Chapitre III

Bioracteurs ou Racteurs Enzymatiques

Construits en gnral sur les mmes modles que les racteurs chimiques, ce sont des
cuves ou enceintes en verre (pour les modles de laboratoire) ou en acier inoxydable. Ils sont
pourvus pour raliser des ractions enzymatiques (racteurs enzymatiques) ou des ractions
cellules (fermenteurs ou cytoculteurs). Les racteurs biologiques sont aussi appels
bioracteurs. Le bioracteur permet de contrler les conditions de culture (temprature, pH,
aration, etc.), et de par ce fait, il permet de rcolter des informations de plus grande fiabilit.
Les bioracteurs industriels permettent la fabrication de nombreux produits : bire, yaourts,
vaccins, antibiotiques, anticorps, vitamines, acides organiques
Un fermenteur est construit en gnral sur le modle d'un bioracteur muni en plus
dun systme d'aration. Cependant, le terme de fermenteur qui est parfois utilis sans aucune
distinction par rapport celui de bioracteur, permet de diffrencier le type de culture
(bactrie, levure pour fermenteur et cellules animales pour bioracteur).
Les bioracteurs sont conus tel quils doivent assurer 4 grandes fonctions :
- bons transferts de matire
- bon transfert de chaleur
- maintien de la strilit
- suivi des paramtres et conduite de rgulations

III.1-Raction enzymatiques

La plupart des ractions biologiques sont catalyss par des substances particulires
appeles enzymes . Ce sont des catalyseurs biologiques appartenant la classe des
protines qui sont des polymres polypeptidiques. Ces macromolcules rsultent de la
polycondensation dacide a-amins du type : NH2-CHR-COOH.
Dans les ractions enzymatiques le ractif sappelle le substrat (S).

III.1.1. Mode de mise en uvre

Lewis a gnralis la notion dacide et de base par la dfinition suivante :

Une substance pouvant accepter une paire dlectron (lectrophile) est un acide
Une substance pouvant cder une paire dlectron (nuclophile) est une base.
La prsence de ces sites donneur-accepteur dans une substance permet la naissance de centre
actif appel sites actifs et qui sont la base de beaucoup de ractions chimiques et
biochimiques.

20
 Chapitre III

La spcificit de la catalyse enzymatique est du la ncessit, pour le substrat davoir

une forme convenable pour venir occuper une place bien dtermine dans la protine (site
actif de la protine), car lenzyme engage le substrat dans un complexe avant de catalyser
toute raction. La molcule de substrat transformer reconnat le site actif et vient sy fixer
par des liaisons plus ou moins fortes.
Les sites actifs sont des groupements fonctionnels OH, N=C, etc.

III.1.2. Utilisation des enzymes

Les deux modes dutilisation des enzymes sont soit sous forme denzyme soluble (le
milieu est homogne) soit sous la forme insoluble et lenzyme est immobilise sur un support
solide (le milieu ractionnel devient htrogne). De l on peut tudier deux mcanisme
cintiques :
La cintique enzymatique homogne qui est rgis par les lois de la catalyse homogne
La cintique enzymatique htrogne qui est rgis par les lois de la catalyse
htrognes.

III.2. Raction homogne et htrogne

III.2.1. Cintique enzymatique homogne

Lactivit catalytique dune enzyme dpend du pH (pH optimal). Cette activit

augmente avec la temprature, selon la loi dArrhnius, mais au-dessus dune temprature
limite, la structure de la protine est dnature et lactivit catalytique diminue. Une solution
enzymatique possde un nombre fixe de sites catalytiques actifs auxquels le substrat peut se
lier; aussi, partir dune certaine concentration en substrat, tous les sites sont occups et la
vitesse de raction devient indpendante de la concentration en substrat.
La loi de vitesse de Michaelis et Menten est une des premires et des plus simples relations
proposes pour modliser la cintique des ractions enzymatiques :
rmax S
r=
K m S
avec
r (mole m-3 s-1) vitesse de la raction,
rmax (mole m-3 s-1) vitesse maximale de la raction,
Km (mol/m3) constante de Michaelis et Menten,
[S] (mol/m3) concentration en substrat.

21
 Chapitre III

La vitesse maximale de la raction rmax est proportionnelle la concentration enzymatique

initiale de la solution (S0). Cette forme de relation peut tre explique par un mcanisme en
deux tapes :
La premire tape est la formation rapide et quilibre dun complexe activ enzyme-
substrat (ES*)
La seconde tape est la dcomposition de ce complexe activ en produit (P) et enzyme
rgnr (E).
La constante de Michaelis et Menten ; Km mesure laffinit de lenzyme pour le substrat,
qui est dautant plus grande que la valeur de la constante est faible.
La relation de Michaelis et Menten ne peut pas traduire le comportement cintique de
toutes les ractions catalyses par des enzymes. Des relations plus complexes ont t
dveloppes pour rendre compte des phnomnes dinhibition observs lorsque des
molcules, autres que le substrat, peuvent se lier rversiblement sur les sites actifs des
enzymes. Notons quil ny sera pas question de cette partie dans ce cours.

