Ecología Aplicada, 3(1,2), 2004 Presentado: 19/01/2004

ISSN 1726-2216 Aceptado: 23/06/2004

Depósito legal 2002-5474

USO DE ALGUNOS PARÁMETROS INDICADORES MICROBIOLÓGICOS Y BIOQUÍMICOS PARA

LA EVALUACIÓN DE LA CONTAMINACIÓN POR HIDROCARBUROS Y LA BIODEGRADACIÓN
DE LOS MISMOS, EN LA ZONA DEL LAGO TITIKAKA (SAN PEDRO DE TIQUINA, BOLIVIA)

SOME BIOLOGICAL AND BIOCHEMICAL INDICATOR PARAMETERS TO EVALUATE

HYDROCARBON CONTAMINATION AND BIODEGRADATION AT TITIKAKA'S LAKE ZONE
(SAN PEDRO DE TIQUINA, BOLIVIA)

Francisco Fontúrbel Rada1

Resumen
Se estudió la variación en el tiempo de la biomasa microbiana, el pH y la actividad enzimática
(para proteasas, ureasas y sacarasas), en suelos del municipio de San Pedro de Tiquina, expuestos
naturalmente a pequeñas vertientes de hidrocarburos. Se estudiaron muestras de época seca y de
época de lluvias. La biomasa presentó un descenso hasta llegar a 0 meqC/kg en época seca en la
muestra tratada con hidrocarburos, las muestras de época de lluvias mostraron un comportamiento
exponencial, en ambos casos. El análisis de pH mostró una tendencia a regularse en un rango de
5.50-5.60 a las dos semanas de exposición, para ambas épocas. Los análisis de actividad
enzimática mostraron un comportamiento de tipo recíproco y polinomial de 2º grado para
proteasas, sacarasas y ureasas, aunque se vio que las sacarasas no tienen sensibilidad a este tipo de
contaminación. Los análisis de varianza efectuados mostraron diferencia significativa entre los
tratamientos con hidrocarburos y los testigos. Los análisis de correlación de Pearson mostraron
una correlación regular entre pH-biomasa y biomasa-proteasas, y una alta correlación entre
proteasas-ureasas.
Se analizaron los datos y se determinó que la conjunción de estos parámetros puede ser utilizada
como un indicador para evaluar la contaminación y la potencialidad de biodegradación natural e
in-situ de hidrocarburos en suelos de la zona del lago Titikaka.
Palabras clave: Hidrocarburos, ecosistema edáfico, biodegradación, biomasa microbiana,
actividad enzimática.

