Les Bonnes Pratiques Du Laboratoire B.P.L

Les bonnes pratiques
du laboratoire
B.P.L
Définition
Les bonnes pratiques de laboratoire se définissent
comme une démarche qualité basée sur des
principes visant à assurer une qualité optimale au
sein du laboratoire. Le but des bonnes pratiques
de laboratoire est de responsabiliser le personnel
travaillant dans le laboratoire et de lui faire
prendre conscience des problèmes.
Conception d’un laboratoire de
microbiologie alimentaire
Le laboratoire d’analyse microbiologique doit être à même de réaliser des
analyses de routine (contrôle de qualité par rapport à une norme, évaluation
de la qualité des matières premières), mais aussi de permettre l’évaluation
de la qualité des opérations de transformation ou de préparation, la
recherche et maîtrise des éventuels points critiques (HACCP), l’évaluation
de l’efficacité des traitements antimicrobiens de conservation, d’emballage
ou de nettoyage etc. Les microorganismes susceptibles d’être rencontrés
appartiennent pour la plupart aux groupes 1, 2 et éventuellement 3. Ceci
impose donc des règles fondamentales de conception et de fonctionnement
du laboratoire d’analyse microbiologique.
Conception des laboratoires
Le laboratoire doit être composé de trois parties
principales :
 le laboratoire proprement dit où sont réalisées les analyses
 la salle de préparation des milieux de culture
 la laverie qui traite les produits et matériels utilisés pour
l’analyse et qui fournit la verrerie et le matériel propre et
stérile. La laverie et la salle de préparation peuvent ne
constituer qu’une seule pièce.
Les bonnes pratiques de laboratoire
Les opérateurs peuvent être

confrontés laboratoires à
différents agents biologiques.
Qu’est-ce qu’un agent biologique?
La plupart des agents biologiques sont des êtres vivants
microscopiques, invisibles à l’œil nu. Ils sont présents
partout, chez les êtres vivants, dans l’environnement et dans
les milieux de travail. On les classe en grandes catégories :
bactéries, champignons microscopiques, virus, parasites et
prions. Ils sont identifiés notamment par leur nom latin de
genre et d’espèce. Par exemple, dans Legionella
pneumophila, Legionella est le genre et pneumophila
l’espèce. Lorsqu’un agent biologique est désigné par son
nom latin, celui-ci s’écrit en italique, ce qui n’est pas le cas
pour le nom français (légionelle par exemple).
Important
- Connaitre la virulence des agents

biologiques manipulés
- Connaitre les voies de pénétration dans
l’organisme
- Connaitre les bonnes pratiques de
laboratoire pour minimiser les risques
Classement des agents biologiques en fonction de leur pathogénicité
Les voies de pénétration dans l’organisme
Voie aérienne
Principale voie d’entrée, mais également la plus insidieuse, elle se fait par
inhalation d’aérosols créés au cours des manipulations :
 par gouttelettes de grandes tailles (> 5µm), se projetant sur des distances
courtes (< 1m) et pouvant se déposer sur les conjonctives, muqueuse
buccale ou nasale (virus de la grippe, VRS (virus respiratoire syncitial :
infecte poumons et voies respiratoires), pneumocoque, B. pertussis…),
 par aérosols (particules < 5µm) sous forme de gouttelettes asséchées ou de
poussières contenant des micro-organismes assez résistants dans
l’environnement, véhiculables sur des distances assez longues (plusieurs
dizaines de mètres) et pouvant être inhalés (agents infectieux de la
tuberculose, de la variole, de la rougeole, du charbon…).

Voie digestive
Les interdictions de pipeter à la bouche, de boire, de manger

et de fumer dans les laboratoires ont considérablement
diminué le risque de contamination par ingestion.
Cependant, le non-respect des règles élémentaires d’hygiène
(porter ses mains à la bouche sans les avoir lavées, sucer un
stylo…) constitue encore un risque non négligeable.

Voies cutanée et oculaire
La contamination peut se faire par projection
dans l’œil, ou sur peau saine et surtout lésée
mais également à la suite d’une piqûre,
coupure, morsure, griffure. Certains
pathogènes peuvent traverser la peau saine,
soit naturellement (Shistosoma mansoni), soit
si un produit facilite le passage par la peau
(DMSO qui perméabilise la peau).
La connaissance des agents biologiques et de leur
classement conditionne les règles de prévention,
notamment les niveaux de confinement 1, 2, 3 ou 4,
requis pour leur manipulation

