Fecha de recepción: 2 de agosto de 2013

Fecha de aceptación: 18 de noviembre de 2013 Dominguezia - Vol. 29(2) - 2013

Características de identidad y pureza de las hojas

de Litsea guatemalensis Mez. (Lauraceae)

María E. Chicas, María E. Paredes, Margarita Paz, Armando Cáceres*

Escuela de Química Biológica, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia. Universidad de San Carlos de Guatemala
(USAC), Edificio T-11, Ciudad Universitaria zona 12, Guatemala.
*Autor a quien dirigir la correspondencia: [email protected].

Resumen

Se realizó una investigación sobre las hojas en diferentes fases fenológicas de Litsea guatemalensis (“laurel
mexicano”), de tres localidades de Sacatepéquez, Guatemala. Se establecieron las características
macroscópicas, organolépticas, anatómicas e histoquímicas que identifican la droga cruda. Se evaluó la
presencia de alcaloides, almidones, grasa y aceites, mucílagos, saponinas y taninos. Se completaron los
parámetros de calidad con mediciones cuantitativas de cenizas totales y rendimiento de aceite esencial.

Characteristics of identity and purity of leaves

of Litsea guatemalensis Mez. (Lauraceae)

Summary

Leaves at different phenological phases of Litsea guatemalensis (Mexican laurel) from three localities of
Sacatepequez, Guatemala, were investigated. Macroscopical, organoleptical, anatomical, and histochemical
characteristics were established identifying the crude drug. In addition, the presence of alkaloids, starches,
fat and oils, mucilage, saponins and tannins were evaluated. Other quality parameters with quantitative
measurements such as total ash and essential oil yields were also assessed.

Introducción Es intensamente utilizada como planta medici-

nal por sus amplias propiedades como aromática,
Litsea guatemalensis Mez. (Lauraceae), conoci- antiséptica, astringente, balsámica, carminativa,
da como “laurel mexicano”, es una especie nati- emenagoga, emoliente, estimulante, espasmolítica,
va de Mesoamérica que crece en sitios que están febrífuga y pectoral, en afecciones respiratorias,
de 1.500 a 3.150 m.s.n.m. en bosques abiertos de gastroenteritis, carencia de leche materna e infla-
pino y matorrales, desde el centro de México y mación; también en lavados y baños para reducir
llega hasta Guatemala (Standley y Steyermark, el cansancio, reducir ataques epilépticos, y tratar
1952; Cáceres, 1996). úlceras e inflamación de piernas (Cáceres 2006).

Palabras clave: Litsea guatemalensis - hojas - caracteres morfológicos - organolépticos - anatómicos - químicos.
Key words: Litsea guatemalensis - leaves - morpho-anatomical characteristics - organoleptic-chemical characteristics.

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Chicas y col.

