Laporan Resmi Mikrobiologi - 8a - Acc

i
LAPORAN PRAKTIKUM
MIKROBIOLOGI
Disusun oleh :
Kelompok VIIIA
Putri Nurul Khusnaini 23020219120005
Margaretha Silvania Siadari 23020219120011
Nhunhung Chusmitaningrum 23020219130038
Rey Wally Bintang Ramadhan 23020219130083
Chabi Burrohman 23020219130110
Fahrizal Nur Muhammad 23020219140076
Wisnu Adhi Pamungkas 23020219140107
Sari Retnowati 23020219140129
PROGRAM STUDI S1 AGROEKOTEKNOLOGI

DEPARTEMEN PERTANIAN
FAKULTAS PETERNAKAN DAN PERTANIAN
UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG
2019
i
ii
LEMBAR PENGESAHAN
Judul : LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

Kelompok : VIIIA (DELAPAN)A
Program Studi : S1-AGROEKOTEKNOLOGI
Tanggal Pengesahan : November 2019
Menyetujui,
Koordinator Praktikum Asisten Pembimbing Praktikum

Mikrobiologi Mikrobiologi
Prof. Dr. Ir. Dwi Retno Lukiwati, MS. Linda Widia Sari
NIP.19520617 197901 2 001 NIM. 23020218120013
ii
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa telah memberikan rahmat-
Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan praktikum Mikrobiologi.
Praktikum ini bertujuan agar mahasiswa dapat mengetahui alat dan media yang
digunakan di laboratorium, sterilisasi dan pembuatan media, isolasi
mirkoorganisme dan penghitungan bakteri.
Penulis menyampaikan terima kasih kepada Prof. Dr. Ir. Dwi Retno
Lukiwati, MS. selaku Koordinator Praktikum Mikrobiologi dan Linda Widia Sari
selaku Asisten Pembimbing Praktikum Mikrobiologi, yang telah membimbing
penulis selama praktikum berlangsung sampai penyusunan laporan Praktikum
Mikrobiologi ini selesai. Harapan penulis yaitu laporan Praktikum Mikrobiologi
yang disusun dapat bermanfaat bagi pembaca.
Penulis menyadari bahwa laporan praktikum ini masih jauh dari sempurna.
Oleh karena itu, kritik dan saran yang bersifat membangun sangat diharapkan oleh
penulis. Akhir kata penulis menyampaikan terima kasih atas perhatian dan koreksi
dari berbagai pihak.
Semarang, 13 November 2019
Penulis
iii
iv
RINGKASAN
KELOMPOK VIIIA. AGROEKOTEKNOLOGI. 2019. Laporan Praktikum

Mikrobiologi. (Asisten : LINDA WIDIA SARI).
Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada tanggal 18 September 2019

tentang Pengenalan Alat dan Media, tanggal 22 September 2019 tentang
Sterilisasi dan Pembuatan Media, tanggal 2 Oktober 2019 tentang Isolasi
Mikroorganisme, tanggal 9 Oktober 2019 tentang Identifikasi Mikroorganisme,
tanggal 22 Oktober 2019 tentang Penghitungan Mikroorganisme di Laboratorium
Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman, dan Laboratorium Kimia Dasar dan Biokimia,
Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang.
Materi terdiri dari alat dan bahan. Alat yang digunakan antara lain autoklaf,
oven, cawan petri, erlenmeyer, timbangan analitik, hot plate stirer, LAF, tabung
reaksi, mortar, ose, pinset, mikropipet, pipet tetes, pipet ukur, mikroskop, gelas
objek, gelas penutup, bunsen, cawan petri, cawan porselen, alumunium foil.
Bahan yang digunakan akuades, mannitol, agar, NaCl, ekstrak khamir, Congo red,
brome thymol blue, tanah tanaman legum, tanaman kacang tanah, karet, gram A
(crystal violet), gram B (Mordant), gram C (alkohol), gram D (Safranin), dan
kapas. Metode yang digunakan dalam praktikum pengenalan alat dan media yaitu
alat dan bahan pembuatan media diamati, dicatat, dan didokumentasikan.
Sterilisasi dan pembuatan media yaitu bahan-bahan membuat media Potato
Dextrose Agar, Yeast Extract Mannitol Agar Congo Red, Yeast Extract Mannitol
Agar Brome Thymol Blue dilarutkan dengan akuades kemudian disterilisasi.
Isolasi mikroorganisme yaitu tanah legum di panaskan dalam oven, ditimbang,
dilarutkan akuades, dilakukan pengenceran dan teknik spread, dan bintil akar
direndam alkohol, dikeringkan, ditekan dengan pinset, diambil cairannya, ditanam
dengan teknik streak. Identifikasi Bakteri dan fungi yaitu bakteri dan fungi
diidentifikasi secara mikroskopis dan makroskopis. Perhitungan jumlah bakteri
yaitu koloni bakteri dihitung dengan cara tidak langsung.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, diperoleh hasil bahwa
pengenalan alat ada 3 yaitu alat elektrik, alat gelas, dan alat non gelas, sterilisasi
sterilisasi kering dilakukan dengan oven, sterilisasi basah dilakukan dengan
menggunakan autoklaf. Media Potato Dextrose Agar digunakan untuk
menumbuhkan fungi, sedangkan media Yeast Extract Mannitol Agar digunakan
menumbuhkan bakteri Rhizobium. Bakteri yang tumbuh pada media Yeast Extract
Mannitol Agar Congo Red berwarna putih susu, sedangkan pada media Yeast
Extract Mannitol Agar Brome Thymol Blue berwarna hijau kekuningan. Fungi
yang tumbuh pada media Potato Dextrose Agar berwarna putih dan berhifa.
Koloni bakteri yang tumbuh pada pour plate tidak dapat dihitung karena jumlah
koloni bakteri sebesar 8 dan pada surface plate dapat dihitung karena jumlah
koloni bakteri sebesar 104.
Kata kunci : Fungi, Rhizobium, sterilisasi, PDA (Potato Dextrose Agar), YEMA
(Yeast Extract Mannitol Agar).
iv
v
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR ................................................................................ ii
LEMBAR PENGESAHAN ....................................................................... iii
RINGKASAN .................................................................................... iv
DAFTAR ISI ............................................................................................. v
DAFTAR TABEL ....................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... viii
ACARA I PENGENALAN ALAT DAN MEDIA
BAB I. PENDAHULUAN ............................................................ 2

BAB II.TINJAUAN PUSTAKA .................................................. 3
2.1.Alat-alat Laboratorium ............................................. 3
2.1.1. Alat Elektrik ................................................... 3
2.1.2. Alat Gelas ....................................................... 6
2.1.3. Alat Non Gelas dan Keramik ......................... 8
2.2.Media Perbanyakan .................................................. 10
2.2.1. Media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Congo Red (CR) dan Bromothymol
Blue (BTB) .................................................... 10
2.2.2. Media Potato Dextrose Agar (PDA) ............. 12
BAB III.MATERI DAN METODE .............................................. 14
3.1. Materi ....................................................................... 14
3.2. Metode ..................................................................... 14
BAB IV.HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................... 15
4.1.Alat-alat Laboratorium ............................................... 15
4.1.1. Alat Elektrik ................................................... 15
4.1.2. Alat Gelas ....................................................... 18
4.1.3. Alat Non Gelas dan Keramik ......................... 21
4.2.Media Perbanyakan .................................................... 24
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN ............................................ 28
5.1. Simpulan .................................................................... 28
5.2. Saran ........................................................................... 28
v
vi
ACARA II STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIA
BAB I. PENDAHULUAN ........................................................... 30

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ................................................. 31
2.1. Sterilisasi .................................................................... 31
2.2. Media Yeast Exstract Mannitol Agar Congo Red (YEMA
CR)
dan media Yeast Exstract Mannitol Agar Bromothymol Blue
(YEMA BTB) ............................................................ 32
2.3. Media Potato Dextrose Agar (PDA) .......................... 34
BAB III. MATERI DAN METODE ............................................. 36
3.1. Materi ......................................................................... 36
3.2. Metode ....................................................................... 36
4.1.Sterilisasi .................................................................... 39
4.2.Media Yeast Exstract Mannitol Agar Congo Red (YEMA
CR)
dan media Yeast Exstract Mannitol Agar Bromothymol Blue
(YEMA BTB) ........................................................... 40
4.3. Media Potato Dextrose Agar (PDA) ......................... 43
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN ............................................ 46
5.1. Simpulan .................................................................... 46
5.2. Saran .......................................................................... 46
ACARA III ISOLASI MIKROORGANISME
BAB I. PENDAHUUAN ............................................................ 48

2.1. Tanaman Kacang Tanah (Arachis hypogeae L.) ..... 49
2.2. Isolasi Rhizobium ..................................................... 50
2.3. Isolasi fungi ............................................................. 52
3.1. Materi ....................................................................... 53
3.2. Metode ..................................................................... 54
4.4. Isolasi Mikroorganisme ........................................... 55
BAB V.SIMPULAN DAN SARAN ............................................. 58
5.1. Simpulan .................................................................. 58
5.2. Saran ........................................................................ 58
ACARA IV IDENTIFIKASI MIKROORGANISME
BAB I. PENDAHULUAN ........................................................... 60

2.1. Bakteri Rhizobium ................................................... 61
2.2. Fungi ........................................................................ 64
vi
vii

3.1. Materi ....................................................................... 66
3.2. Metode ..................................................................... 66
4.1. Identifikasi Bakteri Rhizobium ............................... 68
4.2. Identifiasi Fungi ....................................................... 71
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN ......................................... 73
5.1. Simpulan ................................................................... 73
5.2. Saran ......................................................................... 73
ACARA V PENGHITUNGAN BAKTERI
BAB I. PENDAHULUAN ........................................................ 75

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA ............................................... 76
2.1. Perhitungan Jumlah Bakteri .................................... 76
BAB III. MATERI DAN METODE .......................................... 81
2.1. Materi ....................................................................... 81
2.2. Metode ..................................................................... 81
BAB IV.HASIL DAN PEMBAHASAN .................................... 83
4.1. Perhitungan Jumlah Bakteri .................................... 83
BAB V. SIMPULAN DAN SARAN ......................................... 87
5.1. Simpulan .................................................................. 87
5.2. Saran ........................................................................ 87
DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 88
LAMPIRAN ............................................................................................. 99
vii
viii
DAFTAR TABEL
Nomor Halaman
1. Identifikasi Bakteri Rhizobium .................................................... 68
2. Identifikasi fungi ........................................................................... 71
3. Hasil perhitungan koloni bakteri ................................................... 83
viii
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Halaman
1. Dokumentasi Alat Praktikum Mikrobiologi ....................................... 99
2. Dokumentas Bahan Praktikum Mikrobiologi .................................... 107
3. Hasil Pengamatan .............................................................................. 109
4. Hasil Perhitungan Bakteri .................................................................. 111
5. Log Book Kegiatan Praktikum .......................................................... 113
6. Dokumentasi Kegiatan Praktikum .................................................. 116
ix
1
ACARA I
PENGENALAN ALAT DAN MEDIA

2
BAB I
PENDAHULUAN
Pengenalan alat praktikum dan media penyebaran merupakan salah satu
acara praktikum yang sangat berguna untuk praktikum selanjutnya. Tersedianya
alat praktikum akan memudahkan berjalannya kelancaran praktikum. Terdapat
banyak alat-alat yang digunakan saat praktikum mikrobiologi. Alat-alat dalam
dapat dibedakan menjadi 3 jenis yaitu alat elektrik, alat gelas, dan alat non gelas
dan keramik.
Alat elektrik contohnya seperti mikroskop cahaya ataupun mikroskop
digital, inkubator, autoklaf, oven, laminar air flow, dan timbangan analitik. Alat
gelas contohnya gelas ukur, cawan petri, labu erlenmeyer, pipet tetes, pipet ukur,
gelas beker, pembakar bunsen, tabung reaksi, dan batang l. Alat non gelas dan
keramik contohnya mortar dan penumbuk, pH indikator universal, pinset,
mikropipet, jarum inokulum, spatula, dan cawan porselen. Bahan yang digunakan
adalah Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red, Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) Brome Thymol Blue, dan Potato Dextrose Agar (PDA).
Tujuan praktikum acara pengenalan alat dan media untuk mengamati apa
saja alat-alat dan media yang digunakan pada saat praktikum. Manfaaat acara
pengenalan alat dan media adalah mampu mengetahui, menggunakan,
mengoperasikan alat-alat dan media sesuai dengan fungsi dan prosedurnya.