Abstract
Microbial biomass, pH and enzymatic activity (for proteases, sacharases and ureases) time
variation were studied in naturally hydrocarbon exposed soils at the municipality of San Pedro de
Tiquina. Dry and wet season samples were analyzed. For dry season samples, the microbial
biomass on hydrocarbon treated soil reach a 0 meqC/kg value, whereas wet season samples show
an exponential behavior for control and treated samples. In both seasons, pH analysis shows a
regulation tendency to values of a 5.50-5.60 range at two weeks of exposure. Enzymatic activity
analysis shows a reciprocal and 2nd grade polynomial behavior for proteases, sacharases and
ureases. Also sacharases activity was observed that is not sensitive for this kind of contamination.
Variance analysis performed shows significant differences between control and hydrocarbon-
treated samples. Pearson correlation analysis shows a medium relationship between biomass-pH
and biomass-proteases, and a high correlation between proteases-ureases.
Results suggest that a conjunction of these parameters could be used as an indicator to evaluate
hydrocarbon contamination and in-situ natural biodegradation potentialities in Titikaka’s lake zone
soils.
Keywords: Hydrocarbons, edaphic ecosystem, biodegradation, microbial biomass, enzymatic
activity.
Introducción naturaleza normalmente se encuentran como mezclas
En la actualidad, la contaminación por de diferentes especies moleculares, que en mayor o
hidrocarburos es una de las principales causas de menor grado afectan a la flora, a la fauna y a los
destrucción de los ecosistemas edáficos (Fontúrbel & microorganismos del suelo (Madigan et al., 1999).
Achá, 2003), ya que el uso masivo y el transporte La fertilidad de los suelos es un factor muy
transfronterizo tanto de petróleo crudo como de sus importante para el crecimiento de las plantas, y por lo
derivados, hace que los derrames de hidrocarburos tanto para la existencia y sobrevivencia de los
sean cada vez más frecuentes. La composición animales, que se alimentan de éstas (Krebs, 1985). Los
química de los hidrocarburos es muy variable: en la microorganismos del suelo (tanto hongos como
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bacterias) determinan en gran parte la fertilidad del Materiales y métodos
suelo por la mediación de los procesos de Área de estudio
descomposición de la materia orgánica, la El sitio de estudio se encuentra en el municipio de
movilización de nutrientes y la capacidad de San Pedro de Tiquina (Departamento de La Paz,
intercambio catiónico (Smith & Smith, 2001). Es por Bolivia), a menos de 2 km del estrecho de Tiquina, y a
esta razón que el estudio de los microorganismos del 180 m de la orilla del lago. Las coordenadas
suelo es fundamental para su conservación y manejo geográficas del sitio en UTM son 0525972 / 8210582
adecuado. (16º 10’ 53.10’’S, 68º 45’ 19.12’’W), y la altitud del
Varios procesos bioquímicos y ecológicos propios sitio es de 3845 m. Este sitio fue escogido por la
del suelo se desestabilizan por la acción de los presencia natural de pequeñas vertientes de
hidrocarburos, ya que sus efectos tóxicos afectan a hidrocarburos, ya que según Parrish et al. (1999), una
casi todas las especies del ecosistema edáfico en exposición constante a los hidrocarburos favorece la
mayor o menor grado, de forma directa o indirecta presencia y abundancia de los microorganismos
(Madigan et al., 1999). A pesar que existen muy pocos resistentes y/o degradadores de hidrocarburos.
estudios sobre el tema contextualizados a la propia Muestreo
realidad, los suelos bolivianos no son la excepción a la Se empleó el protocolo de muestreo de suelos en
regla. capa arable propuesto por Totsche (1995), tomando
De acuerdo con Varnam & Evans (2000) muestras aleatorias a 30 cm de profundidad, y
prácticamente todos los ecosistemas edáficos y realizando una muestra mixta por cuarteo. En el
acuáticos del planeta poseen –en mayor o menor laboratorio las muestras de suelo fueron tamizadas con
proporción– cepas de microorganismos capaces de una malla de 2 mm. Se tomaron muestras en época
responder naturalmente a los problemas de seca (Octubre de 2000) y en época de lluvias (Febrero
contaminación por medio de la biodegradación de los de 2001). El suelo no se esterilizó ni recibió otro tipo
contaminantes, incluyendo a los hidrocarburos. Si bien de tratamiento post–muestro para mantener sus
estos procesos se dan de forma natural, la reducida condiciones naturales (Duarte & Ferreira, 2000).
cantidad de microorganismos hace que los tiempos de Determinación de parámetros fisicoquímicos
degradación sean demasiado largos como para iniciales de referencia
observar un resultado que pueda ser considerado como El pH inicial de la muestra fue determinado in-situ
positivo. Sin embargo, existen técnicas de mediante el método descrito por Morales et al. (1997).
estimulación –denominadas en su conjunto En laboratorio se determinó la materia orgánica según
bioremediación– capaces de reducir significativamente el método descrito por Forster (1995) y la textura fue
el tiempo de degradación del contaminante determinada por el método de tamices descrito por
estimulando el crecimiento de la comunidad de Chilón (1996).
microorganismos degradadores (sensu Solano–Serena Diseño de los tratamientos
et al., 2000). Con el suelo tamizado, se elaboraron tratamientos
A raíz del derrame de petróleo del año 2000 en los para el suelo correspondiente a la época seca y a la
departamentos de La Paz y Oruro, ocasionado por el época de lluvias, por medio de la adición de diferentes
deficiente estado de los oleoductos de la empresa concentraciones de aceite de motor sin quemar. Los
Transredes, Bolivia percibió que no se cuenta con intervalos de tiempo usados para las mediciones se
información básica sobre el tema de contaminación indican en las respectivas gráficas, puesto que se
por hidrocarburos e indicadores que permitan hacer emplearon diferentes escalas de tiempo, según el tipo
una evaluación de los daños producidos por este tipo de análisis. Para todas las pruebas se utilizó un factor
de desastres ecológicos y dar una perspectiva de de corrección de humedad relativa
solución por medio de técnicas de biodegradación Determinación de la biomasa microbiana y pH
natural in-situ. Se empleó el método de fumigación-extracción por
Por estas razones se decidió estudiar la cloroformo aplicado a suelos contaminados con
problemática de la contaminación por hidrocarburos petróleo (Fontúrbel & Achá, 2002), basado en los
en suelos afectados de la zona del lago Titikaka, protocolos de Jenkinson & Powlson (1976) y Tate et
correspondientes al municipio de San Pedro de al. (1988). Se aplicó el método para determinación de
Tiquina (Fontúrbel & Achá, 2003). En el presente miliequivalentes de carbono por kg de suelo. El pH en
trabajo se describen y analizan algunos de los laboratorio se determinó de acuerdo al método descrito
parámetros microbiológicos y bioquímicos, por Morales et al. (1997).
susceptibles de ser usados como indicadores para
evaluar el impacto de la contaminación por Determinación de la actividad enzimática
hidrocarburos y la potencialidad de degradación Para estudiar la actividad enzimática de tres
natural in-situ de los mismos en esta zona, y por enzimas: proteasas, sacarasas y ureasas, se emplearon
extrapolación, en el altiplano boliviano. metodologías simplificadas aplicadas a suelos
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contaminados por hidrocarburos, según Fontúrbel 70.00
(2002). 60.00

