Informe

Introducción Teórica:
La esterilización es un proceso físico o químico que destruye todas las formas
de vida microbiana, incluyendo esporas. Es esencial para el control de
enfermedades infecciosas y para trabajar con material que se pueda reutilizar,
disminuyendo el número de microorganismos presentes.
Existen varios métodos de esterilización, tanto físicos como químicos:
Métodos Físicos de Esterilización

1. Flameado: Procedimiento simple y eficaz que consiste en la exposición

de un objeto a la llama hasta su incandescencia. Se utiliza para
esterilizar las astas de cultivo para la siembra bacteriológica.
2. Estufa de Calor Seco: Utiliza una alta temperatura para esterilizar
material en 20 minutos a 180 grados o en 60 minutos a 160 grados
centígrados. Se utiliza para esterilizar material de vidrio debidamente
envuelto en papel y elementos de metal.
3. Esterilización por Calor Húmedo: Se realiza con el autoclave de
sunderland que utiliza vapor de agua. Es más rápido y eficaz que el calor
seco debido a que las moléculas de agua desnaturalizan a las proteínas
de forma irreversible. Se utiliza para esterilizar material resistente a esa
temperatura y sobre todo para los medios de cultivo.
4. Proceso de Finalización o Esterilización Intermitente: Consiste en
someter el producto a esterilizar a calentamientos intermitentes que van
entre los 56 y los 100 grados centígrados durante aproximadamente 30
minutos. En los intervalos se mantiene a temperatura ambiente o a 37
grados, produciendo una germinación de las potenciales esporas y las
bacterias resultantes se harán más sensibles a su posterior
calentamiento.
5. Radiaciones de Luz Ultravioleta: La luz ultravioleta es absorbida a una
longitud de onda de 240 a 280 nanómetros por ácidos nucleicos,
causando daños genéticos y alteración de bases públicas y pear y
médicas de la bacteria. Se utiliza en la preparación de vacunas, cabinas
de seguridad biológica, lugares de trabajo como mesas de laboratorio,
etc.
6. Radiaciones Ionizantes: Actúan lesionando a los ácidos nucleicos
bacterianos. Este procedimiento se utilizará sobre todo en aquellos
procesos industriales destinados a la esterilización de dispositivos
quirúrgicos, guantes, jeringas, etc.

Métodos Químicos de Esterilización

1. Estufa de Óxido de Etileno: El óxido de etileno es un gas inflamable,

potencialmente explosivo y muy penetrante que va a inactivar a todos
los microorganismos patógenos y no patógenos sustituyendo sus
 átomos de hidrógeno al avilés por otros grupos como hidroxilo, socar
box y los. El material que se expone a esterilizar llevará a una atmósfera
aproximada de entre el 5 al 10 por ciento de óxido de etileno en dióxido
de carbono a 50 o 60 grados centígrados en condiciones de humedad
hablada durante aproximadamente 4 a 6 horas. Es necesario someter
esta estufa después a un periodo de aireación debido a que el óxido de
etileno procede un caracter mutagénico. Es un agente efectivo en la
esterilización de material termo lavín como prótesis y catéteres.
2. Formol o Formaldehído: Es un gas soluble en agua que al 40% se conoce
como formalina. Se usa en forma gaseosa y en cámara cerrada,
empleado sobre todo en la esterilización hospitalaria y en industria
farmacéutica. También es muy utilizado como desinfectante ambiental
en salas altamente contaminadas que deben agregarse una vez
tratadas.
3. Glutaraldehído: Se emplea sumergiendo material limpio en una solución
del 2% sobre todo en la esterilización de instrumentos ópticos y
utilizados para la terapia respiratoria.
4. Derivados de Metales Pesados: La actividad de los compuestos
derivados de metales pesados como plata, mercurio, etc., se debe a la
formación de sales que se disocian con dificultad de los grupos
sulfhídrico de las proteínas. Con respecto al nitrato de plata y a los
derivados argentinos, son buenos bactericidas y se utilizan sobre todo
en el tratamiento de quemaduras en soluciones al 0.5%. De los derivados
mercuriales, el más utilizado como desinfectante de la piel es el
mercurocromo, que no es tóxico y sigue siendo activo en presencia de
materia orgánica.
5. Agua Oxigenada o Peróxido de Hidrógeno: Es un agente oxidante de
efecto fugaz por ser descompuesto por las catalanas- de los tejidos.
6. Permanganato de Potasio: También es un agente oxidante que se
inactiva en presencia de materia orgánica y es poco utilizado en
dermatología. Tiene una gran propiedad antifúngica.
7. Derivados Clorados: Se inactivan en presencia de materia orgánica. El
cloro y sus derivados son agentes oxidantes muy usados en la
potabilización del agua en forma de cloro gaseoso o de hipoclorito de
sodio líquido. La cloramina es un antiséptico menos potente que el
hipoclorito de acción más lenta pero mejor tolerada en la aplicación
tópica.
8. Derivados Rodados: Encontramos agentes oxidantes utilizados en la
forma de solución acuosa combinándolo con detergentes o sustancias
orgánicas. Son compuestos que se dispusieran progresivamente y sobre
todo lo podemos ver como ejemplo en la poli vinil y roll y dona o pulido
han ayudado.
9. Alcoholes: Actúan desnaturalizando proteínas. Su acción es rápida pero
se evaporan con facilidad. Por ende, el alcohol etílico se utiliza como
mejor antiséptico a una concentración del 70% ya que esta
concentración reduce más la tensión superficial de la célula bacteriana
facilitando el proceso de desnaturalización de la misma.
10. Fenoles: Actúan precipitando proteínas. El hexaclorobenceno no se
emplea por ser tóxicos. Otros tenemos como ejemplo los crisoles, los
 que unidos a jabones originan compuestos estables. La cruel, la
clorhexidina, es un derivado fenólico que actúa alterando la
permeabilidad de la membrana celular bacteriana. Tiene una rápida
inactivación y es bien tolerado por la piel. Se emplea mucho en
hospitales en lavados de superficies cutáneas como soluciones acuosas
o alcohólicas asociadas a detergentes no iónicos.
11. Detergentes Aniónicos: Actúan desorganizando membranas
citoplasmáticas bacterianas pero tienen escaso poder bacteriostático.
Se mejoran combinándolos con desinfectantes y sustancias
tensoactivas como el laurel sulfato.
12. Detergentes Catiónicos: Tienen acción antiséptica pero se inactivan en
contacto con jabones, algodón y materia orgánica. Ya son muy poco
usados.
13. Licores Propilenglicol y Etilenglicol: Se aplican por medio de aparatos
llamados lycosatos en forma de aerosol para desinfección ambiental.