III.2.2.Cintique enzymatique htrogne

Pour sparer facilement les enzymes des milieux liquides aprs raction, on peut les
fixer soit la surface de particules non poreuses, soit lintrieur de particules poreuses. On
dit que les enzymes sont immobilises. Limmobilisation les rend plus stables grce la
prsence dun microenvironnement favorable (temprature, pH) et leurs liaisons avec le
support. Les mthodes dimmobilisation enzymatique classiques sont dcrites selon le
mcanisme de fixation de lenzyme au support. On distingue 3 principales mthodes
dimmobilisation :
- Limmobilisation par adsorption
- Limmobilisation par liaison covalente
- Limmobilisation par inclusion
Les lois de vitesse sont de la mme forme que celles non immobiliss, mais les
vitesses r et rmax sexpriment, lors dune fixation en surface, en mol.m-2.s-1 de surface de
contact liquide-solide ou encore en mol.kg-1.s-1 de masse de support. Si lenzyme est incluse
dans des particules poreuses, les vitesses r et rmax sexpriment en mol.m-3.s-1 de phase solide
ou en mol.kg-1.s-1 de support.
Toutefois, lorsque les particules sont de forme sphrique ou cylindrique, le passage
dune unit lautre seffectue simplement partir de la taille et de la masse volumique des
particules solides.

22
 Chapitre III

Les concentrations en substrat et produit, prendre en compte dans les quations

cintiques, sont alors les concentrations linterface liquide-solide, dans le cas dune
immobilisation en surface, ou les concentrations dans la phase liquide qui imbibe les pores
des particules solides, dans le cas dune inclusion.
Dans les deux cas dimmobilisation, on doit tenir compte du phnomne de diffusion
linterface liquide-solide ou gaz solide.
La phase liquide ou gaz contient le substrat. La phase solide contient lenzyme qui
peut tre sous forme de blocs, de membrane, de film ou de billes. Les diffrentes substances
prsente dans la phase liquide doivent tre transportes (transfrs) jusqu lenzyme
immobilis. Ce transport de matire reprsente ltape limitante de la cintique : le transport
nest limitant que sil franchie linterface solide-liquide. Cest le phnomne de diffusion qui
est dcrit par la loi de Fick.

III.2.3. Diffusion de matire

Le flux de matire J est dfini comme la quantit de matire (ou mole) qui traverse une
section de surface (cm2) pendant lunit de temps (s).
La premire loi de Fick dit que :
J = - D grad S
D : coefficient de diffusion ou diffusivit molculaire du solut dans le solvant (cm2.s-1).
grad S : gradient de concentration lendroit ou est dtermin le flux.
dS
grad S = x : direction de la diffusion
dx

Milieu plus Milieu moins

gradient de diffusion

Concentr en solut Concentr en solut

diffusion du solute

Si lenzyme est fix lintrieur du solide (membrane), la diffusivit du substrat

lintrieur du support peut tre diffrente de la diffusivit de la molcule en solution, du fait
dinteractions avec le support, on appelle Deff cette diffusivit effective :
dS
J= - Deff .
dx

23
 Chapitre III

III.3. Racteurs enzymatiques

Les ractions enzymatiques sont conduites gnralement dans des racteurs dont le choix du
design et de la configuration est fait en considrant plusieurs paramtres tels que le type de la
raction mise en uvre, la nature de la molcule dintrt, la quantit produire, la forme de
lenzyme utilise (libre ou immobilise) et son cot. Ainsi, il existe des racteurs industriels
pour la catalyse homogne (enzymes libres) quand le cot du catalyseur est suffisamment
faible pour permettre son utilisation unique et pour la catalyse htrogne (enzymes
immobilises) qui permet la rcupration et la rutilisation du catalyseur quand celui-ci est au
contraire coteux.

III.3.1. Fonctionnement discontinus

Dans les bioprocds, les ractions sont gnralement conduites dans des racteurs ferms o
le catalyseur (sous forme libre ou immobilise) est mis en contact avec les substrats dans une
cuve ferme agite pendant un temps donn durant lequel le pH et la temprature sont
contrls. La rcupration des produits qui suit chaque cycle de biotransformation se fait,
gnralement, par filtration, par centrifugation ou par prcipitation. Malgr sa simplicit, ce
type de racteur comporte plusieurs inconvnients inhrents aux racteurs ferms tels que la
variabilit de la qualit des produits, le cot de main duvre li la frquence des
dmarrages et des arrts, lutilisation de grands volumes, la perte des enzymes souvent actives
en fin de cycle (pour les enzymes solubles) et la ncessit dune tape supplmentaire de
sparation des enzymes du milieu ractionnel.