Laboratoires de confinement L1
Aménagement du laboratoire
Dans un laboratoire L1, le matériel biologique manipulé n’est pas
pathogène. Il s’agit par conséquent d’un laboratoire standard, séparé des
autres locaux par au moins une porte, et ayant les caractéristiques
suivantes :
 un espace convenable pour chaque manipulateur,
 des surfaces lisses (murs, sols, paillasses), imperméables, faciles à
nettoyer et résistantes aux agents de nettoyage et de désinfection,
 une absence d’endroit difficilement accessible au nettoyage (exemple :
plinthes),
 un évier ou lavabo pour permettre le lavage des mains,
 un vestiaire. Un autoclave doit être placé dans le même bâtiment.
Aucun équipement spécial de confinement n’est exigé.
Bonnes pratiques
 connaître les consignes de sécurité et la conduite à tenir en cas d’accident,
ne pas boire, manger, fumer, se maquiller,
 ne pas décapsuler les crayons feutre avec les dents,
 désinfecter les plans de travail avant et après manipulation et après toute
contamination,
 recouvrir la paillasse d’un papier absorbant (type BenchKote®),
 se laver les mains avant et après manipulation,
 porter obligatoirement une blouse et en fonction de la manipulation des gants,
des lunettes et / ou un masque,
 utiliser dans la mesure du possible du matériel jetable,
 éviter l’emploi d’aiguilles et de matériel en verre,
 récupérer les aiguilles et matériels coupants dans une boite spéciale
imperforable « safetybox »; ne pas recapuchonner les aiguilles
Bonnes pratiques
 ne pas pipeter à la bouche, utiliser un système d’aspiration mécanique,
 éviter la production d’aérosols et de projections :
 une suspension de micro-organismes ne doit jamais être mélangée par aspirations
et refoulements successifs à travers une pipette et chassée brutalement,
• il est recommandé de faire s’écouler les liquides le long de la paroi du récipient,
sous la surface du liquide à remettre en suspension.
 utiliser des tubes bouchés lors de centrifugations,
 ne pas stocker d’animaux non concernés par l’expérience en cours,
 dans le cas où des OGM du groupe 1 sont manipulés :
• décontaminer les équipements (centrifugeuse, étuve…) avant leur sortie du local,
• inactiver le matériel contaminé et les déchets ; si l’inactivation est effectuée à
l’extérieur du local, transporter le matériel dans un conteneur étanche et fermé.
Les spécifications signalées par un astérisque (*) sont optionnelles :
Il est important de noter que certaines spécifications, qui précédemment

étaient obligatoires, sont devenues optionnelles. Cela ne signifie nullement
que le libre choix est laissé aux laboratoires d’appliquer ou non ces
mesures de confinement ou de protection. Ce sont les démarches
d’évaluation des risques et de validation des méthodes de travail, prenant
en compte tous les facteurs de risque (agents pathogènes, protocoles
expérimentaux, étapes…) qui détermineront l’application des mesures
optionnelles.
Mesures techniques
Conception
 marquage du niveau de confinement et pictogramme « danger biologique » à

l’entrée du laboratoire,
 séparation des autres locaux par au moins une porte,
 accès réglementé et verrouillable. Les noms du responsable du L2 et des

personnes autorisées seront affichés sur la porte,
 vestiaire séparé destiné aux effets personnels,

Mesures techniques
Conception
 présence d’une vitre permettant de voir les occupants,
 moyen de communication avec l’extérieur du local (téléphone, interphone) : ne

pas l’utiliser avec les gants servant à l’expérience en cours,
 espace convenable pour chaque manipulateur,
 ventilation du local par un système d’aspiration mécanique,
 surfaces lisses (murs, sols, paillasses) facilement lavables et décontaminables,
 absence d’endroit difficilement accessible au nettoyage (ex. : plinthes),
 portes et fenêtres devant être fermées pendant l’exécution du travail,
 étanchéité* du local pour en permettre la désinfection.