Además, se menciona el ensayo de esterilidad, que se aplica a aquellas

sustancias, preparaciones y objetos que según la farmacopea internacional
deben ser estériles. Un resultado favorable solamente significa que no ha sido
encontrado ningún microorganismo en la muestra examinada bajo las
condiciones de ensayo. La extensión de este resultado a todo el lote del
producto necesitará la certeza de que todas las unidades que lo componen han
sido preparadas de tal manera que hay un alto grado de probabilidad de que el
ensayo sea satisfecho. Es evidente que esto depende de las precauciones
tomadas en el curso de la fabricación del mismo.
se mencionan los indicadores biológicos, que son preparaciones de
microorganismos seleccionados por su alta resistencia a uno o más métodos
de esterilización y se pueden utilizar para confirmar la eficacia de un proceso de
esterilización.
Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:
1. Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos
(hidratos de carbono,
aminoácidos, vitaminas, etc) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, S, etc)
2. Alternativos: agente solidificante (agar-agar), indicador de pH, etc.
Al utilizar cajas Petri en los cultivos microbianos, tienen que ser esterilizadas
para poder vaciar dichos medios de cultivo que servirán de nutrientes a los
microorganismos tratados. Estas cajas se pueden esterilizar por calor húmedo
o calor seco, siendo el más frecuente el calor seco, por ser más confiable su
efectividad.
Es necesario envolver las cajas Petri antes de esterilizarse para evitar que al
término de la esterilización estén expuestas al medio ambiente y se
contaminen de nuevo. Para esterilizarlas se puede usar un recipiente cilíndrico
de metal o envolviéndolas en papel dextrasa.
 Objetivos:
 Conocer diferentes métodos físicos de esterilización y desinfección utilizados en el
Laboratorio de Microbiología y sus aplicaciones.
 Adquirir conocimientos en la preparación de materiales y medios de cultivo a
esterilizar y en el manejo de equipos usados en esterilización.
 Aplicar controles de esterilización y esterilidad a los procesos.
El alumno conocerá y aprenderá el uso adecuado de las técnicas especiales para la
preparación y esterilización del material usado en el laboratorio de microbiología.

1. Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para

el desarrollo de los microorganismos in vitro.
2. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que los imprescindibles,
en el laboratorio de microbiología.
3. Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos.
Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las
técnicas más comunes para realizarlo.