III.3.2. Fonctionnement continus

Il existe, par ailleurs, plusieurs types de racteurs enzymatiques qui fonctionnent en continu.
Parmi les diffrents racteurs continus on distingue :
- Les racteurs continus parfaitement agit
- Les racteurs lit fixe
- Les racteurs lit fluidis
- Les racteurs membranaires (REM)
Notons que les trois derniers types sont considrs comme tant des racteurs en
fonctionnement piston.

24
 Chapitre III

III.3.3. Racteurs limitation diffusionnelle

III.3.3.1. Transfert de matire liquide-solide dans le cas dun film non poreux

Cest le cas dune enzyme immobilis la surface dun support. Il se produit un

quilibre appel couplage, entre la raction biochimique et le transfert de matire liquide-
solide entre la vitesse de la raction enzymatique et la bioraction. Ce couplage est observ
lorsquun substrat ragit la surface de particules solides sur lesquelles sont fixs une enzyme
ou des micro-organismes. Le substrat se dplace du cur de la phase liquide linterface
liquide-solide o il est consomm par bioraction. Un rgime quasi -stationnaire est
rapidement atteint, et la concentration en substrat linterface [Si] stablit une valeur telle
que la vitesse de transfert de matire soit gale la vitesse de la bioraction. En choisissant
ici, pour illustrer ce couplage, une raction enzymatique obissant la loi cintique simple de
Michaelis et Menten, lgalit des vitesses permet alors dcrire :

k l a ' S S i

rmax S i

K m Si
avec kl (m/s) coefficient de transfert de matire liquide-solide,
a(m2/kg) aire spcifique massique du solide (enzyme),
rmax(mol.s-1. kg-1) vitesse spcifique maximale de bioraction par unit de masse de support
solide,
[S] (mol/m3) concentration en substrat au cur du liquide,
[Si] (mol/m3) concentration en substrat linterface liquide-solide,
Km (mol/m3) constante de Michaelis et Menten
Apres quelques transformations, la relation ci-dessus peut tre mise sous forme
adimensionnelle suivante :

K m Si S S
1 i = Da i

S S S S
rmax
avec Da = appel : nombre de Damkohler
k l a , S

Le nombre de Damkohler reprsente le rapport entre la vitesse maximale de raction et la

vitesse maximale de transfert de matire. Transfert de matire et raction tant en srie, si
leurs vitesses sont trs diffrentes cest le phnomne le plus lent qui sera ltape limitante du
processus.

25
 Chapitre III

Un nombre de Damkohler trs grand devant 1 (Da >>>1) correspond une vitesse
de raction leve devant la vitesse de transfert, ce dernier phnomne est donc
limitant. La relation prcdente montre alors que [Si] est trs petit devant [S] et la
vitesse du processus est donc gale k l a ' S

Un nombre de Damkohler trs petit devant 1 (Da <<<1) ; cest la raction

biochimique qui est le phnomne limitant, [Si] est trs voisin de [S] et la vitesse du
rmax S
processus est donc gale
K m S
Quand le nombre de Damkohler nest ni trs grand, ni trs petit devant 1, la relation ci-
S i
dessus, du second degr par rapport [Si] permet le calcul de
S

K

4 m
S
i 1

= Da
Km
1 1
S 1
S 2 S K
2

Da m 1

S

Le signe choisir devant la racine carre est de manire ce que le rapport soit positif.
La concentration linterface en substrat [Si] permet alors le calcul du facteur defficacit
e , dfini classiquement comme le rapport entre la vitesse observe du processus en prsence
de la limitation diffrentielle et la vitesse maximale de raction en absence de la limitation
diffrentielle.

Si K m

S 1 S
e =

Ce facteur vaut ici :
Si K m

S S
On a bien sr toujours intrt travailler avec un facteur defficacit proche de 1, en
choisissant des conditions hydrodynamiques pour lesquelles la vitesse de transfert de matire
est grande devant la vitesse de bioraction (nombre de Damko hler trs infrieur 1).

III.3.3.2. Transfert de matire liquide-solide dans le cas dun support solide poreux

Ce cas est observ lorsque des enzymes ou des micro-organismes sont inclus
lintrieur de particules poreuses ou de gel ; on le rencontre aussi lors du dveloppement de
films microbiens (biofilm). Les phnomnes de transfert de matire intra particulaire et de
consommation de substrat par raction sont ici simultans et non successifs comme

