AISLAMIENTO Y TAXONOMIA DE BACTERIAS DEL GENERO Bacillus RECOLECTADAS EN SUELOS DE UN BOSQUE DE PINUS RADIATA Y UNA PRADERA PERMANENTE EN DISTINTAS EPOCAS DE MUESTREO

AISLAMIENTO Y TAXONOMIA
DE BACTERIAS DEL GENERO; bacillus

RECOLECTADAS EN SUELOS
DE UN BOSQUE DE PINUS RADIATA
Y UNA PRADERA PERMANENTE
EN DISTINTAS EPOCAS
DE MUESTREO
Nombre: Fabricio Frisancho Cornejo

Código: 2014-118021
INTRODUCCION
Uno de los principales organismos presentes en el suelo son las bacterias y dentro de
este grupo, se encuentran los formadores de endosporas, el genero bacillus. Las
endosporas son estructuras especializadas resistentes a los efectos del calor,
sequedad, congelación, radiación y químicos tóxicos. Las bacterias forman esta
estructura para resistir condiciones adversas del ambiente, también la llegan a formar
como una defensa metabólica. La formación de esta estructura esta dada por las
condiciones del medio ambiente en que se encuentran las bacterias.
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
• Determinar taxonómicamente las bacterias del genero bacillus presente
en los suelos de un bosque de pinus radiata y de una pradera
permanente, en distintas épocas del año
OBJETIVOS ESPECIFICOS
• Aislar cepas de bacillus desde un suelo de bosque de P. radiata y un
suelo de pradera permanente
• Determinar taxonómicamente las cepas de bacillus aisladas desde un
suelo de bosque de P. radiata y una pradera permanente
• Relacionar los factores climáticos: Temperatura y humedad con las
poblaciones de bacillus aisladas desde ambos suelos muestreados
MATERIALES Y METODO
Medios de cultivo
• Agar citrato Simmons, agar nitrato, agar peptona al 2%, almidon, caldo glucosado
y caldo peptona
Reactivos
• Azul de bromotimol, reactivo de barrit (solución A y B), reactivo rojo metilo,
reactivo nitrato (solución A y B)
Agentes de tinción
• Safranina 0,25%, verde de malaquita 7,6%, violeta de genciana
Recolección de muestra de suelo
La muestra de suelo se recolecto desde un bosque de pinus radiata y una pradera
permanente, Cada muestreo coincidió con el termino de la estación del año. Para la
recolección de las muestras se delimito un área de estudio de 3 hectáreas, donde se
extrajeron 5 muestras de suelo a una profundidad de 0 a 10cm. Cada muestra de suelo fue
de 50 g. En total por cada estación se recolecto 30 muestras, 15 de suelo de bosque de P.
radiata y 15 de pradera. Las muestras se depositaron independientemente en bolsas
plásticas las cuales se rotularon de acuerdo al lugar de recolección, posteriormente se
llevaron al laboratorio de microbiología donde fueron analizados inmediatamente.
Las 5 muestras colectadas, se mezclo y Los tubos se depositaron en un baño maria Luego se retiraron y se depositaron en una
homogenizo, obteniendo una muestra única. a 80º C x 30 min incubadora a 23º+2º x 24hrs
1 gr 1 gr
Muestra
homogenizada
10 ml Agua 10 ml Caldo
destilada esteril peptona
Transcurrido el tiempo de incubación se Luego las placas se incubaron a 23°C + 2°C Los viales sembrados se incubaron en una
retiraron los tubos y se realizaron por 24 horas. Transcurrido el tiempo de cámara de cultivo a 23°C + 2°C por 24
diluciones seriadas. incubación se rescataron las colonias más horas, pasado el tiempo de incubación se
aisladas y se sembraron en viales que extrajo un pequeño inóculo y se extendió
0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml contenían agar peptona al 2% inclinado. en un portaobjeto para realizar la tinción de
Wirtz y observar la presencia de
endosporas bacterianas.
Se sembró por triplicado

mediante el método de
siembra por rastrillo en
placas Petri que contenía
agar peptona al 2%.
PRUEBAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO
• Tinción de Wirtz: Permitió observar la presencia de endosporas.
• Tinción Gram: Observación si las bacterias pertenecían a bacterias Gram
positivas o negativas, dejando solo las Gram negativas ya que esa es una
condición que presentan las bacterias del genero a estudiar.
• Prueba de la catalasa: Su función es catalizar la ruptura del agua oxigenada,
liberando oxigeno al ambiente.
• Prueba reducción de nitratos: Esta es una reacción que pueden llevar a cabo
los microorganismos anaerobios facultativos, formando compuestos tales como
nitritos, amoníaco y óxido nitroso.
• Prueba Voges Proskauer: Con esta prueba es posible observar si la bacteria en
estudio realiza una fermentación fórmica de tipo butilenglicol o llamada de tipo
Aerógenes.
• Prueba del citrato: Permite determinar si la bacteria es capaz de utilizar el
citrato como única fuente de energía y carbono.
RESULTADOS
Se recolectaron 300 cepas bacterianas en ambos suelos muestreados, 150 cepas en bosque de P. radiata y 150 cepas
en suelo de pradera permanente.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en otoño, en muestras de suelo de bosque de P. radiata.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en invierno, en muestras de suelo de bosque de P.
radiata.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en primavera en muestras de suelo de bosque
de P. radiata.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en otoño, en muestras de suelo de pradera
permanente.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en invierno, en muestras de suelo de pradera
permanente.
Distribución porcentual de bacterias recolectadas en primavera, en muestras de suelo de pradera
permanente.
DISCUSION
Las especies aisladas del presente estudio demuestra que estas bacterias son
fácilmente recolectadas en muestras de suelo, obteniendo un gran número de ellas
(300), tal como lo indica Castillo et. al. (2004) las bacterias pertenecientes a este
género están ampliamente distribuidas en la naturaleza y son fácilmente aisladas
desde suelo y restos de materia orgánica, especialmente en la rizosfera donde se
encuentra un gran número de vitaminas, aminoácidos y carbohidratos (Starr, 1981).
Estudios indican que las bacterias de este género se encuentran naturalmente en el
suelo formando la microflora propia de estos. Tal como lo indica un estudio de
Sackenheim (1996) en el cual se diluyeron muestras de suelo en la localidad de
Azapa en el norte de Chile en dos épocas distintas, en este estudio se pudo descifrar
que la gran variedad de especie del género Bacillus es amplia en estos suelos, lo cual
coincide con este estudio en que las especies de este género están ampliamente
distribuidas y que son fácilmente aislables mediante los mismo métodos utilizados en
ambos estudios.
CONCLUSIONES
• La mayor diversidad de taxas se presentaron en muestras de pradera permanente,

obteniéndose un total de 13 probables especies del género Bacillus, siendo la
menor diversidad en la época de invierno y la mayor en otoño.
• Dentro de los sectores de muestreo existió diferencia entre las posibles taxas
recolectadas, debido a que en bosque de P. radiata se recolectaron 11 especies, por
el contrario en suelo de pradera permanente se obtuvieron 13 especies, de las
cuales solo 9 coincidieron en ambos suelos muestreados, las restantes
corresponden a especies pertenecientes a cada sector de muestreo y que no se
repiten en ambos suelos.

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Nombre: Fabricio Frisancho Cornejo

Se sembró por triplicado

• La mayor diversidad de taxas se presentaron en muestras de pradera permanente,

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