Biomasa [meq C/Kg]

Análisis estadísticos 50.00

Se realizaron análisis de regresión lineal mediante 40.00 R2 = 0.9623 Testigo

el software Regression Analyzer 3.2, de análisis de 30.00

20.00
Petróleo

Lineal (Testigo)
varianza (ANOVA) mediante el software ESBStats 10.00 R2 = 0.964 Lineal (Petróleo)
Standard 1.2. Los valores F tabulados fueron 0.00

obtenidos de Daniel (1996). Los análisis de 0 5 10 15 20 25 30 35

Tiempo [días]
correlación se elaboraron mediante el software
ESBStats Standard 1.2. Todas las muestras se
trabajaron por triplicado. Fig. 1. Variación de la biomasa microbiana en función
al tiempo para la muestra testigo y la muestra tratada
Resultados con petróleo (con concentración de 25ml/100g). Datos
Parámetros iniciales del suelo para época seca. La desviación estándar sobre el
En las muestras de época seca, se determinó que el promedio se indica con las barras verticales.
pH del suelo era de 4.79, la humedad relativa del
14.44%, la textura era arcillosa, la materia orgánica de
3945 meqC/g y el valor inicial de biomasa microbiana 200.000

meqC/1Kg

suel
Biomasa[
0

o]
-50.000 20 40 60
era de 57.81 mEqC/kg. Para la época de lluvias, el pH 150.000
100.000 0ml/100g
medido fue de 6.11, la humedad relativa de 15.34%, la 5ml/100g
50.000
textura arcillosa, la materia orgánica 11500 meqC/g y 10ml/100g

la biomasa microbiana inicial de 168.53 meqC/kg. 0.000

Biomasa microbiana
Los resultados de biomasa microbiana en de época Tiempo [días]
seca se muestran en la Figura 1, en la que se incluyen
además curvas de tendencia (por regresión lineal) con Fig. 2. Variación de la biomasa microbiana en función
los coeficientes R2 respectivos. En esta gráfica se al tiempo para la muestra testigo y las muestras
puede apreciar que el descenso de la biomasa tratadas para las concentraciones de 0.5 y 10 ml/100g
microbiana es paulatino tanto para el control como de suelo. Datos para época de lluvias. La desviación
para la muestra contaminada, pero a partir de los 15 estándar sobre el promedio se indica con las barras
días de exposición, el descenso de la biomasa en la verticales.
muestra contaminada es mucho más pronunciado hasta
llegar a cero a los 30 días. En la Figura 2 se muestran 5.70

los resultados de biomasa microbiana 5.60

5.50

correspondientes a la época de lluvias, observándose 5.40 Testigo

5.30
en esta gráfica que los diferentes tratamientos no 5.20 5ml/100g
pH

responden a función de carácter lineal como en el caso 5.10

5.00
15ml/100g
25ml/100g
anterior, sino que se observa un decremento inicial, 4.90
4.80
seguido de un incremento a las 24 días, y un nuevo 4.70

descenso a partir de los 40 días de medición. 4.60

0 5 10 15 20 25 30 35

Variación del pH Tiempo [días]

La figura 3 muestra el cambio de los valores de pH
para la época seca y la figura 4 para la época de Fig. 3: Variación del pH en función al tiempo para la
lluvias. Como se puede observar en la Figura 3, a los muestra testigo y las muestras tratadas con
15 días de tratamiento se observa un notable hidrocarburos para las concentraciones que se indican.
incremento de los valores de pH hasta valores Datos para época seca. La desviación estándar sobre el
cercanos a 5.50, para posteriormente descender promedio se indica con las barras verticales.
nuevamente. En el caso de las muestras de época de
lluvias se observa un comportamiento inverso, donde a Actividad enzimática: proteasas, sacarasas y
los 40 días de observación se da un fuerte descenso, ureasas
seguido de un incremento a los 50 días. Nótese que en Empleando las metodologías simplificadas y los
ambos casos, a los 15 días de tratamiento, los valores criterios expuestos en Fontúrbel (2002) se obtuvieron
de pH se manejan en el rango de 5.50 a 5.60. datos de variación de actividad enzimática en función
al tiempo, para proteasas, sacarasas y ureasas.
La curva obtenida para proteasas (Figura 5)
muestra un notable incremento inicial de la actividad
enzimática, seguida de un descenso pasados 20 días de
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exposición (pico máximo registrado de actividad lluvias. La desviación estándar sobre el promedio se
enzimática), manteniéndose la actividad enzimática a indica con las barras verticales.
un nivel superior al inicial hasta el final de la
observación. En cuanto a las sacarasas (Figura 6) se
observa un comportamiento marcadamente diferente 0.0250