Mesures techniques
Aménagements internes
 surfaces imperméables à l’eau, faciles à nettoyer et résistantes aux agents de
nettoyage et de désinfection,
 évier ou lavabo permettant le lavage des mains. Pour les nouvelles installations,
les robinets devront être à commande non manuelle,
 poste de sécurité microbiologique de type II (PSM type II),
vêtements de protection appropriés,
 cages, moyens de contention, procédures d’euthanasie appropriées aux espèces
animales,
 moyens de lutte efficace contre les rongeurs et insectes,
 autoclave* de préférence à l’étage et facilement accessible,
 centrifugeuse à proximité* : utiliser des tubes étanches,
 étuve à proximité*.
Pratiques opératoires
 former et informer sur les risques pour la santé et les prescriptions en matière d’hygiène (y
compris pour le personnel chargé de la maintenance/nettoyage).
 appliquer les bonnes pratiques de laboratoires :
• porte une blouse. Il est conseillé d’en avoir une facilement identifiable (par ex. de couleur).
La retirer après manipulation et la laisser dans le local.
• porter les équipements de protection individuelle (gants ; masque (1)(2), lunettes(1)…)*
• porter des chaussures différentes des chaussures de ville,
• se laver les mains avant et après manipulation,
• ne pas décapsuler les crayons feutre avec les dents,
• ne pas pipeter à la bouche ni sentir les cultures,
• ne pas boire, manger, fumer, se maquiller et manipuler des lentilles de contact,
• recouvrir la paillasse d’un papier absorbant (type BenchKote®),
• éviter l’emploi d’aiguilles et de matériel en verre,
• conserver les échantillons/agents pathogènes/corps/cadavres d’animaux dans des zones
sécurisées et clairement identifiées,
• ne pas garder d’animaux non concernés par l’expérience en cours,
• désinfecter les plans de travail avant et après manipulation et après toute contamination.
(1) si risque chimique associé et (2) si risque de contamination aérienne
 éviter la création d’aérosols et de gouttelettes :
◦ il est obligatoire de réaliser les opérations générant des aérosols
sous PSM de type II : broyage de tissus, ouverture des récipients
après centrifugation, homogénéisation…
◦ lors de la remise en suspension d’une préparation de micro-
organismes, les aspirations et refoulements successifs à travers la
pipette devront être réalisés avec précaution.
◦ il est recommandé de faire s’écouler les liquides le long de la
paroi du récipient, sous la surface du liquide à remettre en
suspension.
◦ utiliser de préférence des tubes bouchés lors de centrifugations.
 afficher les consignes de sécurité et la conduite à tenir en
cas d’accident et en cas de contamination ; s’assurer
qu’elles sont connues.
 rédiger des procédures décrivant :
◦ les méthodes de travail,
◦ les mesures de protection et de prévention,
◦ la liste des opérations à effectuer sous poste de sécurité microbiologique,
◦ les moyens et mesures de nettoyage et de désinfection.
 décontaminer les équipements (centrifugeuse, étuve…) avant les
interventions de maintenance, établir une attestation de décontamination
et la communiquer aux intervenants,
 mettre en place un système de confinement approprié et validé pour le
transfert des échantillons hors L2,
 ne pas recapuchonner les aiguilles : récupérer les aiguilles et matériels
coupants dans une boite spéciale imperforable « safetybox »,
 privilégier l’utilisation du matériel jetable,
 inactiver* les déchets et les agents biologiques présents dans les
effluents. Si l’inactivation est effectuée à l’extérieur du local, transférer
le matériel dans un conteneur étanche et fermé en respectant le double
emballage.
Les spécifications signalées par un astérisque (*) sont optionnelles :
Il est important de noter que certaines spécifications, qui précédemment

étaient obligatoires, sont devenues optionnelles. Cela ne signifie nullement
que le libre choix est laissé aux laboratoires d’appliquer ou non ces
mesures de confinement ou de protection. Ce sont les démarches
d’évaluation des risques et de validation des méthodes de travail, prenant
en compte tous les facteurs de risque (agents pathogènes, protocoles
expérimentaux, étapes…) qui détermineront l’application des mesures
optionnelles.
Mesures techniques
Conception
 marquage du niveau de confinement et pictogramme « danger
biologique » à l’entrée du laboratoire,
 accès réglementé et verrouillable. Les noms du responsable du L3 et

des personnes autorisées seront affichés sur la porte,
 vestiaire séparé et destiné aux effets personnels,
Mesures techniques
Conception
 accès au laboratoire par un sas comportant :
• des portes asservies ne pouvant pas s’ouvrir simultanément
• des vestiaires pour permettre de changer de blouse et de s’équiper des

protections individuelles nécessaires aux manipulations.
 maintien du L3 en dépression par rapport aux zones voisines. Prévoir une

alarme pour signaler tout changement de pression,
 présence d’une fenêtre, incassable et fermée hermétiquement, permettant de

voir les occupants,
 filtration de l’air, entrant et extrait, par un filtre absolu type HEPA,
 moyen de communication avec l’extérieur du local (téléphone, interphone): ne

