TEMA 3.

RECUENTOS CELULARES: EL HEMOGRAMA

1. INTRODUCCIÓN
El hemograma es una determinación analítica básica mediante la que se estudian los elementos formes de la sangre
desde un punto de vista cuantitativo y cualitativo.

Es una prueba muy común y se indica en las siguientes situaciones:

 Revisiones periódicas rutinarias.

 Sintomatología: fatiga, pérdida de peso, debilidad, hemorragias, fiebre dolores…
 Sospecha de enfermedades neoplásicas.
 Cirugías.
 Embarazo.
 Seguimiento de ciertos tratamientos.
 Evolución de enfermedades crónicas.

En el hemograma se incluyen:

 Los recuentos de los 3 tipos celulares distintos presentes en la sangre: hematíes, leucocitos y plaquetas.
 Parámetros morfológicos.
 Concentración sanguínea de la hemoglobina.
 Determinación de la velocidad de la sedimentación globular.

1.1. PARÁMETROS ANALÍTICOS INCLUIDOS EN EL HEMOGRAMA

Se realiza a partir de sangre total anticoagulada con EDTA (tapón lila).

1.2. SERIE ROJA

El estudio básico incluye el recuento de hematíes, determinación de la concentración de hemoglobina sanguínea,
hematocrito y los índices corpusculares. Son parámetros fundamentales para el diagnóstico de anemias.

 Recuento de hematíes o eritrocitos (HEM o RBC): es el número de hematíes por unidad de volumen
sanguíneo. El resultado se expresa como número de hematíes en millones por microlitro en sangre.
o Recuento por debajo de los valores normales son indicio de anemias.
o Recuento por encima de los valores normales indican poliglobulia, eritrocitosis o policitemia.

EDAD Eritrocitos Hemoglobina Hematocrito (%) VCM HCM (pg) CHCM (g/dl)
(g/dl) (Fl)
18-65 años 4,30-5,75 13.5-17,2 39,5-50,5 80-99 27,0-33,5 31,5-36,0
3,90-5,20 12,0-15,6 35,5-45,5

La concentración de hemoglobina (HB o HGB) mide la cantidad de hemoglobina en un volumen determinado de

sangre.

 Valores bajos de HB: anemias, hemorragias, alteraciones de la médula ósea…

 Valores altos de HB: enfermedades respiratorias.

 El hematocrito (HCT) es una medida de volumen de la sangre que ocupan los hematíes y se define como el
porcentaje del volumen total de la sangre compuesto por hematíes.
 Los índices corpusculares de los hematíes o índices eritrocitarios aportan información sobre el tamaño y la
cantidad de hemoglobina que contienen los hematíes.

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  El VCM (valor corpuscular medio) representa el tamaño promedio (volumen) de los hematíes de una muestra y
se expresa en fentolitros.
 VCM por debajo del rango de normalidad: anemia microcítica.
 VCM por dentro de los valores normales: anemia normocítica.
 VCM por encima de los valores normales: anemia macrocítica.

VCM= HCT X 10 / RBC

 Hemoglobina corpuscular media (HCM): valor promedio de la hemoglobina contenida en cada eritrocito y se
expresa en picogramos (pg)
 HCM por debajo del rango de normalidad: anemia hipocrómica.
 HCM con un valor normal: anemia normocrómica.
 HCM por encima del rango de normalidad: anemia hipercrómica.

HCM= HGB X 10 / RNC

 Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM): cantidad media de hemoglobina que hay en los
hematíes.
 CHCM disminuye en las anemias por déficit de hierro (ferropénicas)
 CHCM aumenta en la esferocitosis y en enfermedades de células falciformes.
 Valores de normalidad en las anemias megaloblásticas.

CHCM = HGB X 100 / HCT (dl)

 Amplitud de distribución eritrocitaria (ADE): es el intervalo de distribución de eritrocitos. Los valores de

referencia oscilan entre 11,6 y 14,5%.
o Valores por encima implican la presencia de hematíes de tamaños diferentes (anisocitosis)

 Amplitud de distribución de la hemoglobina (ADH): intervalo de distribución de la hemoglobina.

o Valores por encima indican la presencia de hematíes con concentraciones de hemoglobina muy
diferentes (anisocromía)

1.3. SERIE BLANCA

El estudio básico de la serie blanca incluye el recuento de leucocitos totales y el recuento diferencial de los distintos
tipos de leucocitos o fórmula leucocitaria. Los valores normales en personas adultas (18-65 años):

Leucocitos Eosinófilos Basófilos Neutrófilos Linfocitos Monocitos Plaquetas

3,9-10,2 0,02-0,50 <0,20 1,5-7,7 1,1-4,5 0,10-0,90 150-370

 Recuento de leucocitos (LEU): número de leucocitos por unidad de volumen sanguíneo. Normalmente se
expresa como nº de leucocitos en miles por microlitro de sangre.
o Por encima de los valores normales  LEUCOCITOSIS  mayoría de infecciones bacterianas.
o Por debajo de los valores normales  LEUCOPENIAS  infecciones víricas, bacterianas graves.