N gsuelo*h]
deNH3/
[
Activi
dade
nzim
ática
0.0200
para los 3 tratamientos a los 20 días seguido de una 0.0150 0ml/100g

caída brusca. Para las sacarasas (Figura 7) se observa 0.0100 5ml/100g

un incremento inicial seguido de un descenso para la 0.0050 10ml/100g

0.0000
muestra testigo y un descenso inicial seguido de un -0.0050 0 20 40 60 80
incremento después de los 30 días para las muestras Tiempo [días]

tratadas con diferentes concentraciones de

hidrocarburos.
Fig. 7. Variación de la actividad enzimática de las
ureasas en función al tiempo para la muestra testigo y
6.500 las muestras tratadas con hidrocarburos para las
6.000 0ml/100g
concentraciones que se indican. Datos para época de
5.500 5ml/100g
lluvias. La desviación estándar sobre el promedio se
pH

5.000 10ml/100g
indica con las barras verticales.
4.500

0 10 20 30 40 50 60
Análisis estadísticos de los resultados
Tiempo [días]
Para las muestras de biomasa correspondientes a la
época seca, el análisis de regresión mostró un
Fig. 4. Variación del pH en función al tiempo para la comportamiento lineal, con mayor bondad de ajuste
muestra testigo y las muestras tratadas con para la muestra testigo. El ANOVA realizado entre los
hidrocarburos para las concentraciones que se indican. datos del testigo y la muestra tratada mostraron que
Datos para época de lluvias. La desviación estándar existe una diferencia significativa en la cantidad de
sobre el promedio se indica con las barras verticales. carbono a partir del día 30. Para las muestras de época
de lluvias, el análisis de regresión dio un coeficiente
2.700 de 0.86 y 0.88 para el testigo y la muestra 10ml/100 g
Actividad enzimática [mg

2.500
respectivamente, bajo el modelo exponencial, la
muestra de 5ml/100g dio un coeficiente de 0.70 para el
proteína por ml(g

2.300
2.100
1.900 modelo lineal. El ANOVA mostró que existe una
1.700
diferencia significativa entre los resultados, en todos
suelo*h]

1.500
1.300
0 20 40 60 80 0ml/100g
los tiempos.
Tiempo [días] 5ml/100g Para las muestras de pH correspondientes a la
10ml/100g
época seca, el análisis de regresión dio un coeficiente
Fig. 5. Variación de la actividad enzimática de las de 0.92 para el testigo bajo el modelo lineal, los demás
tratamientos no se ajustaron a ningún modelo de
proteasas en función al tiempo para la muestra testigo
regresión. El ANOVA mostró que existe una
y las muestras tratadas con hidrocarburos para las
diferencia significativa entre los resultados en todos
concentraciones que se indican. Datos para época de
los tiempos. Para la época de lluvias, el análisis de
lluvias. La desviación estándar sobre el promedio se
regresión dio un coeficiente de 0.93 para el testigo, de
indica con las barras verticales.
0.77 para el tratamiento 5ml/100g y de 0.50 para
10ml/100g, todos bajo el modelo lineal. El ANOVA
3.900 mostró que existe diferencia significativa en todos los
Actividadenzimática

azúcares/
gsuelo*h]