3
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Alat-alat Laboratorium
2.1.1. Alat elektrik
Alat-alat yang digunakan dalam praktikum salah satunya adalah alat
elektrik. Macam-macam alat elektrik yaitu mikroskop cahaya, autoklaf, inkubator,
hot place stirer, laminar air flow, timbangan analitik, dan oven. Mikroskop
cahaya yang digunakan berfungsi untuk mengamati mikroba yang berukuran kecil
agar lebih jelas (Wicaksono dkk., 2014). Mikroskop cahaya yang terdapat di
laboratorium adalah mikroskop cahaya yang sudah digital dengan menggunakan
kamera dan langsung terhubung pada komputer. Prinsip kerja mikroskop cahaya
adalah obyek yang akan diamati diletakkan pada meja preparat diamati dengan
mengendalikan fokus dan jarak pengamatan dengan memutar sekrup-sekrup yang
ada pada mikroskop atau dapat juga menggunakan mikroskop digital yang
langsung terhubung oleh kamera dengan cara yang sama (Raya dkk., 2013). Salah
satu alat elektrik yaitu autoklaf merupakan alat untuk sterilisasi basah. Autoklaf
merupakan alat yang digunakan untuk mensterilkan berbagai macam alat dan
bahan yang digunakan dalam praktikum (Djais dan Theodorea, 2019). Alat
auktoklaf mempunyai prinsip kerja seperti panci untuk bandeng presto. Prinsip
kerja autoklaf sama seperti panci untuk memasak bandeng presto, autoklaf
4
digunakan untuk strerilisasi basah pada suhu 121°C dan tekanan 1,5 atm dalam
waktu yang telah ditentukan (Novalia dkk., 2019).
Inkubator dalam praktikum sama halnya dengan inkubator pada bayi
tetapi bedanya disini inkubator digunakan untuk menginkubasi mikroba. Alat
Inkubator adalah salah satu alat elektrik yang berfungsi untuk menginkubasi atau
memeram mikroba pada suhu terkontrol yaitu 5 - 70°C (Syakri dan Putra, 2017).
Inkubator digunakan untuk menginkubasi mikroba dengan suhu tertentu. Prinsip
inkubator adalah bekerja pada suhu 5 - 70°C dengan prinsip kerja sama seperti
oven yaitu memanaskan suspensi mikroba agar tidak terkontaminasi oleh mikroba
lainnnya (Mujipradhana, 2018). Alat elektrik hot plate stirer adalah pelat yang
dapat dipanaskan dan dihubungkan dengan dua magnet yaitu magnet pada motor
dan magnet (stirer bar) yang berfungsi menghomogenkan larutan. Hot plate stirer
dan stirer bar yaitu alat elektrik yang menggunakan magnet (stirrer bar) dalam
menghomogenkan suatu larutan dengan cara berputar (Habibah dkk., 2013). Cara
kerja hot plate stirrer dengan cara pemanasan larutan dan dihomogenkan dengan
bantuan stirrer bar. Prinsip kerja hot plate stirer dan stirer bar adalah pengaturan
suhu terlebih dahulu baru menyalakan untuk besaran perputaran magnet (stirer
bar) untuk menghomogenkan media perbanyakan (Sukawaty dkk., 2017).
Laminar Air Flow adalah alat dengan bentuk meja kerja dengan dukungan alat
penyaring yang mendukung kegiatan praktikum. Cara kerja Laminar Air Flow
menjaga sterilisasi ketika menangani pengkulturan mikroba agar tidak terjadi
kontaminasi dengan bentuk seperti meja kerja (Sridevi dkk., 2013). Alat Laminar
Air Flow bekerja dengan menggunakan sinar UV untuk menjaga kesterilan

5
mikroba dengan bantuan alat penyaring atau filter. Prinsip kerja Laminar Air Flow
(LAF) adalah dengan sinar UV yang digunakan untuk menjaga kesterilan mikroba
agar tidak terkontaminsi dengan mikroba lainnya (Harjanto dan Raharjo, 2019).
Timbangan analitik adalah timbangan yang dirancang untuk mengukur
massa kecil dalam rentang miligram. Alat timbangan analitik berfungsi untuk
menimbang bahan dengan massa yang kecil (miligram) yang akan digunakan
untuk praktikum (Hamid dan Mustafa, 2013). Prinsip kerja timbangan analitik
seperti timbangan biasa tetapi mempunyai ketelitian yang tinggi. Prinsip kerja
timbangan analitik adalah seperti pada umumnya timbangan digital biasa tetapi
timbangan analitik ini mempunyai ketelitian yang sangat sensitif dengan apapun
termasuk udara, maka pada timbangan analitik terdapat penutupnya agar tidak
terganggu pada saat penimbangan (Sari dan Saputri, 2016). Oven merupakan alat
elektrik yang berfungsi sebagai sterilisasi kering. Alat elektrik oven merupakan
alat yang biasa digunakan untuk memasak tetapi oven juga dapat juga digunakan
untuk sterilisasi kering pada alat dan bahan (Latupau dan Suliasih, 2018). Cara
kerja oven dengan cara memasukkan alat atau bahan ke dalam oven dan
dipanaskan pada suhu tertentu. Prinsip kerja dari oven adalah memanaskan benda
yang di dalamnya agar tetap steril dengan pemanasan suhu tertentu dan waktu
tertentu (Subandi, 2015).

6
2.1.2. Alat gelas
Alat gelas yang terdapat pada laboratorium yang digunakan untuk
praktikum yaitu labu erlemenyer, pipet tetes, cawan petri, pipet ukur, tabung
reaksi, batang L, pembakar bunsen, gelas ukur (Rakhman, dkk., 2017). Gelas ukur
merupakan gelas yang bentuknya lonjong ke atas dan diluarnya terdapat ukuran
volume atau cairan. Fungsi Gelas ukur adalah untuk mengukur volume cairan
yang akan digunakan dalam praktikum dengan prinsip kerja melihat cekungan
cairan yang akan digunakan (Sari dan Saputri, 2017). Bentuk dari cawan petri
yaitu berbentuk bulat dan mempunyai tutup yang lebih besar dari wadahnya.
Fungsi cawan petri adalah untuk membiakkan atau kultivasi mikroorganisme
dengan cara menuangkan agar ke cawan petri (Pratama dkk., 2016). Cawan petri
memiliki prinsip kerja dengan cara menahan suhu panas pada saat sterilisasi.
Prinsip kerja cawan petri sebagai wadah atau bahan yang digunakan untuk tempat
media yang sebelumnya disterilisasi terlebih dahulu. Prinsip kerja cawan petri
adalah alat yang terbuat dari bahan kaca yang bertujuan agar dapat menahan suhu
panas pada saat sterilisasi di dalam oven (Tyanjani dan Yunianta, 2014).
Labu erlenmeyer memiliki bentuk bawah yang melembung dan atasnya
kerucut yang biasa digunakan untuk menampung larutan. Fungsi labu erlenmeyer
adalah untuk menampung larutan, bahan, atau cairan dan menghomogenkan
komposisi media dengan prinsip kerja memasukkan bahan atau cairan ke dalam
labu erlemenyer dan ditutup atau disumbat (Yunita dkk., 2016). Pipet tetes
merupakan alat yang kecil dengan bentuk lonjong yang dibagian atasnya terdapat
7
karet atau bulb. Fungsi pipet tetes untuk memindahkan larutan dengan skala kecil
dan prinsip kerjanya memasukkan pipet sampai dasar wadah gelas kemudian
menekan karet sampai larutan terambil dan mengeluarkan pipet tetes dengan
posisi tegak lurus (Novalia dkk., 2015). Bentuk pipet ukur lebih besar
dibandingkan dengan pipet tetes yang memiliki volume tertentu. Pipet ukur
berfungsi untuk memindahakan larutan dengan volume tertentu dengan prinsip
kerja menyedot larutan dengan bantuan bulb sampai mendapat volume yang
diinginkan (Udiyana dkk., 2015).
Gelas beker terbuat dari kaca yang bentuknya seperti gelas pada
umumnya digunakan untuk menampung lautan seperti akuades, alkohol, dan lain-
lain. Fungsi gelas beker sebagai preparasi media dan penampung larutan dengan
prinsip kerja menuangkan cairan atau memasukkan padatan ke dalam gelas beker
dan terdapat ukuran volume cairan di luar gelasnya (Juvitasari dkk., 2012).
Pembakar bunsen atau dapat disebut juga spirtus yaitu digunakan untuk
pemanasan ataupun sterilisasi alat seperti jarum ose. Fungsi pembakar bunsen
adalah untuk sterilisasi pijar dengan prinsip kerja menyalakan api dan digunakan
untuk strelisasi contohnya jarum ose sampai memerah (Misna dan Diana, 2016).
Fungsi tabung reaksi biasa digunakan untuk menumbuhkan bakteri
maupun sebagai wadah untuk larutan ataupun cairan. Tabung reaksi berfungsi
untuk uji biokimia atau menumbuhkan mikroba (Hartutik, 2012). Cara kerja
tabung reaksi adalah dengan cara disterilkan terlebih dahulu baru digunakan untuk
menumbuhkan mikroba. Prinsip kerja dari tabung reaksi adalah sebagai tempat
untuk menumbuhkan mikroba dengan cara menuangkan cairan ke dalam tabung

8
yang biasanya harus disterilkan terlebih dahulu (Kharisma dan Manan, 2012).
Alat yang digunakan untuk meyebarkan atau meratakan mikroba adalah batang L.
Fungsi batang L sebagai alat untuk meratakan atau menyebarkan cairan dan
bakteri pada agar atau media (Surjowardojo dkk., 2016). Cara kerja batang L
adalah dengan penggunaan untuk meratakan mikroba diatas media dengan pola
zig zag. Prinsip kerja batang L dengan cara meratakan mikroba diatas biakan atau
media agar dengan pola zig zag (Rizky dkk., 2019).
2.1.3. Alat Non Gelas dan Keramik
pH indikator universal adalah indikator pH berisi larutan dari beberapa
senyawa yang menunjukkan beberapa perubahan warna yang halus pada rentang
pH antara 1-14 untuk menunjukkan keasaman atau kebasaan larutan. Penentuan
pH pada larutan menggunakan pH indikator universal (Indira, 2015). Cara kerja
indikator pH adalah mencelupkan kertas indikator ke daam larutan atau
meneteskan larutan diatas kertas indikator pH. Prinsip kerja pH indikator
memberikan suatu keterangan terhadap larutan bersifat asam, basa, atau netral
dengan cara meneteskan larutan pada kertas pH yang akan terjadi perubahan
warna dan dicocokan pada pH indikator (Mukaromah dkk., 2010). Spatula
merupakan alat yang berbentuk seperti sendok tetapi dengan ujung yang kecil dan
lebih tipis. Alat spatula yaitu alat yang digunakan untuk mengambil bahan yang
akan digunakan dengan bentuk seperti sendok kecil (Fajarin dkk., 2015). Cara
kerja spatula yaitu dengan cara mengambil bahan atau padatan. Prinsip kerja
9
spatula yaitu dengan mengambil atau memindahkan padatan dari satu media ke
media lain (Yunita dkk., 2016).
Fungsi mikropipet pada umumnya sama dengan pipet-pipet lainnya untuk
memindahkan cairan. Mikropipet adalah alat untuk mentransfer atau
memindahkan cairan yang bervolume kecil (Ratri dkk., 2009). Prinsip kerja
mikropipet dengan cara memasukkan mikropipet kedalam larutan untuk
mengambil larutan dengan volume yang kecil dengan satu kali pemakaian
mikrotip (Hidayatussalihin dkk., 2019). Salah satu alat keramik adalah mortar
yaitu alat yang terbuat dari bahan adukan pasir yang berfungsi untuk
menghaluskan bahan. Mortar dan penumbuk merupakan alat keramik yang terbuat
dari adukan pasir, bahan perekat dan air sehingga sifatnya kuat dan tidak mudah
pecah (Maryoto, 2009). Cara kerja mortar yaitu dengan meletakkan bahan diatas
mortar dan ditumbuk dengan penumbuk. Prinsip kerja mortar adalah dengan cara
meletakkan bahan yang akan dihaluskan di atas mortar kemudian ditumbuk
dengan penumbuk (Febriyanti dkk., 2015).
Fungsi jarum inokulum memiliki keterkaitan dengan pemindahan
mikroba ke media baru. Jarum Inokulum atau jarum ose digunakan untuk
memindahkan biakan untuk ditanam di media baru (Ngajow dkk., 2013). Cara
kerja jarum ose yaitu menggoreskan ke biakan untuk mengambil mikroba yang
sebelumnya sudah disterilkan. Prinsip kerja jarum ose adalah dengan mesterilkan
jarum ose pada pembakar bunsen sampai ujung memerah ditunggu sampai agak
dingin kemudian digoreskan pada media untuk mengambil mikroba yang akan
dibiakkan (Ashari dkk., 2014). Kegunaan pinset untuk alat bantu pengambilan
10
mikroba. Pinset adalah jenis alat penjepit yang memiliki banyak kegunaan salah
satunya adalah untuk mengambil mikroba pada suatu media (Cahyo dkk., 2017).
Cara kerja pinset dengan cara pencapitan pada bintil akar agar bintil tersebut
pecah. Prinsip kerja dari pinset yaitu pengambilan dengan pencapitan untuk
mengambil dengan sedikit penekanan bintil akar agar pecah (Barus dkk., 2013).
Cawan porselen adalah cawan yang berukuran kecil yang biasanya
digunakan untuk wadah sterilisasi dalam volume kecil. Alat selanjutnya adalah
cawan porselen merupakan cawan yang terbuat dari porselen dan biasa digunakan
sebagai wadah dari bahan yang tidak mudah menguap, seperti garam dapur, gula
dan sejenisnya (Zuhra dkk., 2012). Cara kerja cawan porselen adalah wadah untuk
sterilisasi tanah yang dimasukkan ke dalam oven. Prinsip kerja cawan porselen
adalah sebagai wadah bahan yang terbuat dari bahan keramik yang akan
digunakan untuk sterilisasi dalam oven (Geantaresa dan Supriyanti, 2010).
2.2. Media Perbanyakan
2.2.1. Media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) CR dan BTB
Media yang digunakan sebagai perbanyakan Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) dan Potato Dextrose Agar (PDA). Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) pada praktikum ini menggunakan 2 jenis yaitu Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome
Thymol Blue. Fungsi Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue adalah sebagai media
11
isolasi mikroorganisme dalam bentuk bakteri. Komposisi media dari Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) Bromo Thymol Blue sama hanya yang membedakan adalah Congo red
dan Brome Thymol Blue. Kompisisi media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
yaitu K2HPO4, MgSO4.7H2O, Nacl, mannitol, ekstrak khamir, agar, akuades.
K2HPO4 merupakan senyawa kimia anorganik yang biasa digunakan untuk zat
penyangga. Senyawa K2HPO4 berfungsi sebagai larutan penyangga (Afid, 2016).
MgSO4.7H2O atau disebut dengan magnesium sulfat yang merupakan komposisi
dalam media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yang mengandung
magnesium, sulfur, dan oksigen. Fungsi MgSO4.7H2O adalah untuk menyerap
sisa-sisa air pada media (Fitriadi dan Putri, 2016). Fungsi NaCl yang biasa
digunakan untuk membunuh mikroba lain yang tidak digunakan. NaCl berfungsi
membunuh mikroba selain mikroba yang akan diinokulasi (Amalia dkk., 2016).
Komposisi pada Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yang biasa
digunakan dalam menurunkan tekanan adalah mannitol. Mannitol berfungsi untuk
menurunkan tekanan tanah yang berlebih pada media (Roostika dkk., 2016).
Ekstrak khamir merupakan senyawa organik yang berfungsi sebagai sumber
energi yang tidak membutuhkan cahaya untuk pemenuhan nutrisi mikroba. Fungsi
ekstrak khamir sebagai nutrisi untuk mikroba (Saskiawan dkk., 2017).
Agar merupakan salah satu komposisi yang dapat digunakan untuk
memadatkan media. Fungsi agar adalah untuk memadatkan media tumbuh
mikroba (Marfuah dkk., 2018). Akuades merupakan air biasa pada umumnya
yang tidak berasa, bau ataupun berwarna. Fungsi akuades untuk melarutkan
12
semua bahan untuk pembuatan media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) dan
media Potato Dextrose Agar (PDA) (Astriyani dkk., 2017). Komposisi yang
membedakan pada kedua Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) tersebut adalah
Congo Red dan Brome Thymol Blue. Congo Red (CR) berfungsi sebagai indikator
untuk mengetahui tumbuh atau tidaknya mikroba dengan adanya warna putih susu
pada media agar yang tidak merubah warna agar (Sembiring, 2019). Indikator
Brome Thymol Blue merupakan indikator yang digunakan untuk mengetahui
apakah mikroba dalam media tersebut tumbuh atau tidak. Brome Thymol Blue
yaitu indikator untuk mengetahui apakah bakteri tumbuh atau tidaknya dalam
suatu media tetapi perbedaannya dengan Congo Red adalah pada warna media
yang menjadi kekuningan atau hijau kebiruan (Widianingsih dan De jesus, 2018).
2.2.2. Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar atau sering disebut PDA merupakan salah satu
media perbanyakan mikroorganisme yang paling sering digunakan yang terbuat
dari infuse kentang dan dextrose (Mirani dkk., 2016). PDA adalah Potato
Dextrose Agar yang merupakan media tumbuh untuk fungi atau jamur. Komposisi
pada Potato Dextrose Agar (PDA) yaitu kentang, dextrose, agar, dan aquades.
Kentang merupakan sumber karbohidrat, vitamin dan energi sedangkan dextrose
sebagai sumber gula dan energi (Wantini dan Oktavia, 2018). Agar merupakan
komposisi yang digunakan untuk memadatkan media. Komponen agar berfungsi
untuk memadatkan medium Potato Dextrose Agar (PDA) (Fatmariza dkk., 2019).
Fungsi akuades adalah untuk melarutkan semua komposisi pada Potato Dextrose
13
Agar (PDA). Akuades berfungsi untuk melarutkan semua bahan untuk pembuatan
media Potato Dextrose Agar (PDA) (Astriyani dkk., 2017).
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan media yang sangat cocok untuk
pengembangbiakan jamur secara cepat. PDA membuat pertumbuhan jamur sangat
cepat, hifa banyak, rapat, dan menumpuk karena nutrisi pada medium PDA yang
lengkap (Pratiwi dkk., 2016). Fungi dalam berkembang biak memerlukan media
yang mengandung nutrisi dan bahan organik yang bisa mendukung pertumbuhan.
Media PDA memiliki kandungan dextrose dan karbohidrat yang cukup untuk
pemenuhan kebutuhan nutrisi fungi dan juga berperan dalam proses metabolisme
jamur (Taurisia dkk., 2015).

