JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 1(2), 159-163, 2015 ISSN CETAK.

2443-115X
ISSN ELEKTRONIK. 2477-1821

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI BAKTERI ASAM LAKTAT (BAL)

DARI BUAH MANGGA (Mangifera indica L.)

Submitted : 25 Nov 2015

Edited : 15 Des 2015
Accepted : 21 Des 2015

Arsyik Ibrahim, Aditya Fridayanti, Fila Delvia

Laboratorium Penelitian dan Pengembangan FARMAKA TROPIS Fakultas Farmasi Universitas

Mulawarman, Samarinda, Kalimantan Timur
Email : [email protected]; [email protected]
[email protected]

ABSTRACT
The research has been done for the isolation and identification of lactic acid bacteria (LAB) from
mango (Mangifera indica L.). This research aimed to isolated of lactic acid bacteria that is in mango
(Mangifera indica L.) and determine the characteristics of lactic acid bacteria isolate (LAB) of mango
(Mangifera indica L.). The method used is spoiled technique of mango (Mangifera indica L.) and isolation
using selective media MRS Broth and MRS Agar. The identification isolate of lactic acid bacteria (LAB) used
methods macroscopically and microscopically with indirect coloring, gram staining and used biochemical
with katalase testing. The results obtained in the form of characteristic isolate of lactic acid bacteria
displayed form of bacteria with circle, smooth surface, curve, entire side and white. The microscopically
displayed stick form of bacteria and purple with gram coloring.

Keywords : Mangifera indica L., lactic acid bacteria, spoiled, isolation

PENDAHULUAN Beberapa metabolit aktif yang dihasilkan

Bakteri asam laktat adalah bakteri yang oleh bakteri asam laktat yaitu asam laktat, etanol,
memiliki kontribusi yang besar dalam dunia hidroperoksida dan bakteriosin. Metabolit yang
pangan. Bakteri asam laktat selain biasanya dihasilkan oleh bakteri tersebut merupakan agen
digunakan sebagai pangan fungsional juga sering yang dapat digunakan dalam membunuh bakteri.
digunakan sebagai pengawet alami dari suatu Salah satu yang digunakan sebagai antimikroba
produk pangan fermentasi. Penggunaan bakteri yaitu bakteriosin yang merupakan suatu senyawa
asam laktat sebagai pengawet alami dengan peptida. Dilaporkan bahwa bakteriosin memegang
metode biopreservatif telah banyak dikembangkan peranan paling penting dalam menanggulangi
dengan menggunakan bakteri asam laktat secara infeksi akibat mikroorganisme. Selain itu asam
langsung atau menggunakan metabolitnya sebagai laktat yang di produksi oleh BAL dapat
agen antimikroba. menurunkan pH lingkungan. pH yang rendah dapat
Penggunaan BAL ini dikarenakan bakteri menghambat kontaminasi mikroba pembusuk dan
asam laktat disebut sebagai food grade juga membunuh mikroba patogen terutama yang
microorganisms yang merupakan mikroba yang ada didalam tubuh(2).
tidak beresiko terhadap kesehatan karena tidak Penelitian tentang isolasi BAL telah banyak
menghasilkan racun berbahaya pada bahan pangan dilakukan terutama pada produk-produk daging
melainkan mempunyai fungsi sebaliknya yang baik mentah ataupun kalengan, produk susu (yoghurt,
bagi kesehatan. Hal ini karena bakteri asam laktat keju, dadih), fermentasi (tape, tempe, beer).
dapat menghambat secara alami mikroba Namun belum begitu banyak yang diisolasi dari
patogen(1). buah-buahan dan sayur-sayuran tropis. Beberapa
sumber memaparkan bahwa pada buah-buahan dan

159 AKADEMI FARMASI SAMARINDA

JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 1(2), 159-163, 2015 ARSYIK IBRAHIM