Por el gran interés e importancia que presenta Métodos

L. guatemalensis como especie medicinal, este es-
tudio tuvo como objetivo establecer los caracteres Una porción de aproximadamente 1 g de hojas de la
de identidad y pureza cuando se presenta en estado fase de desarrollo foliar de cada localidad fue con-
de droga cruda; esos caracteres son requisitos in- servado en cámara húmeda, utilizando bolsas con
dispensables para garantizar una materia prima óp- cierre hermético y se almacenó en refrigeración para
tima para la elaboración de formas farmacéuticas. su análisis organoléptico, anatómico e histoquímico,
La composición química del aceite esencial de mientras que el resto del material colectado fue se-
especímenes guatemaltecos demostró una alta va- cado a la sombra para la realización de las pruebas
riabilidad según las zonas de recolección; dominan de pureza (cenizas totales) y determinación de acei-
tetrahidrolinalol, linalol, 1,8-cineol y carvona (Cruz tes esenciales.
y col., 2012).
Las principales actividades demostradas experi- Características de identidad
mentalmente son la actividad antiinflamatoria y la Consistió en la descripción detallada de los caracte-
antihiperalgesia, atribuidas principalmente a res organolépticos, macroscópicos, anatómicos e
pinocembrina y escopoletina (Silva y col., 2012). histoquímicos. Para el estudio anatómico de las ho-
jas algunos ejemplares frescos fueron cortados
transversalmente a mano alzada en la porción me-
Materiales y métodos dia de la hoja.
Las hojas se diafanizaron según la técnica de
Materiales Dizeo de Strittmatter (1973); en las descripciones
de la arquitectura foliar se utilizó la terminología
Material vegetal propuesta por Hickey (1973) y para los tricomas, la
Se recolectaron aproximadamente 1 kg de hojas de de Üphof y col. (1962). Las coloraciones emplea-
ejemplares procedentes de tres localidades del De- das fueron safranina en etanol al 80 % y safranina -
partamento de Sacatepéquez; Loc. municipio San fast green.
Bartolomé Milpas Altas (2.724 m.s.n.m., latitud 14º Las características epidérmicas y estructuras
35’ 50,0’’ N, longitud 90º 41’ 35,4’’ O, W 693), foliares se describieron acorde con la terminología
(Nº BIGU 47545 y Nº CFEH 1094), Loc. Munici- de Metcalfe y Chalk (1950, 1979). Las observacio-
pio Magdalena Milpas Altas (1.993 m.s.n.m., lati- nes microscópicas se efectuaron con microscopio
tud 14º 33’ 22,0’’ N, longitud 90º 40’ 30,1’’ O, SW óptico Nikon Alphaphot.
2 m), (Nº BIGU 47543 y Nº CFEH 1093) y Loc.
Cerro Alux del municipio de San Lucas Sacate- Histoquímica
péquez (2.108 m.s.n.m., latitud 14º 36’ 42,2’’ N, Se efectuaron diversas pruebas histoquímicas a fin
longitud 90º 37’ 47,1’’ O, posición ± 6 m) (Nº BIGU de detectar contenidos celulares (Scala, 1912;
47544 y Nº CFEH 1092). Johansen, 1940). Para ello se utilizó: sudán IV para
La recolección se realizó durante los meses de lípidos (aceites y sustancias grasas en general), so-
febrero a mayo de 2009 y, además, se tuvo en cuen- lución de sulfato férrico - formaldehído para taninos,
ta las diferentes fases fenológicas (desarrollo foliar, violeta de cresilo para mucílagos, ácido sulfúrico
inicio de floración e inicio de fructificación). concentrado para saponinas, solución iodo -
Se confeccionaron ejemplares testigos de herba- iodurada para almidón, reacción de Dragendorff para
rio, que se encuentran depositados en el Herbario alcaloides.
de la Escuela de Biología (BIGUA) de la Universi-
dad de San Carlos de Guatemala (USAC) y el Her- Características de pureza
bario CFEH del Laboratorio de Productos Natura- Se realizaron ensayos cuantitativos, por triplica-
les Farmaya. do, en el material vegetal seco, de las tres locali-
La identificación botánica del material se reali- dades en las diferentes etapas fenológicas. Se de-
zó en colaboración con el ingeniero agrónomo Mario terminaron las cenizas totales utilizando una mu-
Esteban Véliz Pérez del Herbario BIGU y el botá- fla de mesa Thermoline FB1400. Se colocó
nico del herbario CFEH Luis Álvarez. aproximadamente 1 g de material en estudio en

