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PRÁCTICA NÚMERO 7
CITOMETRÍA HEMÁTICA (SERIE ROJA)
DETERMINACIONES INCLUÍDAS 1. ERITROCITOS 2. HEMOGLOBINA 3. HEMATOCRITO 4. VOLUMEN GLOBULAR MEDIO (VGM). 5. HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM). 6. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (CHCM). 7. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN ERITROCITARIA.
INTRODUCCIÓN La citometría hemática (biometría hemática, hemograma, conteo sanguíneo completo) es un estudio de laboratorio que mide las cantidades y características de los tres tipos de cuerpos que normalmente se encuentran en la sangre, que en orden decreciente de tamaño son: 1. Leucocitos (glóbulos blancos, serie blanca, fórmula blanca). 2. Eritrocitos (glóbulos rojos, serie roja, fórmula roja). 3. Plaquetas (trombocitos).
A estos cuerpos se les llama elementos figurados porque tienen una forma definida comparada con la parte líquida de la sangre, el plasma. Serie eritrocitaria (formula roja o serie roja): Se evalúa tanto por la cantidad de eritrocitos como por su contenido de hemoglobina. Es importante tomar en cuenta que estos parámetros varían de acuerdo con la altura sobre el nivel del mar, la edad y el género del paciente. Por otra parte, los índices eritrocitarios que indican el contenido de hemoglobina por eritrocito y el tamaño de cada uno de ellos, son datos importantes que orientan a las posibles etiologías en pacientes con anemia.
1. CONTEO DE ERITROCITOS: Es la cantidad de eritrocitos en la sangre. Se expresa
como número de eritrocitos por milímetro cúbico. “Eritrocito” quiere decir “célula roja” en latín. Los eritrocitos constituyen aproximadamente 45% del volumen sanguíneo. Un varón sano de 70 kg posee alrededor de 25,000,000,000,000 de eritrocitos. Una mujer sana de 50 kg, aproximadamente 17,000,000,000,000. Cada segundo muere aproximadamente 2,300,000 eritrocitos, o 200,000,000,000 en un día y se sustituyen a la misma velocidad a la que son destruidos.
2. HEMOGLOBINA: La hemoglobina es la proteína contenida en el eritrocito; su
función principal es el transporte de O2/CO2 de los pulmones a los tejidos y viceversa, ocupa alrededor del 33 % del volumen del eritrocito. Está constituida de cuatro subunidades formadas de una cadena de globina rodeando a un grupo hem. Hay cuatro cadenas polipeptídicas que constituyen a la globina, estas son , β, y , que se representan en pares, así el tipo de hemoglobina está determinado por las cadenas que contiene la globina. Se encuentran tres tipos de Hb: hemoglobina A, constituida por 4 cadenas proteínicas ()2(β)2, es la principal en el adulto con una concentración del 97%. La hemoglobina A2 ()2()2 y la hemoglobina fetal ()2()2 están en proporción mínima 2.5 % y menos del 1 % respectivamente. Si el orden de los aminoácidos de la cadena peptídica difiere de las variedades o β habituales o si se produce una recombinación anómala, se producen hemoglobinas anormales, causantes de hemoglobinopatías.
3. HEMATOCRITO: Es el volumen de los eritrocitos con respecto al volumen sanguíneo
total, o la relación existente entre los glóbulos rojos de la sangre y el volumen total de ésta. También se define como la proporción de eritrocitos en 100 mL de sangre. El valor normal en un varón adulto es alrededor del 47% y del 42% en la mujer. En los neonatos, los valores normales son más altos y durante el primer mes se van reduciendo progresivamente hasta el primer año, para reascender paulatinamente durante la infancia y adolescencia. El valor de hematocrito depende del número de eritrocitos circulantes, pero también de la forma y tamaño de los mismos, de ahí su limitado interés clínico. Aproximadamente la cifra del volumen de hematocrito nos indica el número de eritrocitos por milímetro cúbico con sólo multiplicarla por 100,000 y sumarle a esta cifra 400,000 en hombres y 300,000 en mujeres. Así, un volumen de hematocrito de 47% corresponde a 5,1 millones de eritrocitos/mm3 (hombre) y un volumen de hematocrito de 42% corresponde a 4,5 millones de eritrocitos/mm3 (mujer).