pas l’utiliser avec les gants servant à l’expérience en cours,
Mesures techniques
Conception
 espace convenable pour chaque manipulateur,
 ventilation du local par un système d’aspiration mécanique,
 surfaces lisses (murs, sols, paillasses) facilement lavables et
décontaminables,
 absence d’endroit difficilement accessible au nettoyage
(ex. : plinthes),
 local devant être fermé hermétiquement pendant l’exécution
du travail,
 étanchéité du local pour en permettre la désinfection.
 système de ventilation de secours*.
 énergie électrique de secours* vivement conseillée.
Mesures techniques
 surfaces imperméables à l’eau, faciles à nettoyer et
résistantes aux agents de nettoyage et de désinfection,
 vêtements de protection appropriés,
 évier ou lavabo à commande non manuelle permettant la

récupération des effluents. Placer à proximité un
distributeur de papier absorbant pour le séchage des mains
 douche* pour permettre la décontamination du personnel en

cas d’accident (de préférence dans le sas ou à proximité du
L3).
Mesures techniques
 système permettant l’inactivation des effluents des éviers et des
douches,
 poste de sécurité microbiologique de type II (PSM type II),
 cages, moyens de contention, procédures d’euthanasie appropriées aux
espèces animales,
 moyens de lutte efficace contre les rongeurs et insectes,
 autoclave à double entrée ou à proximité immédiate si mise en place de
procédures validées et contrôlées.
 centrifugeuse et étuve à l’intérieur du local,
 congélateur permettant de stocker le matériel biologique sur place. Il est
conseillé de l’équiper d’une alarme,
 équipement de base (petit matériel de type vortex, bain-marie,
centrifugeuse de
 paillasse…) spécifique au L3 et marqué.
Mesures techniques
 former et informer sur les risques pour la santé et les
prescriptions en matière d’hygiène (y compris pour le
personnel chargé de la maintenance/nettoyage),
 tenir à jour un cahier d’enregistrement de la date des
expériences et du matériel biologique manipulé,
 il est recommandé de ne pas travailler seul,
Mesures techniques
• porter une blouse. Il est conseillé d’en avoir une spéciale, facilement
identifiable (par ex. de couleur), qui sera retirée après manipulation et
restera dans le sas, L’utilisation de blouses jetables est vivement
recommandée. Dans le cas contraire, les blouses devront être
autoclavées avant d’être envoyées à la blanchisserie.
• porter obligatoirement des gants, une coiffe et des surbottes ; le port de
masque(1)(2) et / ou de lunettes(1) est optionnel et dépend de la
manipulation,
• porter des chaussures différentes des chaussures de ville,
• se laver les mains avant et après manipulation,
• ne pas décapsuler les crayons feutre avec les dents,
Mesures techniques
• ne pas pipeter à la bouche ni sentir les cultures,
• ne pas boire, manger, fumer, se maquiller et manipuler des lentilles de
contact,
• recouvrir la paillasse d’un papier absorbant (type BenchKote),
• éviter l’emploi d’aiguilles et de matériel en verre,
• conserver les échantillons/agents pathogènes/corps/cadavres d’animaux
dans des zones sécurisées et clairement indiquées,
• ne pas garder d’animaux non concernés par l’expérience en cours,
• désinfecter les plans de travail avant et après manipulation et après
toute contamination.
Mesures techniques
 éviter la création d’aérosols et de gouttelettes :
• il est obligatoire de réaliser les opérations générant des aérosols sous
PSM de type II : broyage de tissus, ouverture des récipients après
centrifugation, homogénéisation…
• lors de la remise en suspension d’une préparation de micro-organismes,
les aspirations et refoulements successifs à travers la pipette devront
être réalisés avec précaution.
• il est recommandé de faire s’écouler les liquides le long de la paroi du
récipient, sous la surface du liquide à remettre en suspension.
• utiliser des tubes bouchés est obligatoire lors de centrifugations.
Mesures techniques
 afficher les consignes de sécurité et la conduite à tenir en cas d’accident
et en cas de contamination ; s’assurer qu’elles sont connues.
 rédiger des procédures décrivant :
• les méthodes de travail,
• les mesures de protection et de prévention,
• la liste des opérations à effectuer sous poste de sécurité
microbiologique,
• les moyens et mesures de nettoyage et de désinfection.
 décontaminer les équipements (centrifugeuse, étuve…) avant les
interventions de maintenance, établir une attestation de décontamination
et la communiquer aux intervenants,
Mesures techniques
 mettre en place un système de confinement approprié et validé pour le
transfert des échantillons hors L3,
 marquage avant enlèvement, des cadavres d’animaux contaminés par
des agents biologiques ou de leur contenant (mention de la maladie
présumée),
 ne pas recapuchonner les aiguilles : récupérer les aiguilles et matériels
coupants dans une boite spéciale imperforable « safetybox »,
 privilégier l’utilisation de matériel jetable,
 inactiver les déchets et les agents biologiques présents dans les
effluents. Si l’inactivation est effectuée à l’extérieur du local, transférer
le matériel dans un conteneur étanche et fermé en respectant au
minimum un double emballage. (Notamment en cas d’absence
d’autoclave double entrée).
Hygiène et sécurité liées aux substances chimiques
 J’ai lu et j’ai compris les pictogrammes de risque
Conseils d’utilisation d’un PSM de type II
 Avant les manipulations