3.400
tiempos.
[ppm

2.900 0ml/100g
2.400 Las curvas de actividad enzimática de proteasas
1.900
1.400
5ml/100g
10ml/100g
ajustaron medianamente al modelo recíproco, y las de
0.900 sacarasas y ureasas al modelo polinomial de 2º grado y
0.400
-0.100 recíproco. Los ANOVA realizados mostraron que para
0 20 40
Tiempo [días]
60 80 proteasas y sacarasas existe una diferencia
significativa durante todo el tiempo de observación,
mientras que para las sacarasas existe diferencia
Fig. 6: Variación de la actividad enzimática de las significativa solamente entre los días 12 y 29 del
sacarasas en función al tiempo para la muestra testigo tratamiento, ya que luego de la caída brusca de los
y las muestras tratadas con hidrocarburos para las valores de actividad enzimática todas las muestras
concentraciones que se indican. Datos para época de reportaron valores muy próximos a cero.
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 Los análisis de correlación de Pearson elaborados incluyen 8 especies aisladas de hongos degradador-
para los datos de la época de lluvias se muestran en la positivo), ya que el descenso inicial de la biomasa
Tabla 1. No se realizó esta correlación con los datos representa la muerte de los microorganismos que no
de la época seca por no contar con información de son resistentes y/o degradadores de hidrocarburos, y el
actividad enzimática. incremento posterior el crecimiento y desarrollo de la
porción de la comunidad que es resistente y/o capaz de
Tabla 1. Análisis de correlación de Pearson para los degradar los contaminantes.
datos obtenidos en época de lluvias. El criterio de Estudios de Mishra et al. (2001) y Margesin &
calificación de coeficientes corresponde a Daniel Schinner (2001) muestran que existe un potencial de
(1996). biodegradación nativo en los suelos, que puede ser
Coeficiente de incrementado por medio de bioestimulación. Mishra et
Factores de relación Pearson Calificación al. (2001) determinaron que la cantidad de
pH-biomasa 0.555947418 Regular correlación microorganismos capaces de degradar hidrocarburos
pH-proteasas 0.050531245 No existe correlación encontrada naturalmente en el suelo es muy baja (10 3
pH-sacarasas 0.316997642 Baja correlación a 104 UFC/g de suelo) y que demora más tiempo en
pH-ureasas 0.012458038 No existe correlación degradar una misma cantidad de hidrocarburos
biomasa-proteasas 0.571478181 Regular correlación respecto a una muestra tratada con nutrientes de
biomasa-sacarasas 0.136409331 Baja correlación bioestimulación. Las variaciones en la comunidad
biomasa-ureasas 0.319641992 Baja correlación microbiana fueron constatadas por medio de un PCR
proteasas-sacarasas 0.440734930 Regular correlación de DNA genómico ( Mishra et al., 2001).
Margesin & Schinner (2001) realizaron estudios
proteasas-ureasas 0.688099565 Alta correlación
comparativos de bioremediación de petróleo con y sin
sacarasas-ureasas 0.154676544 Baja correlación
bioestimulación en suelos de altura (a 2875m de
altitud) obteniendo valores de eficiencia del 50±4% y
Discusión 70±2% en suelos no tratados y tratados
Los parámetros del suelo biomasa microbiana total, respectivamente. Koren et al. (2003) plantean además
pH, actividad enzimática de proteasas y actividad que la fuente de nitrógeno es uno de los principales
enzimática de ureasas son sensibles a la contaminación factores limitantes del proceso de biodegradación en
por hidrocarburos, y pueden proveer de información sistemas abiertos, especialmente del nitrógeno en
valiosa al momento de realizar una evaluación. forma de ácido úrico.
Por lo tanto, los resultados sugieren que este suelo
Los resultados de variación de biomasa obtenidos tiene capacidades naturales mesurables de
para la época seca muestran un constante descenso en degradación de hidrocarburos, de acuerdo a los
la cantidad de carbono microbiano disponible. criterios que plantean Solano–Serena et al. (2000),
Comparando este comportamiento con los resultados Mishra et al. (2001), Margesin & Schinner (2001) y
obtenidos para la época de lluvias y con los resultados Koren et al. (2003).
de Fontúrbel & Achá (2002) (obtenidos con muestras Esta capacidad natural de degradación viene regida
del mismo sitio, pero en época de transición), lo más por el principio de la infalibilidad microbiana (de
probable es que este comportamiento se deba a la acuerdo con Varnam & Evans, 2000), que plantea que
desecación del suelo en el laboratorio tanto de las tarde o temprano, los compuestos xenobióticos del
muestras testigo como de las muestras tratadas. Sin suelo serán degradados por un amplio rango de
embargo, en la muestra con hidrocarburos se observa microorganismos heterotróficos (bacterias, hongos,
un descenso mucho más rápido, posiblemente debido a levaduras), aunque la mayoría de las veces no se
la toxicidad de la elevada dosis (puesto que 25ml/100g degrade el 100% del contaminante (Solano-Serena et