26
 Chapitre III

prcdemment. Il en rsulte, lintrieur de la particule, un gradient de concentration en

substrat et donc de vitesse de consommation de celui-ci.
En rgime quasi-stationnaire, un bilan de matire diffrentiel sur le substrat conduit aux
quations diffrentielles suivantes :
en configuration sphrique (de rayon z)
d 2 S 2 d S
Deff r
dz 2 z dz

en configuration film plan :
d 2S
Deff 2 = r
dx
avec les conditions aux limites suivantes :
[S] = [Si] pour x = L ou z = R ; continuit de la concentration en substrat linterface
liquide-solide ;
d S dS
= 0 ou = 0 pour z = 0 ou x = 0 ; arrt de la diffusion au centre de la
dz dx
particule ou lextrmit du film.
Dans ces relations, L (m) reprsente lpaisseur du film, R (m) le rayon de la particule, z
et x les coordonnes courantes, [S] (kg/m3) la concentration en substrat dans la phase liquide
qui imbibe le milieu solide poreux, [Si] (kg/m3) la concentration en substrat dans la phase
liquide la surface de la particule, r (mol.s-1 .m3) la vitesse spcifique de bioraction par unit
de volume de support solide et Deff (m2/s) le coefficient de diffusion effectif du substrat dans
le milieu poreux. Ce coefficient Deff dpend de la diffusivit du substrat ainsi que de la
tortuosit et de la porosit du solide.
A partir de la connaissance de la loi de vitesse : r = rm ([S]), la rsolution des quations ci-
dessus conduit au facteur defficacit e , dfini comme le rapport entre la vitesse observe et
la vitesse rm ([Si]) quaurait la raction biochimique en labsence de gradient de concentration
intra particulaire en substrat.
Dans le cas dune bioraction obissant la loi cintique de Michaelis et Menten : Le facteur
defficacit e est alors fonction du rapport Km/[Si] et dun module de Thiele dfini :

en configuration sphrique, par : = R rm

3 Deff K m

en configuration plane, par : = L rm

Deff K m

27
 Chapitre III

Les paramtres intrinsques rm et Km de la bioraction sont difficiles dduire dexpriences

de laboratoire, car les phnomnes de diffusion et de raction ne peuvent jamais tre
dcoupls; un traitement numrique est ncessaire pour les extraire des variations de la vitesse
observe en fonction de la concentration en substrat [Si].

III. 4. Dimensionnement des bioracteurs

Lors de la mise en uvre d'une bioraction , la premire tape consiste dimensionner les
diffrents lments constitutifs du bioracteur en vue d'optimiser le procd. Dans le gnie
chimique et biochimique, l'opration de mlange est le paramtre critique du procd
responsable des phnomnes de transferts intervenant au sein du racteur.

III.4.1. Agitation mcanique et force de cisaillement

Les mobiles dagitation, dont le seul rle est de mlanger la phase liquide, peuvent tre
classs en deux catgories: les mobiles cisaillants et les mobiles non cisaillants.
Pour lagitation mcanique des cuves standards, il existe deux types de mobiles dagitation
avec des proprits diffrentes :

III.4.2. Mobile rotatif dbit radial (cisaillant)

Le mouvement gnr par cette turbine est radial, puis axial lorsque le liquide rencontre la
paroi de la cuve, le cisaillement cr par la turbine accrot la turbulence et donc le
mlange du liquide. Ce type dagitation est traumatisant pour les cellules, il les projette
contre les parois de la cuve ce qui entrane un fort cisaillement et une bonne efficacit de
transfert de loxygne, ce type de mobile convient bien aux bactries et aux levures. ex :
turbine pales droites ou incurves (six pales plates ou turbine Rushton).

III.4.3. Mobile rotatif dbit axial (non cisaillant)

Lagitation gnre un mouvement axial du liquide qui est moins traumatisant et peu de force
de cisaillement. Grce une action de pompage, les cellules et le fluide sont pousss
dlicatement au fond de la cuve dans une sorte de tourbillon (comme pour lhlice de bateau)
puis ils remontent le long des parois. Les collisions et les zones stagnantes sont alors
minimises. Par contre, lefficacit de transfert de loxygne nest pas bonne. Ce type de
mobile convient pour les cellules fragiles. ex : hlice type marine

28
 Chapitre III

hlices marine
turbine pales droites
ou incurves

Pour les bioracteurs fonctionnant ncessitant une aration, la circulation dair joue les
deux rles (aration et agitation). On lappelle lagitation pneumatique ou air-lift. Elle est
moins "traumatisante" pour les suspensions cellulaires trs fragiles et elle est adapte pour les
processus arobies. Le gaz d'oxygnation lui seul cre la turbulence et permet le maintien
des cellules en suspension homogne tout en assurant des transferts de matire corrects. La
gomtrie du bioracteur est conue avec soin de faon ce que le transfert d'oxygne soit le
plus efficace possible (la gomtrie du fond de la cuve est de forme conique).
Par ailleurs, le volume de milieu ne constitue qu'une partie du volume total de la cuve. On
garde environ 1/5me 1/4 du volume total libre pour tenir compte de l'augmentation du
volume due l'injection d'air, lagitation et la formation de mousse en cours de
fermentation.

III.4.4. Temps de mlange

Le temps de mlange tM est le temps pour rendre la phase liquide homogne en

concentration la suite dune perturbation.
En rgime turbulent tM est donn par les relations :
Pour une hlice marine
2
6 dc
da
tM =
N
Pour une turbine
2
4 dc
da
tM =
N

29
 Chapitre III

On admet quun racteur est parfaitement mlang si le temps de mlange est suprieur au
temps de demi-raction.
En configuration standard, le temps tM est atteint ds 55 tr/mn avec une hlice et ds 35 tr/mn
pour une turbine.