14
BAB III
MATERI DAN METODE
Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada Hari Rabu Tanggal 18
September 2019 di Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman serta
Laboratorium Ekologi dan Produksi Tanaman, Fakultas Peternakan dan Pertanian,
Universitas Diponegoro, Semarang.
3.1. Materi
Materi yang digunakan adalah pengenalan alat dan jenis media saat
praktikum mikrobiologi terdiri dari alat dan bahan. Bahan yang digunakan adalah
0,125 g K2HPO4, 0,05 g MgSO4.7H2O, 0,025 g Nacl, 2,5 g mannitol, 0,25 g
ektrak khamir, 5 g agar, 250 ml akuades dan Potato Dextrose Agar (PDA) instan
serta alat-alat baik alat elektrik, alat gelas, dan alat non gelas. Alat yang
digunakan adalah berupa kamera dan alat tulis.
3.2. Metode
Metode yang digunakan dalam praktikum adalah penjelasan atau
presentasi dari masing masing kelompok dengan pembagian masing masing (alat
elektrik, alat gelas, dan alat keramik dan non gelas) ke praktikan lain, selanjutnya
dilakukan sesi tanya jawab kemudian dicatat dan didokumentasikan.

15
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Alat-alat Laboratorium
4.1.1. Alat elektrik
Berdasarkan praktikum mikrobiologi acara pengenalan alat dan
pembuatan media diperoleh hasil bahwa alat-alat yang terdapat pada laboratorium
dibagi menjadi 3 yaitu alat elektrik, alat gelas, dan alat non gelas dan keramik.
Alat-alat yang akan digunakan untuk praktikum tersebut dibedakan menjadi tiga
yaitu, alat elektrik, alat gelas, dan alat non gelas dan keramik. Alat-alat yang
digunakan dalam praktikum salah satunya adalah alat elektrik. Macam-macam
alat elektrik yaitu mikroskop cahaya, autoklaf, inkubator, hot place stirer, laminar
air flow, timbangan analitik, dan oven. Mikroskop cahaya merupakan alat elektrik
yang digunakan untuk mengamati mikroba yang berukuran kecil (Lampiran 1. ).
Hal ini sesuai dengan pendapat Wicaksono dkk. (2014) yang menyatakan bahwa
mikroskop cahaya digunakan untuk melihat obyek obyek kecil yang tidak terlihat
oleh mata dengan jelas. Mikroskop cahaya yang terdapat di laboratorium adalah
mikroskop cahaya yang sudah digital dengan menggunakan kamera dan langsung
terhubung pada komputer. Prinsip kerja mikroskop cahaya adalah obyek yang
akan diamati diletakkan pada meja preparat dan diamati dengan mengendalikan
fokus dan jarak pengamatan dengan memutar sekrup-sekrup yang ada pada
mikroskop. Hal ini sesuai dengan pendapat Raya dkk. (2013) yang menyatakan
16
bahwa prinsip kerja mikroskop cahaya dengan meletakkan obyek yang diamati
pada kaca preparat ke meja mikroskop dan diamati dengan mengendalikan sekrup
dan kedua mata ataupun langsung tersambung oleh kamera. Autoklaf merupakan
alat yang berbentuk seperti panci yang berfungsi untuk mensterilkan bahan atau
media (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Djais dan Theodora (2019) yang
menyatakan bahwa autoklaf merupakan alat sterilisasi basah atau dapat dikatakan
sebagai alat untuk sterilisasi media seperti Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Congo Red, Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue, dan
Potato Dextrose Agar (PDA). Prinsip kerja autoklaf sama seperti panci untuk
menanak bandeng presto tetapi dengan alat yang lebih modern tekanan 2 atm pada
suhu dan waktu tertentu. Hal ini sesuai pendapat Novalia dkk. (2019) yang
menyatakan bahwa prinsip kerja autoklaf sama seperti untuk menanak bandeng
presto dengan tekanan 2 atm pada suhu 121° C dan memerlukan waktu 15 menit.
Inkubator merupakan alat yang berbentuk seperrti oven yang berfungsi
untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu terkontrol (Lampiran 1.).
Hal ini sesuai dnegan pendapat Syakri dan Putra (2017) yang menyatakan bahwa
inkubator merupakan alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu
dan waktu yang telah dikontrol. Prinsip inkubator adalah memanaskan mikroba
dengan suhu tertentu sama seperti prinsip kerja pada oven secara umum. Hal ini
sesuai dengan pendapat Mujipradhana (2018) yang menyatakan bahwa prinsip
kerja inkubator sama dengan oven yang digunakan agar bakteri tidak
terkontaminasi oleh bakteri lain dengan suhu tertentu. Hot plat stirer dan stirer
bar berfungsi untuk menghomogenkan larutan menggunakan magnet (stirer bar)

17
yang berputar (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Habibah dkk. (2013) yang
menyatakan bahwa hot plate stirrer adalah alat untuk menghomogenkan larutan
dengan cara pengadukan. Prinsip kerja hot plate stirer dan stirer bar adalah
pengaturan suhu terlebih dahulu baru menyalakan untuk besaran perputaran stirer
bar dengan menggunakan bantuan magnetic stirrer untuk menghomogenkan
media perbanyakan. Hal ini sesuai pendapat Sukawaty dkk. (2017) yang
menyatakan bahwa prinsip kerja hot plate stirer dan stirer bar adalah dengan
menyalakan alat dan diatur suhunya dan dimasukkan magnet lalu berputar untuk
menghomogenkan larutan. Laminar Air Flow bekerja secara aseptis, artinya
menjaga sterilisasi ketika menangani pengkulturan mikroba agar tidak terjadi
kontaminasi (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Sridevi dkk. (2013) yang
menyatakan bahwa Laminar Air Flow (LAF) digunakan untuk menghindari
kontaminasi mikroba lain pada pengkulturan mikroba. Prinsip kerja Laminar Air
Flow (LAF) adalah dengan sinar UV yang digunakan untuk menjaga kestreliran
mikroba agar tidak terkontaminsi dengan mikroba lainnya. Hal ini sesuai dengan
pendapat Harjanto dan Raharjo (2019) yang menyatakan bahwa Laminar Air Flow
(LAF) mempunyai prinsip kerja dengan bantuan sinar UV yang digunkan untuk
mensterilkan mikroba.
Timbangan analitik berfungsi untuk menimbang bahan yang akan
digunakan untuk praktikum dengan ketelitian tertentu (Lampiran 1.). Hal ini
sesuai dengan pendapat Hamid dan Mustafa (2013) bahwa timbangan analitik
adalah alat untuk menimbang bahan yang akan digunakan dalam praktikum
dengan ketelitian yang tinggi. Prinsip kerja timbangan analitik adalah seperti pada
18
umumnya timbangan digital biasa tetapi timbangan analitik ini mempunyai
ketelitian yang sangat sensitif, maka pada timbangan analitik terdapat penutupnya.
Hal ini sesuai dengan pendapat Sari dan Saputri (2016) yang menyatakan bahwa
prinsip kerja timbangan analitik sama seperti timbangan biasa tetapi bedanya
timbangan analitik mempunyai tingkat ketelitian yang tinggi. Oven merupakan
alat yang biasa dipakai dan berfungsi sebagai sterilisasi kering (Lampiran 1.).
Hal ini sesuai pendapat Latupau dan Suliasih (2018) yang menyatakan bahwa
oven merupakan alat sterilisasi kering yang mensterilkan alat alat seperti cawan
petri, pipet tetes, cawan porselen. Prinsip kerja dari oven adalah memanaskan
benda yang di dalamnya agar tetap steril dengan pemanasan suhu dan waktu
tertentu. Hal ini sesuai dengan pendapat Subandi (2015) yang menyatakan bahwa
prinsip kerja oven yaitu dengan memanaskan dengan suhu tertentu pada ruangan
di dalamnya untuk mensterilisasikan alat-alat.
4.1.2. Alat gelas
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan diperoleh hasil bahwa
macam-macam alat gelas yang dipakai ketika praktikum mikrobiologi yaitu labu
erlemenyer, pipet tetes, cawan petri, pipet ukur, tabung reaksi, batang L,
pembakar bunsen, gelas ukur. Hal ini sesuai pendapat Rakhman dkk. (2017) yang
menyatakan bahwa alat-alat yang biasa digunakan untuk praktikum adalah labu
erlenmeyer, pipet tetes, cawan petri, pipet ukur, tabung reaksi, batang L,
pembakar bunsen, gelas ukur. Cawan petri merupakan alat yang terbuat dari kaca
dengan bentuk lingkar yang berfungsi untuk membiakkan mikroorganisme

19
(Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Pratama dkk. (2016) yang menyatakan
bahwa cawan petri digunakan untuk membiakkan mikrorganisme dengan media
agar. Prinsip kerja cawan petri yaitu sebagai wadah atau tempat media yang dapat
menahan suhu panas pada saat sterilisasi karena terbuat dari kaca. Hal ini sesuai
dengan pendapat Tyanjani dan Yunanta (2014) yang menyatakan bahwa prinsip
kerja cawan petri adalah cawan petri yang teruat dari kaca agar dapat menahan
suhu panas pada saat disterilkan ataupun sebagai wadah media. Gelas ukur
merupakan gelas yang bentuknya lonjong keatas dan diluarnya terdapat ukuran
volume atau cairan (Lampiran 1.). Gelas ukur berfungsi untuk mengukur volume
cairan dengan cara menuangkan ke dalam gelas ukur dan melihat cekungan air.
Hal ini sesuai dengan pendapat Sari dan Saputri (2017) yang menyatakan bahwa
gelas ukur berfungsi untuk mengukur volume cairan dengan prinsip kerja melihat
batas cekungan cairan yang akan digunakan.
Labu erlenmeyer memiliki bentuk bawah yang melembung dan atas
kerucut yang biasanya digunakan untuk menampung larutan (Lampiran 1.). Hal
ini sesuai dengan pendapat Yunita dkk. (2016) yang menyatakan bahwa labu
erlenmeyer berfungsi untuk menampung larutan, bahan, atau cairan serta meracik
dan menghomogenkan bahan-bahan komposisi media dengan prinsip kerja
menuangkan cairan melalui mulut labu erlenmeyer yang kemudian ditutup atau
disumbat. Pipet tetes yaitu alat berbentuk lonjong yang diatasnya terdapat karet
atau bulb (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Novalia dkk. (2015) yang
menyatakan bahwa pipet tetes berfungsi untuk memindahkan larutan dengan skala
yang kecil dengan prinsip kerja memasukkan pipet tetes samapi dasar wadah
20
kemudian menekan karet sampai larutan terambil dan mengeluarkan pipet tetes
dengan posisi tegak. Bentuk pipet ukur lebih besar dibandingkan dnegan bentuk
pipet tetes yang berfungsi mengambil larutan dengan ukuran tertentu (Lampiran
1.). Hal ini sesuai dengan pendapat Udiyana dkk. (2015) yang menyatakan bahwa
pipet ukur berfungsi untuk memindahakan larutan dengan skala volume tertentu
dengan prinsip kerja menyedot larutan dengan bantuan bulb sampai volume yang
diinginkan.
Gelas beker terbuat dari kaca yang bentuknya seperti gelas pada
umumnya tetapi mempunyai ukuran volume yang digunakan untuk menampung
cairan (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Juvitasari dkk. (2012) yang
menyatakan bahwa gelas beker berfungsi sebagai preparasi media dan penampung
latutan dengan prinsip kerja menuangkan atau memasukkan cairan maupun
padatan memalui mulut gelas beker. Pembakar bunsen atau biasa disebut dengan
spirtus yang berfungsi untuk pemanasan atau sterilisasi alat-alat seperti jarum ose
(Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Misna dan Diana (2016) yang
menyatakan bahwa pembakar bunsen berfungsi untuk sterilisasi pijar dengan
prinsip kerja menyalakan api dengan bantuan korek api untuk sterilisasi pijar pada
jarum ose.
Fungsi tabung reaksi digunakan untuk menumbuhkan bakteri atau dapat
digunakan juga sebagai wadah larutan (Lampiran 1.). Hal ini sesuai dengan
pendapat Hartutik (2012) yang menyatakan bahwa tabung reaksi berfungsi untuk
uji biokimia atau menumbuhkan mikroba. Prinsip kerja tabung reaksi sebagai
wadah perkembangbiakan mikroba dengan cara menuangkan mikroba ke dalam