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diferentes crisoles de porcelana, previamente cal- Caracteres microscópicos-anatómicos

cinados y a peso constante; las muestras fueron
calcinadas a 550 ºC hasta obtener cenizas La hoja en corte transversal muestra la epidermis
blancas.Se dejaron enfriar los crisoles en un de- adaxial constituida por una hilera de células cubier-
secador y posteriormente se pesaron y anotaron ta por una delgada cutícula. El mesofilo es de es-
los resultados. tructura dorsiventral, con una hilera de células en
Por hidrodestilación, mediante un equipo tipo empalizada de paredes delgadas y sin espacios
Clevenger, se realizaron tres extracciones para la intercelulares. El nervio medio está constituido por
obtención de los aceites esenciales. Para esta de- un haz colateral abierto, que se encuentra comple-
terminación se utilizaron 25 g de material seco de tamente rodeado por una conspicua y casi continua
cada localidad en las diferentes etapas fenológicas. capa de fibras perivasculares y, al igual que los ner-
Se destiló a temperatura constante durante aproxi- vios marginales, se halla reforzado del lado de la
madamente 2 horas utilizando 500 ml de agua des- epidermis abaxial, por colénquima angular; la epi-
tilada y 2 ml de un disolvente orgánico (pentano), dermis abaxial tiene células pequeñas, cutícula del-
manteniendo un flujo de destilación de 2 - 3 ml gada y en vista superficial muestra las células de
por minuto. La caracterización química de los acei- paredes tangenciales con tendencia a rectas, con
tes esenciales fue realizada mediante la técnica de estomas de tipo anomocíticos y tricomas simples
cromatografía en capa fina empleando cromato- unicelulares (Figuras 1 E - I).
placas de silica gel Merck®como fase estacionaria,
y como fase móvil se empleó tolueno - acetato de Características histoquímicas
etilo (93:7). Como estándares de comparación se
utilizaron limoneno, citral y 1,8 cineol (Wagner y Se evidenció reacción positiva para alcaloides, almi-
Bladt, 1996). dones, grasa y aceites, mucílagos, saponinas y taninos.
El análisis de la materia vegetal fue llevado a El tamizaje permitió evidenciar la presencia de
cabo en el Laboratorio de Investigación de Produc- alcaloides en poca cantidad en la nervadura central,
tos Naturales (LIPRONAT) y en el Laboratorio de mientras que en el parénquima se presentan en ma-
Bioensayos del Departamento de Citohistología de yor cantidad. Los almidones de asimilación están
la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia de la distribuidos en el colénquima y en los parénquimas
USAC. en empalizada y esponjoso.
Los depósitos de grasas y aceites son evidentes
en la nervadura central y xilema. Los mucílagos y
Resultados saponinas se encontraron distribuidos en los dife-
rentes tejidos en abundancia, mientras que los
Caracteres macroscópicos y organolépticos taninos se encuentran cerca de las fibras extra
xilemáticas de la nervadura central. También pre-
Los ejemplares de estudio son árboles silvestres de sentan poca presencia en el parénquima esponjoso
follaje perenne, dioicos, con altura aproximada y en el parénquima en empalizada.
máxima de 5 m, con ramas delgadas y tallo leñoso
de color pardo oscuro. Con un diámetro que oscila Características de pureza
entre 35 y 50 cm (Figuras 1, A - C). En el análisis de los parámetros de calidad se evi-
Las hojas son simples, discoloras, verde brillan- denció que los porcentajes de cenizas totales (Ta-
te en el haz y verde grisáceas en el envés, lustrosas, bla 1) se encuentran dentro de los límites interna-
aromáticas, con disposición alterna, elípticas - cionales señalados (≤ 10 %) (OMS, 2003).
lanceoladas, de 9,8 cm de longitud, ápice agudo y El porcentaje de rendimiento de aceite esencial
base cuneiforme, margen entero, con peciolo de 1 durante las fases fenológicas de inicio de floración
cm de longitud lanceolado. La venación es pinnada- e inicio de fructificación (Tabla 2), presentaron va-
reticulada. lores superiores a los informados en otras investi-
Las hojas desecadas (droga vegetal) son de co- gaciones, en las cuales los porcentajes no sobrepa-
lor verde oscuro, opaco con olor sui generis, no se san el 0,85 %, mientras que el porcentaje de rendi-
fragmentan con facilidad (Figura 1, D). miento de la fase de desarrollo foliar fue menor.

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Chicas y col.

