| 2021

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú. DECANA DE
AMÉRICA FACULTAD DE FARMACIA Y
AM BE R STUDI O

BIOQUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Departamento Académico de Quimica analitica y basicaa

Espectroscopía infrarroja: Uso y Cuidado del

espectofotómetro infrarrojo- Determinación e interpretación
Y
B

del espectro infrarrojo de la cafeína obtenida del té.

DESIGNED

Profesores: Alumnos:
Dr. Ruben Cueva Matta Cariga Olenka
Mestanza Dr. Norma Arquíñego Zárate Fiorella
www.reallygreatsite.co
Carlos Casas.
m
Vasquez Condori Gerardo
Ing. Ursula Villafuertes.
Salazar Quiñonez Imanol
Mendoza Allauca Jimmy
Introducción
Para la identificación y cuantificación de un analito en una
muestra desconocida, una de las técnicas mas usadas por
los Químicos Farmacéuticos es la espectroscopía, que
mediante el espectro electromagnético se da a conocer los
diferentes tipos de radiaciones electromagnéticas.
La radiación infrarroja representa una fracción del espectro
electromagnetico, y es muy usado para identificar grupos
funcionales a partir de las absorciones observadas en un
analito.
En esta oportunidad, trabajaremos con una muestra de té,
donde usaremos una técnica de extracción (Destilación por
arrastre a vapor) para extraer la cafeína del té e
identificarla mediante la técnica espectroscópica infrarroja
con el espectrofotómetro infrarrojo.
 Objetivos:
Conocer el fundamento de la espectroscopía
infrarroja.

Conocer el uso y el cuidado que se le debe dar a

un espectofotómetro infrarrojo.

Determinar e interpretar el espectro infrarrojo de

la cafeína obtenida en el té mediante una
 Marco
teórico
 ESPECTRO
ELECTROMAGNETICO

Es un barrido continuode diferentes

tipos de radiación electromagnética,
cada uno asociado a una energía en
particular, por ejemplo. Las energías
Infrarrojas provocan las vibraciones
moleculares

RADIACIÓN
ELECROMAGNÉTICA
La ecuación siguiente
Otra forma de describir la
Es la energía que se transmite por el
espacio.
frecuencia es el numero de
Debido a que la R.E tiene propiedades
ondulatorias puede ser caracterizado por como ondas (V), los numeros de onda
una onda. Por su frecuencia o por su longitud de tienen unidades del inverso de
onda, centimetros
La ecuación muestra que las longitudes
de onda cortas tienen altas energías y Las frecuencias altas, los numeros
altas frecuencias de onda grandes, y las longitudes de
Y longitudes de onda largas tienen bajas onda cortas se asocian con
energías y frecuencias bajas energias altas
 REGIÓN INFRARROJA

(latín: infra, que signifa "por debajo" del rojo)

La región infrarroja del espectro tiene

longitudes de ondas entre 8 x 10(-5) cm a 1 x
10 (-2) cm.
Los fotones infrarrojos ocasionan que los
grupos de átomos vibren con respecto a los
enlaces que los conectan.
Las moléculas absorben la radiación infrarroja
sólo a ciertas longitudes de onda y frecuencias.
La pocisión de la banda infrarroja puede
especificarse por medio del número de onda, el
cual corresponde al numero de ciclos en un cm.
 ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA

Estudia los fenómenos de interacción entre la radiación de origen infrarrojo y la materia.

La energia de la radiación es absorbida por una molécula que se encuentra vibrando en
su parte basal a la misma longitud de onda que la radiación infrarroja incidente,
provocando con ello un cambio en la intensidad de vibración.

Las distancias de enlace son una longitud promedio, porque el enlace de una
molécula se comporta como un resorte vibrante

Una tensión es una vibración que Una flexión es una vibración que no discurre a
discurre a lo largo del enlace lo largo del enlace y que cambia el angulo dell
y cambia su longitud del enlace enlace

Cada vibración de un enlace se porduce con una frecuencia caracteristica.