21
tabung reaksi. Hal ini sesuai pendapat Kharisma dan Manan (2012) yang
menyatakan bahwa prinsip kerja tabung reaksi adalah dengan menuangkan cairan
ke dalam tabung rekasi dan biasanya tabung reaksi juga disterilisasi terlebih
dahulu. Batang L merupakan salah satu alat yang berfungsi untuk meratakan
cairan dan bakteri dalam cawan petri (Lampiran 1.). Hal ini sesuai dengan
pendapat Surjowardojo dkk. (2016) yang menyatakan bahwa batang L berfungsi
sebagai alat untuk meratakan cairan dan bakteri dalam suatu media. Prinsip kerja
batang L yaitu dengan menggoreskan ke media dengan pola zig-zag. Hal ini
sesuai dengan pendapat Rizky dkk. (2019) yang menyatakan bahwa prinsip kerja
batang L adalah meratakan cairan atau mikroba dengan arah zig-zag pada suatu
media.
4.1.3. Alat Non Gelas dan Keramik
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan diperoleh hasil bahwa
macam-macam alat non gelas dan keramik adalah ph indikator, mortar dan
penumbuk, spatula, mikropipet, jarum ose, pinset, dan cawan porselen. pH
indikator universal adalah adalah indikator yang digunakan untuk mengetahui pH
suatu larutan (Lampiran 1.). Hal ini sesuai dengan pendapat Indira (2015) bahwa
pH indikator universal berisi larutan dari beberapa senyawa yang menunjukkan
beberapa perubahan warna yang halus pada rentang pH antara 1-14 untuk
menunjukkan keasaman atau kebasaan larutan. Prinsip kerja pH indikator yaitu
dengan memberi suatu keterangan apakah sifat larutan tersebut asam, basa, atau
netral. Hal ini sesuai dengan pendapat Mukaromah dkk. (2010) yang menyatakan
22
bahwa ph indikator mempunyai prinsip kerja dengan cara meneteskan larutan
pada pH indikator kemudian diamati perubahan warnanya dan dicocokkan pada
pH indikator apakah larutan tersebut bersifat asam, basa, ataupun netral.
Alat selanjutnya adalah spatula merupakan alat yang digunakan untuk
mengambil atau mengurangi bahan untuk ditimbang (Lampiran 1.). Hal ini
sesuai dengan pendapat Fajarin dkk. (2015) yang menyatakan bahwa spatula yaitu
alat yang digunakan untuk mengambil bahan yang akan digunakan untuk
praktikum. Spatula mempunyai dua sisi dengan kegunaan masing masing yaitu
satu sisi untuk mengambil bahan sedangkan yang satu sisi untuk mengurangi
bahan jika kelebihan. Hal ini sesuai dengan pendapat Yunita dkk. (2016) yang
menyatakan bahwa spaula mempunyai prinsip kerja mengambil atau mengurangi
bahan yang akan dipindahkan ke media yang lain. Mikropipet umumnya
mempunyai fungsi yang sama dengan pipet-pipet lainnya yaitu berfungsi untuk
memindahkan larutan dengan volume kecil (Lampiran 1.). Hal ini sesuai dengan
pendapat Ratri dkk. (2009) yang menyatakan bahwa mikropipet adalah alat untuk
mentransfer atau memindahkan cairan yang bervolume kecil. Prinsip kerja
mikropipet yaitu dengan satu kali pemakaian tip mikropipet. Hal ini sesuai dengan
pendapat Hidayatussalihin dkk. (2019) yang menyatakan bahwa prinsip kerja
mikropipet dengan cara memasukkan mikropipet ke dalam wadah yang berisi
larutan dengan kapaitas volume yang kecil dengan satu kali pemakaian tip.
Mortar dan penumbuk merupakan alat yang terbuat dari adukan pasir dan
semen yang biasa digunakan untuk menghaluskan, menghancurkan, menumbuk
bahan (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Maryoto (2009) yang menyatakan
23
bahwa mortar dan penumbuk terbuat dari pasir, bahan perekat dan air sehingga
sifatnya kuat dan tidak mudah pecah saat digunakan untuk menghaluskan bahan.
Prinsip kerja dari mortar yaitu bahan diletakkan di mortar kemudian ditumbuk.
Hal ini sesuai dengan pendapat Febriyanti dkk. (2015) yang menyatakan bahwa
cara penggunaan mortar dengan meletakkan bahan yang akan dihaluskan ke
dalam mortar kemudian ditumbuk dengan penumbuk. Jarum Inokulum atau jarum
ose merupakan alat non gelas yang digunakan untuk memindahkan biakan ke
media baru (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Ngajow dkk. (2013) yang
menyatakan bahwa jarum ose atau inokulum berfungsi untuk memindahkan
biakan dari suatu tempat ke tempat yang lain. Prinsip kerja jarum inokulum yaitu
memanaskan diatas api bunsen baru kemudian digunakan untuk mengambil
biakan. Hal ini sesuai dengan pendapat Ashari dkk. (2014) yang menyatakan
bahwa cara penggunaan jarum ose dengan cara dipanaskan terlebih dahulu sampai
ujung memerah dan ditunggu dingin sebentar kemudian baru digunakan untuk
mengambik biakan untuk dipindahkan ke media baru. Pinset adalah jenis alat
penjepit yang memiliki banyak kegunaan salah satunya adalah untuk mengambil
mikroba pada suatu media atau untuk memecah bintil akar (Lampiran 1.). Hal ini
sesuai dengan pendapat Cahyo dkk. (2017) yang menyatakan bahwa pinset
digunakan untuk mengambil benda dengan cara menjepitnya agar bintil akar
pecah. Prinsip kerja pinset yaitu dengan mengambil benda dengan cara dijepit.
Hal ini sesuai dengan pendapat Barus dkk. (2013) yang menyatakan bahwa cara
penggunaan pinset yaitu dengan cara mengambil benda dengan dijepit dengan
sedikit penekanan. Alat selanjutnya adalah cawan porselen yang biasa digunakan
24
untuk wadah atau tempat bahan yang akan disterilisasi ke dalam oven contohnya
tanah (Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Zuhra dkk. (2012) yang menyatakan
bahwa cawan porselen merupakan cawan yang terbuat dari porselen dan biasa
digunakan sebagai wadah dari bahan yang tidak mudah menguap, seperti garam
dapur, gula dan sejenisnya. Prinsip kerja cawan porselen yaitu dengan cara cawan
yang terbuat dari kaca mampu menahan panas yang digunakan pada sterilisasi.
Hal ini sesuai pendapat Geanteresa dan Supriyanti (2010) yang menyatakan
bahwa penggunaan cawan porselen dengan cara sebagai wadah media seperti
tanah untuk disterilisasikan di oven.
4.2. Media Perbanyakan
Media yang digunakan sebagai perbanyakan Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) dan Potato Dextrose Agar (PDA). Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) pada praktikum ini menggunakan 2 jenis yaitu Yeast Extract Mannito
Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome
Thymol Blue. Fungsi Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue adalah sebagai media isolasi
mikroorganisme dalam bentuk bakteri. Komposisi media dari Yeast Extract
Mannitol Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Brome Thymol Blue sama hanya yang membedakan adalah Congo red dan Brome
Thymol Blue. Komposisi media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yaitu
K2HPO4 merupakan senyawa yang berfungsi sebagai larutan penyangga
(Lampiran 2.). Hal ini sesuai dengan pendapat Afid (2016) yang menyatakan
25
bahwa K2HPO4 merupakan komposisi yang digunakan sebagai larutan penyangga
pada Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) untuk menyesuaikan pH.
MgSO4.7H2O berfungsi untuk menyerap sisa-sisa air yang masih terdapat pada
media agar tidak menghambat tumbuhnya mikroba (Lampiran 2.). Hal ini sesuai
pendapat Fitriadi dan Putri (2016) yang menyatakan bahwa MgSO4.7H2O
berfungsi sebagai penyerap air pada media yang menjadikan berkurangnya
mikroba-mikroba selain mikroba yang akan di isolasi.
NaCl merupakan senyawa anorganik berupa padatan yang berfungsi
sebagai pembunuh mikroba selain mikroba yang akan diinakulasi. Hal ini sesuai
dengan pendapat Amalia dkk. (2016) yang menyatakan bahwa NaCl merupakan
komposisi bahan yang berfungsi membunuh atau mencegah pertumbuhan mikroba
selain mikroba yang akan diisolasi. Mannitol merupakan senyawa yang berfungsi
untuk menurunkan tekanan tanah yang berlebih pada media tumbuh (Lampiran
2.). Hal ini sesuai dengan pendapat Roostika dkk. (2016) yang menyatakan bahwa
mannitol berfungsi sebagai menurunkan tekanan yang berlebihan pada media
tumbuh.
Ekstrak khamir merupakan sumber energi yang berfungsi sebagai nutrisi
mikroba. Hal ini sesuai dengan pendapat Saskiawan dkk. (2017) yang menyatakan
bahwa ekstrak khamir merupakan nutrisi atau makanan bagi mikroba. Agar adalah
salah satu komposisi yang berfungsi untuk memadatkan media tumbuh mikroba.
Hal ini sesuai dengan pendapat Marfuah dkk. (2018) bahwa agar berfungsi untuk
memadatkan media untuk pertumbuhan mikroba. Akuades merupakan air yang
pada umumnya seperti air biasa tidak mengandung unsur-unsur lainnya yang
26
berfungsi untuk melarutkan semua bahan untuk pembuatan media. Hal ini sesuai
dengan pendapat Astriyani dkk. (2017) yang menyatakan bahwa aquades
merupakan pelarut dalam senyawa.
Komposisi yang membedakan pada kedua Yeast Extract Mannito Agar
(YEMA) tersebut adalah Congo Red dan Brome Thymol Blue, Congo Red
berfungsi sebagai indikator untuk mengetahui tumbuh atau tidaknya mikroba. Hal
ini sesuai dengan pendapat Sembring (2019) yang menyatakan bahwa Congo Red
sebagai indikator untuk mengetahui tumbuh atau tidaknya mikroba dengan adanya
perubahan warna putih susu (Lampiran 2.). Brome Thymol Blue (BTB)
merupakan indikator untuk mengetahui apakah bakteri tumbuh atau tidaknya pada
suatu media dengan perubahan warna kuning atau biru. Hal ini sesuai dengan
pendapat Widianingsih dan De jesus (2018) yang menyatakan bahwa terdapat
perubahan warna kekuningan pada YEMA BTB yang menunjukkan bahwa
terdapat bakteri yang tumbuh di dalamnya.
Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan salah satu media perbanyakan
mikroorganisme paling sering digunakan yang terbuat dari infuse kentang dan
dextrose (Lampiran 2.). Hal ini sesuai pendapat Mirani dkk. (2016) yang
menyatakan bahwa PDA terbuat dari 4 komposisi yaitu kentang, dextrosa, agar,
dan aquades. Kentang merupakan sumber karbohidrat, vitamin dan energi bagi
fungi dan dextrose sebagai sumber gula dan energi. Hal ini sesuai dengan
pendapat Wantini dan Oktavia (2018) yang benyatakan bahwa dextrose
merupakan sumber gula dan energi pada media Potato Dextrose Agar (PDA).
Komponen agar berfungsi untuk memadatkan medium Potato Dextrose Agar

27
(PDA). Hal ini sesuai dengan pendapat Marfuah dkk. (2018) yang menyatakan
bahwa agar berfungsi untuk memadatkan media. Akuades berfungsi untuk
melarutkan semua bahan untuk pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA).
Hal ini sesuai dengan pendapat Astriyani dkk. (2017) yang menyatakan bahwa
aquades digunakan untuk melarutkan senyawa. PDA adalah Potato Dexstose Agar
yang merupakan media tumbuh yang baik untuk fungi atau jamur. Hal ini sesuai
dengan pendapat Indriati dkk. (2010) yang menytakan bahwa Potato Dextrose
Agar (PDA) memiliki fungsi sebagai media untuk pertumbuhan kapang.

28
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan dapat disimpulkan
bahwa alat-alat yang digunakan dalam praktikum mikrobiologi terdapat alat
elektrik meliputi yaitu mikroskop cahaya, oven, inkubator, autoklaf, laminar air
flow, timbangan analitik, hot plate stirrer, alat gelas meliputi tabung reaksi, gelas
beker, labu erlenmeyer, gelas ukur, cawan petri, pipet tetes, pipet ukur, pembakar
bunsen, batang L, alat non gelas meliputi mortar dan penumbuk, mikropipet, pH
indikator, pinset, jarum inokulum, spatula, dam cawan porselen. Media yang
digunakan adalah Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red, Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue dan Potato Dextrose Agar
(PDA) instan.
5.2. Saran
Saran yang diberikan untuk praktikum pengenalan alat dan bahan yaitu
diharapkan pada waktu berjalannya praktikum dapat mengefisiensikan waktu, dan
pada saat dijelaskan oleh praktikan lain sebaiknya memperhatikan.