 Fórmula leucocitaria: consiste en el recuento diferencial de los distintos tipos de leucocitos presentes en la
sangre.

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 LEUCOCITOS ENCIMA DE LOS VALORES NORMALES POR DEBAJO DE LOS VALORES NORMALES

EOSINÓFILOS Eosinofilia (procesos alérgicos e

infecciones parasitarias) Eosinopenia

BASÓFILOS Basofilia (infecciones víricas e

hipersensibilidad a algunos alimentos y Basopenia
medicamentos)

NEUTRÓFILOS Neutrofilia (procesos inflamatorios e Neutropenia

infecciones bacterianas)  Leve: 1,0-1,5 x 103uL
-Desviación a la izquierda: cuando hay  Moderada: 0,5-1,0
presentes estadios inmaduros de  Grave: <0,5
neutrófilos- Inferior a 200/Ul  Agranulocitosis.

LINFOCITOS Linfocitosis (infecciones víricas y procesos Linfopenia (SIDA)

neoplásicos)

MONOCITOS Monocitosis (infecciones víricas) Monocitopenia

CÉLULAS GRANDES Se admiten como valores normales cifras inferiores a 4%.

NO TEÑIDAS (LUC)

 Índice de lobularidad (IL): indica de forma indirecta, la proporción de leucocitos polimorfonucleares y

mononucleares y su rango de normalidad oscila entre 2 y 3.
o Valores superiores a 3 indica posible patología asociada a granulocitos.
o Valores inferiores a 2 posible desviación a la izquierda.

 Índice de actividad peroxidasa media de neutrófilos (IAPM): sus valores normales entre -10 y +10.

1.4. PLAQUETAS
El recuento de plaquetas (PLQ o PLT) es el nº de plaquetas por unidad de volumen sanguíneo.

Tanto los valores elevados (TROMBOCITOSIS) como los valores disminuidos (TROMBOPENIA) pueden ser debidos a
múltiples causas.

 Plaquetocrito (PCT): mide la fracción de volumen sanguíneo total ocupada por las plaquetas y sus valores
normales oscilan entre 0,1 y 0,4%
.
 Volumen plaquetario medio (VPM): valor promedio del tamaño de las plaquetas. Se expresa en fentolitros.

 Índice de dispersión de las plaquetas (IDP): refleja el grado de variación morfológica de las plaquetas. Los
valores normales son entre 25 y 65%.

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 2. MÉTODOS MANUALES PARA LA DETERMINACIÓN DEL HEMOGRAMA
Los recuentos celulares manuales se basan en: diluir toda la sangre con el diluyente adecuado, cargar la dilución en
la cámara y contar con el microscopio las células presentes, y, por último, efectuar los cálculos necesarios.

La cámara de Neubauer es un portaobjetos especial de vidrio de grosor muy superior al normal. Tiene una franja
central delimitada por surcos laterales. Tiene grabada una cuadrícula de 3x3 (9mm2).

 Recuento de hematíes
o La sangre se diluye a 1/200 con el reactivo Hayem.
o Se efectúa en el cuadrado primario central, que está dividido en 16 cuadrados secundarios, los
cuales a su vez están divididos en 16 cuadrados terciarios. Se cuentan los 5 cuadrados secundarios:
las 4 esquinas y uno de los centrales. Volumen total contado de 0,02mm2
o RBC = nº hematíes contados x 104

 Recuento de leucocitos
o Se diluye a 1/20 con el reactivo Turk.
o Se efectúa en los 4 cuadrados primarios de 1mm de lado situados en las esquinas de la cámara. El
volumen total contando será de 0,4mm2.
o WBC = nº leucocitos contados x 50

 Recuento de plaquetas
o Se diluye a 1/100 con una solución hipotónica para lisar los hematíes con el líquido Rees Ecker.
o El recuento se efectúa igual que los hematíes.
o PLT = nº de plaquetas contadas x 5 x 103

2.1. HEMOGLOBINA
Se recomienda el método cianmetahemoglobin por su exactitud. Este método se basa en la transformación de la
hemoglobina en cianmetahemoglobina mediante dos reacciones químicas.