Al medirse experimentalmente la energia abosrbida por un compuesto en
particular, utilizando los numeros de onda, puede determinarse que tipos de
enlace posee
 ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA

Una condición necesaria para que se produsca una vibración es una molécula
al
incidir sobre ella un haz de energía infrarroja es la presencia de momentos dipolares
¿Qué es un momento
En una moléculadipolar?
los átomos vibran alrededor de sus posiciones de equilibrio. La
energía necesaria para generar una vibración depende de la energia de enlace y de
la masa de los átomos involucrados

El momento dipolar de un
Par poder producir una vibración enlace es el porducto entre el
implica que si se hace incidir valor de las cargas y la
fotones de energia adecuados distancia que las separa.
(En el infrarrojo) estos serán
absorbidos por aquellas uniones
que poseen un momento dipolar)
 ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA

No todas las vibraciones seran activadas en una molécula, solamente lo serán

aquellos enlaces en los que cambie el momento dipolar durante la interacción con
la energía infrarroja
¿Cuáles son los modos normales de
vibración?
Las moléculas se trasladan y rotan y sus atomos vibran, la vibración es muy
compleja pero puede considerarse la combinación de varios movimientos
vibratorios muy simples.
 FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROSCOPIA INFRARROJA

En una moléculas, los átomos no ocupan pocisiones fijas sino que vibran dentro de un
determinado espacio.
Estoscambiosde posiciónno pueden realizarse de manera discontinua sino que
requieren la absorción de cierta cantidad de energia (Región del infrarrojo)
Vibraciones entrelos átomos de una molécula: Vibraciones de valencia(Tensión o
elongación) y vibraciones de deformación (Torsión, felxión)
Los movimientos de los átomos de una molécula poliatómica pueden descomponerse en
vibraciones independientes llamadas normales de acuerdo a su grado de libertad
Cada modo de vibración tiene asignada una frecuencia que corresponde a una banda de
absorción en la región infrarroja.
No todas las vibraciones posiblesse pueden detectar en forma de radiaciones
infrarrojas, solo se perciben aquellas que implican un cambio en su momento dipolar
-
 ESPECTRÓMETRO INFRARROJO
Es el instrumento donde se lleva a cabo la interacción entre la materia (muestra) y la
radiación infrarroja. Actualmente se les conoce como espectrómetros de infrarrojo con
trasnformada de Fourier, o como espectrometría FTIR. El resultado de la interaccion
entre la muestra y la energia en infrarrojo se lee en un espectro de infrarrojo.
 ESPECTOFOTÓMETRO INFRARROJO

Mide la frecuencia de la luz infrarroja absorbida

por un compuesto
Es llamado tambien instrumento dispersivo
debido que dispersa la luz en todas las
frecuencias distintas y mide de
individual. manera
Los instrumentos dispersivos requieren prismas y
rejillas de difracción costosas deben alinearse y
calibrarse de manera manual con regularidad.
Solo se observa una frecuencia a la vez por lo
que requieren fuentes IR intensas y requiere de Diagrama de bloques de un espec trofotómetro infrarrojo dispersivo. El haz de la muestra pasa
a través de la celda de la muestra mientras que el haz de referencia pasa a través de la celda
2 a 10 minuos para escanear un de referencia que sólo contiene el disolvente. Un espejo rotatorio permite de manera alternada
espectro completo que la luz de cada uno de los dos haces entre al monocromador donde se comparan. La
tarjeta de registro grafica la diferencia en la transmitancia de la luz entre los dos haces.

En las muestras pueden colocarse una gota de liquido como

una pelicula delgada entre dos placas de sal hechas de NaCl
o KBr, puede molerse un sólido de KBr y prensarse en el haz
de luz.
 ESPECTRO INFRARROJO

Es un dibujo compuesto por bandas o picos, en donde en el eje x de las abcisas (o de

las X) entan representados todos los valores del intervalo de longitud de onda del
infrarrojo medio, ya sea en número de ondas o longitud de onda. Mientras que en el
eje de las ordenadas (o de las y) están presentes los valores de la intensidad de
absorción o de transmisión

Cada pico en un espectro de

infrarrojo representa un especifico
tipo de vibración. Por lo tanto,
podemos decir que el espectro es
una representacion de los estados
exitados porducidos al hacer un
barrido en todo el intervalos de
longitudes de onda en el infrarrojo
medio
la region del espectro situada entre 4000 y 1400 cm-1, es de gran utilidad para la
identificacion de la mayoria de los grupos funcionales presentes en las móleculas
organicas. La absorciones que aparecen en esta zona porvienen de las vibraciones
de estiramiento. La zona situada entre 1400 y 600 cm-1 es compleja debido a que
en ella aparecen una combinación de vibraciones de alargamineto, asi como flexion
 TÉCNICAS DE INTERACCIÓN
Dependiendo de la forma física de la muestra, se han diseñado dsipositivos para que la interacción de la
radiación infrarroja con la muestra se lleve a cabo de forma optima.