29
ACARA II
STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIA

30
BAB I
PENDAHULUAN
Sterilisasi merupakan pemusnahan atau eliminasi
semua mikroorganisme, termasuk spora bakteri, yang sangat resisten. Sterilisasi
adalah suatu cara yang digunakan untuk mensterilkan barang-barang yang pada
sebuah praktikum atau percobaan. Sterilisasi dibagi menjadi dua bagian yaitu
sterilisasi basah dan sterilisasi kering. Sterilisasi basah merupakan teknik
sterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada suhu dan tekanan tertentu. Autoklaf
biasanya untuk mensterilkan alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian
mikrobiologi. Semua alat serta media yang digunakan dalam penelitian terlebih
dahulu disterilisasi kering dengan api bunsen atau oven dan disterilisasi basah
dengan autoklaf. Sterilisasi kering merupakan sterilisasi alat alat kering seperti
cawan petri, tabung reaksi, gelas beker. Sterilisasi kering menggunakan oven
untuk sterilisasi. Sterilisasi basah lebih efektif dibandingkan sterilisai kering
karena pada sterilisai basah membutuhkan waktu yang lebih pendek dan dapat
menghantarkan energi thermal yang baik.
Tujuan dari praktikum teknik sterilisasi dan pembuatan media adalah untuk
mengetahui teknik sterilisasi, kerja aseptis dan cara membuat media. Manfaat dari
praktikum teknik sterilisasi dan pembuatan media adalah dapat mengetahui teknik
sterilisasi, kerja aseptis dan cara membuat media.
.
31
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Sterilisasi
Sterilisasi basah merupakan teknik sterilisasi dengan menggunakan
autoklaf pada suhu dan tekanan tertentu. Autoklaf biasanya untuk mensterilkan
alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian mikrobiologi. Semua alat serta
media yang digunakan dalam penelitian terlebih dahulu diasterilisasi kering
dengan api bunsen atau oven dan disterilisasi basah dengan autoklaf. Alat-alat
yang akan disterilisasi, dimasukkan ke dalam autoklaf bersuhu 121°C pada
tekanan 15 psi selama 20 sampai 30 menit (Shofiyani dkk., 2017). Teknik
sterilisasi ini berguna untuk menghilangkan mikroorganisme yang tidak
diinginkan. Prinsip kerja sterilisasi basah dengan autoklaf yaitu air di didihkan
hingga uap dalam keadaan jenuh dan tekanan meningkat, sehingga suhu ikut
meningkat sampai 121°C yang akan memusnahkan mikroorganisme vegetatif
maupun spora (Lestari dkk., 2018).
Sterilisasi kering merupakan salah satu teknik sterilisasi dengan
menggunakan udara panas. Teknik sterilisasi kering digunakan untuk
mensterilkan alat-alat yang akan digunakan untuk penelitian. Alat-alat yang akan
digunakan seperti cawan petri, pinset, dan tabung reaksi dicuci, dikeringkan,
kemudian dibungkus dengan kertas dan dimasukkan pada oven pada suhu 160°C
selama kurang lebih 2 jam (Kowal dkk., 2018). Proses sterilisasi kering berguna
32
untuk menghilangkan mikroorganisme yang menempel pada alat-alat yang akan
digunakan dalam penelitian. Sterilisasi kering menggunakan oven dengan suhu
180°C, dengan tujuan untuk mematikan semua kehidupan mikroorganisme yang
terdapat pada alat (Indrawati dkk., 2019). Sterilisasi basah lebih efektif dilakukan
dibandingkan dengan sterilisasi kering. Hal ini karena pada sterilisasi basah suhu
yang digunakan tidak terlalu tinggi, uap air mengembun pada bahan-bahan yang
disterilkan menyebabkan protein terdenaturasi dan mematikan organisme tersebut,
sedangkan pada sterilisasi kering membutuhkan suhu yang sangat tinggi dan
waktu yang lebih lama (Cahyani, 2009).
2.2. Media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) CR ( Congo Red ) dan
BTB ( Brome Thymol Blue )
Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red adalah suatu media
yang digunakan untuk mengisolasi mikroba pada kegiatan mikrobiologi. Media
YEMA CR memiliki kepanjangan yeast ekstrak mannitol agar congo red, adalah
media yang berkaitan dengan mikrobiologi dibutuhkan untuk media isolasi
mikroba (Purwaningsih, 2010). Kandungan Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Congo Red terdiri dari K2HPO4, MgSO47H20, NaCl, ekstrak khamir, agar,
aquades, mannitol, dan congo red (Antonius dkk., 2015). K2HPO4 merupakan
senyawa kimia anorganik yang biasa digunakan untuk zat penyangga. Senyawa
K2HPO4 berfungsi sebagai larutan penyangga (Afid, 2016). MgSO4.7H2O atau
disebut dengan magnesium sulfat yang merupakan komposisi dalam media Yeast
Extract Monnitol Agar (YEMA) yang mengandung magnesium, sulfur, dan

33
oksigen. Senyawa MgSO4.7H2O berfungsi untuk menyerap sisa air pada media
yang digunakan ketika percobaan (Fitriadi dan Putri, 2016). Fungsi NaCl yang
biasa digunakan untuk membunuh mikroba lain. NaCl berfungsi sebagai
pembunuh mikroba selain mikroba yang akan diinokulasi (Amalia dkk., 2016).
Komposisi Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yang biasa digunakan
dalam menurunkan tekanan adalah mannitol. Mannitol berfungsi untuk
menurunkan tekanan tanah yang berlebih (Roostika dkk., 2016). Ekstrak khamir
merupakan senyawa organik yang berfungsi sebagai sumber energi yang tidak
membutuhkan cahaya matahari untuk pemenuhan nutrisi mikroba. Senyawa
ekstrak khamir berfungsi sebagai nutrisi untuk mikroba (Saskiawan dkk., 2017).
Agar merupakan salah satu media yang dapat digunakan untuk
memadatkan media. Bahan agar berfungsi untuk memadatkan media tumbuh
mikroba (Marfuah dkk., 2018). Akuades merupakan air biasa pada umumnya
yang tidak berasa, berbau ataupun berwarna. Air akuades berfungsi untuk
melarutkan semua bahan untuk pembuatan media Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) (Astriyani dkk., 2017).
Yeast Extract Monnitol Aagar Congo Red (YEMA CR) adalah media
tanam mikroba yang berwarna merah dan berfungsi sebagai indikator. Congo Red
berfungsi sebagai indikator suatu mikroorganisme untuk mengetahui tumbuh atau
tidaknya mikroba dengan adanya warna putih susu pada media agar yang tidak
merubah warna agar (Sembiring, 2019). Brome Thymol Blue adalah media tanam
mikroba yang berwarna biru dan berfungsi sebagai indikator. Brome Thymol Blue
merupakan indikator untuk mengetahui apakah bakteri tumbuh atau tidaknya pada
34
suatu media namun berbeda dengan Congo Red yang berwarna merah, Brome
Thymol Blue (BTB) berubah warna dari biru menjadi kekuningan ataupun hijau
kebiruan (Widianingsih dan De jesus, 2018). Mikroba dapat di identifikasi dengan
menggolongkan jumlah koloninya pada Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Brome Thymol Blue. Identifikasi mikroba sangat perlu dilakukan untuk
mengetahui jenis bakteri yang diinginkan (Nursanti, 2017). Syarat media Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) yang baik adalah memiliki pH yang sesuai.
Bakteri akan berkembang biak jika ada suatu media memiliki pH yang sesuai
dengan kondisi untuk pertumbuhannya (Fajrin dkk., 2017).
2.3 Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Media Potato Dextrose Agar (PDA) adalah suatu tempat untuk
membiakan mikroorganisme. Potato Dextrose Agar (PDA) merupakan suatu
media yang digunakan untuk membiakan suatu mikroorganisme (cendawan atau
fungi, bakteri, dan makhluk hidup lainnya) (Sari dkk., 2018). Komposisi dari
Potato Dextrose Agar (PDA) adalah ekstrak kentang, dextrose atau gugusan gula,
agar, dan aquades. Berdasarkan komposisinya Potato Dextrose Agar (PDA)
termasuk dalam media semi sintetik karena tersusun atas bahan alami (kentang)
dan bahan sintesis (dextrose dan agar) (Wantini dan Octavia dkk, 2017).
Dextrose adalah penyedia energi bagi biakan dan kentang sebagai
karbohidrat atau makanan bagi biakan. Kentang berfungsi sebagai sumber
karbohidrat, vitamin dan energi sedangkan dextrose sebagai sumber gula dan
energi (Wantini dan Oktavia, 2018). Agar merupakan komposisi yang digunakan
35
untuk memadatkan media. Komponen agar berfungsi untuk memadatkan media
Potato Dextrose Agar (PDA) (Fatmariza dkk., 2019). Fungsi akuades adalah
untuk melarutkan semua komposisi pada media Potato Dextrose Agar (PDA).
Akuades berfungsi untuk melarutkan semua bahan pada pembuatan media Potato
Dextrose Agar (PDA) (Astriyani dkk., 2017). Potato Dextrose Agar (PDA) adalah
suatu media tanam yang baik karena dapat memenuhi kebutuhan nutrisi biakan.
Media Potato Dextrose Agar (PDA) adalah media yang paling baik untuk
perkembangbiakan fungi karena di dalamnya terdapat pH yang sesuai, dan tidak
mengandung zat-zat yang menghambat pertumbuhan (Taurisia dkk., 2015).

36
BAB III
MATERI DAN METODE
Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada tanggal 22 September 2019
pukul 10.00 – 12.00 di Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman, Fakultas
Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang.
3.1. Materi
Materi yang digunakan pada praktikum acara Sterilisasi dan Pembuatan
Media berupa alat dan bahan. Bahan yang digunakan Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) Congo Red serta Potato Dextrose Agar (PDA). Alat yang
digunakan adalah autoklaf untuk sterilisasi media Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) Congo Red dan Potato Dextrose Agar (PDA), cawan petri untuk wadah
yang akan disterilisasi kering, oven untuk sterilisasi kering.
3.2. Metode
Metode yang digunakan pada sterilisasi basah adalah sterilisasi basah
dimasukkan media dan alat yang akan disterilkan kedalam erlenmeyer atau tabung
reaksi, kemudia ditutup rapat dengan kapas, dimasukkan erlenmeyer atau tabung
reaksi dalam autoklaf dan tutup dengan rapat, dinyalakan autoklaf, ditunggu
hingga manometer dan thermometer pada suhu 121oC dengan tekanan 2 atm
selama 15 menit, setelah 15 menit, ditunggu hingga tekanan berkisar 0,5 atm,
dibuka katup pengaman dan dibiarkan autoklaf tidak lagi mengeluarkan uap,
37
setelah itu buka autoklaf dan keluarkan alat dan medianya, untuk media agar,
untuk menurunkan suhunya dan menjaga agar tidak beku dimasukkan kedalam
inkubator suhu 55oC sebelum digunakan.
Metode yang digunakan pada sterilisasi kering adalah sterilisasi kering
dimasukkan pipet, ose, cawan petri, erlenmeyer sesuai kebutuhan, dibersihkan
cawan petri menggunkan kapas yang dibasahi dengan alkohol, kemudian bungkus
dengan kertas pembungkus, dibersihkan pipet hisap dan sumbat pangkal pipet
dengan kapas dan bungkus dengan kertas pembungkus, dibersihkan ose dan
bungkus dengan kertas, ditutup mulut erlenmeyer dengan alumunium foil yang
rapat, dimasukkan cawan petri, pipet, ose dan erlenmeyer dalam oven dengan
suhu 170oC selama 2 jam, dikeluarkan alat-alat dari oven dan tunggu hingga
dingin sebelum digunakan.
Metode yang digunakan pada pembuatan Yeast Exstract Mannitol Agar
Congo Red (YEMA CR) dan Yeast Exstract Mannitol Agar Brom Tymol Blue
(YEMA BTB) adalah bahan bahan pembuatan media Yeast Exstract Mannitol
Agar Congo Red (YEMA CR) dan Yeast Exstract Mannitol Agar Brom Tymol
Blue (YEMA BTB) ditimbang sesuai kebutuhan dengan 0,125 gram K2HPO4;
0,05 gram MgSO4. 7H2O; 0,025 gram NaCl; 2,5 gram mannitol; 0,25 gram ekstrak
khamir; 5 gram agar; 250 ml akuades; 0,625 gram Congo Red 1% dan 10 gram
media Potato Dextrose Agar (PDA), larutkan dalam akuades, kemudian aduk
menggunakan stirrer dan autoklaf disterilisasi, setelah steril, tuang dalam cawan
petri sebanyak 10 ml tiap cawan dan tabung reaksi sebanyak 7 ml tiap tabung,
ditunggu sampai agar memadat dan diinkubasikan secara terbalik.

38
Metode yang digunakan pada pembuatan Potato Dextrose Agar (PDA) dan
media Yeast Exstract Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR) adalah komponen
media ditimbang dengan menggunakan timbangan analitis seberat 10 gram dan
komponen lainnya seperti 0,125 gram K2HPO4; 0,05 gram MgSO4. 7H2O; 0,025
gram NaCl; 2,5 gram mannitol; 0,25 gram ekstrak khamir; 5 gram agar; 250 ml
akuades; 0,625 gram Congo Red 1%, agar dilarutkan dengan hot plate stirrer
dalam 50 ml akuades, lalu media dituangkan ke dalam Erlenmenyer atau ke
tabung reaksi, kemudian siap di sterilisasi.

39
BAB IV
4.1. Sterilisasi
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat diperoleh hasil bahwa
sterilisasi basah merupakan teknik sterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada
suhu dan tekanan tertentu. Autoklaf digunakan sebagai alat pensterilisasi basah
(Lampiran 1.). Hal ini sesuai pendapat Shofiyani dkk. (2017) yang menyatakan
bahwa alat-alat yang akan disterilisasi terlebih dahulu dimasukkan ke dalam
autoklaf yang bersuhu 121°C pada tekanan 1,5 atm selama 20 sampai 30 menit.
Sterilisasi digunakan untuk menghilangkan mikroorganisme yang tidak
dibutuhkan dalam percobaan. Hal ini sesuai pendapat Lestari dkk. (2018) yang
menyatakan bahwa teknik sterilisasi ini berguna untuk menghilangkan
mikroorganisme yang tidak diinginkan. Prinsip kerja sterilisasi basah dengan
autoklaf yaitu air di didihkan hingga menguap dalam keadaan jenuh dan tekanan
meningkat, sehingga suhu ikut meningkat sampai 121°C yang akan membunuh
mikroorganisme vegetatif. Hal ini sesuai pendapat Saniwanti dkk. (2015) yang
menyatakan bahwa penggunaan autoklaf pada sterilisasi basah menggunakan
tekanan bersuhu 121℃.
Sterilisasi kering digunakan untuk peralatan yang bersifat gelas. Alat-alat
gelas yang digunakan pada sterilisasi kering seperti tabung reaksi, cawan petri,
dan pipet. Hal ini sesuai dengan pendapat Hidayat dkk. (2013) yang menyatakan
40
bahwa tabung reaksi, cawan petri bersifat gelas dan merupakan alat yang tahan
panas pada suhu tinggi. Sterilisasi kering adalah sterilisasi yang menggunakan
oven sebagai alat pensterilnya dengan suhu yang tinggi (Lampiran 1.). Hal ini
sesuai pendapat Korwal dkk. (2018) yang menyatakan alat yang digunakan seperti
cawan petri, pinset, dan tabung reaksi dicuci, dikeringkan, dan dibungkus dengan
kertas dan dimasukkan pada oven pada suhu 160°C selama kurang lebih 2 jam.
Sterilisasi basah lebih efektif dilakukan dibandingkan dengan sterilisasi kering
karena waktu yang digunakan lebih singkat untuk mensterilkan. Hal ini sesuai
dengan pendapat Cahyani (2009) yang menyatakan bahwa pada sterilisasi basah
suhu yang digunakan tidak terlalu tinggi, uap air mengembun pada bahan yang
disterilkan menyebabkan protein terdenaturasi dan dapat mematikan organisme
yang terdapat pada bahan dalam waktu yang lebih singkat, sedangkan pada
sterilisasi kering membutuhkan suhu yang sangat tinggi dan waktu yang lebih
lama.
4.2. Media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red dan Brome
Thymol Blue
Media yang digunakan untuk isolasi bakteri Rhizobium adalah Yeast
Extract Monnitol Agar (YEMA) Congo Red dan Yeast Extract Monnitol Agar
(YEMA) Brome Thymol Blue. Hal ini sesuai pendapat Purwaningsih (2010) yang
menyatakan bahwa Yeast Extract Monnitol Agar Congo Red (YEMA CR) Yeast
Extract Monnitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue berkaitan dengan
mikrobiologi yang dibutuhkan untuk media isolasi mikroba. Yeast Extract

