Preparación de Osazonas

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL
ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS
QUÍMICAS
ESCUELAS DE
BIOQUÍMICA CLÍNICA Y QUÍMICA
INTEGRANTES
ABAD EVELYN
FARMACÉUTICA
ALMEIDA MARÍA BELÉN BIOQUÍMICA I
PAUCAR SOFÍA
SILVA PAOLA
TEMA:
COMINA ERIKA MÉTODOS DE OBTENCIÓN DE
CARBOHIDRATOS
Características
• Monosacáridos y Disacáridos.
• Reaccionan con Fenilhidrazina.
• Tiempo de formación y precipitación.

Formación de una Osazona a partir de
una aldosa
Práctica en el Laboratorio
MATERIALES:
 Ácido Acético
 Solución de Fenilhidrazina
 Acetato de Sodio
 Microscopio
PROCEDIMIENTO:
1. Acidificar 5mL de la solución de los azúcares con 10 gotas

de ácido acético.
2. Agregar 3 gotas de la solución de Fenilhidrazina y un poco
de acetato de sodio sólido.
3. Calentar en un baño de agua durante 5 minutos agitando
ocasionalmente.
4. Filtrar y calentar el filtrado en un baño de agua por 20
minutos.
5. Dejar enfriar lentamente.
6. Examinar los cristales en el microscopio.
Apariencia Cristalina
DETERMINACIÓN
DE
CARBOHIDRATOS
POR EL MÉTODO
DE TOLLENS
• Determinación de azúcares reductores

• REACCIONES DE OXIDACIÓN
• Los agentes oxidantes suaves oxidan los
aldehídos pero no a las cetonas.
• Este diferente comportamiento frente a la
oxidación permite distinguirlos.
AZÚCARES
REDUCTORES
Los azúcares reductores son aquellos azúcares que

poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto,
y que a través del mismo pueden reaccionar como
reductores con otras moléculas.
La glucosa es el azúcar reductor más abundante en

el organismo. Su concentración en la sangre está
sometida a un cuidadoso mecanismo de regulación
en individuos sanos y, en personas que padecen
diabetes, aumenta sustancialmente
REACCIÓN DE TOLLENS
• El reactivo de Tollens se obtiene al mezclar nitrato de plata con
amoníaco, ambos en disolución acuosa.
Preparación del reactivo:
• Solución A.- Se disuelven 3 g de nitrato de plata en 30 ml de agua
• Solución B.- Hidróxido sódico al 10%
Cuando se requiera el reactivo mezclar en un tubo de ensayo 1 ml de
cada una de las soluciones y añadir gota a gota una solución de
amoniaco hasta disolución del óxido de plata.
Determinación de azúcares
reductores
PROCEDIMIENTO
2 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2
M.P. M.P. M.P. M.P. ml
M.P 2
. BoMa
ml
10 a 15’
M.P
1 ml de reactivo de Tollens .
El reactivo oxida los aldehídos a ácidos
carboxílicos y al hacerlo, la plata Ag+ se
reduce a Ag°. En determinadas condiciones,
la plata se deposita sobre las paredes del
tubo de ensayo, formando un espejo.
Precipita plata metálica en forma de espejo
Tollens Bernhard
Disacárido Monosacáridos Tipo Poder
enlace reductor
Maltosa Glucosa-glucosa (1-4) +
Lactosa Galactosa-glucosa (1-4) +
Celobiosa Glucosa-Glucosa (1-4) +
Gentobiosa Glucosa- glucosa (1-6) +
Melibiosa Galactosa-glucosa (1-6) +
Epimelobiosa Galactosa-manosa (1-6) +
Furanosa Glucosa-fructosa (1-3) +
Sacarosa Glucosa-fructosa (2-1) -
Trehalosa Glucosa-glucosa (1-1) -
PRUEBA DE BENEDICT
Prueba de BENEDICT
Esta reacción identifica azúcares con
grupo reductores libres (C=O), como la
lactosa, glucosa, maltosa, celobiosa, etc.
Los disacáridos como la maltosa y

lactosa tienen grupos reductores libres,
excepto la sacarosa que los pierde
cuando se forma.
Esta prueba se basa en la capacidad del
carbohidrato
Cu2+ Cu1+
Ión Cúprico Ión Cuproso