sayuran seperti durian, nanas, sirsak, cacao, pisang, Pelaksanaan Penelitian

mangga, tomat, kubis, asinan sawi, selada, kacang 1. Penyiapan Sampel
panjang dan lain sebagainya adalah potensial Sampel buah mangga diambil di daerah
sebagai sumber BAL(3). Sekolaq Darat Kubar. Buah mangga merupakan
Kalimantan terkenal dengan produksi buah buah mangga masak dan tidak cacat, dicuci dengan
mangga yang berlimpah. Beberapa jenis mangga air mengalir dan dikeringkan. Setelah kering
dapat ditemui di sini. Dilaporkan bahwa di dikupas kulitnya dengan pisau staines steel steril.
Kalimantan terdapat 31 jenis Mangifera indica dan 2. Proses pembusukan
3 jenis diantaranya adalah endemik. Dilaporkan Sampel buah mangga yang telah dikupas
bahwa di Kalimantan ditemukan 23 jenis dan dipotong dimasukkan ke dalam daun pisang
Mangifera yang merupakan tumbuhan asli dan 4 steril dan dibungkus. Setelah dibungkus
jenis yang merupakan tumbuhan endemik. dimasukkan ke dalam wadah berupa toples kedap
Sehingga dapat dikatakan bahwa Kalimantan udara dan cahaya. Dilakukan pembusukan selama
merupakan pusat persebaran jenis-jenis mangga 72 jam pada suhu ruangan.
(Mangifera spp.)(4). 3. Pengenceran Sampel
Berdasarkan kemungkinan adanya bakteri Sampel hasil pembusukan di ambil pulpnya,
asam laktat yang terdapat pada buah mangga dicampurkan lalu dimasukkan sebanyak 1 gram ke
(Mangifera indica L.) dan besarnya manfaat yang dalam tabung reaksi yang berisikan 9 mL MRS
dihasilkan dari bakteri asam laktat. Maka broth. Setelah dimasukkan di inkubasi selama 48
dilakukan penelitian untuk mengisolasi bakteri jam pada suhu 37 ºC. Kemudian hasil inkubasi
asam laktat dari buah mangga (Mangifera indica diambil dan dilakukan pengenceran dengan
L.) serta mengidentifikasi karakteristik bakteri mengambil 100 µL hasil inkubasi ditambahkan ke
asam laktat (BAL) yang diperoleh. dalam 900 µL pepton water sehingga diperoleh
pengenceran 10-1. Kemudian hasil dari
METODE PENELITIAN pengenceran 10-1 diambil kembali 100 µL dan
Bahan dimasukkan kembali ke dalam tabung berisi pepton
Penelitian ini menggunakan objek water 900 µL. Pengenceran terus dilakukan sampai
penelitian yaitu buah mangga matang dengan jenis didapat pengenceran 10-9.
mangga yang diteliti yaitu mangga kweni
(Mangifera odorata). Bagian yang akan diteliti 4. Isolasi bakteri asam laktat (BAL)
adalah buah mangga kuweni masak yang telah Pengenceran 10-9 yang diperoleh diambil
menimbulkan aroma khas dan tidak cacat yang dengan menggunakan ose bulat sebanyak 1 ose.
diperoleh dari desa Sekolaq Darat Kubar, medium Kemudian dilakukan inokulasi ke dalam medium
de Men Rogrosa Sharpe (MRS) agar oxoid, dan MRS agar dengan membagi cawan Petri ke dalam
medium de Men Rogrosa Sharpe (MRS) broth empat kuadran yaitu kuadran 1, kuadran 2, kuadran
oxoid, pepton water, medium Potato Dektrosa 3 dan kuadran 4 dilakukan metode gores
Agar (PDA) dan Nutrient Agar (NA) Merck, NaCl membentuk zig zag bersambung tiap kuadran.
0,9%, larutan H2O2 3%, cat kristal violet, cat lugol Diinkubasi cawan petri selama 7 hari pada suhu 37
iodin, alcohol 96% dan safranin yang diperoleh ºC. Setelah proses inkubasi selesai dilanjutkan
dari laboratorium Farmasi Universitas dengan mengisolasi koloni-koloni yang tumbuh
Mulawarman. masing-masing berdasarkan perbedaan morfologi
koloni bakteri dalam cawan Petri setiap kuadran.
Peralatan Dilakukan isolasi sampai diperoleh isolat atau
Alat yang digunakan dalam penelitian ini koloni tunggal dari tiap cawan petri.
yaitu toples, pisau cutter, timbangan analitik, labu
ukur, labu Erlenmeyer, cawan Petri, incubator, 5. Identifikasi bakteri asam laktat (BAL)
laminar air flow, autoklaf, kaca objek, hot plate, Isolat yang diperoleh diidentifikasi
pinset, bunsen, cawan porselin, spatel logam, ose menggunakan uji katalase dan metode
gores, rak tabung, mikroskop listrik. makroskopik serta mikroskopik. Uji katalase
dengan meneteskan larutan H2O2 pada objek glass,