41
Monnitol Agar Brome Thymol Blue (YEMA BTB) dapat digunakan sebagai suatu
indikator yang merubah warna biru menjadi kuning kehijauan ketika CO2
ditambahkan. Yeast Extract Monnitol Agar Brome Thymol Blue (YEMA BTB)
dan berfungsi sebagai pengidentifikasi jumlah koloni yang ada. Hal ini sesuai
dengan pendapat Nursanti (2017) yang menyatakan bahwa teknik identifikasi
mikroba dapat dilakukan berdasarkan jumlah koloni pada media Yeast Extract
Monnitol Agar Brome Thymol Blue (YEMA BTB).
Komposisi yang digunakan pada pembuatan Yeast Exstract Mannitol
Agar Congo Red (YEMA CR) dan Yeast Exstract Mannitol Agar Brom Tymol
Blue (YEMA BTB) adalah dengan K2HPO4, MgSO4. 7H2O, NaCl, mannitol,
ekstrak khamir, agar, akuades, indikator Congo Red dan Brom Thymol Blue. Hal
ini sesuai pendapat Antonius dkk. (2015) yang menyatakan bahwa kandungan
Yeast Extract Monnitol Agar (YEMA) terdiri dari K2HPO4, MgSO47H20, NaCl,
ekstrak khamir, agar, aquades, mannitol. K2HPO4 adalah senyawa kimia
anorganik yang biasa digunakan untuk zat penyangga pada Yeast Exstract
Mannitol Agar (YEMA) (Lampiran 2.). Hal ini sesuai pendapat Afid (2016) yang
menyatakan bahwa senyawa K2HPO4 berfungsi sebagai larutan penyangga.
MgSO4.7H2O merupakan komposisi dalam media Yeast Extract Monnitol
Agar (YEMA) yang mengandung magnesium, sulfur, dan oksigen yang berfungsi
untuk menyerap sisa-sisa air pada media (Lampiran 2.). Hal ini sesuai dengan
pendapat Fitriadi dkk. (2016) yang menyatakan bahwa MgSO4.7H2O berfungsi
untuk menyerap sisa air pada media yang digunakan. NaCl digunakan untuk
membunuh mikroba lain yang tidak digunakan pada media. Hal ini sesuai dengan
42
pendapat Amalia dkk. (2016) yang mneyatakan bahwa larutan NaCl berfungsi
membunuh mikroba selain mikroba yang akan diinakulasi pada media.
Komposisi Yeast Extract Monnitol Agar (YEMA) yang biasa digunakan
dalam menurunkan tekanan pada media adalah mannitol (Lampiran 2.). Hal ini
sesuai dengan pendapat Roostika dkk. (2016) yang menyatakan bahwa mannitol
berfungsi untuk menurunkan tekanan yang berlebih pada media tumbuh. Ekstrak
khamir merupakan senyawa organik yang berfungsi sebagai sumber energi yang
tidak membutuhkan cahaya matahari untuk pemenuhan nutrisi mikroba. Hal ini
sesuai dengan pendapat Saskiawan dkk. (2017) yang menyatakan bahwa ekstrak
khamir berfungsi sebagai nutrisi atau makanan untuk mikroba.
Agar merupakan salah satu media yang dapat digunakan untuk
memadatkan media. Hal ini sesuai dengan pendapat Marfuah (2018) yang
menyatakan bahwa agar berfungsi untuk memadatkan media tumbuh mikroba.
Akuades merupakan air biasa pada umumnya yang tidak berasa, berbau ataupun
berwarna yang digunakan untuk melarutkan semua komposisi media. Hal ini
sesuai pendapat Astriyani dkk. (2017) yang menyatakan bahwa akuades berfungsi
untuk melarutkan semua bahan untuk pembuatan media Yeast Extract Monnitol
Agar (YEMA).
Komposisi yang membedakan pada kedua Yeast Extract Monnitol Agar
(YEMA) tersebut adalah Congo Red dan Brome Thymol Blue. Yeast Extract
Monnitol Agar Congo Red (YEMA CR) adalah media tanam mikroba yang
mengandung Congo Red berfungsi sebagai indikator. Hal ini sesuai dengan
pendapat Sembiring (2019) yang menyatakan bahwa Congo Red berfungsi

43
sebagai indikator suatu mikroorganisme untuk mengetahui tumbuh atau tidaknya
mikroba dengan adanya warna putih susu pada media agar yang tidak merubah
warna agar (Lampiran 2. ). Brome Thymol Blue adalah indikator yang berwarna
biru untuk mengetahui adanya bakteri atau tidak pada suatu media. Hal ini sesuai
dengan pendapat Widianingsih dkk. (2018) yang menyatakan bahwa Brome
Thymol Blue merupakan indikator untuk mengetahui apakah bakteri tumbuh atau
tidaknya pada suatu media namun berbeda dengan Congo Red yang berwarna
merah, Brome Thymol Blue (BTB) berubah warna dari biru menjadi kekuningan
ataupun hijau kebiruan. Syarat media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yang
baik adalah memiliki pH yang sesuai untuk mikroorganisme. Hal ini sesuai
dengan pendapat Fajrin dkk. (2017) yang menyatakan bahwa bakteri akan
berkembang biak jika ada suatu media memiliki pH yang sesuai dengan kondisi
untuk pertumbuhannya.
4.3. Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar (PDA) adalah media untuk membiakan
miroorganisme seperti fungi atau cendawan, bakteri dan makhluk hidup lainnya
(Lampiran 2.). Mikroorganisme dapat dibiakan dengan sempurna jika media
yang digunakan mengandung nutrisi yang cukup bagi kelangsungan hidup
mikroorganisme tersebut. Hal ini sesuai pendapat Octavia dkk. (2017) yang
menyatakan bahwa komposisi Potato Dextrose Agar (PDA) termasuk dalam
media semi sintetik karena tersusun atas bahan alami (kentang) dan bahan sintesis
(dextrose dan agar). Kentang merupakan sumber karbon (karbohidrat), vitamin

44
dan energi, dextrose sebagai sumber gula dan energi. Media yang sering
digunakan dalam pembiakan mikroorganisme adalah media Potato Dextrose Agar
(PDA), ini dikarenakan Potato Dextrose Agar (PDA) tersususun dari karbohidrat
dan gula. Hal ini sesuai dengan pendapat Taurisia dkk. (2015) yang menyatakan
bahwa media Potato Dextrose Agar (PDA) adalah media yang paling baik untuk
perkembangbiakan mikroorganisme.
Komposisi dari Potato Dextrose Agar (PDA) adalah ekstrak kentang,
dextrose atau gugusan gula, agar, dan akuades. Dextrose adalah penyedia energi
bagi biakan dan kentang sebagai karbohidrat atau makanan bagi biakan. Hal ini
sesuai dengan pendapat Wantini dkk. (2018) bahwa ekstrak kentang berfungsi
sebagai sumber karbohidrat, vitamin dan energi sedangkan dextrose sebagai
sumber gula dan energi Agar merupakan komposisi yang digunakan untuk
memadatkan media. Hal ini sesuai pendapat Fatmariza dkk. (2019) yang
menyatakan bahwa komponen agar berfungsi untuk memadatkan media Potato
Dextrose Agar (PDA).
Fungsi akuades untuk melarutkan semua komposisi pada media Potato
Dextrose Agar (PDA). Hal ini sesuai pendapat Astriyani dkk. (2017) yang
menyatakan bahawa akuades berfungsi untuk melarutkan semua bahan pada
pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA). Potato Dextrose Agar (PDA)
adalah suatu media tanam yang baik karena dapat memenuhi kebutuhan nutrisi
pada mikroorganisme dan mempunyai pH yang sesuai untuk pertumbuhan fungi.
Hal ini sesuai dengan pendapat Taurisia dkk. (2015) yang menyatakan bahwa
syarat media Potato Dextrose Agar (PDA) yang baik adalah mempunyai tekanan
45
osmosis, tegangan permukaan dan derajat keasaman yang sesuai, serta tidak
mengandung zat-zat yang menghambat pertumbuhan bakteri dan mempunyai
nutrisi yang cukup untuk kebutuhan.

46
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa
pada sterilisasi basah digunakan sebuah alat autoklaf dan sterilisasi kering
digunakan sebuah alat yaitu oven. Syarat media Yeast Extract Mannitol Agar
(YEMA) yang baik adalah mempunyai kadar pH yang sesuai untuk media
tumbuh. Syarat media Potato Dextrose Agar (PDA) yang baik adalah memiliki
derajat keasaman yang sesuai dan tidak mengandung zat-zat yang dapat
menghambat pertumbuhan fungi.
5.2. Saran
Saran yang diberikan untuk praktikum sterilisasi dan pembuatan media
adalah pada pembuatan media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red
dan Potato Dextrose Agar (PDA) harus benar-benar homogen, pada saat sterilisasi
alat-alat kering harus dilakukan dengan hati-hati agar alat tidak pecah saat
dilakukan pemanasan atau sterilisasi.

47
ACARA III
ISOLASI MIKROORGANISME
48
BAB I
PENDAHULUAN
Mikroorganisme atau mikroba adalah makhluk hidup yang memiliki
ukuran kecil sehingga dalam pengamatannya harus menggunakan mikroskop.
Jumlah mikroba di alam tersebar dimana-mana dan sangat banyak. Mikroba bisa
ditemukan di dalam tubuh manusia, hewan, makanan, dan lain sebagainya.
Keberadaan mikroba juga dapat ditemukan pada komponen abiotik yang ada di
alam seperti tanah, air, dan udara.
Isolasi adalah cara untuk memisahkan mikroba dari lingkungan sehingga
memperoleh kultur murni dengan bantuan media buatan. Beberapa cara yang
dilakukan antara lain, dengan cara goresan, cara tuang, cara sebar, dan cara
mikromanipulator. Percobaan isolasi ini untuk memelihara suatu mikroorganisme
yaitu bakteri dan jamur serta membedakan setiap mikroorganisme. Fungsi dari
media itu sendiri adalah untuk menumbuhkan mikroba dan memperbanyak
jumlah. Media yang dipakai untuk mengisolasi jamur adalah medium Potato
Dextros Agar (PDA) dan media yang dipakai untuk mengisolasi bakteri adalah
medium Yeast Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR) dan Yeast Mannitol Agar
Bromo Thymol Blue ( YEMA BTB).
Tujuan praktikum acara isolasi mikroorganisme adalah memindahkan
mikroorganisme pada media baru dan dapat memperbanyak mikroorganisme.
Manfaat praktikum acara isolasi mikroorganisme adalah mampu mengetahui cara
mengisolasi mikroorganisme dengan baik dan benar.

49
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Tanaman Kacang Tanah (Arachis hypogaea L.)
Tanaman kacang tanah (Arachis hypogaea L.) adalah tanaman berkeping
dua atau dikotil. Asal tanaman kacang tanah yaitu dari Amerika Selatan tepatnya
di Brazillia. Kondisi lingkungan yang cocok untuk ditanami kacang tanah yaitu
kondisi tanah dengan oksigen 67, keasaman 6, kelembaban 51, tekstur 0,9, dan
suhu 32°C (Mukminin dkk., 2017). Berikut ini klasifikasi dari tanaman kacang
tanah:
Kingdom : Plantae
Divisi : Spermatophyta
Kelas : Dicotyledoneae
Ordo : Leguminales
Famili : Papilionaceae
Genus : Arachis
Spesies : Arachis hypogeae L. (Mawartiningsih, 2017)
Tanaman kacang tanah memiliki ciri daun, bunga, buah, biji, dan akar
yang kecil. Daun pada tanaman kacang tanah berbentuk menyirip, bunganya
berwarna putih, buahnya berbentuk polong, warna biji kacang tanah yang
bervariasi dan akarnya adalah akar tunggang (Mutia dkk., 2013). Morfologi
tanaman kacang tanah dapat dilihat dari bentuknya. Batang pada tanaman kacang
memiliki ciri tidak berkayu, jenis batangnya perdu, berambut atau berbulu,
50
berbentuk bulat dan berwarna hijau (Murtiana dkk., 2017). Hal yang unik dari
tanaman kacang tanah yaitu memiliki nodul atau bintil pada akarnya. Akar
tanaman kacang tanah terdapat bakteri Rhizobium yang bersimbiosis dengan cara
membentuk nodul akar dan menghasilkan tryptophan, oleh bakteri akan menjadi
asam indol asetat atau IAA (Agustian dkk., 2010).
2.2. Isolasi Rhizobium
Isolasi bakteri adalah cara yang digunakan untuk memisahkan mikroba
dari lingkungan sehingga memperoleh kultur murni. Proses isolasi mikroba yaitu
memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain yang berasal dari campuran
berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan, morfologi dan sifat
mikroba lainnya (Puspitasari dkk., 2012). Tujuan isolasi mikroorganisme yaitu
memindahkan mikroorganisme pada media baru dan dapat memperbanyak
mikroorganisme tersebut. Bakteri yang tumbuh diambil dan dibiakkan kembali
pada media agar hingga diperoleh biakan murni (Fitri dan Yasmin, 2011).
Bakteri Rhizobium dapat tumbuh pada bintil akar tanaman legum bila
tanaman tersebut mampu memberikan asupan makanan. Tujuan dari isolasi
bakteri adalah untuk mengetahui keberadaan bakteri Rhizobium yang terdapat
pada bintil akar kacang tanah (Purwaningsih, 2010). Keberadaan bakteri
Rhizobium sangat penting keberadaanya bagi kesuburan tanah dan tanaman
legum. Isolat bakteri Rhizobium dapat dimanfaatkan sebagai pupuk hayati, karena
bakteri Rhizobium mampu meningkatkan kesuburan tanah pertanian dengan cara
menyerap nitrogen di udara (Widawati, 2015).