• Mettre en route le PSM et attendre 15 minutes.
• Anticiper l'ordre des manipulations afin d'éviter les entrées/sorties de
matériels du volume de travail, c'est-à-dire regrouper le matériel
nécessaire à l'ensemble des manipulations près du PSM.
• Retirer ses bijoux (bagues, bracelets, montres...).
• Se laver les mains soigneusement.
• Nettoyer le plan de travail et les parois avec un détergent non agressif :
éthanol à 70 % ou spray désinfectant (eau de Javel interdite).
• Nettoyer les matériels nécessaires aux manipulations avec l'éthanol à 70
% et les disposer dans le volume de travail du PSM. Veiller cependant à
ne pas trop encombrer l'enceinte pour éviter de perturber le flux
laminaire.
 Pendant les manipulations

• N'utiliser dans l'enceinte que du matériel à usage unique stérile
(pipettes graduées stériles, anses stériles...).
• Effectuer des gestes calmes à l'intérieur du volume de travail et surtout
lors du passage dans la veine de garde (introduction et retrait des mains
du volume de travail).
• Maintenir dégagées les grilles de reprise d'air.
• Réaliser les manipulations dans le centre de la surface de travail et
surtout pas au-dessus des grilles de reprise d'air (au moins à 10 cm de
la grille avant), en évitant les mouvements rapides et gestes brusques.
• Jeter le matériel souillé dans le sac à déchets biologiques.
• Ne pas placer un bec Bunsen sous le PSM pour ne pas perturber le flux
laminaire et ne pas détériorer les filtres par la chaleur.
• Ne pas tousser, ni éternuer en direction de la zone stérile.
• Ne pas projeter de liquide ou de solide sur la face interne du filtre.
 Après les manipulations

• Ranger le plan de travail et s'assurer de n'y laisser
que les portoirs à tubes.
• Nettoyer le plan de travail, les parois et les
accessoires avec de l'éthanol à 70 % ou spray
désinfectant (eau de Javel interdite).
• Laisser fonctionner le PSM en position « travail »
encore 15 à 20 minutes.
 Après les manipulations

• Ranger le plan de travail et s'assurer de n'y laisser
que les portoirs à tubes.
• Nettoyer le plan de travail, les parois et les
accessoires avec de l'éthanol à 70 % ou spray
désinfectant (eau de Javel interdite).
• Laisser fonctionner le PSM en position « travail »
encore 15 à 20 minutes.
 Maintenance périodique
Nettoyer à fond le PSM régulièrement, y
compris le bac de rétention situé sous le plan de
travail. Ce nettoyage doit se faire avec le PSM
éteint pour éviter que les lingettes soient
aspirées et aillent colmater le filtre.
Équipements de protection individuelle
Les vêtements de protection
Les vêtements de protection ont pour fonction d’éviter que la peau, et donc
l’utilisateur, entre en contact avec des substances biologiques. Ils
préviennent également la propagation des germes aussi bien dans le cadre du
travail qu’à l’extérieur (voiture, domicile, famille…). De ce fait, le port de la
blouse est obligatoire. En matière de protection contre les micro-organismes
pathogènes, la norme EN 14126:2003 définit les exigences spéciales
auxquelles les matériaux non tissés des vêtements de protection jetables
doivent répondre. Ces vêtements de protection sont identifiés à l’aide du
pictogramme « risque biologique ».
Préconisations suivant le niveau de confinement
 L1 : port d’une blouse en coton.
 L2 : port d’une blouse dédiée, en coton ou jetable en matériau non tissé. Port de
chaussures différentes des chaussures de ville ou de surchaussures. Le port de gants
est fonction des résultats de l’évaluation des risques à chaque étape du protocole
expérimental.
 L3 : port d’une blouse dédiée, jetable en matériau non tissé. Selon la norme EN
14126 :2003, il est recommandé de porter des vêtements de protection avec des
coutures recouvertes ou soudées, car les virus, bactéries et spores sont suffisamment
petits pour traverser les ouvertures des coutures cousues. Port obligatoire de
surchaussures, d’une charlotte et de gants.
Remarque
Le nettoyage des blouses en coton est interdit à son domicile. Le responsable d’unité ou de
service a obligation de maintenir dans un état satisfaisant les vêtements de travail fournis au
personnel. A ce titre, les frais d’entretien et de remplacement doivent être pris en charge par
l’unité ou le service.
Afin de s’acquitter au mieux de cette obligation, deux solutions peuvent être envisagées :
• La signature d’un contrat avec une laverie proche de l’unité ou du service qui assurera
l’entretien des tenues de travail déposées par le personnel. Un plan de prévention devra être
établi afin d’informer la laverie de la spécificité des tenues de travail (présence de
microorganismes du groupe 1 et / ou de produits chimiques) et d’éventuelles précautions à
prendre.
• La mise à disposition de machines à laver permettant de procéder au nettoyage des tenues de
travail.
Les gants
Les gants utilisés dans les laboratoires de biologie doivent
répondre aux normes des équipements de protection
individuelle. Ils doivent être choisis afin de protéger le porteur
contre des risques mortels ou irréversibles. Les gants EPI
doivent porter le marquage CE et être testés conformément aux
normes suivantes :
• EN 420:2003 : Propriétés générales.
• EN 388:2003 : Risques mécaniques (non applicable pour les
gants jetables).
Les gants
Les gants utilisés dans les laboratoires de biologie doivent
répondre aux normes des équipements de protection
individuelle. Ils doivent être choisis afin de protéger le porteur
contre des risques mortels ou irréversibles. Les gants EPI
doivent porter le marquage CE et être testés conformément aux
normes suivantes :
• EN 420:2003 : Propriétés générales.
• EN 388:2003 : Risques mécaniques (non applicable pour les
gants jetables).
• EN 374-1:2003 : Risques Chimiques et Biologiques
(généralités).
• EN 374-2:2003 : Procédures de tests Risques Biologiques
(résistance à la pénétration).
• EN 374-3:2003 : Procédures de tests Risques Chimiques
(résistance à la perméation).
Les gants
Gants préconisés pour la manipulation de produits biologiques