4. ÍNDICES ERITROCITARIOS: En una citometría hemática además de determinar la
concentración de hemoglobina, el número de eritrocitos y el valor de hematocrito, se puede establecer una relación entre estas cifras para determinar los índices eritrocitarios que permiten conocer el tamaño de cada eritrocito y su contenido de hemoglobina: 1. Volumen corpuscular o globular medio (VCM, VGM): permite conocer el volumen medio de cada eritrocito, relacionando el volumen de hematocrito con el número de glóbulos rojos. 2. Hemoglobina corpuscular o globular media (HCM, HGM): nos indica el promedio de Hb contenida por eritrocito, relacionando el valor de la concentración de hemoglobina con el número de glóbulos rojos. 3. Concentración de hemoglobina corpuscular o globular media (CHCM CHGM)): compara la concentración promedio de hemoglobina dentro de cada eritrocito, con el volumen promedio de cada eritrocito, relacionando el valor de la concentración de hemoglobina con el volumen de hematocrito.
Nota: algunos autores consideran la siguiente clasificación:
Índices Eritrocitarios Primarios: ▪ Número de eritrocitos. ▪ Hemoglobina. ▪ Hematocrito.
Índices Eritrocitarios Secundarios:
▪ Volumen Corpuscular o Globular Medio (VCM, VGM). ▪ Hemoglobina Corpuscular o Globular Media (HCM, HGM). ▪ Concentración de Hemoglobina Corpuscular o Globular Media (CHCM, CHGM). A. ANEMIAS La anemia es la alteración más frecuente que se encuentra en la citometría hemática, se define de diferentes formas: • Disminución de la masa eritrocitaria. • Según la Organización Mundial de la Salud, los valores de hemoglobina menores de 12.0 g/dL para mujeres y de 13.0 g/dL para varones. • Disminución de la masa de glóbulos rojos o de la concentración de hemoglobina por debajo de la segunda desviación estándar respecto de la media para edad y sexo.
La anemia puede involucrar uno o varios procesos y en ocasiones es difícil catalogar
una situación cambiante, por lo que el diagnóstico debe de basarse no sólo en una definición, sino en la situación general del paciente. La anemia es un problema común, no es una enfermedad, sino la manifestación de una enfermedad. Luego de diagnosticarse, se debe determinar la causa de las anemias y la mayoría se basa en su clasificación.
B. CLASIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE LAS ANEMIAS
1. CLASIFICACIÓN CON BASE EN EL VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM): En esta
clasificación las anemias se dividen en tres grupos; anemia microcítica, anemia normocítica y anemia macrocítica (Esquema 1).
ESQUEMA 1: CLASIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE LAS ANEMIAS CON BASE AL VCM
2. AMPLITUD DE DISTRIBUCIÓN ERITROCITARIA (ADE): La ADE o RDW, por su nombre en inglés (red blood cell distribution width), se reporta en un hemograma. EL ADE revela la cuantificación y la variación del tamaño de los eritrocitos. Se calcula como el cociente entre el coeficiente de variación de la distribución de los volúmenes de los eritrocitos dividido por el VCM, y se expresa en tanto por ciento (Figura 1 y 2).
Anemia Anemia microcítica macrocítica Número de eritrocitos
ADE
VCM
Tamaño de células (fL)
Figura 1. Histograma de la distribución de eritrocitos.
Figura 2. Distribución del tamaño de glóbulos presentes en la circulación sanguínea.A.