 El ion ferroso de la hemoglobina se oxida en ion férrico dando lugar a metahemoglobina.

 Esta pasa a cianmetahemoglobina en presencia de cianuro potásico.

2.2. HEMATOCRITO
El hematocrito se basa en la sedimentación de los hematíes de un volumen de sangre determinado mediante la
fuerza centrífuga y medir el volumen que ocupan.

Microhematocrito: mediante capilares específicos que se llenan directamente de sangre anticoagulada. Se sella con
plastilina por ambos extremos y se centrifuga 5 minutos.

La lectura se realiza midiendo directamente la columna de hematíes y la columna total de sangre (hematíes +
plasma) con una regla y calculamos el hematocrito mediante una regla de 3.

Para facilitar la lectura, existen lectores de hematocrito.

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 3. AUTOMATIZACIÓN DEL HEMOGRAMA
Los contadores o Autoanalizadores hematológicos permiten analizar un volumen grande de muestras en tiempos
reducidos (120 muestras/hora) con mayor exactitud, precisión, seguridad y sencillez que los métodos manuales.

Estos equipos proporcionan mayor información que los manuales, ya que cuantifican mayor número de parámetros
y para hacerlo necesitan un volumen reducido de sangre.

3.1. COMPONENTES DE UN CONTADOR HEMATOLÓGICO

Los contadores cuentan con un muestreador que aspira un volumen concreto de sangre para iniciar el proceso de
medida.

 CIRCUITO HIDRÁULICO: todos los tubos, válvulas, dispensadores, distribuidores y cámaras por las que
circula la sangre y cualquier fluido del aparato. Se incluyen:
o Depósito de reactivos
o Distribuidores: dirigen las muestras y reactivos a los canales y los tubos por los que circulan todos los
fluidos.
o Cámaras de mezclado y reacción: la sangre se diluye con soluciones y reacciona con los reactivos.
o Cámaras de medida: pasan las células una a una para ser contadas y analizadas, incorporan un
hemoglobinómetro que cumple la función de cubeta.

 SISTEMA NEUMÁTICO: suministra las presiones necesarias para que funcione todo el sistema. El
componente principal es un comprensor-aspirador, capaz de generar presiones positivas y negativas.

 COMPONENTE ELÉCTRICO Y ELECTRÓNICO: para efectuar las mediciones y controlar la secuencia en las
que se llevan a cabo las distintas operaciones, se incluyen:
o Fuentes de luz
o Electrodos para generar campos eléctricos.
o Transductores (fotomultiplicadores) para transformar las señales lumínicas en impulsos eléctricos.
o Discriminadores para diferenciar los distintos impulsos generados.
o Amplificadores: para amplificar las señales procedentes de discriminadores.
o Convertidores analógico-digital
o Sensores
o Microprocesadores
o Terminales periféricos para recogida, procesamiento y documentación de resultados.

 SOFTWARE ESPECÍFICO
o Análisis de toda la información generada para transformarla en resultados y elaborar informes.
o Conexión de los sistemas informáticos generales para poder recibir y transmitir información.

3.2. PRINCIPIOS EN LOS QUE SE BASAN LOS CONTADORES

MEDICIÓN DE LA VARIACIÓN DE LA IMPEDANCIA
La impedancia es la oposición que presenta un circuito eléctrico al paso de corriente. Para contar y
dimensionar partículas en general y células en particular se habla del principio Coulter.

Supongamos que tenemos 2 cámaras llenas de una solución y separadas por un orificio, y en cada una se sumerge un
electrodo que establece una diferencia de potencial (debido a que la solución tiene disueltos iones con carga que se
desplazan). Cuando una partícula atraviesa el orificio, lo obstruye parcialmente impidiendo la libre circulación de los

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iones cargados con la solución, por lo que aumenta la oposición o la resistencia al paso de corriente, y se produce un
aumento de la impedancia.

Este pulso de impedancia es proporcional al tamaño de la partícula (cuanto mayor sea, más obstrucción provocará y
más dificultará la circulación) y puede ser registrado por un sensor.

ANÁLISIS DE LA DISPERSIÓN ÓPTICA

Algunos contadores utilizan el principio de la dispersión óptica. El dispositivo de medida consiste en un
capilar, por el que circula la suspensión celular, y es atravesado por un haz de luz.

