Presentación 1 SALMONELLA

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INFORME DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

ANALISIS DE SALMONELLA

PRESENTADO POR:
ESTEFANY CAVIEDES ARCINIEGAS
FICHA:
1806843
INSTRUCTOR:
JAIRO ALFONSO PERALES LLERENA
MATERIALES UTILIZADOS
• Pipetas estériles de 10 mL y 1 mL. • Autoclave
• Gradillas. • Frascos de schott de 250 ml
• Tubos de ensayo de 16 x 160 mm. • Agua peptonada (bufferada)
• Asa de cultivo. • Mechero
• Cajas de Petri de • Agares
• Baño María.
• Incubadora.
MUESTRAS A UTILIZAR
Muestra para detectar salmonella
• Rabadilla de pollo
• 25gr de la muestra
MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS
• Caldo Selenito Cistina
• Agua Peptonada (Bufferada)
• Agar MacConkey
• Agar XLD
• Agar Sulfito Bismuto
CALDO SELENITO CISTINA
Este caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el
selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica
excepto Salmonella spp, durante las primeras 8-12 horas de incubación.
Características del medio:
Color ámbar muy claro de transparente
a ligeramente opalescente.
AGUA PEPTONADA BUFFERADA
Medio de cultivo empleado para el preenriquecimiento de microorganismos a
partir de diferentes muestras. Es ampliamente utilizado en los protocolos de
control higiénico de alimentos para búsqueda de salmonella spp.
Características del producto:
Medio de cultivo deshidratado: Color beige claro, homogéneo, libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: Color ámbar claro.
AGAR MACCONKEY
AGAR XILOSA, LISINA Y
DESOXICOLATO
(XLD)
AGAR SULFITO BISMUTO
AGAR MACCONKEY
NEGATIVO PARA SALMONELLA POSITIVO PARA SALMONELLA
AGAR XILOSA, LISINA Y DESOXICOLATO
(XLD)
NEGATIVO PARA SALMONELLA POSITIVO PARA SALMONELLA
AGAR SULFITO BISMUTO
NEGATIVO PARA SALMONELLA POSITIVO PARA SALMONELLA
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE SALMONELLA
SPP.
Los métodos microbiológicos tradicionales para la detección de Salmonella,
no van encaminados al conteo de esta bacteria, se considera una técnica
cuyo resultado se expresa cualitativamente, determinando su presencia o
ausencia en diferentes matrices. La detección está basada en el empleo de
medios de cultivo selectivos y posterior caracterización de las colonias
mediante pruebas bioquímicas y serológicas.
ETAPA DE PRE-ENRIQUECIMIENTO.
El objetivo de esta etapa es normalizar metabólicamente las células de
Salmonella spp. que se encuentren en determinada matriz para su perfecto
desarrollo y todos los microorganismos compiten por los nutrientes. Se
realiza a partir de medios de cultivo no selectivos como agua peptonada.
Se toma 25gr de la muestra de pollo en un frasco schott de 250 ml con 225
ml de agua peptonada al 0,1%. Es necesario incubar la muestra durante 18
a 24 hora a 37°C.
ETAPA DE ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO EN
MEDIO LIQUIDO
Esta etapa estimula y favorece el crecimiento de Salmonella spp. inhibiendo
el crecimiento de la flora acompañante; los medios de cultivo utilizados son:
Caldo Selenito Cistina, inhibe el crecimiento de gran parte de la flora
intestinal competitiva (E. coli, Enterococos), sin afectar a Salmonella,
Shiguella, Pseudomonas o Proteus, mientras que la Cistina actúa
favoreciendo el crecimiento de Salmonella.
En 2 tubos de 10 ml de caldo selenito cistina se le agrega 1 ml de la
muestra del frasco de schott a cada tubo. Es necesario incubar de 18 a 24
horas a 37°C.
ETAPA DE AISLAMIENTO EN MEDIOS
SELECTIVOS.
Esta etapa permite la diferenciación de colonias de Salmonella de otras
bacterias, esta diferenciación radica en la composición de los distintos
medios que permiten el crecimiento de las colonias con aspectos
característicos. Para aislar y diferenciar las colonias de Salmonella, los
medios de cultivo Para aislar y diferenciar las colonias de Salmonella, los
medios de cultivo más empleados son: Agar XLD, Agar Sulfito Bismuto y
agar MacConkey. En estos medios las colonias las colonias típicas de
Salmonella se aprecian de las siguientes maneras:
En Agar Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD): Colonias rosadas con o sin
centro negro. Muchos cultivos de Salmonella sp pueden producir colonias
con un centro negro grande brillante o colonias casi completamente negras.
En Agar Bismuto Sulfito (BS): Colonias marrones, gris o negras, a veces
con brillo metálico. El medio es usualmente marrón al principio se torna
negro conforme se incrementa el tiempo de incubación, produciéndose el
llamado efecto “halo”.

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