Reflexión Total Atenuada Reflexión Transmición

Difusa

Esta técnica es preferencialmente En esta técnica la

El principio de funcionamientos de
utilizada para muestras en forma muestra se coloca de
esta técnica es la penetración del
de polvo, se mezcla en forma manera que el haz
haz de infrarrojo en forma atenuada
homogénea en un polvo fino de de infrarrojo traspase
en la muestra, es decir, el haz lo
bromuro de potasio (KBr), totalmente, el dispositivo
hace penetrando una distancia leve
compuesto que no mas simple
en la muestra. Existen accesorios
que "rebotan" o se refleja una o ningun tipo deocasiona
señal espectral en para colocar de manera
varias veces en la muestra. el intervalo de radiación infrarroja adecuada la
en el infrarrojo medio muestra es el sujetar de peliculas
El accesorio de transmicion
es usado
 MUESTRAS SOLIDAS
Pueden prepararse de la siguiente forma

Pastilla Pelicula Suspención

. La muestra debe estar seca, se
Si la muestra a analizar es un En polvos o solidosreducidos a
coloca en un mortero de ágata a
3mg, se muele bien, despues se
solido de bajo punto de fusión, es particulas pequeñas pueden
agrega el haluro que puede ser posible calentar con cuidado sobre estudiarse como
polvo de NaCl, Kb (30 mg papel aluminio, la muestra entre una pasta
delgada. Una pequeña cantidad de
aproximadamente) y se procede dos ventanas (NaCl, KBr) en una muestra seca (5mg) es
nuevamente a pulverizar. Esta estufa o parrilla. pulverizada en un mortero de
mezcla se comprime en una ágata en un polvo muy fino,. Se
pastilladpra a presión para obtener añaden una gotas de Nujol para
una pastilla transparente.. formar la suspeción, con una
El NaCl absorbe a partir de 600 cm- espatula se toma un poco de la
1, el KBr absorbe a partir de 400 cm pasta y se coloca en una ventana
.1 y el CsI es transparente de 4000 de Na. Con otra ventana se
a 200 cm-1 comprime para obtener una
pelicula muy delgada.
APLICACIONES COMUNES
 La cafeina es un alcaloide de grupo de las xantinas. Actua como una droga
CAFEÍNA
psicoactiva y estimulante debido a su acción anatgonista no selectiva de los
receptores de adenosina

Es un alcaloide de la familia metilxantina, su nombre

sistemica es 1,3,7-trimetilxantina
En cuanto a la farmacinetica, tiene una absorción oral,
rectal, parenteral, alcanzando por via oral
concnetraciones máximas a los 60 minutos y con una
voda de eliminación de 1,5 a 10 horas.
Sus pirnicpales efectos son psicoestimulantes,
respiratorios y cardiovasculares.
Se metaboliza en el higado por el citocromo P1A2.
Procedimientos
 a) Obtención del espectro de la cafeína patrón

MATERIALES

- Espectrómetro
FTIR

- Muestra de cafeína
PROCEDIMIENTO

1.- Obtener el
espectro
Background

2.- Colocar una pequeña

cantidad de la muestra
de cafeina en el
portamuestra del
3. Obtener el espectro IR de la
cafeína
 4.- Restar el espectro
Background del espectro de
la cafeína para obtener el
espectro puro de la cafeína

5.- Guardar este espectro

 b) Extracción de la cafeína del té

Materiales y equipo
de laboratorio
- Tubo de ensayo
-Baño María
- Balanza
analítica
- Papel filtro
 b) Extracción de la cafeína del té

- Solución de
Compuesto
s acetato de
- plomo
- Muestra de
Cloroformo
Te
 b) Extracción de la cafeína del té