AKADEMI FARMASI SAMARINDA 160

JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 1(2), 159-163, 2015 ARSYIK IBRAHIM

kemudian diambil olesan bakteri dengan mengidentifikasi BAL pada penelitian ini yaitu
menggunakan ose dan dioleskan pada larutan pada dilakukan secara makroskopik, mikroskopik dan
objek glass, dilihat reaksi yang terbentuk jika tidak uji katalase.
terbentuk gelembung menandakan reaksi positif. a. Identifikasi Makroskopik
Metode makroskopik dengan melihat langsung Identifikasi makroskopik dilakukan dengan
morofologi isolat bakteri yang tumbuh pada melihat langsung isolat yang tumbuh pada media
medium meliputi bentuk dan warna bakteri. Dan agar meliputi warna, bentuk, tepi, permukaan serta
metode mikroskopik dengan menggunakan sudut elevasi yang terbentuk pada isolat. Hasil
mikroskop dengan metode pewarnaan gram. identifikasi mikroskopik dapat di lihat pada Tabel
Pewarnaan gram dilakukan dengan mengoleskan 1.
bakteri diatas objek glass, difikasasi lalu ditetesi Dari hasil identifikasi secara makroskopik
cat gram A, diamkan selama 1 menit, ditetesi cat memperlihatkan hasil berupa isolat yang
gram B, diamkan selama 1 menit, ditetesi cat gram mempunyai warna putih susu, bentuk bulat, tepi
C, diamkan selama 30 detik, ditetesi cat gram D, entire, permukaan halus dan elevasi yang
diamkan 2 menit. Kemudian ditutup dengan cover cembung. Hasil ini selanjutnya di sesuaikan
glass dan ditetesi dengan minyak emersi lalu dengan standar BAL hasil penelitian yang
diamati bentuk dan warna sel. dilakukan sebelumnya (1), BAL hasil isolasi dari
buang mangga kuweni yang diperoleh
HASIL DAN PEMBAHASAN menunjukkan gambaran morfologi makroskopik
A. Isolasi bakteri asam laktat (BAL) yang sama dengan BAL standar yang diperoleh
Isolasi bakteri merupakan sebuah teknik pada penelitian sebelumnya.
untuk mendapatkan koloni tunggal suatu bakteri. b. Identifikasi Mikroskopik
Isolasi bakteri asam laktat melalui proses Identifikasi secara mikroskopik dilakukan
pembusukan untuk mendapatkan bakteri asam dengan menggunakan mikroskop listrik untuk
laktat dan dengan menggunakan media selektif de melihat bentuk dari sel bakteri. Identifikasi bakteri
Men Rogrosa Sharpe yang bertujuan asam laktat secara mikroskopik dilakukan dengan
mengoptimalkan pertumbuhan dan mendapatkan menggunakan pewarnaan tidak langsung dan
koloni bakteri asam laktat yang diharapkan. pewarnaan gram. Morfologi BAL hasil pewarnaan
Proses isolasi dilakukan proses plating, dapat dilihat pada Gambar 2.
kultur dari pengenceran 10-9 diinokulasikan pada Pengamatan pada mikroskop dengan
media MRS Agar dengan metode gores dengan pewarnaan gram menunjukkan hasil pengujian
dibagi dalam empat kuadran dan diinkubasi dalam bahwa sel bakteri berwarna ungu, hal ini
inkubator. Koloni BAL tunggal yang tumbuh menunjukan bakteri asam laktat (BAL) yang
dimurnikan kembali dengan cara diisolasi termasuk dalam golongan bakteri gram
menginokulasikan kembali koloni ke dalam media positif dengan bentuk bulat bergandengan/berantai
MRS Agar (Merck) secara gores dan diinkubasi diduga dari genus Streptococcus. Bakteri gram
pada suhu selama 37 0C 48 jam dalam suasana positif mempunyai ciri dinding sel dengan
anaerob(3). Hasil isolasi BAL dapat dilihat pada peptidoglikon yang lebih tebal sehingga
Gambar 1. penyerapan warna dari cat kristal violet yang
Dari hasil isolasi yang dilakukan diperoleh terserap dalam sel akan bertahan walaupun
koloni tunggal dari buah mangga kuweni yang dilakukan pencucian menggunakan cat peluntur
disebut sebagai isolat sebanyak satu isolat yang (larutan alkohol-lugol) yang diharapkan dapat
memiliki bentuk dan warna yang sama pada melunturkan cat warna pertama. Dengan
masing-masing kuadran goresan. bertahannya cat warna kristal violet yang berwarna
1. Identifikasi Isolat Hasil Isolasi ungu ini di dalam sel bakteri maka cat gram D
Identifikasi bakteri bertujuan untuk (safranin) sebagai cat lanjutan tidak akan bisa
menentukan karakteristik khusus yang dimiliki terserap lagi, sehingga warna sel akan tetap
oleh isolat yang diperoleh yang mempunyai berwarna seperti warna cat yang dipakai pertama
karakteristik sama dengan bakteri yang diinginkan. (cat kristal violet). Pengamatan secara mikroskopik
Beberapa cara yang digunakan untuk tidak langsung menunjukkan hasil berupa bentuk

161 AKADEMI FARMASI SAMARINDA

JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 1(2), 159-163, 2015 ARSYIK IBRAHIM

sel dari isolat bakteri yaitu berbentuk batang bentuk sel yang bergerombol membentuk rantai
dengan dinding sel (a) dan selubung sel (b) serta antara satu sel dengan sel yang lainnya.