(azul) (anaranjado)
Dependiendo de la concentración de óxido de

cobre y de la cantidad de cobre reducido.
El reactivo de Benedict consta de:
• Sulfato cúprico
• Citrato de sodio
• Carbonato anhidro de sodio
• NaOH (alcalinizar el medio)
Materiales
• Reactivos de Benedict
• Soluciones de carbohidratos
Procedimiento
• Colocar en un tubo de ensayo 1mL
de reactivo de Benedict y 5 gotas
de solución del azúcar.
• Caliente a ebullición por 5 min y
observar el cambio producido por el
calentamiento.
• Deje enfriar a temperatura ambiente.
Un precipitado cuya coloración varía entre
anaranjado y rojo con decoloración de la
solución indica prueba positiva.
DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS
POR EL MÉTODO DE LA ANTRONA
UNO DE LOS MÉTODOS MÁS
COMÚNMENTE USADOS
PARA CUANTIFICAR
AZÚCARES TOTALES ES EL DE
LA ANTRONA ESTE
PROCEDIMIENTO NOS
PERMITE DETERMINAR
CUANTITATIVAMENTE
HEXOSAS, ALDOPENTOSAS,
ÁCIDOS URÓNICOS YA SEA EN
FORMA LIBRE O FORMANDO
PARTE DE POLISACÁRIDOS.
En presencia del ácido sulfúrico ,los
carbohidratos experimentan deshidratación
convirtiéndose en furfural ó
hidroximetilfurfural.
intensidad o la energía de la luz que ha
pasado a través de la celda o tubo de
fotocolorímetro conteniendo la solución
coloreada.
Para esta determinación se debe fijar un valor de

longitud de onda que es donde el
La cuantificación de azúcares Complejo colorido muestra su máxima absorción,
se hace en base al color y además disponer de un blanco para calibrar el
desarrollado por la muestra aparato.
esta solución solamente contiene agua

destilada y reactivo de Antrona.
TÉCNICA:
MATERIALES: REACTIVOS:
1. ANTRONA AL 0.2% EN ACIDO
- Espectrofotómetro ó Fotocolorímetro equipado
con filtro rojo SULFURICO CONCENTRADO
- Celdas para espectrofotómetro ó
1. 2.- SOLUCION PATRON DE GLUCOSA :
Fotocolorímetro
- Tubos de ensayo. 3.-SOLUCION PROBLEMA:
- Mechero
- vaso de precipitación
- gradilla, pinzas para tubo de ensayo
- Hielo
PROCEDIMIENTO
1.-En una gradilla coloque 8
2.- En dos tubos agregar la
tubos de ensayo, adicionar
muestra diluida.
volúmenes de glucosa y agua.
4.-Una vez que todos los tubos 3.-Llevar a baño de hielo

están bien fríos, adicióneles 4 mi por 10 min.
de Antrona a cada uno.
6.-Cuando haya agitado todos los

tubos, transfiéralos a un baño de agua
5.-Agitar. que ya se encuentre hirviendo, y
déjelos ahí durante 10 minutos. Para
evitarla evaporación, tape la boca de
los tubos de ensaye con una canica.
7.- Después de ese tiempo, 8.-Cuando ya estén fríos los tubos, pase
saque los tubos del baño de al espectrofotómetro 6 fotocolorímetro
agua, y llévelos al baño de hielo para leer la .absorbancia de cada uno de
para que se enfríen ellos. Utilice los tubos especiales de
rápidamente lectura que le serán proporcionados,
fijando una longitud de onda de 640 nm.
REACCIÓN DE FEHLING
Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos. Si el glúcido que

se investiga es reductor, se oxidará dando lugar a la reducción del
sulfato de cobre (II), de color azul, a óxido de cobre (I), de color rojo-
anaranjado.
PROCEDIMIENTO
La reacción de Fehling se realiza del siguiente modo:
Se toman 3 ml de la muestra que se quiera analizar
Añadir 1 ml del reactivo Fehling A y 1 ml del reactivo Fehling B
El líquido del tubo de ensayo adquirirá un fuerte color azul.
Calentar el tubo al baño María o directamente en un mechero de
Laboratorio
La reacción será positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo y
aparece un precipitado
La reacción será negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono
azul-verdoso
Reactivo Fehling A: disolver 7 g CuSO4 · 5 H2O en 100 ml de agua destilada
Reactivo Fehling B: 35 g de tartrato de sodio y potasio + 12 g NaOH en 100 ml de agua

destilada
GRACIAS

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• Reaccionan con Fenilhidrazina.

• Tiempo de formación y precipitación.

1. Acidificar 5mL de la solución de los azúcares con 10 gotas

• Determinación de azúcares reductores

Los azúcares reductores son aquellos azúcares que

La glucosa es el azúcar reductor más abundante en

Precipita plata metálica en forma de espejo

Los disacáridos como la maltosa y

Ión Cúprico Ión Cuproso

Dependiendo de la concentración de óxido de

Para esta determinación se debe fijar un valor de

esta solución solamente contiene agua

4.-Una vez que todos los tubos 3.-Llevar a baño de hielo

6.-Cuando haya agitado todos los

Se basa en el carácter reductor de los monosacáridos. Si el glúcido que

Reactivo Fehling B: 35 g de tartrato de sodio y potasio + 12 g NaOH en 100 ml de agua

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