Es necesario que las células que van a ser analizadas atraviesen el haz de luz y se consigue con el enfoque, que
consiste en inyectar a la suspensión una corriente laminar de diluyente.

MÉTODO DE CAMPO OSCURO

El haz de luz que atraviesa el capilar incide sobre un disco opaco que evita que la luz alcance un
fotodetector. Este haz de luz suele ser una fuente halógena.

Cuando el haz de luminoso incide sobre una célula, se produce una dispersión de los rayos de luz que inciden sobre
el fotodetector.

MÉTODO DE RAYO LÁSER

La fuente lumínica suele ser un láser de helio o neón, que produce luz monocromática a una determinada
longitud de onda. La suspensión se sitúa en un capilar; el rayo láser atraviesa el capilar e incide sobre un detector.

Se producen fenómenos de absorción, difracción y dispersión en todas las direcciones.

 Dispersión frontal en ángulos bajos  volumen celular e índice de refracción.

 Dispersión frontal en ángulos altos y dispersión lateral  complejidad celular.

3.3. MEDICIÓN DE LA SERIE ROJA Y PLAQUETAS

 Canal de eritrocitos/plaquetas
Se efectúa por variación de impedancia. Ambos se efectúan en el mismo canal.

Habitualmente se cuentan las células presentes en 0,5mL de sangre diluida. Para que el autoanalizador acepte el
recuento, al menos 2 de 3 medidas deben ser similares. Este recuento múltiple garantiza la exactitud y
reproducibilidad de los resultados y permite evitar posibles errores. El contador genera histogramas.

Serie roja: recuento de hematíes, hematocrito, volumen corpuscular medio, histograma y amplitud de
distribución eritrocitaria.

Plaquetas: recuento de plaquetas, plaquetocrito, volumen plaquetario medio, histograma e índice de

dispersión de plaquetas.

3.4. MEDIDAS DE LA SERIE BLANCA

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Los contadores incluyen un único canal de impedancia específico para leucocitos en el que se efectúa un recuento
total y diferencial basado en tamaños.

Canal de peroxidasa
La peroxidasa es la tinción más utilizada en contadores hematológicos. Los neutrófilos y eosinófilos son los que
tienen mayor cantidad de peroxidasa. La suspensión pasa a la cámara de medida donde se mide la absorbancia que
es proporcional al contenido de peroxidasa.

Finalmente, a partir de los datos obtenidos se calcula el IAPM (índice de actividad peroxidasa media de neutrófilos)

Canal de basófilos
En el canal de peroxidasa no se pueden identificar los basófilos. Tras el análisis de los datos de este canal, se
obtienen los siguientes parámetros:

 Recuento de basófilos
 Índice de lobularidad
 Alarma de desviación a la izquierda

3.5. EXPRESIÓN DE RESULTADOS Y GENERACIÓN DE INFORMES

 Resultados numéricos: medición directa o por analizadores automáticos.

 Resultados gráficos:
o Histogramas: proporcionan información sobre un único parámetro relacionado con el nº de células y
la intensidad.
o Citogramas: proporcionan información sobre dos parámetros, situando cada célula en una posición
en función de la intensidad.
o Gráficos de flujo: representan el flujo de partículas por los distintos canales.

 Alarmas: señalan posibles resultados anómalos que requieren comprobación. Pueden ser:
o Cualitativa: basadas en la detección de posibles alteraciones morfológicas (alarmas de desviación a
la izquierda, de blastos)
o Cuantitativas: basadas en recuentos celulares (alarmas de anemia)

Todos estos resultados se muestran en informes. Uno para el operador y otro para el clínico solicitante.

3.6. CAUSAS DE ERROR

 Errores de coincidencia: se producen cuando dos o más células pasan por la
zona detectora simultáneamente o muy juntas.
 Incapacidad del instrumento para discriminar células de otras partículas.
Errores debido a las  Variabilidad en la intensidad de las señales generadas.
limitaciones del equipo  Contaminación de los diluyentes y contaminación de las muestras.
 Obstrucción de orificios o capilares.
 Presencia de microburbujas.
 Averías en los sistemas eléctricos y electrónicos.

 Coagulación parcial de la muestra

 Falta de homogeneidad.
Errores debidos a la  Presencia de grandes concentraciones de crioaglutininas.
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naturaleza de la muestra  Hemólisis in vivo, lipoemia e hiperbilirrubinemia (ictericia)
 Recuento de leucocitos muy alto
 Presencia de agregados celulares y agregados plaquetarios.
 Lisis deficiente de los hematíes.