Glóbulos rojos de tamaño homogéneo, reflejado en el histograma de frecuencias con una menor amplitud y por ende, un RDW dentro de rangos normales. B. Glóbulos rojos de tamaño más heterogéneo, reflejado en el histograma de frecuencias con una mayor amplitud y por ende, un RDW superior y reportado como alterado. 3. VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN ERITROCITARIA:
La velocidad de sedimentación eritrocitaria (VSE) o velocidad de sedimentación
globular (VSG), se usa clínicamente como una prueba inespecífica para descubrir la presencia de una probable infección o proceso inflamatorio.
La velocidad de sedimentación eritrocitaria depende de la concentración de
macromoléculas asimétricas (fibrinógeno y γ-globulinas) y la concentración de eritrocitos. La superficie del eritrocito normalmente tiene carga eléctrica negativa que se conoce como el “potencial zeta”. Las fuerzas repelentes de estas cargas negativas de los eritrocitos ayudan a mantenerlos separados y suspendidos en el plasma. Las macromoléculas asimétricas del plasma tienen el efecto de hacer decrecer las fuerzas repelentes del potencial zeta de los eritrocitos. Cuando hay un incremento en la concentración plasmática de macromoléculas, como en diversos padecimientos inflamatorios, los eritrocitos se agregan y sedimentan más rápidamente, acelerando así la velocidad de sedimentación eritrocitaria. Por lo tanto, VSE se modifica siempre que existe un desequilibrio humoral que afecta a las proteínas plasmáticas, acelerándose cuando aumentan la proporción de γ- globulinas.
Etapas de la velocidad de sedimentación:
1. Hemaglutinación 2. Sedimentación 3. Depósito de eritrocitos
La utilidad de la VSE: su aumento se relaciona con enfermedades, inflamatorias,
infecciosas, necrosis tisular, neoplasias y anemias. De esta manera tiene amplio uso como medio de vigilar el estado de las enfermedades inflamatorias crónicas como la artritis reumatoide. Su disminución se encuentra en hiperglucemias y policitemias. OBJETIVOS 1. Determinar la concentración de hemoglobina y el valor de hematocrito. 2. Conocer la utilidad clínica de las determinaciones de hemoglobina y hematocrito en el diagnóstico de anemias. 3. Determinar los índices eritrocitarios VCM, HCM y CHCM, útiles para clasificación de las anemias. 4. Determinar la VSE como una prueba inespecífica en el diagnóstico de enfermedades infecciosas o inflamatorias.
MATERIALES Y EQUIPO ▪ Aguja Vacutainer. ▪ Tubo Vacutainer (tapón lila con EDTA-K2). ▪ Torundas de algodón. ▪ Alcohol al 70%. ▪ Gradilla. ▪ Citómetro. ▪ Tubo Wintrobe. ▪ Pipeta Pasteur de punta larga. ▪ Citometro Sysmex KX-21
METODOLOGÍA 1. Para la toma de muestra no hay requerimientos especiales. 2. En condiciones antisépticas extraer la muestra de sangre con el tubo Vacutainer (tapón lila con EDTA-K2). 3. Enseguida homogeneice el tubo por inversión de 8 a 10 veces. 4. La muestra será analizada en el citómetro Sysmex KX-21N según el método proporcionado, a través del cual se determinará la concentración de hemoglobina, el valor de hematocrito y los índices eritrocitarios. 5. Para obtener la VSE, se empleará la sangre obtenida en el punto 1; llenar el tubo Wintrobe hasta la marca de 10 utilizando una pipeta Pasteur de punta larga. Colocar el tubo de Wintrobe en posición vertical y dejarlo reposar durante 1 hora, al final tomar la lectura y anotar la VSE. NOTA: El tubo de Wintrobe lleva una doble escala en centímetros y en milímetros, que se lee de arriba hacia abajo por la izquierda, para observar la VSE.
A. DETERMINACIÓN DE ÍNDICES ERITROCITARIOS:
1. CÁLCULO DE NÚMERO DE GLÓBULOS ROJOS.
HOMBRE: Número de glóbulos rojos = (hematocrito)/10 + 0.4 Número de glóbulos rojos = ( )/ 10 + 0.4 = /mm3.