Figura 1.- Morfoanatomía de las hojas de Litsea guatemalensis

Morfología externa: A. Ejemplar de San Bartolomé Milpas Alta; B. Ejemplar de Magdalena Milpas Alta; C. Ejemplar
de cerro Alux; D. Droga cruda. Caracteres microscópicos-anatómicos: E. Epidermis en vista superficial mostrando
estomas anomocíticos; F. Tricomas simples unicelulares; G. Mesófilo mostrando epidermis y una capa de parénquima
en empalizada; H. Nervio medio; I. Vascularización de la nervadura central.

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Tabla 1.- Porcentaje de cenizas totales de hojas de Litsea guatemalensis

Localidad muestreada Fase fenológica Porcentaje promedio de cenizas totales

San Bartolomé Milpas Altas Desarrollo foliar 5,20 ± 0,07

Inicio de floración 4,70 ± 0,13
Inicio de fructificación 3,90 ± 0,11

Cerro Alux Desarrollo foliar 5,10 ± 0,25

Inicio de floración 5,10 ± 0,12
Inicio de fructificación 4,20 ± 0,38

Magdalena Milpas Altas Desarrollo foliar 4,30 ± 0,10

Inicio de floración 4,70 ± 0,55
Inicio de fructificación 4,30 ± 0,32

Tabla 2.- Porcentaje de rendimiento de aceites esenciales de hojas de Litsea guatemalensis

Localidad muestreada Fase fenológica Porcentaje promedio de aceites esenciales

San Bartolomé Milpas Altas Desarrollo foliar 0,50 ± 0,01

Inicio de floración 1,20 ± 0,25
Inicio de fructificación 1,30 ± 0,20

Cerro Alux Desarrollo foliar 0,90 ± 0,16

Inicio de floración 1,00 ± 0,12
Inicio de fructificación 1,80 ± 0,29

Magdalena Milpas Altas Desarrollo foliar 0,70 ± 0,08

Inicio de floración 1,20 ± 0,32
Inicio de fructificación 0,80 ± 0,12

Discusión diadas (Cáceres, 2006). La presencia de almidones

de asimilación en las hojas del laurel fue informada
Los resultados coinciden con la literatura en que las por Miyake (1902), en un estudio realizado en el
hojas de L. guatemalensis contienen alcaloides, jardín botánico de Tokio; encontró que los
saponinas y aceites esenciales; pero además, fue po- cloroplastos de las hojas siempre verdes, almace-
sible evidenciar reacciones positivas para almido- nan almidones de asimilación para favorecer la fo-
nes, mucílagos y taninos en todas las muestras estu- tosíntesis en los climas fríos, hace referencia a que

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Chicas y col.