51
Tanaman kacang tanah merupakan salah satu jenis tanaman legum yang
mampu mengikat nitrogen bebas di udara. Hubungan bintil akar tanaman kacang
tanah dengan bakteri Rhizobium yaitu simbiosis mutualisme artinya bakteri
mendapat asupan makanan dari tanaman inangnya, sedangkan tanaman kacang
tanah mendapat nitrogen yang diserap oleh bakteri Rhizobium sehingga terbentuk
bintil-bintil akar (Marwan dan Handayani, 2019). Proses pertumbuhan tanaman
legum sangat membutuhkan nitrogen dalam jumlah cukup sebagai pembentuk
asam amino. Pengambilan nitrogen bebas di udara membutuhkan bantuan
mikroorganisme yang mampu mengikat nitrogen tersebut. Bakteri Rhizobium
bersimbiosis pada tanaman legum dengan cara menginfeksi akar tanaman dan
membentuk bintil akar (Fitriana dkk., 2015).
Proses pemindahan suatu kultur campuran untuk menjadi kultur murni
adalah langkah awal dalam tahap isolasi mikroba. Koloni bakteri Rhizobium pada
media Yeast Extract Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR) yang memiliki
warna putih dimurnikan dengan teknik menggores permukaan agar dengan jarum
ose yang telah diinokulasikan atau disebut streak plate (Kaburuan dkk., 2014).
Isolasi Rhizobium memerlukan akuades dan alkohol dalam prosesnya. Fungsi
akuades digunakan untuk melarutkan bahan media uji dan fungsi alkohol
digunakan untuk mensterilkan alat praktikum yang akan digunakan dan
merendam bintil akar (Diana dan Marziah, 2017). Syarat hidup bakteri salah
satunya dipengaruhi pH tanah di lingkungan yang ditempati. Bakteri penambat
nitrogen tumbuh dengan baik di kisaran pH tanah 6,1 – 7,0 (Rohmah dkk., 2016).
52
2.3. Isolasi Fungi
Isolasi fungi dilakukan untuk mengetahui bentuk dari fungi itu sendiri
baik secara mikroskopis maupun makroskopis. Isolasi fungi bermanfaat untuk
mengetahui ciri-ciri morfologi unik yaitu dari segi warna, tekstur, ukuran, bentuk
permukaan dan lain sebagainya (Ansiga dkk., 2017). Tujuan dari isolasi fungi
yaitu memisahkan fungi dari lingkungannya sehingga diperoleh kultur murni.
Isolasi fungi dilakukan untuk mengetahui jenis funginya dan mengetahui jumlah
fungi di sekitar tanah tanaman kacang tanah (Purwantisari dan Hastuti, 2009).
Fungi yang hidup di sekitar tanah tanaman legum sangat penting
peranannya. Beberapa kelompok fungi membentuk asosiasi dengan akar tanaman
yang disebut simbiosis (Prasasti dkk., 2013). Simbiosis yang terjadi saling
menguntungkan kedua pihak. Dampak dari adanya fungi di sekitar tanah yaitu
membantu tanaman legum dalam pertumbuhan, perlindungan terhadap penyakit,
dan peningkatan kualitas tanah (Kurniaty dkk., 2013). Kondisi lingkungan yang
cocok untuk tumbuh fungi yaitu di lingkungan lembab. Fungi tumbuh di kondisi
lingkungan dengan curah hujan 48,6% yang masuk dalam tipe curah hujan C yaitu
agak basah (Zakiah dan Nurhakiki, 2018).
Proses isolasi fungi dilakukan dengan metode pengenceran bertingkat.
Metode pengenceran bertingkat bertujuan mengurangi atau memperkecil jumlah
fungi yang tersuspensi dalam cairan (Yunita dkk., 2015). Teknik dalam proses
isolasi fungi teknik spread plate. Penanaman fungi pada media Potato Dextrose
Agar (PDA) dilakukan dengan teknik spread plate yaitu menyebar fungi secara
aseptis diatas medium yang sudah memadat (Zahidah dan Shovitri, 2013).
53
BAB III
MATERI DAN METODE
Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada tanggal 2 Oktober 2019 di
Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman serta Laboratorium Ekologi dan
Produksi Tanaman, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro,
Semarang.
3.1. Materi
Materi yang digunakan dalam Praktikum Mikrobiologi acara Isolasi
Mikroorganisme berupa alat dan bahan. Bahan yang digunakan adalah tanaman
kacang tanah (bintil akar) beserta tanahnya, alkohol, akuades, Yeast Extract
Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR), Yeast Extract Mannitol Agar Brome
Thymol Blue (YEMA BTB) dan Potato Dextrose Agar (PDA). Alat yang
digunakan adalah cawan petri untuk merendam bintil akar dengan alkohol,
Laminar Air Flow (LAF) menjaga sterilisasi ketika menangani pengkulturan
mikroba agar tidak terjadi kontaminasi, pinset untuk mengambil bintil akar
dengan cara menekan bintil akar, jarum ose digunakan untuk memindahkan
mikroba dari bintil akar ke media, cawan porselen digunakan untuk wadah tanah
yang akan disterilisasikan, mortar dan penumbuk digunakan untuk menghaluskan
tanah yang akan disterilisasi, timbangan analitik berfungsi sebagai alat untuk
menimbang tanah yang sudah ditumbuk halus seberat kurang lebih 1 gram, oven
berfungsi sebagai tempat untuk mensterilkan tanah, tabung reaksi sebagai tempat
54
saat menuangkan tanah setelah tahap sterilisasi dengan oven yang selanjutnya
untuk tahap isolasi.
3.2. Metode
Metode yang digunakan dalam Praktikum Mikrobiologi acara Isolasi
Mikroorganisme yaitu pada tanaman leguminosae pengambilan bintil akar dengan
cara memotong akar 0,5 cm pada setiap sisi bintil akar. Bintil akar direndam
dalam larutan etanol 96% selama 5 – 10 detik. Sterilan direndam dalam larutan
sublimat 0,1% selama 3 – 5 menit, kemudian dicuci lima kali dengan air steril.
Bintil akar dihancurkan dengan pinset, kemudian cairan bintil akar ditumbuhkan
pada media Yeast Extract Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR) dan diinkubasi
selama 3 – 5 hari pada suhu kamar (28°C). Bakteri yang telah tumbuh selama
masa inkubasi, diambil pada koloni terpisah dengan ciri-ciri warna putih susu
kemudian dipindahkan pada media Yeast Extract Mannitol Agar Congo Red
(YEMA CR) baru.
Proses isolasi fungi yaitu tanah dalam cawan porselen dipanaskan dengan
oven pada suhu 80°C selama 30 menit. Tanah yang telah dioven diambil 1 g dan
dimasukkan kedalam tabung reaksi. Tiga pengenceran terakhir diambil untuk
ditanam secara spread plate ke media Potato Dextroes Agar (PDA) yang
ditambah streptomycin atau penicillin. Diinkubasi pada suhu ruang 5 – 7 hari.

55
BAB IV
4.1. Isolasi Mikroorganisme
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan diperoleh hasil bahwa
terdapat bakteri Rhizobium pada bintil akar kacang tanah dan fungi di sekitar akar
kacang tanah (Lampiran 2.). Tanaman kacang tanah merupakan salah satu jenis
tanaman legum yang mampu mengikat nitrogen bebas di udara karena adanya
bakteri Rhizobium. Hal ini sesuai pendapat Marwan dan Handayani (2019) yang
menyatakan bahwa hubungan bintil akar tanaman kacang tanah dengan bakteri
Rhizobium yaitu simbiosis mutualisme artinya bakteri mendapat asupan makanan
dari tanaman inangnya, sedangkan tanaman kacang tanah mendapat nitrogen di
udara dari pengikatan nitrogen oleh bakteri Rhizobium sehingga terbentuk bintil
akar. Isolat bakteri Rhizobium dapat dimanfaatkan untuk pupuk hayati karena
bakteri Rhizobium mampu meningkatkan kesuburan tanah dengan menyerap
nitrogen di udara. Hal ini sesuai pendapat Widawati (2015) yang menyatakan
bahwa bakteri Rhizobium adalah bakteri yang berperan sebagai bakteri penambat
nitrogen simbiotik yang dapat menyuburkan tanah. Metode dalam proses isolasi
bakteri Rhizobium adalah streak plate berarti menumbuhkan bakteri di media agar
dengan menggoreskan jarum ose yang telah diinokulasi kultur bakteri. Hal ini
sesuai dengan pendapat Kaburuan dkk. (2014) yang menyatakan bahwa
penumbuhan koloni bakteri Rhizobium pada media Yeast Extract Mannitol Agar
Congo Red (YEMA CR) menggunakan metode streak plate. Syarat hidup bakteri
56
yang baik salah satunya dipengaruhi pH tanah netral. Hal ini sesuai dengan
pendapat Rohmah dkk. (2016) yang menyatakan bahwa bakteri penambat nitrogen
dapat tumbuh dengan baik di kisaran pH tanah 6,1 – 7,0.
Proses pembiakkan fungi seringkali terjadi timpang tindih sehingga perlu
dilakukan isolasi yang bermanfaat untuk mengetahui kultur murni dari fungi
tersebut. Isolasi fungi dilakukan berdasarkan ciri-ciri morfologi, warna, tekstur,
dan lain-lain. Hal ini sesuai dengan pendapat Ansiga dkk. (2017) yang
menyatakan bahwa isolasi fungi yang dilakukan bermanfaat untuk mengetahui
ciri-ciri morfologi unik yaitu dari segi warna, tekstur, ukuran, bentuk permukaan,
dan lain-lain. Media yang digunakan dalam proses isolasi fungi yaitu
menggunakan media Potato Dextrose Agar (PDA) (Lampiran 2.). Tujuan dari
isolasi fungi yaitu untuk memisahkan fungi dari lingkungannya dan mengetahui
jenis fungi. Hal ini sesuai pendapat Purwantisari dan Hastuti (2009) yang
menyatakan bahwa isolasi fungi dilakukan untuk mengetahui jenis fungi dan
mengetahui jumlah fungi di sekitar tanah tanaman kacang tanah (Lampiran 2.).
Fungi dan akar tanaman kacang tanah yang termasuk tanaman legum membentuk
simbiosis mutualisme. Hal ini sesuai pendapat Kurniaty dkk. (2013) yang
menyatakan bahwa fungi berperan penting membantu tanaman legum dalam
proses pertumbuhan, perlindungan terhadap penyakit, dan peningkatan kualitas
tanah. Metode dalam proses isolasi fungi yaitu spread plate. Hal ini sesuai dengan
pendapat Zahidah dan Shovitri (2013) yang menyatakan bahwa penanaman fungi
pada media Potato Dextrose Agar (PDA) dilakukan dengan teknik spread plate
yaitu menyebar fungi secara aseptis diatas medium yang sudah memadat. Fungi
57
dapat tumbuh di lingkungan yang cocok dari segi curah hujan, suhu, kelembaban,
dan lainnya. Hal ini sesuai pendapat Zakiah dan Nurhakiki (2018) yang
menyatakan bahwa syarat hidup fungi dapat dilihat dari kondisi cuaca berupa rata-
rata curah hujan 48,6% yang masuk kedalam tipe curah hujan C yaitu agak basah.
Isolasi fungi dilakukan dengan metode pengenceran bertingkat menggunakan
tabung reaksi untuk memperkecil jumah fungi dalam cairan. Hal ini sesuai dengan
pendapat Yunita dkk. (2015) yang menyatakan bahwa metode pengenceran
bertingkat bertujuan mengurangi atau memperkecil jumlah fungi yang tersuspensi
dalam cairan.
58
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
bakteri Rhizobium banyak ditemukan pada bintil akar kacang tanah dan fungi
banyak ditemukan pada tanah disekitar akar tanaman kacang tanah. Metode yang
digunakan dalam isolasi bakteri yaitu metode streak plate atau metode goresan
dan metode yang digunakan untuk isolasi fungi yaitu metode spread plate atau
metode sebar.
5.2. Saran
Saran yang dapat diberikan dalam Praktikum Acara Isolasi
Mikroorganisme yaitu penggunaan bintil akar pada tanaman kacang tanah lebih
diperbanyak sehingga bakteri Rhizobium lebih mudah ditemukan. Proses awal
isolasi fungi yaitu pengambilan tanah harus benar-benar di sekitar perakaran
karena sangat berpengaruh terhadap ada atau tidak adanya fungi. Penggunaan alat
praktikum harus diperhatikan dengan benar agar tidak terjadi kesalahan.

59
ACARA IV
IDENTIFIKASI MIKROORGANISME
60
BAB I
PENDAHULUAN
Mikroorganisme atau mikroba adalah suatu organisme yang berukuran
sangat kecil. Ukurannya kurang dari 1 mm sehingga untuk mengamati hal itu kita
harus menggunakan mikroskop sebagai alat bantu melihat mikroorganisme.
Mikroorganisme disebut juga organisme mikroskopik. Sifat mikroorganisme
sebagian kecil bersifat patogen. Mikroorganisme alami yang hidup di dalam tubuh
manusia disebut mikroorganisme normal. Jenis mikroorganisme dapat berupa
bakteri, fungi atau cendawan.
Cara untuk mengetahui suatu ciri dan ukuran suatu mikroba dapat
menggunakan dua cara, yaitu secara mikroskopis dan makroskopis. Mikroskopis
dengan cara mengamati sel mikroba yang masih hidup dengan menggunakan
metode pewarnaan gram. Pewarnaan gram ada dua macam yaitu pewarnaan gram
positif dan pewarnaan gram negatif. Dua pewarnaan tersebut menghasilkan hal
yang berbeda pada akhir percobaan. Bakteri gram positif akan menghasilkan
warna ungu dan bakteri gram negatif akan menghasilkan warna merah. Secara
makroskopis ciri mikroba dapat dilihat secara langsung bentuk dan warnanya.
Tujuan dari praktikum identifikasi mikroorganisme adalah mengetahui
bentuk dan ciri mikroorganisme secara mikroskopis dan makroskopis. Manfaat
dari praktikum identifikasi mikroorgansime adalah dapat membedakan bentuk dan
ciri mikroorganisme secara mikroskopis dan makroskopis.

