TD 2
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1/Éclatement de la cellule : Les méthodes de fractionnement subcellulaire consistent à séparer les différents
composants cellulaires par destruction de la membrane plasmique, puis par désorganisation de la cellule
(L’homogénat)
Techniques: physiques : ultrasons ou hautes pressions.
chimiques : choc osmotique, action de détergents ou d’enzymes.
mécaniques : pistons et cylindres comme tube de Potter.
-L’homogénat est conservé à 0°C pour la Préservation maximale des structures et fonctions des différents
constituants cellulaires et des enzymes.
-Quel est le contenu de l’homogénat ?
*fragments provenant des ruptures membranaires (plasmique, réticulum, Golgi) se refermant immédiatement
pour donner de petites vésicules fermées appelées microsomes
*série de centrifugations de plus en plus longues et donnant des champs de gravité de plus en plus élevés pour
fractionner l’extrait initial en une série de culots et surnageant.
*technique préparatoire rapide, simple et permettant de manipuler des grandes quantités de matériel sans
donner cependant de fractions parfaitement
pures.
Protocole:
*Dépôt d’une fine couche de l’homogénat à la surface du gradient contenu dans le tube à centrifuger : solution
de saccharose ou de glycérol dont la concentration varie de façon régulière et décroissante du bas vers le haut
du tube, variation linéaire et continue ou bien discontinue et par paliers.
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Université Oran 1, Faculté de Médecine, Service d’Histologie-Embryologie
Travaux Pratiques et Dirigés de Cytologie des étudiants en première année de Médecine
Année Universitaire : 2018-2019 Dr Belarbi-Amar N Dr Mebarki K
*Migration des particules dans le gradient jusqu’à une position d’équilibre qui correspond à sa densité
*Obtention d’anneaux le long du tube (centrifugation zonale) qui peuvent être récupérés séparément par
aspiration.
Technique : permettant d’obtenir une séparation des constituants cellulaires en une seule étape.
2/Séparation des organites par centrifugation sur gradient de densité auto formé:
Cette technique permet de séparer les molécules indépendamment de leur taille et avec des différences
de densité très faibles exemple : fait la différence entre molécule d’ADN standard et d’ADN lourd
(artificiel )
II-Culture cellulaire.
1/Conditions à respecter :
• Respect d’une asepsie stricte : ajout éventuel d’antibiotiques aux milieux de culture.
-Étude de l’influence de différents facteurs sur les cellules : substrats, température, substances chimiques,
médicaments…
-Suivi de précurseurs du métabolisme marqués pour étudier leur devenir dans la cellule ( isotope).
- Nombre de passage : limité sauf pour les cellules embryonnaires (,2 ou 3) pour les cellules épithéliales,
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c/ Cellules hybrides: obtenues par fusion chimique ou physique et possédant, dans un premier temps, deux
noyaux séparés appelées hétérocaryons . donnant après mitose des cellules hybrides dans laquelle tous les
chromosomes se rassemblent pour former un unique noyau.
Exemple: Le jumelage de la bactérie et de l'ADN hybride va produire l'insuline.
QCM:
1/ Apres l'éclatement de la cellule, (la ou les réponses justes):
a- à 37 ºc .
c- à moins 0ºc.
d- à 0°C.
3/ Concernant la Séparation des organites par ultracentrifugation différentielle (la ou les réponses
justes):
e- est une série de centrifugations de plus en plus longues donnant des champs de gravité de plus en plus
élevés.
4/Concernant la Séparation des organites par ultracentrifugation sur gradient de densité préformé (la
ou les réponses justes):
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d- permettant d’obtenir une séparation des constituants cellulaires en une seule étape.
5/ Concernant la séparation des organites par centrifugation sur gradient de densité auto formé (la ou
les réponses justes):
d- Cette technique permet de séparer les molécules indépendamment de leur taille et avec des différences
de densité très faibles.
e- on utilise une solution concentrée de chlorure de césium (CsCl).
6/ Conditions à respecter sur Culture cellulaire (la ou les réponses justes):
a- Température 37ºc.
b- pH alcalin.
b- pH neutre.
c- Cellules hybrides.
d- Cellules épithéliales.
e- Cellules embryonnaires.