Laurus nobilis L. presenta escasa cantidad de almi- medio más bajos se registraron en la fase de fructi-
dones, mientras Litsea japonica (Thunb.) Jussieu ficación, que fueron: 3,90 % ± 0,11para San
presenta muy abundante cantidad de almidones de Bartolomé Milpas Altas, 4,20 % ± 0,38 para Cerro
asimilación. Más recientemente Christodoulakis Alux y 4,30 % ± 0,32 para Magdalena Milpas Altas
(1993), en un estudio realizado en Grecia, informó (Tabla 1).
que L. nobilis, acumula normalmente almidón den- En años recientes se registraron en la literatura
tro de los cloroplastos, característica que mantiene diferentes porcentajes de rendimiento de aceites
aun cuando esté sometido a condiciones desfavora- esenciales para muestra seca de L. guatemalensis,
bles o de contaminación ambiental, debido a su ca- como es el caso del estudio realizado por Cruz y
racterística de hojas siempre verdes. Estos informes col. (2008) que presentó 0,70 % de rendimiento. En
coinciden con lo encontrado en este estudio para la muestra seca, Ortiz (2005) registró para ejemplares
especie L. guatemalensis, tomando en cuenta que colectados de Chimaltenango, San Lucas y San
se desarrolla preferentemente en climas fríos y que Antonio Aguas Calientes, una media total de 0,85 %.
pertenece al mismo género que L. japonica. La pre- En esta investigación se registraron porcentajes
sencia de almidones de asimilación en hojas ha sido de rendimientos mayores en todas las localidades
registrada también en diversas especies de cítricos en las diferentes fases fenológicas, excepto en la fase
(Esquivel-Chávez y col., 2012). de desarrollo foliar de San Bartolomé Milpas Altas
La intensidad de las reacciones histoquímicas (Tabla 2). En el estudio llevado a cabo por Cruz
evidenciaron mínimas diferencias en las muestras (2011), se realizaron mediciones de ese parámetro a
de las tres localidades, posiblemente debido a fluc- partir de muestras de L. guatemalensis (con un pe-
tuaciones de temperatura, precipitación, luminosi- ríodo de almacenamiento mayor a un año) proce-
dad, altitud y tamaño de partículas del suelo de la dentes de las localidades de estudio, y se obtuvo un
zona de cultivo, así como la edad y la fase fenológica rendimiento de 0,60 % (San Bartolomé Milpas Al-
de las plantas (Martin y Woodcock, 1983; Ocampo tas), entre 0,25 a 0,85 % (Cerro Alux) y 0,70 %
y col., 2007). (Magdalena Milpas Altas), respectivamente (Comu-
En general, la presencia de estos metabolitos pro- nicación personal, Cruz, 2011).
porcionó presuntivamente una explicación a la in- Los porcentajes promedio más elevados de ren-
formación detectada en la literatura para L. dimiento de aceites esenciales en el Cerro Alux fue-
guatemalensis en cuanto a las propiedades que se le ron registrados en la fase de inicio de fructificación,
atribuyen, como astringente, posiblemente debida a mientras que en Magdalena Milpas Altas el porcen-
taninos; estimulante, a causa de la presencia de taje más elevado se registró durante la fase de ini-
alcaloides, y antiinflamatoria por la presencia de cio de floración. Tal y como se informa en otras
flavonoides y mucílagos. También su uso con fines especies vegetales productoras de aceites esencia-
terapéuticos en afecciones respiratorias y gástricas les, San Bartolomé Milpas Altas no evidenció dife-
conferidas posiblemente por la presencia abundan- rencia entre la fase de inicio de floración e inicio de
te de mucílagos y saponinas (Martin y Woodcock, fructificación (Tabla 2) (Martin, 1983).
1983; Méndez, 2002; Cáceres, 2006). En cuanto a los factores que afectan el rendi-
El porcentaje de cenizas es un parámetro miento de aceites se puede mencionar el tipo de
fisicoquímico que indica el contenido mineral de materia prima, que se refiere a las características
metales pesados, arcilla y material orgánico presente genéticas de la planta, que son influidas por el lugar
en la droga vegetal y que según la OMS no debe y la época de producción, la maduración o la edad
exceder el 10 %. Duke y Archley (1986) informa- de la planta y las enfermedades que pueda sufrir,
ron un porcentaje de cenizas totales de 4,9 % para como en el caso de San Bartolomé Milpas Altas,
L. guatemalensis, mientras que Cruz y col. (2008) donde el ejemplar en estudio presentó menor edad
de 3,96 %. estimada y colonización fúngica.
En esta investigación fue posible observar que También influyen en los resultados de las deter-
todas las determinaciones de cenizas totales se en- minaciones el tiempo de secado, las características
contraban dentro de los límites esperados para to- del equipo de extracción, la cantidad de materia pri-
das las localidades de estudio, y evidenciaron alta ma utilizada, el volumen y la pureza del disolvente,
calidad de la materia vegetal. Los porcentajes pro- la cantidad de agua o vapor utilizado, la temperatura