MUJER: Número de glóbulos rojos = (hematocrito)/ 10 + 0.3 Número de glóbulos rojos = ( )/ 10 + 0.3 = /mm3. Valores de referencia: Hombre: 4.5- 6.2 millones /mm3. Mujer: 4.0 – 5.5 millones /mm3.
2. CÁLCULO DE HEMOGLOBINA. HOMBRE/MUJER Hematocrito/ 3
3. CÁLCULO DE HEMATOCRITO Hemoglobina x 3
4. VCM ó VGM. Es el volumen promedio de cada eritrocito y se expresa en femtolitros
(fL). hematocrito VCM = —————————————— × 10 = # de globulos rojos en millones VCM = —————————— × 10 = fL. Valor de referencia = 92 ± 9 fL. 5. HCM ó HGM. Es la cantidad media de hemoglobina contenida en cada eritrocito y se expresa en picogramos (pg).
hemoglobina HCM = —————————————— × 10 = # de glóbulos rojos en millones
HCM = —————————— × 100 = pg.
Valores de referencia = 30 ± 2 pg.
4. CHCM ó GHCM. Este índice compara la concentración promedio de Hb dentro
de cada eritrocito, con el volumen promedio de cada eritrocito y se expresa en g/dL.
Nota: los parámetros de la citometría hemática variarán dependiendo del género,
edad y altitud (lugar de residencia). REPORTE DE RESULTADOS BENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE MEDICINA LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CITOMETRÍA HEMÁTICA FECHA: NÚMERO DE MATRÍCULA: SERIE ROJA RESULTADO 1 RESULTADO 2 VALORES DE REFERENCIA G. R., millones/mm3 4.5–5.9 (hombre) 4.1–5.1 (mujer) HEMOGLOBINA, g/dL 14.0–17.5 (hombre) 12.3–15.3 (mujer) HEMATOCRITO, % 42–50 (hombre) 36–45 (mujer) VCM, fL 80–96.1 HCM, pg 27.5–33.2 CHCM, g/dL 33.4–34.5 ADE o RDW, % 11–15 VSE, mm/hora 0–6 (hombre) 0–15 (mujer) 0–10 (promedio) INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
RESPONSABLE:
CUESTIONARIO
1. ¿Qué es la citometría hemática y cuál es su utilidad en el diagnóstico clínico?
2. ¿Cómo se define anemia? y ¿Cuáles son sus signos clínicos ¿
3. ¿Qué tipo de anemia se asocia con un déficit de hierro por aporte
insuficiente, disminución de absorción intestinal o aumento de la pérdida? 4. ¿Qué tipo de anemia se asocia con un déficit de cobalamina (vitamina B12) o folato por aporte insuficiente o disminución en la absorción intestinal?
5. ¿Cuáles son las causas que pueden hacer variar el valor del hematocrito? Menciona 2 enfermedades que presentan un Hto. alto y 2 enfermedades que presentan Hto bajo:
CASOS CLÍNICOS
1. Femenina de 35 años, con sangrados menstruales abundantes por miomatosis
uterina, recibió transfusión sanguínea hace un mes. Presenta síndrome anémico caracterizado por palidez de mucosas, atrofia de papilas linguales, uñas quebradizas, astenia, adinamia. Se realiza una citometría hemática obteniendo los siguientes resultados:
Con base al VCM y la HCM, ¿cuál es el tipo de anemia que presenta la paciente?
2. Paciente femenino de 38 años, medio socioeconómico bajo, multiparidad (G6,
P6). Padecimiento desencadenado durante la última gestación la cual no llevó control prenatal, manifestado por palidez y disnea de medianos esfuerzos. A la exploración física en el puerperio inmediato, presenta palidez de mucosas, atrofia de papilas linguales, no existen adenomegalias ni hepatoesplenomegalia. Se le realiza una citometría hemática obteniéndose los siguientes resultados: Parámetro Resultado Límite de referencia
Con base al VCM y la CHCM, ¿cuál es el tipo de anemia que presenta la paciente?
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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