Materiales y Reactivos:
Medio de cultivo Agar-Agar y Agar Sangre.
Estufa de microbiología.
Alcohol al 70%.
Placas Petri.
1 Probeta 250ml.
Agua destilada.
3 Pipetas 10ml y pro pipetas.
Agitador con buzo.
Pisetas.
Papel aluminio.
Algodón.
Balanza Analítica.
2 Matraz aforado Erlenmeyer de 500ml.
3 Mecheros Bunsen.
2 Trípodes.
2 Telas de Amianto.
1 Calentador Mediano (eléctrico).
Pinza de acero (Laboratorio).
Film plástico / papel film.
1 probeta de 100ml.
Cinta de Papel. Marcadores para escribir y rotular.
 Procedimiento:
1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos
casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes
deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor,
añadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentración deseada
de los mismos. Si el medio contiene un agente solidificante (agar-agar) hay que
calentar el preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando,
para asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y
semisólidos)

2. Esterilizar la disolución.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para

evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya
a utilizarse el medio, el procedimiento será diferente:
A) Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir
con papel de aluminio. Llevar a esterilizar al autoclave (121°C) durante 15-20
minutos. Pasado ese tiempo apagar el autoclave y esperar a que baje la
presión y temperatura.
Una vez estéril y manteniendo siempre la zona de esterilidad al mechero y la
placa lo mas plana posible en la mesada, repartir en placas de Petri estériles
unos 15ml a 20 ml y dejar en reposo para que solidifique.

Observaciones y Registro de Resultados:

PROCEDIMIENTO PARA LA ELABORACIÓN DE TAPONES DE ALGODÓN:
1. Se corta una tira de algodón, de acuerdo a las necesidades.
2. Con una pinza de disección se prensa uno de los extremos.
3. Se enrolla el algodón en la pinza, de manera que quede firme el enrollado.
4. Por otro lado, se corta el cuadro de gasa adecuado al tamaño requerido y se coloca
en la boca del matraz, procurando centrarlo.
5. Con la pinza y el algodón enrollado en ella, la gasa se presiona hacia dentro del
matraz, de manera que entre uniformemente por todos lados a la boca de éste,
dejando a flote la punta superior del algodón. La pinza es retirada del algodón
dando una vuelta en sentido contrario al enrollado para que se afloje, y jalando
hacia arriba presionando el algodón para que no salga de la boca del matraz.
6. Hasta este paso, deben quedar cuatro puntas de la gasa colgando a los lados de la
boca del matraz; dos de la puntas que se encuentran opuestamente, se amarran entre
sí, formando un lazo.
7. Luego se amarran las otras dos puntas restantes, obteniéndose de esta manera el
tapón de algodón.
Procedimiento para envolver las cajas Petri:
1. Se corta papel dextrasa, del tamaño adecuado para el número de cajas que se desee
envolver y se colocan las cajas en el centro del papel.
2. Los bordes de los costados se unen en el centro cubriendo las cajas.
3. En la parte superior se unen los bordes de ambos lados y esta unión se dobla a la
mitad.
4. Se hace un segundo doblez, quedando recargado éste sobre las cajas.
5. Al papel se le presiona a los costados quedando al relieve el volumen de las cajas
envueltas en el papel.

6. Se doblan las puntas del papel de cada una de las esquinas al centro.
7. Se le dá vuelta al material, quedando el doblez hacia abajo.
8. Las puntas salientes del papel en los lados de las cajas se doblan hacia arriba y al
centro de las cajas y se les asegura con cinta adhesiva.

Al almacenar los materiales estériles se deben tomar una serie de

precauciones, tales como:
 Controlar el acceso a las áreas de almacenamiento de materiales estériles.
 Mantener el área de almacenamiento limpia, libre de polvo e insectos.
 Controlar la temperatura y la humedad de las áreas de almacenamiento.
 La temperatura ideal debe estar por debajo de los 26oC y la humedad relativa entre
30 y 60%.
 Los periodos prolongados de almacenamiento en lugares tibios y húmedos, pueden
producir condensación de humedad sobre el material de empaque. Utilizar,
preferiblemente, estantes cerrados para colocar el material.
 Dejar que los materiales que salen del horno o el autoclave alcancen la temperatura
ambiente antes de ser almacenados; de esta forma se evita la condensación dentro
del empaque.

Conclusión:
El **agar-agar** es un producto gelatinoso que se obtiene de ciertas algas rojas,
principalmente de los géneros **Gelidium**, **Eucheuma** y **Gracilaria**. Este
polisacárido se extrae de las paredes celulares de las algas y luego se somete a un
proceso de filtración, decoloración y deshidratación para obtener el agar en diversas
presentaciones como tiras, escamas, barras o polvo.