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y la presión; el tamaño de la partícula, el tiempo, el Cáceres, A. (2006). Vademécum nacional de plan-

número de repeticiones y los métodos de extracción tas medicinales. Editorial Universitaria, Gua-
(Martin, 1983). temala.
La caracterización química de los aceites esen- Christodoulakis, N.S (1993). “Air pollution effects
ciales de las muestras en estudio por el método de on the guard cells of the injury resistant leaf of
cromatografía en capa fina, mostró un alto nivel de Laurus nobilis L.”. Bulletin of Enviromental Con-
coincidencia de Rf con las bandas del estándar de tamination and Toxicology 51:471-478.
limoneno, pese a que en la literatura y en el estudio Cruz. S. (2011). Evaluación química y actividad
realizado por Cruz en 2008, empleando cromato- biológica de aceites y extractos de especies
grafía de gases acoplado a espectrofotometría de de laurel (Litsea spp.) distribuidas en Gua-
masas (CG - EM), el 1,8 cineol fue el componente temala para su aprovechamiento a nivel in-
que demostró mayor presencia en el aceite esencial. dustrial en la producción de aromas y/o
Este resultado puede haber sido influido por las fitomedicamentos. (Proyecto FODECYT
limitantes propias de la técnica analítica empleada 51-09). Guatemala.
en esta investigación (Domínguez, 1975; Vallverdú Cruz, S.; Cáceres, A.; Medinilla, B.; Paredes,
y col., 2005). M.E.; Orozco, R.; García, E.; Letrán, H.
También se registraron nueve valores de Rf que (2008). Caracterización química y evaluación
no presentaron ninguna similitud con los valores de la actividad biológica de Bourreriahuanita
de los estándares utilizados, y que no pudieron (Llave & Lex.) Hemsl. (Esquisuchil) y Litsea
ser identificados, presuntivamente debido a que guatemalensis Mez. (laurel). (Informe-2008-
no fue posible contar con un número mayor de 087). DIGI-USAC, Guatemala.
estándares de comparación dentro del procedi- Cruz, S.M.; Mérida, M.; Pérez, F.; Santizo, A.;
miento analítico empleado, incluso se registró la Cáceres, A.; Apel, M.; Henriquez, A. (2012).
presencia de tres bandas que fueron visibles úni- “Chemical composition of essential oil of Litsea
camente con luz UV a 365 nm, que tampoco pu- guatemalensis (Mexican bay) from different
dieron ser identificadas. provenances of Guatemala”. Acta Horticulturae
No fue posible establecer coincidencias entre 964: 47-57.
el estándar de citral y las muestras analizadas, de- Dizeo de Strittmater, C. (1973). “Nueva técnica de
bido a que por causas indeterminadas, las bandas diafanización”. Bol. Soc. Arg. Bot. 15(1): 126-
de ese estándar no presentaron el color caracterís- 129.
tico que informa la literatura, azul violeta, al utili- Domínguez, X. (1975). Cromatografía en papel y
zar vainillina - ácido sulfúrico como revelador y en capa delgada. Unión Panamericana. Depar-
tolueno - acetato de etilo (93:7) como fase móvil. tamento de Asuntos Científicos. Serie Química,
Tampoco mostró valores de Rf que permitieran la Washington.
identificación del citral en las muestras (Wagner y Duke, J.A.; Archley, A.A. (1986). Handbook of
Bladt, 1996). Proximate Analysis Tables of Higher Plants.CRC
En conclusión, se evidenció que no existen dife- Press, Boca Raton: 460p.
rencias en las características organolépticasy ana- Esquivel-Chávez, F.; Valdovinos-Ponce, G.; Mora-
tómicas de la materia vegetal de L. guatemalensis, Aguilera, G.; Gómez-Jaimes, R.; Velásquez-
proveniente del Cerro Alux, San Bartolomé y Mag- Monreal, J.J.; Manzanilla-Ramírez, M.A.; Flo-
dalena Milpas Altas. El mayor porcentaje de rendi- res Sánchez, J.L.; López-Arroyo, J.I. (2012).
miento de aceite esencial se detectó en las fases de “Análisis histológico foliar de cítricos agrios y
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