III.5.Hydrodynamique des racteurs

III.5.1. Nombres caractristiques adimensionnels

Chacune de ces valeurs pouvant tre exprime partir des trois units fondamentales
(masse, longueur, temps), le thorme de Vaschy-Buckingham permet de transformer
lexpression de la puissance, dans une premire approche, en 3 nombres adimensionnels lis
les uns aux autres :

III.5.1.1. Le nombre de Reynolds (Re)

Il caractrise le rapport entre les forces dinertie et les forces de viscosit. Re permet
de prdire le type dcoulement laminaire ou turbulent ; En rgime laminaire (Re < 10) ; En
rgime turbulent (Re > 104)
d a2 N l
Re =

avec da (m) diamtre de lagitateur,
N (tr/s) vitesse de rotation,
(kg/m3) masse volumique du liquide,
(Pa.s) viscosit du liquide.
En rgime laminaire, le produit Np*Re est constant ; en rgime turbulent, cest le nombre de
puissance qui est constant : Np = 6 pour la turbine et 0,4 pour lhlice marine. Lhlice marine
consomme donc moins de puissance que la turbine.

III.5.1.2. Le nombre de Froude (Fr)

Il caractrise le rapport entre les forces dinertie et les forces de gravit. Fr permet de
prdire la formation dun vortex

-si Fr 1 (pas de vortex),

-si Fr 3 (vortex),

N 2 da
Fr
g

30
 Chapitre III

Avec
g : acclration de la pesanteur. g = 9,81 m/s2
Pour viter la formation du vortex, les cuves sont quipes de contre-pales appeles : chicanes

III.5.1.3. Le nombre de Puissance (NP)

Il caractrise le coefficient de traine de lagitateur dans le fluide et reprsente ainsi

lexpression de la puissance consomme
P
NP
N3 d5

P (Watt): puissance mecanique consomm par le moteur de lagitation

III.5.1.4. Le nombre de Weber (We)

il caractrise laction des forces de tension superficielle.

N 2 d a3
We

Avec : : la tension superficielle (en kg.s-2 ou N.m-1)

III.5.1.5. Relation entre les nombres

Ces quatre nombres sont relis par l'quation suivante :

N P K Re Fr We
x y z

Avec K, x, y et z : paramtres relis la gomtrie des agitateurs, ces paramtres sont obtenus
par exprimentation.

Les caractristiques de puissance Np en fonction du type d'agitateur et en fonction du

nombre de Reynolds sont donnes par la courbe caractristique du mobile dagitation.

31
 Chapitre III

Nombre de puissance de diffrents mobiles dagitation en fonction du nombre de

Reynolds

En rgime laminaire, le produit Np*Re est constant ; en rgime turbulent, cest le

nombre de puissance qui est constant : Np = 6 pour la turbine et 0,4 pour lhlice marine.
Lhlice marine consomme donc moins de puissance que la turbine.

III.6. Cuve mcaniquement agite standard

Bioracteur standard (cuve mcaniquement agit)

Dans la pratique industrielle, les bioracteurs sont construits sous de nombreuses

formes de cuves et de mobiles dagitation. La configuration appele cuve standard assure une

32
 Chapitre III

bonne homognit de la phase liquide. Le rle des contres pales appels chicanes est dviter
la formation dun vortex autour de laxe du mobile dagitation.

III.7. Racteurs lit fixe

Un autre moyen d'augmenter la concentration bactrienne ou damliorer lactivit de

lenzyme consiste les fixer sur des supports. Le support d'immobilisation sont des particules
ou billes sur lesquelles sont immobiliss des cellules ou des enzymes. Il est compact dans
une colonne au travers de laquelle le milieu peut tre inject. Les deux extrmits du racteur
sont fermes par des grilles ou des plaques perfores et permettant la percolation dune phase
liquide, mais empchant tout mouvement de la phase solide disperse. Lalimentation peut se
faire de bas en haut ou de haut en bas selon le type de construction.
Le racteur lit fixe permet la fois davoir une importante productivit et un produit final
exempt denzymes tant donn que celles-ci sont confines dans le racteur, vitant ainsi une
tape finale de sparation du biocatalyseur et du produit.
Le racteur lit fixe constitue la configuration classique utilise dans la conduite de ractions
catalytiques htrognes grande chelle. Il est cependant important de noter que ce racteur
conduit une forte perte de charge ainsi quau risque de colmatage du lit et dimportantes
limitations diffusionnelles ce qui rduit ses performances
Si les particules sont de forme sphrique, la fraction de racteur occupe par la phase solide
est de lordre de 0,6 et celle occupe par la phase liquide est de 0,4
La perte de charge subie par le liquide la traverse dun lit de particules sphriques peut
tre estime par la relation dErgun :