es la dosis más elevada aplicada en todos los estudios, al., 2000), puesto que la transformación de
comparando con las demás dosis aplicadas de 5, 10 y compuestos tóxicos en la naturaleza es compleja y no
15 ml/100g) . Tanto los resultados de biomasa está regida por una sola vía bioquímica y depende de
correspondientes a la época de lluvias como los la biodisponibilidad del xenobiótico (Pieper &
resultados de Fontúrbel & Achá (2002) muestran que a Reineke, 2000). En estos casos, las bacterias juegan un
menores concentraciones de contaminante (5, 10 y papel protagónico (Varnam & Evans, 2000), en tanto
15ml/100g) se observa un descenso inicial, seguido de que los hongos (especialmente los filamentosos)
un incremento temporal. juegan un papel integral muy importante en la
Estos resultados, cotejados con los estudios de bioremediación (April et al., 2000).
diversidad y abundancia realizados paralelamente con En cuanto a los resultados obtenidos para la
las mismas muestras (publicaciones en preparación) se variación del pH en el tiempo, es importante volver a
explican en términos de microorganismos ver las Figuras 3 y 4, en las que claramente se puede
biodegradadores de hidrocarburos (entre los que se ver cómo el pH se regula desde una condición inicial
(significativamente diferente en época seca que en
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época húmeda) hacia un rango estable de pH entre y 5), excepto por la muestra control, donde la
5.50 y 5.60. Según Madigan et al. (1999), muchos de actividad enzimática no se ve prácticamente afectada.
los microorganismos bioremediadores de De acuerdo a Madigan et al. (1999) y Parrish et al.
hidrocarburos nativos del suelo, funcionan (1999), uno de los factores negativos de la
óptimamente a un pH ácido cercano a 5. Cotejando la bioremediación y el uso de microorganismos
Figuras 2, 3 y 4, se puede observar que existe una biodegradadores es el incremento de urea en el medio.
tendencia que sugiere la regulación del pH dentro del La medición de la actividad enzimática de las
rango mencionado, corresponde con el crecimiento de sacarasas no resultó sensible a este tipo de
la porción resistente y/o degradadora de la comunidad contaminación, y por lo tanto no sería un buen
microbiana, incrementando las potencialidades de indicador para este caso. La similitud entre las curvas
bioremediación natural de estos suelos. Así mismo, los de las muestras testigo y tratadas puede deberse a que
investigadores Stapleton et al. (1998) que estudiaron los parámetros medidos en los suelos de estudio no se
la biodegradación de PAHs (hidrocarburos aromáticos ven fuertemente afectados por los hidrocarburos a
policíclicos) en ambientes extremófilos con un pH concentraciones relativamente bajas.
entre 2 y 3, también observaron que la mayoría de las De los resultados obtenidos y por las razones
especies capaces de degradar hidrocarburos no se anteriormente expuestas, se plantean preliminarmente
desarrollan en condiciones de pH superiores a 6, por lo como los indicadores más apropiados para realizar una
que se sugiere que estos grupos son evaluación de la contaminación por hidrocarburos, la
predominantemente acidófilos. variación de biomasa, la variación del pH y la
Las tres enzimas estudiadas en esta investigación se variación en la actividad enzimática de las proteasas,
escogieron teniendo en cuenta los principales procesos en función al tiempo. Un descenso en la biomasa (que
metabólicos del suelo, pero también en función a la debe ser complementado con un estudio de la
disponibilidad de materiales y reactivos en la unidad diversidad de la comunidad microbiana), la regulación
de investigación (factor técnico limitante). En estudios del pH en un rango de 5.00 a 5.60 (de acuerdo a
posteriores sería recomendable considerar el estudio referencias teóricas y experimentales), y el incremento
profundo de la actividad de las enzimas dioxigenasas, significativo de la actividad enzimática de las
ya que son esenciales en la degradación de los proteasas, así como la magnitud de estos parámetros,
hidrocarburos acíclicos (Gibson & Parales, 2000) y son un claro indicador de los efectos tóxicos
tienen gran importancia en la degradación de los producidos por la contaminación por hidrocarburos.
hidrocarburos aromáticos (Stapleton et al., 1998). Adicionalmente, estos parámetros pueden ser
Los resultados obtenidos para la actividad cotejados con otros indicadores macroscópicos como
enzimática de proteasas y ureasas (parámetros entre la muerte y degradación de la flora, la muerte masiva
los cuales existe una alta correlación) mostraron un de la fauna asociada (Runnalls & Mackay, 1999) y la
comportamiento muy particular: de manera contaminación de cuerpos de agua relacionados
coincidente con el incremento de la biomasa directa o indirectamente con los suelos en estudio.
