LABORATORIO 8 Siembra Coprocultivo

LABORATORIO N°4
PRPARACION DE MEDIO DE CCULTIVO Y SIEMBRA DE COPROCULTIVO
OBJETIVO
Conocer el procedimiento a realizar cuando llega al laboratorio clínico una muestra de
coprocultivo, en cuanto a su siembra e incubación.
El examen de cultivo rectal se realiza introduciendo un hisopo (palillo recubierto de algodón

en sus puntas) en el recto. El hisopo se rota suavemente y luego se retira. El frotis extraído
en el hisopo se coloca en un medio de cultivo para estimular el crecimiento de
microorganismos. El propósito del examen es aislar e identificar organismos en el recto que
pueden causar síntomas y/ o enfermedad gastrointestinal.
Coprocultivo corriente: Se toma la muestra con torula en medio Cary blair. La muestra
debe provenir de deposición diarreica fresca (torular la zona con mucus, pus o sangre
idealmente)
MATERIALES
1. Muestra de deposición en tubo de transporte estéril con o sin tórula, en seco o con
Cary Blair.
2. Agar SS
3. Asa curva de cultivo corriente
4. Gradilla para tubos
PROCEDIMIENTO
1. Preparación de agar SS:
a. Preparar 100 mL de agar SS. Concentración final del agar SS 6%
p/v
b. Llevar a ebullición hasta que se disuelva. NO PONER EN EL
AUTOCLAVE.
c. Mezclar bien, verter en las placas de cultivo (15 a 20ml en cada
placa) y dejar solidificar.
2. Rotular muestra de Coprocultivo. Encender mechero y colocar alrededor placas
Petri con medio agar SS (secadas previamente en la estufa).
3. Marcar con lápiz demográfico la placa con agar, dándoles el mismo Nº de la
muestra.
4. Frente al mechero, retirar tórula del medio de transporte con una mano.
5. Con la otra mano abrir una placa Petri, tomándola por la base con medio, depositar
una porción de muestra en un extremo del agar, frotando la tórula suavemente.
Tapar la placa Petri.
6. Diseminar la muestra con el asa curva, flameada al rojo vivo sobre mechero Bunsen
previamente por toda la superficie del agar en diferentes direcciones, con el fin de
esparcir lo más posible la muestra.
7. Volver a flamear el asa
8. Llevar a estufa de cultivo las placas y tubos de cultivo para su incubación a 37°C
por 24 horas.
DESARROLLO
Los alumnos dispondrán de muestras de coprocultivos para que realicen el procedimiento
que corresponde a este tipo de muestra en cuanto a su siembra en el medio adecuado y a su
incubación.
ANEXO
Medio Cary-Blair
Uso indicado
El medio Cary-Blair está indicado para la conservación de muestras fecales y rectales que
contienen bacterias entéricas desde el lugar de recolección hasta el laboratorio para su
examen y cultivo.
Resumen y principios
Las enfermedades transmitida por alimentos y otras infecciones diarréicas representan un
importante problema para la salud pública.
A pesar de que las infecciones entéricas pueden estar ocasionadas por diferentes tipos de
bacterias, la mayoría de los cultivos de heces se utilizan para detectar Salmonella spp.,
Shigella spp., y Campylobacter spp.
El medio Cary-Blair modificado es una solución salina balanceada no nutritiva que

contiene fosfatos para proporcionar capacidad de tamponamiento, y sales de cloruro para
proporcionar iones esenciales que ayudan a mantener el equilibrio osmótico. El agar es un
agente solidificante que proporciona una textra semisólida al medio. La sal de sodio y la
L-cisteína proporcionan un entorno reducido. Se recomienda para mantener la viabilidad
de bacterias enterales durante el transporte hasta el laboratorio.2
Reactivos
Fórmula aproximada por litro del medio Cary-Blair modificado
Cloruro de sodio 5,0g L-cisteína 1,0g
Fosfato disódico 1,1g Agar bacteriológico 1,5g
Tioglicolato de sodio 1,5g Agua desionizada 1 litro
Cloruro de calcio 0,09g
Precauciones
Para uso diagnóstico in vitro
• Para un solo uso
• Todas las muestras clínicas pueden contener microorganismos infecciosos y deben
considerarse material biológico peligroso y manipularse con cuidado. Deben utilizarse
equipos de protección personal apropiados. Siga las pautas de bioseguridad y del
laboratorio cuando manipule muestras clínicas. 3-6
• Para ser utilizado por personal cualificado capacitado.
Instrucciones de uso
[1] Recolecte la muestra del recto o de heces frescas.
[2] Saque la tapa del vial e inocule el medio Cary-Blair con la muestra de hisopado rectal
o fecal.
[3] Tape el vial, cerrando herméticamente Registre la información del paciente en el
espacio proporcionado en la etiqueta del vial y transporte la muestra al laboratorio.
Cultivos de muestras en el laboratorio

En el laboratorio, las muestras deben ser procesadas para el cultivo bacteriológico usando
medios de cultivo recomendados y técnicas de laboratorio que dependerán del tipo de
muestra y del organismo que se está investigando. Para conocer los medios recomendados
de cultivo y las técnicas para el aislamiento y la identificación de bacterias para muestras
de hisopados clínicos consulte pautas y manuales publicados de microbiología
Agar Salmonella Shigella (SS)
El agar Salmonella Shigella (SS) es un medio moderadamente selectivo y diferencial para

el aislamiento, cultivo y diferenciación de Salmonella spp. y algunas cepas
de Shigella spp. El agar SS es una modificación del agar citrato de desoxicolato. Se
recomienda para analizar muestras clínicas y análisis de alimentos para detectar la
presencia de Salmonella spp. y algo de Shigella spp. SS Agar es un medio
moderadamente selectivo en el que las bacterias grampositivas son inhibidas por las sales
biliares, el verde brillante y el citrato de sodio. El agar Salmonella Shigella (SS) es muy
selectivo para las especies de Salmonella, pero inhibe algunas cepas de Shigella. Fue
desarrollado para ayudar en la diferenciación de fermentadores de lactosa y no
fermentadores de lactosa de muestras clínicas, alimentos sospechosos y otras muestras
similares.
Principio de agar SS
El agar Salmonella Shigella se compone de sales biliares, citrato de sodio, verde brillante,
digestión enzimática de caseína, extracto de carne de res, digestión enzimática de tejido
animal, tiosulfato, citrato férrico, rojo neutro y agar. La inclusión de sales biliares , citrato
de sodio y verde brillante sirve para inhibir organismos gram positivos, coliformes e
inhibir el enjambre de Proteus spp., Mientras permite que Salmonella spp. para crecer .
El extracto de carne de res, la digestión enzimática de caseína y la digestión enzimática de
tejido animal proporcionan fuentes de nitrógeno, carbono y vitaminas necesarias para el
crecimiento del organismo. La lactosa sirve como fuente de carbohidratos en Agar
Salmonella Shigella. La diferenciación de organismos entéricos se logra mediante la
incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan la lactosa producen
ácido que, en presencia del indicador rojo neutro, da como resultado la formación de
colonias rojas / rosadas. Los no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. El
tiosulfato de sodio y el citrato férrico permiten la detección de sulfuro de hidrógeno
mediante la producción de colonias con centros negros. El rojo neutro se vuelve rojo en
presencia de un pH ácido, lo que muestra que se ha producido la fermentación.

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