et chimiques (en particulier CMR, radioactivité et agents
pathogènes des groupes 2 et 3)
 Gants de type EPI de catégorie III.
 En latex ou nitrile en fonction du ou des produits manipulés.
 Non poudrés de préférence pour éviter les risques d'allergie.
 Conformes aux normes version 2003.
 Résistants aux micro-organismes et aux virus : AQL
(porosité) de 0,65 (EN 374-2:2003 Niveau 3).
 Longueur minimale de 26 cm, pour une protection accrue
contre les projections de liquide comme stipulé dans la
norme EN 374-1:2003 pour se conformer à la norme EN
420:2003.
Les gants
• Précautions d’usage
 Inspecter les gants avant usage.
 Respecter les procédures de mise en place et de retrait du gant.
 Laver les mains avant et après le retrait.
 Utiliser un gant en nitrile ou latex en fonction des produits manipulés.
 Pratiquer le double gantage lorsque le risque est très élevé.
 Changer les gants très régulièrement.
• Attention
 En cas de projection sur un gant jetable, ce dernier doit être changé
impérativement et immédiatement. Les gants jetables n’apportent qu’une
protection limitée contre les produits chimiques.
 Les gants jetables vendus sous l'appellation de « gants d'examen » ne
sont pas des EPI.
Les équipements de protection des yeux et du visage
En laboratoire de biologie, il est parfois nécessaire de protéger ses yeux et

son visage contre les risques de projection de liquides contenant des micro-
organismes susceptibles de contaminer l'individu. Les protections oculaires
et / ou faciales doivent porter le marquage CE et répondre à la norme EN
166. Lors du choix de ces EPI, il faut également tenir compte d'éléments de
confort qui assureront une bonne adaptation de la protection, tels que la
qualité optique, la présence de branches ajustables, le poids, la conception
du pont nasal sans oublier l'aspect esthétique.
Les équipements de protection des yeux et du visage
• Préconisation
Les lunettes masques ou les écrans faciaux sont particulièrement adaptés

contre les projections de gouttelettes ou de liquides. Ils sont également plus
efficaces pour se protéger contre les chocs, comme, par exemple, lors de
l'éclatement d'un microtube. Ces EPI peuvent également protéger contre les
rayonnements ultraviolets s’ils répondent à la norme EN 170 qui propose
une aide au choix des filtres en fonction de la longueur d'onde.
Les appareils de protection respiratoire (APR)
Pour des agents biologiques pathogènes par inhalation, le port d'appareils de