Procedimient
o 2) Filtrar y agregar 20
mL de la solución de
acetato de plomo al
1) Pesar 5 g de té, 10% y continuar
adicionar 100 mL de hirviendo por 5
minutos.
agua destilada y
hervir por 10 minutos
 b) Extracción de la cafeína del té

Procedimient
o
4)Extraer 3 veces con
5.0 mL de cloroformo
3)Filtrar y lavar el papel de cada vez recibiendo las
filtro con agua destilada, porciones en un
concentrar la solución hasta tubo de ensayo
pequeño volumen (20 a 30
mL)
 b) Extracción de la cafeína del té

Procedimient
o

5)Destilar la solución
para recuperar el
cloroformo, el residuo se
retira y se analiza
por IR.
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

Materiales y equipo
de laboratorio
Tablas de bandas de
absorción de grupos
funcionales en el infrarrojo
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

Materiales y equipo Mortero de

ágata
de laboratorio
Celdas de Espectrofotómetro
NaCl Infrarrojo

Espátul
a
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

Cloroform
Compuesto
o
s

Nujo
l
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

Procedimiento
Nujol
Aceite de
hidrocarburo
1) Preparar la
pesado
muestra usando un
Parafina
mortero de ágata y una
espátula para Picos mayores
obtener una pasta entre 2950-2800,
mezclando la 1465-1450, y
muestra obtenida 1380-1370 cm-1
con nujol.
C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

2) Limpiar las
celdas con
cloroformo o n-
hexano. Usar las
celdas de NaCl.
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

3) Colocar una
pequeña 4) Obtener el 5) Retirar la celda solo con
cantidad de la background nujol y se coloca la
muestra con nujol (espectro del celda con la muestra
en la celda nujol más el preparada y se obtiene el
formando una medio espectro de la muestra más
película muy ambiente). nujol y el medio ambiente.
delgada y luego
colocar en el
portamuestras.
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

-
. Espectro del nujol más
el medio ambiente
6) Restar el 7) Comparar
background para ambos
obtener solo el Espectro de la
espectros del
muestra más nujol y
espectro de la patrón y de la
el medio ambiente
muestra
muestra.

Espectro
de la
muestra
 C) Obtención del espectro de la muestra
problema.

Espectro
de la
muestra

Cafeín
a
Resultados
Fig. Espectro IR de la cafeína
Solo se marcaron 4 enlaces C-N, pero hay una totalidad de 10 enlaces C-N
Tabla . Número de onda según tipo de enlace
 Conclusiones
Se concluye que el fundamento de la espectroscopia infrarroja se
basa en la rotación/vibración de las moléculas producto de la
absorción de E° de la luz monocromática.
Se demostró que el uso y cuidado del espectrofotómetro
infrarrojo es indispensable conocer al momento de ejecutar las
operaciones a fin de causar daños físicos y materiales.
Se interpretó y logró identificar el espectro de la cafeína
extraída a partir del té.
Artículo
Objetivo: Validar el análisis cuantitativo por
espectroscopia infrarroja del ibuprofeno en
 MATERIALES REACTIVOS
Instrumento: Espectrofotómetro Pastillas de ibuprofeno
convencional FTIR Bruker IFS 66
Mortero de ágata
Estándar o patrón

99.8%

Cloroformo
Prensa para hacer pastilla Balanza analítica Bromuro de potasio
 PROCEDIMIENTO
A. Encender el espectrómetro IR
(calentar). Triturar hasta un polvo fino 200 a 300 mg de KBr utilizando
un mortero de ágata.

B. Preparación de la pastilla de KBr : Adicionar 1 a 2 mg de patrón de Ibuprofeno al KBr pulverizado y mezclar

bien hasta obtener polvo fino

Realizar la pastilla utilizando esta mezcla

C. Obtención de los espectros IR :
Espectrodel Background Obtener el espectro del background del IR sin
muestra en el equipo siguiendo lasinstrucciones del manual
Calibración del Espectrofotómetro del usuario.
Blanco pastilla de KBr (blanco)
Colocar la pastilla de KBr en el compartimiento de la muestra y obtener el espectro.