P 150 l U l 1 2

1,75 l U l2 1 l

l

H d p2 3
l dp l3
P : perte de charge (Pa)
H : hauteur du lit (m)
dp : diamtre des particules (m)
Ul : vitesse superficielle du liquide (m/s)
l : fraction de lit occupe par la phase liquide gale 0,4 max
l : viscosit du liquide (Pa.s)

III.8. Racteur lit fluidis

Les particules support avec leurs cellules fixes (ou enzymes) sont en mouvement,
fluidises par un flux d'coulement.
33
 Chapitre III

Il est constitu dun tube de section circulaire rempli de particules solides actives, mais
forcment plac verticalement et dont seule une extrmit est ferme par une grille ou une
plaque perfore. Lactivit est assure par des bactries ou des enzymes qui sont fixes sur un
support mobile, particules granulaires fines et poreuses comme le sable ou le charbon actif. La
phase liquide traverse le racteur de bas en haut et comme les particules solides ne sont pas
confines, ds que la vitesse superficielle du liquide dpasse la valeur appele vitesse
minimale de fluidisation, le lit sexpanse et les particules solides se dplacent librement
lintrieur de la suspension liquide-solide. On dit alors que le lit est fluidis; les particules
solides sont animes dun mouvement du flux ascendant rapide et rgulier de l'effluent qui
assure leur mlange.
Ce systme minimise les phnomnes de colmatage des colonnes et d'emprisonnement
des gaz produits. Il assure un meilleur transfert de matire et de chaleur.

34
 Chapitre III

Srie de TD N3

Exercice 1
Dans un bioracteur, on hydrolyse le sucrose la temprature ambiante par catalyse
enzymatique selon la raction suivante

sucrose
sucrase produit
Avec un dbit volumique constant Q de 25 litre/ mn et une concentration initiale CAo
en sucrose de 10 M, on obtient un taux de conversion XA de 90 % de sucrose.
La vitesse r dhydrolyse du sucrose est dcrite par la loi de Michaelis-Menten de la
forme :

k C (mol)
rA 1 A avec CA concentration de sucrose
1 K C (litre) (min)
M A

ou k1 = 0,2 min-1 et KM = 1,0 (mol/liter)-1,

1- Ecrire le bilan matire du sucrose qui se dcompose selon la raction; sans variation de
volume dans chacun des racteurs suivant:
Racteur ferm uniforme
Racteur ouvert parfaitement mlang en rgime permanent
Racteur en coulement piston en rgime permanent
Calculer le temps de sjour ou de passage pour chacun des trois racteurs. Conclure.

Exercice 2

La glucoamylase hydrolyse le maltose en glucose selon la raction

Maltose + H2O -----------> 2 glucose
On souhaite raliser un racteur enzymatique continu, impliquant la glucoamylase , enzyme
(Enzyme michaelinne) ayant les paramtres cintiques, dtermins 40 C, suivants: r max =
0,02 mole de maltose (mn)-1 (litre)-1 et KM = 35 mmole /litre. On veut traiter en continu la
solution de maltose 1 mole/litre avec un dbit de 1 litre/mn en ayant 95 % de conversion de
maltose. Pour chaque cas, ci-dessous, faire un bilan massique (dbit, volume du racteur
constants et rgime permanent) et calculer le volume du racteur mettre en uvre pour
obtenir la conversion souhaite.
1. dans le cas dun racteur parfaitement agit
2. dans le cas dun racteur piston.

35
 Chapitre III

Exercice 3

On met en uvre dans un racteur enzymatique semi-continu l'hydrolyse d'une solution de

saccharose par l'invertase. Dterminer le temps coul quand le volume du racteur devient 10
fois gal au volume initial.
On donne :
- Lenzyme est michaelinne
- Concentration d'alimentation du substrat S0 = 50 g/l
- Concentration du substrat dans le racteur Sc = 10 g/l
- Volume initial du racteur V0 = 1 litre
- Dbit d'alimentation Q = 5 l/h
- KM = 0,5 g/l
- Vitesse spcifique maximale de l'hydrolyse rmax = 2,5 g/h/mg d'enzyme
- Concentration d'enzyme E = 2 mg/l

Exercice 4

Une solution de lactose est convertie par une -galactosidase en glucose et galactose dans un
racteur agit continu
a Combien faut-il attendre pour atteindre le rgime stationnaire ?
b Ecrire les quations des bilans matires du lactose et du glucose en rgime dynamique.
c - Comment varient les concentrations des diffrents composants du milieu ltat
stationnaire?
d Dterminer la relation entre la vitesse d'hydrolyse du lactose et la vitesse de production du
glucose aprs la stabilisation du systme.
Exercice 5
L'Acide 6-Aminopnicillanique (6-APA) sert de point de dpart la fabrication de
nombreuses pnicillines synthtiques plus actives que la pnicilline naturelle. Il peut tre
synthtis par action de la pnicilline amidase sur la benzylpenicilline. Un racteur agit
discontinu est utilis pour la synthse enzymatique de la 6-APA partir de la
bnzylpenicilline.
a Ecrire les quations des bilans matires du substrat et du produit.
b On suppose que l'enzyme est Michaelinne et le volume du racteur constant, dterminer
la concentration du substrat en fonction du temps.
c Quel serait le temps ncessaire pour convertir 20 % de bnzylpenicilline en 6-APA?
On donne : rmax = 2 g/l/h, S0 = 200 g/l, KM = 10 g/l