microbiana (aumento de la población de Las evidencias experimentales obtenidas en la
microorganismos degradadores) y la regulación del presente investigación, conjuntamente con los
pH, se observa un incremento marcado en la lisis resultados citados en Fontúrbel & Achá (2002, 2003)
proteica y un descenso en la actividad ureolítica. De muestran que los suelos estudiados tienen un gran
principio, los hidrocarburos son sustancias poco potencial tanto de bioremediación natural in-situ como
solubles en agua y su estructura molecular dificulta el de obtención y aislamiento de microorganismos
ataque enzimático inicial (Rittman & McCarty, 2001), degradadores-positivo que puedan ser inoculados en
por lo que la actividad enzimática varía poco la otros ambientes de similares características, que
primera semana y media, respecto al valor inicial. El pueden resultar afectados por el derrame de
incremento en la actividad de lisis proteica puede hidrocarburos volátiles y no volátiles, como
deberse fundamentalmente a la movilización y consecuencia del transporte de hidrocarburos (Moroz,
aprovechamiento de la proteína dejada por los 1999; Fontúrbel & Achá, 2000).
microorganismos muertos a causa de la toxicidad de Si bien la degradación de hidrocarburos poca veces
los hidrocarburos, pero también puede jugar un papel es del 100% (Solano-Serena et al., 2000), la
importante en la cinética molecular de los procesos de conjunción natural de diferentes especies de bacterias
degradación (segunda y tercera semana de y hongos, con diferentes vías metabólicas (April et al.,
observación), posteriormente, cuando la proteína 1999; Varnam & Evans, 2000) puede conseguir una
disponible ha sido aprovechada y ha pasado la fase eficiencia de más del 90%, puesto que la
más eficaz del proceso de degradación, la actividad bioremediación es un proceso propio de la naturaleza
enzimática se reduce nuevamente a niveles basales. (Pieper & Reineke, 2000). Si bien la mayor parte de
La actividad enzimática de las ureasas experimenta los procesos de biodegradación de hidrocarburos son
un descenso poco pronunciado durante la época crítica aeróbicos estrictos y dependen de la cantidad de
de la biodegradación (comparar con las Figuras 2, 3, 4 oxígeno disponible en el suelo, también se han
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 INDICADORES DE CONTAMINACIÓN Y BIODEGRADACIÓN DE HIDROCARBUROS EN SUELOS
DEL LAGO TITIKAKA
Diciembre 2004
___________________________________________________________________________________________
descrito algunas vías metabólicas anaeróbicas Daniel W. 1996. Bioestadística: Base para el análisis
complejas (Parés & Juárez, 1997), que se recomienda de las ciencias de la salud. Editorial Limusa,
sean estudiadas en el futuro. México. : 832.
Duarte C. & Ferreira S. 2000. Gasoline biodegradation
Conclusiones in different soil microcosms. Brazilian Journal of
Los resultados obtenidos muestran que los Microbiology. 31: 45-49.
parámetros biomasa microbiana (en términos de Fontúrbel F. 2002. Metodologías simplificadas para el
carbono), pH la actividad enzimática de proteasas y estudio de actividad enzimática en suelos aplicadas
ureasas, se manifiestan como buenos indicadores para al estudio de contaminación por hidrocarburos.
la evaluación de la contaminación por hidrocarburos Bioquímica. 2: 7-10.
en suelos, y podrían ser empleados sin necesidad de Fontúrbel F. & Achá D. 2002. Empleo del método de
realizar estudios costosos o contar con mucho determinación de biomasa microbiana por
equipamiento de laboratorio. fumigación-extracción para el estudio en suelos del
Se constató también que la actividad enzimática de altiplano boliviano contaminados por
las sacarasas no sería un indicador sensible para este hidrocarburos. Ciencia Abierta Internacional 18.
tipo de contaminación, y por lo tanto no debería usarse Fontúrbel F. & Achá D. 2003. Sinopsis de los estudios
en este tipo de estudios. de bioremediación de petróleo realizados en suelos
Los parámetros biomasa, pH y actividad del Lago Titikaka: una alternativa social y
enzimática serían también buenos indicadores de ambientalmente viable a los problemas de
biodegradación y descontaminación de hidrocarburos contaminación por hidrocarburos. pp. 93-100. En:
en suelos, siempre y cuando sean utilizados juntos y se F. Fontúrbel & G. García (eds.). Propuestas Para
haga la correlación correspondiente, ya que la Un Desarrollo Sostenible: Lago Titikaka Por
variación de uno solo de estos parámetros puede o no Estrategas K. Publicaciones Integrales, La Paz.
deberse a los efectos de los hidrocarburos o a alguna Forster J. 1995. Organic carbon . pp. 59-65. En: K.
externalidad en el proceso, en cambio el uso Alef & P. Nannipieri, 1995 (eds.). Methods In
combinado de estos indicadores proporciona un mejor Applied Soil Microbiology And Biochemistry.