Espectrodel Ibuprofeno(estándar)
Colocar la pastilla de Ibuprofeno/KBr en el compartimiento de la muestra y obtener el
espectro.
Dilución
Espectrode la IbuprofenoComercial en
Colocar la pastilla de Ibuprofeno /KBr en el cloroformo
compartimiento de la muestra y obtener el espectro.
 ESPECTRO DEL IBUPROFENO (PURO) PARA
IDENTIFICAR LAS SEÑALES DEL EFECTO
INFRARROJO

Representa al grupo carbonilo

C=O

Banda intensa en 1721.5 cm-1

Su señal (estiramiento del enlace)
aparece a dicho número de onda.

Ibuprofeno
 PROCEDIMIENTO PARA LA
DETERMINACIÓN DEL P.A SIN LOS
EXCIPIENTES
Luego de haberpesado la
misma cantidad de muestra y
Espectros infrarrojos de un medicamento nacional (Sindol 600
mg), los excipientes luego de la extracción del p.a. y de una
pulverizado previamente, las solución de IBU en cloroformo.
tabletas de ibuprofeno, se le diluye
en cloroformo (10mL) con el fin de
eliminar los excipientes

Con agitación magnética durante

cinco min, se filtró en vacío con
Buchner y finalmente se
centrifugó durante cinco min a fin
de separar el remanente de los
excipientes

EL CLOROFORMO PROVOCA E N S A N C H A M IE N T OD E L A B A N D E D E T R A N
S M IT A N C IA D E L C = O
 Espectro infrarrojo luego de la
extracción del p.a., una solución
de IBU en cloroformo.

En todos los
casos se
determinó el
área de la señal
infrarroja
correspondiente al
grupo carbonilo
en el rango 1648-
1783 cm–1.
 Referencias
bibliográficas
 Yurkanis P. Determinación de la estructura de los compuestos organicos. Fundamentos de la
Quimica Orgánica. 3ª ed. Madrid : Pearson; 2015. p 339-368.
Wade J. Espectroscopia Infrarroja y Espectroscopia de masas. Quimica Organica. 7 ed. Mexcio:
Pearson, 2011. p 510-554
Mondragón P. Espectroscopia de infrarrojos para todos. CIATEJ [Internet]. 2017[Citado el 17 de
noviembre del 2021]; 1 (1): p 1-53
https://ciatej.mx/files/divulgacion/divulgacion_5a43b7c09fdc1.pdf
Berrio L. Derivatización de la cafeína. [Internet] Universidad del Quindío [Citado el 13 de octubre
del 2021] Disponible en: https://deporteysalud2.files.wordpress.com/2016/06/informe.pdf Skoog
DA, Holler FJ, Crouch SR. Principios de Análisis Instrumental. 6ª ed. México: Cengage Learning
Editores; 2008.
Gallignani M, Torres M, Ayala C, Brunetto M del R. Determinación de cafeína en café mediante
espectrometría infrarroja de transformada de Fourier. Rev Tec. 2008;31(2):159–68.
Ayala C. Diversdad estrategias de trabajo para la determinacion de cafeina en muestras reales de
interes basadas en el uso de la Espectrometria Infrarroja [Internet]. Ula.ve. 2012 [citado el 17 de
noviembre de 2021]. Disponible en: http://bdigital.ula.ve/storage/pdf/31784.pdf
López Luengo MT. El té verde. Offarm [Internet]. 1 de mayo de 2002 [citado 17 de
noviembre de 2021];21(5):129-32. Disponible en: https://www.elsevier.es/es-revista
- offarm-4-articulo-el-te-verde-13032231
PubChem. Lead(II) acetate [Internet]. [citado 17 de noviembre de 2021]. Disponibl
e en: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/9317
Hoja informativa sobre cloroformo [Internet]. 2017. [citado 17 de noviembre de
2021]. Disponible en: https://nj.gov/health/eoh/rtkweb/documents/fs/0388sp.pdf
Preguntas
 ¿Cuáles son los tipos de vibraciones en moléculas
poliatómicas?

¿Por qué es necesario la cafeína st?

La obtención de espectro IR se puede llevar a cabo a
través de 3 técnicas de medida, Una de estas es la
Reflexión Difusa, ¿En que consiste esta tecnica?

¿Conoces otros tipos de disolventes orgánicos y que

factores se deben tener en cuenta para su elección?