36
 Chapitre III

Exercice 6

La glucoamylase hydrolyse le maltose en glucose selon lquation :

Maltose + H2O ------------> 2 glucose
Les paramtres de la glucoamylase , dtermins 40 C sont rmax = 10 mol de maltose.mn-1
(mg denzyme)-1 et KM = 35 mmol/l. Lhydrolyse enzymatique (Enzyme michaelinne) 40
C du maltose est mise en uvre dans un racteur discontinu de 1000 litres. La concentration
initiale du maltose S0 est de 1 mol/l et la concentration en enzyme E est de 1 g/l.
Quel est le temps ncessaire pour que le maltose soit hydrolys 99 %.
Problme 1
Une laiterie reoit du lactosrum. Ce fluide contient du lactose et une quantit
importante de protines solubles. Il est prvu d'en faire un concentrat de protines par
ultrafiltration, puis de valoriser le permat dans un bioracteur en hydrolysant le lactose dans
ce dernier en glucose et galactose. On suppose le volume du bioracteur constant.
Il a t dcid deffectuer lultrafiltration et lhydrolyse enzymatique du lactosrum en
continu (Racteur Continu Parfaitement Mlang CSTR). Lhydrolyse reoit 46 894 litres par
jour de lactose et on suppose que ce dbit est constant. La concentration de lactose lentr
du racteur est de 148,7 mM. A la fin de lhydrolyse, 80 % de lactose sont transforms.
Calculer le volume ractionnel installer et la quantit denzyme (-galactosidase) mettre
en uvre si lquation de la cintique de lhydrolyse enzymatique est de la forme

k2.CEn z.CLa c
rLa c
Km C
1 0La c
CLa c C
La c
K1
Nous allons admettre que le travail se fasse avec deux quipes raison de 8 h/jour
chacune. La dure de fonctionnement des installations est limite 10 h/j, le reste du temps
tant consacr au nettoyage et la maintenance.
Les paramtres ont les valeurs suivantes :
Paramtre Valeur Unit
K1 3 mM
K2 12,2 mmole.g-1.min-1
Km 53,9 mM
CEnz 8 g.l-1
Dbit volumique Q 104 l.jour-1
Cenz est la concentration denzymes immobiliss avec laquelle nous allons travailler.

37
 Chapitre III

Les enzymes risquent dtre contamins par des microorganismes, qui les dgradent. Il
est propos de combattre les infections en introduisant de temps en temps une charge dun
certain dsinfectant dans le racteur CSTR en fonction. Lhydrolysat contamin par le
dsinfectant ne pourra pas tre vendu, mais ce dernier sera vacu du racteur par leffluent
aprs un certain temps.
En admettant que lon introduise une quantit de dsinfectant suffisante pour porter sa
concentration initialement 5 g/l, calculer le temps quil faut pour que la concentration de
dsinfectant soit tombe 0,5 ppm. Calculer ensuite le volume de hydrolysat qui sera
contamin avec plus de 0,5 ppm de dsinfectant. Utiliser les rsultats de la partie prcdente
Le propritaire de la laiterie veut renoncer au procd en continu, et vous demande de
recalculer le volume ractionnel et la quantit denzymes dont il aurait besoin si lhydrolyse
se faisait en batch. Aprs chaque cycle de production, on vidange le racteur, on le rince et
on le remplie nouveau de permat et de biocatalyseur. Ces oprations - dentretiens - durent
30 minutes environ.
a) Formulez un bilan de masse sur le lactose qui vous permettra de calculer le temps
de raction ncessaire pour une charge.
b) En comparant le temps pour un cycle complet avec le temps de fonctionne-ment de 10 h/j,
et en admettant que lon utilise toujours 8 g/l denzymes, calculer le volume ractionnel et la
masse denzymes ncessaire pour traiter le lactosrum.
Problme 2
Pour calculer le temps ncessaire (temps de sjour) pour transformer 100 moles de
glucose en thanol dans un bioracteur, on peut supposer pour simplifier que le bioracteur est
un racteur batch (racteur ferm) de volume constant gal 0,01 m 3. Cette hypothse
simplificatrice permet destimer le temps t ncessaire pour atteindre un taux de conversion
final Xf de 0,3. Selon cette hypothse, le temps t ( temps de sjour) est donn par :
X f

t = NA0 VdX.r
0

NA0 : est le nombre de mole de glucose au dbut de la fermentation, V le volume du

bioracteur, X le taux de conversion, Xf le taux final de conversion de la raction et r la
vitesse de raction de la fermentation.
1- Ecrire lquation de bilan de matire du ractif A (glucose) de concentration initiale CAo qui
se dcompose selon la raction; sans variation de volume dans le racteur ferm uniforme.
Retrouver lexpression du temps de sjour t donne ci-dessus.
38
 Chapitre III