panorama de la situación. Academic Press, Londres.
En base a estos estudios, se constató que los suelos Gibson D. & Parales R. 2000. Aromatic hydrocarbon
de la zona del lago Titikaka con los que se trabajó dioxygenases in environmental biotechnology.
tienen un cierto potencial bioremediador, puesto que Current Opinion in Biotechnology. 11: 236-243.
poseen especies de bacterias y hongos Jenkinson D. & Powlson S. 1976. The effects of
biodegradadoras de hidrocarburos. Por esta razón biocidal treatments on metabolism in sol-I.
estos suelos tienen un alto valor científico para el Fumigation with chloroform. Soil Biol. Biochem.
estudio y desarrollo de tecnologías económicas de 8: 167-177.
bioremediación, y también tienen una relevancia Koren O., Knezevic V., Ron E. & Rosenberg E. 2003.
significativa en el contexto socio-económico de las Petroleum pollution bioremediation using water–
comunidades del lugar. insoluble uric acid as the nitrogen source. Applied
Finalmente, se constató que tanto la actividad and Environmental Microbiology. 69 (10): 6337–
biodegradadora como la respuesta a la contaminación 6339.
son mayores en la época de lluvias que en la época Krebs C. 1985. Ecología. 2º edición. Harla, México
seca, puesto que en la época de lluvias la humedad del DF. : 540-542.
ambiente favorece al crecimiento de los Madigan M., Martinko J. & Parker J. 1999. Brock:
microorganismos en general. Biología de los microorganismos. 8º edición.
Prentice Hall, Madrid. : 150-155, 405-408, 465,
Agradecimientos 523-524, 582-584, 698, 712-713, 774-777.
A la Unidad de Suelos del Instituto de Ecología, y Margesin R. & Schinner F. 2001. Bioremediation
en especial a la Lic. Isabel Morales y a la Lic. Cristina (natural attenuation and biostimulation) of diesel–
Ruiz por apoyar esta investigación. A Sergio Coloque oil–contaminated soil in an alpine glacier skiing
por el apoyo en laboratorio. A Darío Achá por su area. Applied and Environmental Microbiology. 67
apoyo, colaboración y sus valiosos comentarios al (7): 3127–3133.
manuscrito. Al Dr. Enrique Richard por sus valiosos Mishra S., Jyot J.,Kuhad R. & Lal B. 2001. Evaluation
comentarios al manuscrito. Al Sr. Raúl Mamani por of inoculum addition to stimulate in situ
permitirme trabajar en su propiedad para la toma de bioremediation of oily–sludge–contaminated soil.
muestras. Applied and Eenvironmental Microbiology. 67 (4):
1675–1681.
Literatura citada Morales I., Amurrio P. & Ruiz M.C. 1997. Estudio de
Chilón E. 1996. Manual de Edafología. Ediciones la salinidad en los sistemas de suka kollus y pampa
CIDAT, La Paz. : 69-83, 161-164.
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 FRANCISCO FONTÚRBEL RADA
Ecol. apl. Vol. 3 Nº 1 y 2, pp.172-179
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 en el transcurso de una campaña agrícola, Smith R.L. & Smith T.M. 2001. Ecología. 4º edición,
localidad Aygachi. Ecología en Bolivia. 30: 75-89. Addison Wesley, Madrid.
Moroz W.J. 1999. Contaminación del aire. pp. 492- Solano-Serena F., Marchal R.,Cararégola S., Vasnier
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Ingeniería Ambiental. 2º edición. Prentice Hall Mycobacterium strain with extended capacities for
Pearson, México DF. degradation of gasoline hydrocarbons. Applied and
Parés R. & Juárez A. 1997. Bioquímica de los Environmental Microbiology. 66(6): 2392-2399.
microorganismos. Reverté, Barcelona. : 232-236. Stapleton R., Savage D., Sayler G. & Stacey G. 1998.
Parrish P., Clark J. & Prince R. 1999. Alaska Oil Spill Biodegradation of aromatic hydrocarbons in a
Bioremediation Monitoring Program: An update. extremely acid environment. Applied and
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Sabine Island Drive, Gulf Breeze, FL 32561. EPA. Tate K., Ross D. & Feltham C. 1988. A direct
Pieper D. & Reineke W. 2000. Engineering bacteria extraction method to estimate soil microbial C:
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energía. pp. 49-84. En: J.G. Henry & G.W. Heinke Biochemistry. Academic Press, Londres.
(eds.). Ingeniería Ambiental. 2º edición. Prentice Varnam A. & Evans M. 2000. Environmental
Hall Pearson, Mexico DF. microbiology. ASM Press, Washington. : 99-100.
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Institución donde se realizó el trabajo:
Unidad de Suelos del Instituto de Ecología de la Universidad Mayor de San Andrés
C/ 27 de Cota Cota s/n, La Paz, Bolivia.
Institución actual:
Unidad de Post–Grado Universidad Loyola
Maestría en Ingeniería de Medio Ambiente y Recursos Naturales
Av. Busch # 1191, La Paz, Bolivia
Dirección de contacto del autor:
Casilla postal # 180, La Paz, Bolivia
Av. 20 de Octubre # 2005, Dep. 301, La Paz, Bolivia; Tel. +591–2–2113942
Correo electrónico: [email protected] / [email protected]
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