiza la observación en un beaker. En las
muestras de hígado de pollo las “fibras” son rápidamente detectadas, porque presentan un
color blanquecino-crema; además, al ser expuesto el beaker a luz de ambiente se muestra con
claridad el ADN. Se visualizan varios fragmentos de diferentes tamaños.

Figura 6 y 7: Muestra de ADN (Fresa) en beaker.

Al igual que en el caso anterior, el análisis se realiza en un beaker, pero con la muestra de
fresa. En principio, la solución presenta una tonalidad baja rosada-rojiza. Las “hebras” de
ADN se encuentran mayormente en la superficie. Se diferencian por tener una tonalidad más
fuerte.

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 ● La experimentación del aislamiento de ADN permite obtener el material biológico
suficiente para su análisis en microscopía, en los procedimientos realizados en tejido
animal y vegetal (muestras de hígado de pollo y fresa respectivamente), se pueden
describir diferencias en los resultados. El aislamiento hecho a la muestra animal fue
más efectivo, dado que se encontró una mayor cantidad de “hebras” (material de
ADN) tras efectuar la metodología; sin embargo, en el tejido vegetal no se obtuvo una
cantidad similar, sino inferior.
Se podría plantear que los tejidos animales, proporcionan una mayor cantidad de
material de ADN (realizando el procedimiento de aislamiento) que los tejidos
vegetales.

CONCLUSIONES
● El ácido desoxirribonucleico (ADN), contiene el material genético de todos los
seres vivos, además de llevar información, para la síntesis de proteínas y la
duplicación de la misma. Está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas
entre sí formando una doble hélice, principalmente está constituido por un azúcar
llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y una base nitrogenada, las cuales son:
Adenina, Guanina, Tianina y Citosina.
● A lo largo de esta práctica pudimos observar la extracción del ADN, en este caso
se hizo uso de una muestra de hígado de pollo y una muestra de fresa, de las
cuales su ADN fue extraído por centrifugación, al momento de observar las
muestras en el microscopio, nos pudimos percatar que en la muestra de hígado se
encontraba una mayor cantidad de material de ADN, mientras que en la muestra
de fresa no se pudo observar una cantidad similar.

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es la función del ADN en los sistemas vivos?
El ADN es importante para los seres vivos ya que este es el encargado de llevar la
información que se necesita para la síntesis de proteínas y su duplicamiento, también
es importante porque transporta nuestra información genética.[1]
2.- Explica en qué consiste la replicación del ADN.
La replicación del ADN se trata de duplicar una molécula de este, con el fin de
duplicar el genoma y así obtener que cada célula hija contengan un conjunto de
cromosomas completo.
Cuando el ADN está duplicado podemos observar que la célula se puede dividir y
depositar la mitad de ADN en la célula hija, de forma que la célula hija y la original
sean idénticas genéticamente.[2]
3.- ¿Cuál es la función del EDTA en el buffer de lisis?
Cuando el ADN es expuesto al núcleo este se encontrará expuesto a unas enzimas
llamadas DNAsas, estas enzimas degradan el ADN y para evitar que se degrade se
utiliza el EDTA que es un agente quelante que atrapa los iones Mg2+ usados por las
DNAsas.[3]
4.- ¿Cuál es la función de las sales en la extracción de ADN?
La sal al momento de añadirse en el procedimiento hace que se neutralice la carga del
ADN y que los iones de sodio con carga positiva sean atraídos por cargas negativas

4
 del ADN,lo que nos lleva a que las moléculas de ADN se unan en vez de repelerse
entre sí.[4]
5.- Investigue y menciona otro protocolo para la extracción de ADN.
Uso de matrices celulósicas para la extracción del ADN de muestras biológicas:
Este es un método utilizado en investigaciones forenses consiste en impregnar una matriz
de celulosa con productos químicos que permitan la lisis celular y posterior conservación
del ADN. El procedimiento a seguir es usar tampones con agentes quelantes, sales,
detergentes y moléculas con gran absorbancia en el UV lo que nos ayudará a proteger las
muestras de los radicales libres que pueden formarse por exposición a la luz solar.
Siguiendo este procedimiento las muestras pueden ser conservadas por un largo período de
tiempo, lo cual es muy útil para la resolución de casos forenses y también tiene utilidad
para la determinación de especies en un fluido corporal como puede ser un virus o una
bacteria.[5]

BIBLIOGRAFÍA
[1]Monod J, Pribnow C. PROCESOS GENÉTICOS DE LA SÍNTESIS DE
PROTEÍNAS: LA TRANSCRIPCIÓN [Internet]. Ucm.es. [citado el 26 de junio de
2022]. Disponible en:
https://www.ucm.es/data/cont/media/www/pag-56185/09-Procesos%20gen%C3%A9ti
cos%20de%20la%20s%C3%ADntesis%20de%20prote%C3
%ADnas-la%20transcripción%C3%B3n.pdf
[2] S. Replicacion de Adn: Adn Girasa, Amplificacion Genica, Adn Polimerasa, Adn
Ligasa, Topoisomerasa, Proteina del Retinoblastoma, El Gen Egoista. Libros; 2011.
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Replicacion-de-ADN#:~:text=Definici
%C3%B3n,un%20juego%20completo%20de%20cromosomas.
[3]Edu.co. [citado el 26 de junio de 2022]. Disponible en:
https://dspace.tdea.edu.co/bitstream/handle/tdea/1476/Preparaci%C3%B3n%20de%20
soluci%C3%B3n%20de%20lisis%20para%20extracci%C3%B3n%20de
%20ADN%20descrito%20por%20Collins%20et%20al.%20%281987%29.pdf?sequen
ce=1&isAllowed=y#:~:text=EDTA%20(%C3%81cido%20etilendiaminotetraac%C3%
A9tico)%3A %20Una,Fritsch%20%26%20Maniatis%2C%202001).
[4]Bio-rad.com. [citado el 26 de junio de 2022]. Disponible en:
https://www.bio-rad.com/webroot/web/pdf/lse/literature/4110034ES.pdf
[5]10 Métodos de Extracción de ADN [Internet]. Wakolatinamerica.com. [citado el 26
de junio de 2022]. Disponible en:
https://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/noticias-wako/post/10-metodos-de-
extraccion-de-adn/
[6] Cecie Starr, Ralph Taggart, Christine Evers y Lisa Starr. Biología La unidad y la
diversidad de la vida 12a. edición. Cengage Learning Editores, S.A. de C.V; 2009
[7] Bruce Alberts, Dennis Bray, Karen Hopkin, Alexander Johnson, the Estate of
Julian Lewis, David Morgan, Martin Raff, Nicole Marie Odile Roberts, and Peter
Walter. ESSENTIAL CELL BIOLOGY, 5th ed. New York : W.W. Norton &
Company,2019
[8] Harvey Lodish, Arnold Berk, Chris A. Kaiser, Monty Krieger, Anthony Bretscher,
Hidde Ploegh, Angelika Amon, Kelsey C. Martin. Molecular Cell Biology 8a. edición.
New York : W. H. Freeman and Company; 2016
[9] Ríos Sánchez E, Calleros E, González Zamora A, Rubio J, Martínez OC,
Martínez A, et al. Comparative analysis of different DNA extraction methods

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and their genotyping efficiency in Mexican population. Acta Univ [Internet].
2016;26(4):56–65. Disponible en:
http://www.scielo.org.mx/pdf/au/v26n4/2007-9621-au-26-04-00056.pdf
[10] Conogasi.org. [citado el 26 de junio de 2022]. Disponible en:
https://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn-2/