2a- Calculer le temps t en minute si la vitesse de raction r est du premier ordre et est de la
forme:
r = k C A0 (1-X)
Ou ; k = 1 h-1 la constante de raction et CA0 = 104 mole/m3 la concentration initiale.
2b- Calculer le temps t en minute si la raction est de type enzymatique et est de la forme
k CA
r
1 K2 C A

avec C A = CA0 (1-X)

On donne : k = 1h-1, CA0 = 104 mole/m3, et K2 = 10-5 m3/mole
Problme 3
La glucose isomrase, immobilise sur support solide, est utilise industriellement
pour produire des sirops de glucose enrichis en fructose. La raction disomrisation du
glucose en fructose est quilibre, et la constante dquilibre, qui varie peu avec la
temprature, est voisine de 1.
On se propose de concevoir une unit permettant disomriser 45 % du glucose dun
sirop de glucose de concentration 2 800 mol/m3. La production souhaite est de 20 m3/h.
Cette raction disomrisation par enzyme immobilise a t tudie par Illanes et coll.
La vitesse de la raction augmente avec la temprature, mais la stabilit de lenzyme diminue
avec ce paramtre. La temprature optimale est voisine de 60 oC, cest cette valeur que nous
choisirons. Pour cette temprature, la constante dquilibre vaut 1.
Dautre part, la cintique de cette raction quilibre suit la loi de Michaelis et Menten
rmS
r
K m S
;

Sous rserve de prendre comme concentration en substrat [S] la diffrence : [S] = [G]
- [Ge]
o [G] reprsente la concentration en glucose de la solution et [Ge] = 1400 mol/m3, la
concentration en glucose lquilibre, calculer la concentration en glucose la sortie du
racteur, dduire la concentration du substrat la sortie du racteur.
A 60 oC, les paramtres intrinsques de la loi cintique sont :
rm = 17,52 10-3 mol.s-1 kg-1 (kg de biocatalyseur)
Km = 7 815 mol/m3.

39
 Chapitre III

Ces deux valeurs ont t obtenues dans des conditions exprimentales telles que la vitesse
de la bioraction tait ltape limitante de lisomrisation. Par ailleurs, les particules de forme
sphriques de biocatalyseur ont une masse volumique s = 1 800 kg/m3.
Le bioracteur qui simpose naturellement est un racteur lit fixe. Dans une premire
tape, un dimensionnement approch peut tre effectu avec les hypothses simplificatrices
suivantes : la phase liquide est en coulement piston dans le racteur, les rsistances dues aux
transferts de matire sont ngligeables. Dans ces conditions, soit H la hauteur du racteur, M
la masse de biocatalyseur quil renferme, [So] la concentration en substrat lentre du
racteur, Q le dbit volumique de substrat et z la cote courante dans le racteur.
Calculer la masse du biocatalyseur requise pour cette conversion et quel volume occupe telle
dans le bioracteur. Dduire le volume total du racteur.
Les auteurs cits prconisent un rapport H/dc de 3,5 . Calculer pour ce cas le diamtre
dc de la cuve puis sa hauteur H. Quelle est dans ces conditions, la vitesse superficielle de la
solution ?
La prise en compte du transfert de matire liquide-solide passe par le calcul du nombre
de Damkohler Da, du rapport Km/[S] et du facteur defficacit e . mais dans un racteur lit
fixe, la concentration en substrat varie et donc les paramtres cits plus hauts varient aussi
Sa masse volumique de la solution de glucose est de 1320 kg/m3 la viscosit de la
solution est 1.9 10-3 Pa/s, le coefficient de diffusivit D = 0.52 10-9 m2/s, calculer le
coefficient de transfert de matire liquide-solide Kl et la surface spcifique dchange a
Pour cela on applique les relations suivantes :
2/3 0.82 0.38
K d p Ul d p U l l
l l l 0.765 0.365
U l l D l l

a= 6
d p l

on donne pour un lit fixe l =0.4

Dduire les valeurs de Da, du rapport Km/[S] et du facteur defficacit e lentr et

la sortie du racteur. Conclure.
Le facteur defficacit li la diffusion intra particulaire se calcule en configuration
sphrique partir du module de Thiele et du rapport Km/[S]. si la diffusivit effective du
glucose est gale 1.5 10-10 m2/s, calculer le module de Thiele . Si on suppose que les
concentrations linterface solide-liquide et au cur du liquide identiques calculer le rapport
Km/[S] et le facteur defficacit lentr et la sortie du bioracteur. Conclure

40
 Chapitre III

Pour garder au racteur les performances souhaites, que suggriez- vous

41