En la cocina, el agar-agar es muy valorado por sus propiedades gelificantes, lo que

permite dar textura a alimentos tanto dulces como salados. Es capaz de gelificar
recetas a temperatura ambiente, sin necesidad de frío¹. Además, es una alternativa
vegetal a la gelatina animal, lo que lo hace popular en dietas vegetarianas y veganas.
Desde el punto de vista nutricional, el agar-agar es rico en proteínas, minerales, fibras
y compuestos fenólicos. Contiene un alto nivel de fibra, ácidos grasos de calidad y
bajos niveles de lípidos o grasas. Entre los minerales que destaca están el potasio,
magnesio, calcio, sodio, fósforo, zinc, manganeso y selenio. También aporta vitaminas
como la E, colina, vitaminas del grupo B (incluido el ácido fólico o B9), vitamina K y
provitamina A.

En el campo de la microbiología, el agar-agar es esencial para la preparación de medios

de cultivo en placa, ya que su capacidad gelificante permite mantener la forma de los
cultivos bacterianos y otros microorganismos⁴⁵. Su consistencia resistente y la
propiedad de ser reversible, es decir, que puede gelificar y fundirse múltiples veces sin
perder sus características, lo hacen un material muy versátil y confiable para diversas
aplicaciones tanto en la cocina como en el laboratorio.

La esterilización y la preparación de medios de cultivo son procesos cruciales en el

laboratorio de microbiología que permiten el estudio de microorganismos en
condiciones óptimas. La esterilización asegura que los materiales y medios estén libres
de cualquier forma de vida microbiana, lo que es esencial para obtener resultados
experimentales precisos y reproducibles.

La esterilización puede realizarse a través de métodos físicos como el calor seco y

húmedo, químicos con agentes como el óxido de etileno, y mecánicos como la
filtración. Cada método tiene sus aplicaciones específicas y debe ser seleccionado
cuidadosamente según el tipo de material y la sensibilidad térmica de los objetos a
esterilizar.

La preparación de medios de cultivo requiere una selección meticulosa de ingredientes

que satisfagan las necesidades nutricionales de los microorganismos de interés. El
proceso incluye la disolución de componentes, ajuste de pH, esterilización,
enfriamiento y vertido en recipientes adecuados para su uso en experimentos.

El autoclave se destaca como el método más utilizado para la esterilización de medios

de cultivo debido a su eficacia para destruir microorganismos, incluyendo esporas
resistentes. Sin embargo, su uso requiere seguir estrictas instrucciones y precauciones
para garantizar la seguridad y la eficacia del proceso.

Las placas de Petri, como herramienta fundamental para el cultivo de

microorganismos, deben ser esterilizadas y manejadas con cuidado para evitar la
contaminación. La limpieza, esterilización y almacenamiento adecuados son pasos
esenciales para mantener la integridad de los experimentos microbiológicos.
La esterilización y la preparación de medios de cultivo son pasos indispensables en la
microbiología. Estos procesos no solo previenen la contaminación y aseguran la validez
de los experimentos, sino que también protegen la salud de los investigadores y la
comunidad en general al evitar la propagación de microorganismos potencialmente
patógenos. La rigurosidad y el cumplimiento de los protocolos establecidos son la clave
para el éxito en el laboratorio de microbiología.
La esterilización es un proceso esencial en diversos campos, desde la microbiología
hasta la medicina y la industria, que garantiza la eliminación de todas las formas de
vida microbiana, incluidas las esporas resistentes. Este proceso es vital para prevenir la
propagación de enfermedades infecciosas y asegurar que los materiales reutilizables
estén libres de contaminantes biológicos.
Los métodos de esterilización se clasifican en físicos y químicos, cada uno con sus
propias aplicaciones y ventajas. Los métodos físicos, como el flameado, la estufa de
calor seco, y la esterilización por calor húmedo (autoclave), son preferidos para
materiales que pueden soportar altas temperaturas. Por otro lado, los métodos
químicos, como el uso de óxido de etileno, formaldehído y glutaraldehído, son
adecuados para materiales sensibles al calor.
La esterilización no solo se limita a la eliminación de microorganismos, sino que
también incluye la preparación de medios de cultivo estériles que son cruciales para el
crecimiento y estudio de microorganismos en laboratorios. Los componentes de estos
medios varían según las necesidades nutricionales de los microorganismos a cultivar,
pero generalmente incluyen agua, nutrientes orgánicos e inorgánicos, y un agente
solidificante como el agar-agar.
La estabilidad de los medios de cultivo esterilizados es limitada. Si no serán utilizados
inmediatamente, conservar a 4-10°C en refrigerador.