Gambar 1. Hasil isolasi pada media MRS agar

Tabel 1. Identifikasi Isolat secara Makroskopik

No. Isolat Warna Bentuk Tepi Permukaan Elevasi

1. M1 Putih susu Bulat Entire Halus mengkilap Cembung

Gambar 2. Identifikasi pewarnaan tak langsung dan gram secara Mikroskopik dengan perbesaran 100x
Keterangan :
a = selubung sel
b = sel bergerombol

AKADEMI FARMASI SAMARINDA 162

JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 1(2), 159-163, 2015 ARSYIK IBRAHIM

Gambar 3. Hasil uji katalase

c. Identifikasi Uji Katalase UCAPAN TERIMAKASIH

Uji katalase dilakukan dengan meneteskan Penulis mengucapkan terimakasih kepada
larutan H2O2 3% pada kultur muda (umur 24 jam). Dekan Fakultas Farmasi Universitas Mulawarman,
Sifat reaksi terhadap uji katalase ditentukan dengan Kepala Laboratorium Penelitian dan
Pengembangan FARMAKA TROPIS Fakultas
pemunculan gelembung gas yang memberikan
Farmasi atas izin melaksanakan penelitian.
indikasi pembentukan gas CO2(4). Pengujian
katalase adalah pengujian secara biokimiawi yang DAFTAR PUSTAKA
memperlihatkan aktivitas dari bakteri yang 1. Daeschel MA.1989. & Schillinger U & Lucke
menghasilkan enzim katalase ditandai dengan FK .1990. Citasi Fitriyani, Ida. Isolasi,
terbentuknya gelembung pada pengujian yang Karakterisasi, Identifikasi Bakteri Asam
menandakan reaksi positif. Hasil ujikatalase dapat Laktat (BAL) dari Buah Mangga Matang
dilihat pada Gambar 3. Yang Berpotensi Menghasilkan Antimikroba.
[Skripsi]. Yogyakarta, UIN Sunan Kalijaga;
Uji katalase menunjukkan bahwa isolat
2010.
bakteri asam laktat (BAL) yang diuji menunjukkan 2. Lawalata, Helen, J, Sembiring, L., Rahayu,
hasil uji berupa katalase negatif dimana tidak E.,S. Bakteri Asam Laktat Pada Bakasang dan
terbentuknya gelembung pada object glass yang Aktivitas Penghambatannya Terhadap Bakteri
terdapat cairan H2O2 saat diolesi dengan bakteri. Patogen dan Pembusuk. Prosiding Seminar
Hal ini dikarenakan bakteri asam laktat tidak Nasional Biologi Fakultas Biologi UGM.
memproduksi enzim katalase yang dapat Yogyakarta. 2010 : 1163 -1166.
3. Yuni Nurisva Sari Maya., YN., Syukur. S.,
mengubah hidrogen peroksida menjadi air dan
Sari, J., Isolasi, Karakterisasi, dan Identifikasi
oksigen dan berkaitan dengan kemampuan bakteri DNA Bakteri Asam Laktat (BAL) Yang
asam laktat yang hanya membutuhkan sedikit Berpotensi Sebagai Antimikroba dari
oksigen untuk dapat hidup. Fermentasi Markisa Kuning (Passiflora edulis
var. flavicarpa). J. Kimia Unand. 2013. (ISSN
SIMPULAN No. 2303-3401), 2 (2): 81-91.
4. Noor, A., , Ningsih, D.R., Hasbianto, A.,
1. Isolat bakteri asam laktat dari buah mangga
Sabur, A., Sebaran Dan Keragaman Plasma
mempunyai karakteristik secara
Nutfah Mangga Di Kalimantan Selatan,
makroskopik yaitu warna putih susu, bentuk
Prosiding Seminar Nasional Sumber Daya
bulat, tepi entire, permukaan halus dan
Genetik Pertanian "Pengelolaan Sumber Daya
elevasi cembung.
Genetik Lokal sebagai Sumber Pertumbuhan
2. Hasil identifikasi bakteri asam laktat dari
Ekonomi Daerah". Kalimantan Selatan. 2015 :
buah mangga kweni (Mangifera odorata)
p. 2080218
menunjukkan hasil reaksi negatif terhadap
5. Mirza Nuryady, M., Istiqomah. T., Faizah. R.,
uji katalase, merupakan bakteri gram positif
Ubaidillah, S., Mahmudi. Z., Sutoyo. Isolasi
bentuk bulat bergandengan/berantai
dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Asal
(Streptococcus)
Youghurt. J. UNEJ. 2013, I (5): 1-11.

163 AKADEMI FARMASI SAMARINDA