protection respiratoire filtrants anti-aérosols peut s'avérer nécessaire suivant
les conditions de manipulation. Les appareils de protection respiratoire
filtrants doivent répondre à la norme EN 149:2001 s'il s'agit d'appareils de
protection respiratoire à usage unique.
En cas de risque chimique associé, la cartouche filtrante à adapter sur un
masque à gaz doit répondre à la norme EN 143.
• Préconisation
Pour la manipulation d'agents pathogènes du groupe 2, ils doivent porter les

mentions FFP2 (APR jetables) et P2 (cartouches). Pour la manipulation
d'agents pathogènes du groupe 3, ils doivent porter les mentions FFP3 (APR
jetables) et P3 (cartouches).
• Précautions d'usage
- Choisir l’APR en fonction de l'organisme pathogène manipulé.
- Choisir un APR adapté à sa morphologie (ne pas hésiter à en essayer
plusieurs).
- Préférer des masques jetables munis de soupape d'expiration pour un
meilleur confort d'utilisation.
- Respecter les procédures de mise en place et de retrait et notamment le
test d'étanchéité.
- Laver les mains avant la mise en place de l’APR et après le retrait.
- Jeter les masques dans les poubelles DASRI.
- Les masques de protection jetables sont à usage unique et personnel.
- Les masques de protection réutilisables doivent être désinfectés après
chaque utilisation.
• Bon à savoir
Le pouvoir de filtration du masque n'est pas altéré par le colmatage du filtre.
• Attention
Le masque chirurgical sert à protéger le patient contre les aérosols émis par
le soignant. En aucun cas, cet équipement médical ne protège contre un
agent biologique infectieux.
• Bon à savoir
Le pouvoir de filtration du masque n'est pas altéré par le colmatage du filtre.
• Attention
Le masque chirurgical sert à protéger le patient contre les aérosols émis par
le soignant. En aucun cas, cet équipement médical ne protège contre un
agent biologique infectieux.
Désinfection / stérilisation
Avant d’utiliser un produit, il est

obligatoire de tester son efficacité sur le
matériel à détruire.
• Désinfection par des moyens chimiques

La désinfection des locaux et des surfaces par voie aérienne
• Les rayonnements ultraviolets

Les rayonnements ultraviolets ne sont pas efficaces sur tous les types de
germes. Ils n’ont qu’un effet bactéricide sur les poussières de l’air. Dans ces
conditions, cette méthode de désinfection est vivement déconseillée.
• La fumigation
Les principales applications sont la désinfection et la décontamination :
 de l’air ambiant d’un laboratoire.

 de surfaces inaccessibles.
 avant toute intervention de maintenance (notamment lors du
changement des filtres de PSM).
 avant la sortie d’un appareillage.
La désinfection des locaux et des surfaces par voie aérienne
• La fumigation
Remarque
Une attention particulière doit être apportée aux préparations commerciales

de désinfection de l’air (bombes aérosol) : leur efficacité doit être validée
en interne. L’utilisation de préparations sans aldéhyde est vivement
déconseillée car elles ont un spectre d’activité restreint.
La stérilisation
• Chaleur humide (autoclaves)
La stérilisation par chaleur humide sous pression est actuellement la
méthode la plus fiable, efficace et facile d’emploi. L’utilisation d’un
autoclave est soumise à l’obtention d’une habilitation par le directeur
d’unité, délivrée à la suite d’une formation.
• Chaleur sèche (fours, flambage)
La chaleur sèche des fours de type Poupinel et de type Pasteur peut être
utilisée sur des instruments susceptibles d’être détériorés par l’humidité. Le
flambage est à proscrire en raison de sa très faible efficacité, et des risques
de création d’aérosols.
• Stérilisation à vapeurs bactéricides
Le formaldéhyde et l’oxyde d’éthylène gazeux ont une activité bactéricide
et sporicide entre 30 °C et 80 °C. Ils nécessitent des stérilisateurs prévus à
cet effet, et ne peuvent être utilisés que par du personnel qualifié.
Attention : Les fours à micro-ondes ne peuvent servir ni à la stérilisation
du matériel, ni à celle des liquides.
Cas particulier des prions*
Les méthodes classiques de désinfection ne sont pas efficaces sur les

prions.
Différents traitements sont proposés :
• Chimique
 Eau de Javel fraîchement diluée au ½ à partir de la solution à
2,6 % de chlore actif, à température ambiante, pendant 1 heure,
 Soude 1N à température ambiante, pendant 1 heure.
• Thermique par autoclave à 134 °C, pendant 1 heure.
Cependant, aucune de ces méthodes n’offre une garantie absolue ;
l’efficacité maximale est obtenue en associant un traitement chimique au
traitement thermique. Les déchets inactivés par ces méthodes doivent
ensuite être incinérés dans un centre agréé.
Déchets d’Activité de Soins à Risques Infectieux (DASRI) et assimilés
Nature des déchets
• Solides, liquides, piquants/coupants.

• Putrescibles d’origine humaine, animale ou végétale.
• Pathogènes pour l’homme (groupes 2 à 4) et / ou pour
l’environnement (OGM groupes 1 à 4).
Collecte
• Emballage identifié par le logo risque biologique, étanche, résistant,
avec un système de fermeture et de préhension efficace et d’une
capacité
adaptée répondant aux normes suivantes :
 Sacs à déchets mous, norme NF X 30-501.
 Conteneurs rigides et emballages mixtes (carton avec sac
interne), norme NF X 30-505.
 Conteneurs pour piquants/coupants, norme NF X 30-500.
• Obligation d’indiquer sur les emballages le nom et l’adresse du
producteur.
• Compactage interdit.
• Transvasement à éviter.
• Regroupement possible des déchets pour réduire le temps
d’élimination (voir les durées de stockage)
• Etablissement d’un bordereau de suivi « Elimination des déchets
d’activités de soins à risques infectieux ».
Stockage
• Locaux
Ils doivent être correctement ventilés et protégés contre les intempéries et la
chaleur, intégralement lavables et décontaminables et entretenus
régulièrement. Ils doivent être conçus pour prévenir l’intrusion des
animaux. Ils doivent comporter : une cuvette de rétention, une arrivée
d’eau, des murs et un sol continus en matériaux résistants et facilement
lavables, un éclairage suffisant, des extincteurs, des congélateurs et
réfrigérateurs, l’affichage de consignes, des protections individuelles, du
matériau absorbant.
• Méthode
La congélation est interdite sauf :
 Pour les pièces anatomiques : congélation puis élimination régulière
ou stockage entre 0 °C et 5 °C avec élimination sous 8 jours..
 Pour les déchets mixtes (biologiques et radioactifs de demi-vie
courte) : décroissance avant élimination.
Durée de stockage
Pour les déchets solides contaminés (pathogènes des groupes 2 à 4 et OGM
des groupes 1 à 4), la durée entre la production effective des déchets et leur
incinération ne doit pas excéder :
• 72 heures si la production est supérieure à 100 kg / semaine.
• 7 jours pour une production inférieure ou égale à 100 kg /semaine et
supérieure à 15 kg / mois.
• 1 mois pour une production inférieure ou égale à 15 kg / mois et
supérieure à 5 kg / mois.
• 3 mois si la production est inférieure à 5 kg / mois.
Traitements
Il existe différents types de traitements qui, selon la nature du déchet,
pourront être mis en œuvre seuls ou associés :
• Prétraitement : inactivation chimique (exemple : eau de javel) et / ou
thermique (autoclave). Il faut valider l’efficacité de ces procédés.
• Traitement interne autorisé si le procédé de désinfection est homologué.
• Incinération dans un centre de traitement agréé (le plus courant).

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requis pour leur manipulation

Les spécifications signalées par un astérisque (*) sont optionnelles :

Il est important de noter que certaines spécifications, qui précédemment

 marquage du niveau de confinement et pictogramme « danger biologique » à

 séparation des autres locaux par au moins une porte,

 accès réglementé et verrouillable. Les noms du responsable du L2 et des

 vestiaire séparé destiné aux effets personnels,

 présence d’une vitre permettant de voir les occupants,

 moyen de communication avec l’extérieur du local (téléphone, interphone) : ne

 espace convenable pour chaque manipulateur,

 ventilation du local par un système d’aspiration mécanique,

 surfaces lisses (murs, sols, paillasses) facilement lavables et décontaminables,

 absence d’endroit difficilement accessible au nettoyage (ex. : plinthes),

 portes et fenêtres devant être fermées pendant l’exécution du travail,

 étanchéité* du local pour en permettre la désinfection.

Les spécifications signalées par un astérisque (*) sont optionnelles :

Il est important de noter que certaines spécifications, qui précédemment

 accès réglementé et verrouillable. Les noms du responsable du L3 et

 accès au laboratoire par un sas comportant :

• des portes asservies ne pouvant pas s’ouvrir simultanément

• des vestiaires pour permettre de changer de blouse et de s’équiper des

 maintien du L3 en dépression par rapport aux zones voisines. Prévoir une

 présence d’une fenêtre, incassable et fermée hermétiquement, permettant de

 filtration de l’air, entrant et extrait, par un filtre absolu type HEPA,

 moyen de communication avec l’extérieur du local (téléphone, interphone): ne

 évier ou lavabo à commande non manuelle permettant la

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