61
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Bakteri Rhizobium
Rhizobium adalah bakteri yang terdapat dalam tanah. Bakteri Rhizobium
merupakan bakteri yang bersimbiosis dengan tumbuhan leguminoceae atau
kacang–kacangan untuk mengikat nitrogen. Bakteri Rhizobium adalah bakteri
pengikat nitrogen simbiotik yang mengurangi N2 menjadi amonia setelah
membentuk akar atau nodul batang dengan tanaman polongan (Wang dkk., 2011).
Ciri–ciri bakteri Rhizobium secara umum jika kita melihat bentuk koloninya,
misalnya; bentuknya bulat, bening, keruh atau opaque, dan putih. Bentuk
Rhizobium secara makroskopis berwarna putih susu, tidak transparan, bentuk
koloni sirkuler, konveks, semitranslusen, diameter 2 - 4 mm (Sari dkk., 2015).
Rhizobium secara makroskopis pada media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Congo Red adalah warna koloni putih susu, tidak transparan, bentuk koloni
sirkuler, konveks, dan semitranslusen . Bentuk koloni media Yeast Extract
Mannitol Agar (YEMA) menunjukkan bahwa Rhizobium tumbuh lambat, koloni
berbentuk bundar, berelevasi cembung berwarna putih susu (Arimurti, 2009).
Bakteri Rhizobium merupakan bakteri yang aktif mengkolonisasi akar.
Sifat dari bakteri Rhizobium sangat agresif dalam mengkolonisasi akar
menggantikan tempat mikroorganisme yang menimbulkan penyakit atau
mikroorganisme lain yang merugikan (Muhibuddin, 2018). Bakteri Rhizobium
sangat agresif terbukti karena bakteri Rhizobium mampu meningkatkan

62
pertumbuhan dan meningkatkan ketahanan tanaman. Rhizobium hanya dapat
memfiksasi nitrogen atmosfer bila berada di dalam bintil akar dari mitra
legumnya. Bakteri Rhizobium dapat memfiksasi nitrogen bebas hanya dengan
mitra legumnya (Fitriana dkk., 2015). Ciri Rhizobium adalah bakteri yang
memiliki ukuran sangat kecil dan memiliki ciri-ciri tertentu. Secara mikroskopis
sel bakteri Rhizobium berbentuk batang, aerobik, gram negatif dengan ukuran 0,5
- 0,9 x 1,2 - 3 μm, bersifat motil pada media cair, umumnya memiliki satu
flagella polar atau subpolar (Sari dan Prayudyaningsih, 2015).
Warna Rhizobium yang telah ditanam pada media Yeast Extract Mannitol
Agar Congo Red (YEMA CR) berwarna putih bening dan merah muda saat di
tumbuhkan. Rhizobium yang menunjukan warna bakteri putih bening dan merah
muda saat ditumbuhkan dengan Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red
yang berarti tidak menyerap atau sedikit menyerap warna merah dari indikator
Congo Red (Shetta dkk., 2011). Bakteri Rhizobium pada media Yeast Extract
Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue berwarna kuning. Indikator yang
muncul yaitu warna kuning pada media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA)
Brome Thymol Blue menunjukkan suasana asam dan berwarna biru pada suasana
basa (Prihanto dkk., 2018). Warna bakteri pada media Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) Brome Thymol Blue pada kondisi asam berwarna kuning. Bakteri
berwarna kuning pada kondisi asam menunjukan bahwa bakteri merupakan jenis
bakteri dengan pertumbuhan yang cepat (Fajrin dkk., 2017). Penyebab kegagalan
pada saat pembuatan media bakteri Rhizobium adalah inokulum tidak mampu
bersaing dengan populasi alam yang lebih besar dan tekanan lingkungan yang
63
berpengaruh. Faktor kegagalan saat pengembangbiakan bakteri Rhizobium adalah
ketidakmampuan inokulum bersaing dengan populasi alam yang lebih besar dan
menurunnya viabilitas inokulum akibat tekanan lingkungan (Fuskhah dkk., 2014).
Bakteri memerlukan suhu yang optimum untuk pertumbuhan. Suhu sangat
berpengaruh terhadap pertumbuhan dan kegiatan fisiologi bakteri atau mikroba
lain (Habib dan Aminudin, 2016). Teknik pewarnaan gram bakteri Rhizobium
yaitu bakteri yang berbentuk batang dengan ukuran sedang. Rhizobium merupakan
bakteri yang berbentuk batang atau basil (Pamungkas dan Irfan, 2018). Bakteri
Rhizobium merupakan salah satu bakteri gram negatif. Hasil pewarnaan gram
bakteri menghasilkan warna merah menunjukkan bahwa bakteri merupakan
bakteri gram negatif (Fitri dan Yasmin, 2011). Bakteri gram negatif mengandung
lipid yang tinggi dan dinding sel tipis, ketika mendapat perlakuan alkohol, lipid
terekstraksi akan memperbesar daya rembes (permeabilitas) dinding sel,
sedangkan bakteri gram positif mengandung lipid yang rendah akan terdehidrasi.
Ciri bakteri gram negatif adalah mengandung lipid yang tinggi, lipid akan
memperbesar daya rembes dinding sel ketika bereaksi dengan alkohol, warna
ungu bakteri gram positif setelah pewarnaan gram karena mengandung lipid yang
rendah, sehingga akan terdehidrasi oleh alkohol (Irfan, 2014).

64
2.2 Fungi
Isolasi mikroba fungi dilakukan dengan menggunakan media Potato
Dextrose Agar (PDA). Identifikasi karakteristik koloni fungi pada media Potato
Dextrose Agar (PDA) dilakukan setelah isolasi. Secara makroskopis, koloni jamur
berbentuk lingkaran tak beraturan dengan tepian bergerigi yang berukuran large.
Bagian depan dan belakang koloni fungi berwarna putih dengan permukaan halus
dan mengkilap. Koloni jamur yang tumbuh pada media Potato Dextrose Agar
(PDA) akan tumbuh dengan bentuk bulat berdiameter 2-3 cm, berwarna putih, dan
permukaannya halus (Gandi dkk., 2019). Bentuk fungi secara makroskopis adalah
berbentuk bulat dan berwarna putih. Fungi secara makroskopis adalah berbentuk
lingkaran yang tidak beraturan, koloni berwarna putih, permukaan halus, dan
berspora (Arifuddin dkk., 2017). Ciri-ciri kenampakan fungi yang bisa dilihat
yaitu koloni berwarna putih, permukaan halus mengkilap, dengan tepi permukaan
serrate atau bisa dikatakan bergerigi. Koloni fungi yang dibiakkan pada media
Potato Dextrose Agar (PDA) tumbuh koloni berwarna putih, bentuk tidak teratur,
permukaannya halus, dan pinggirannya berupa gerigi (Kawuri, 2016).
Bentuk fungi secara mikroskopis yaitu ada yang berbentuk miselium,
bentuk konidia, bentuk fialid, dan lain lain. Pengamatan mikroskopis dengan
melihat bentuk fungsi beragam seperti bentuk miselium, bentuk konidia, bentuk
fialid, bentuk makro dan mikrokonidia pada media PDA (Ngittu dkk., 2014).
Fungi secara mikroskopis berbentuk bulat dan memiliki warna putih. Ciri fungi
secara mikroskopis berbentuk bulat dan berwarna putih (Nainggolan dkk., 2014).
65
Fungi biasanya berwarna putih dan hidup berkoloni. Warna fungi pada
media Potato Dextrose Agar (PDA) berwarna putih pucat membentuk diameter
koloni yang berukuran 4–5 cm (Khastini dan Wahyuni, 2017). Fungi sebagai
organisme eukariotik, tidak berklorofil dan mengambil makanan secara absorbtif,
menghasilkan spora seksual maupun aseksual, mempunyai struktur somatik
berupa hifa yang dapat bercabang-cabang membentuk miselium. Organisme fungi
merupakan organisme kosmopolit yang hidup secara heterotropik, bentuk
vegetatifnya berupa filamen yang memiliki dinding sel tersusun dari kitin dan
glukan, bersifat eukariotik, bereproduksi secara aseksual dan seksual, propagulnya
berupa spora yang dihasilkan dalam jumlah yang besar (Samingan, 2010).
66
BAB III
MATERI DAN METODE
Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada Hari Rabu tanggal 9 Oktober
2019 di Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman, Fakultas Peternakan dan
Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang.
3.1. Materi
Materi yang digunakan berupa alat dan bahan. Bahan yang digunakan
adalah kristal violet (CV), mordant (lugol’s iodine), larutan pemucat (ethanol 96
% atau aseton), counterstain (safranin), akuades, isolate bakteri dan isolate fungi.
Alat yang digunakan adalah jarum ose untuk mengambil bakteri pada media Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red, kaca preparat untuk tempat hasil
pengambilan mikroba dari media, pipet tetes untuk menetaskan pewarnaan gram
dan menetaskan akuades, cawan petri untuk wadah bilasan air akuades pada saat
pewarnaan gram, mikroskop untuk mengamati bakteri yang ada pada kaca
preparat.
3.2. Metode
Metode yang digunakan dalam praktikum identifikasi mikroorganisme
pada bakteri Rhizobium adalah pewarnaan gram yaitu dibuat ulasan bakteri
Rhizobium pada preparat, kemudian diteteskan kristal violet (CV) sebagai
pewarna utama atau primer dan mordant (lugol’s iodine). Etanol dan safranin
67
sebagai pewarna sekunder, setiap penambahan pewarna tunggu sekitar1 menit,
lalu dibilas menggunakan akuades dari ujung preparat, setelah itu preparat
dikeringkan dengan kertas tissue dan biarkan mengering diudara, selanjutnya
ditutup dengan deglass dan ditambahkan minyak imersi, kemudian amati
menggunakan mikroskop dengan perbesaran 100x.
Metode yang dilakukan pada praktikum identifikasi mikroorganisme
pada fungi tanah yaitu menggunakan pengamatan makroskopis dan mikroskopis.
Pengamatan makroskopis yaitu mengamati ukuran koloni, eksudat, warna depan
dan belakang, permukaan koloni, tepi koloni, dan bentuk koloni yang
diidentifikasi menggunakan kasat mata fungi yang tumbuh pada media Potato
Dextrose Agar (PDA) dengan dituliskan ciri-ciri fungi dan klasifikasinya.
Pengamatan mikroskopis yaitu mengidentifikasi biakan fungi yang diambil dan
diuraikan menggunkan ose untuk diletakkan pada tetesan biru, kemudian ditutup
menggunkan gelas penutup yang akan diamati pada mikroskop dengan perbesaran
100x dengan penambahan minyak imersi.

68
BAB IV
4.1. Identifikasi Bakteri Rhizobium
Tabel 1. Identifikasi Bakteri Rhizobium

Pengujian Biokimiawi
Asal Isolat
YEMA + CR YMA + BTB
Media tetap berwarna
Tanaman Kacang
merah muda, bakteri Media berubah warna dari biru
Tanah (Arachis
Rhizobium berwarna ke warna kuning kehijauan
hypogaea)
putih susu
Sumber: Data Primer Praktikum Mikrobiologi, 2019.
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan diperoleh hasil bahwa bakteri
pada media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Congo Red merupakan bakteri
Rhizobium yaitu berwarna putih keruh seperti susu atau jernih seperti air, dan
bentuk koloninya bulat, dalam indikator Congo Red berwarna merah muda yang
berarti tidak menyerap warna merah (Lampiran 3.). Ciri-ciri bakteri Rhizobium
adalah bulat dengan permukaan seperti kubah atau kerucut, dan berwarna putih
seperti susu atau jernih seperti air, serta tidak menyerap warna merah. Hal ini
sesuai dengan pendapat Sari dan Prayudyaningsing (2015) yang menyatakan
bahwa bakteri Rhizobium secara umum jika melihat bentuk koloninya, berbentuk
bulat, bening, keruh atau opaque, dan putih. Ciri Rhizobium secara makroskopis
adalah koloni berwarna putih susu tidak transparan. Hal ini sesuai dengan
pendapat Arimurti (2009) yang menyatakan bahwa penampakan koloni media
Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) menunjukkan bahwa Rhizobium tumbuh
lambat, koloni berbentuk bundar, berelevasi cembung berwarna putih susu.

69
Rhizobium adalah kelompok bakteri yang berkemampuan sebagai penyedia
hara bagi tanaman. Bakteri Rhizobium hanya dapat memfiksasi nitrogen atmosfer
bila berada di dalam bintil akar dari mitra legumnya. Hal ini sesuai dengan
pendapat dari Fitriana dkk. (2015) yang menyatakan bahwa bakteri Rhizobium
memfiksasi nitrogen hanya dengan mitra legumnya. Peranan Rhizobium terhadap
pertumbuhan tanaman khususnya berkaitan dengan masalah ketersediaan hara
bagi tanaman inangnya. Rhizobium secara makroskopis memiliki ciri-ciri
berwarna putih susu pada media Yeast Exqtract Mannitol Agar (YEMA) Congo
Red. Hal ini sesuai dengan pendapat Arimurti (2009) yang menyatakan bahwa
Rhizobium memiliki ciri-ciri tumbuh cepat, bereaksi masam pada media Yeast
Extract Mannitol Agar (YEMA), koloni berbentuk berelevasi cembung, agak
tembus cahaya, lengket dan berwarna putih susu dan mampu tumbuh pada media
dengan sumber karbon dulsitol dan dengan sumber N L-histidin, serta tidak
menyerap warna merah. Bakteri Rhizobium pada media Yeast Extract Mannitol
Agar (YEMA) Congo Red berwarna merah muda yang berarti tidak menyerap
warna merah. Hal ini sesuai pendapat Shetta dkk. (2011) yang menyatakan bahwa
isolat Rhizobium yang ditumbuhkan pada media yang mengandung Congo Red
tidak menyerap warna merah dari indikator Congo Red. Bakteri Rhizobium pada
media Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) Brome Thymol Blue mampu
mengubah warna media menjadi kuning, karena adanya sifat asam oleh
mikroorganisme dan menunjukkan bakteri tumbuh cepat (Lampiran 3.). Hal ini
sesuai dengan pendapat Prihanto dkk. (2018) yang menyatakan bahwa pada media
Yeast Extract Mannitol Agar (YEMA) yang diberi Brome Thymol Blue Rhizobium
70
bersifat asam yang ditunjukkan perubahan warna biru menjadi kekuningan. Warna
bakteri Rhizobium pada media Yeast Extract Mannitol Agar Brome Thymol Blue
(YEMA BTB) pada kondisi asam berwarna kuning. Hal ini sesuai dengan
pendapat Fajrin dkk. (2017) yang menyatakan bahwa bakteri berwarna kuning
pada kondisi asam menunjukan bahwa bakteri merupakan jenis bakteri dengan
pertumbuhan yang cepat.
Berdasarkan hasil pengamatan teknik pewarnaan gram, bakteri Rhizobium
yaitu bakteri yang berbentuk batang dengan ukuran sedang (Lampiran 3.). Hal
ini sesuai dengan pendapat Pamungkas dan Irfan (2018) yang menyatakan bahwa
bakteri Rhizobium merupakan bakteri yang berbentuk batang atau basil. Bakteri
Rhizobium berwarna merah sehingga bakteri tersebut dapat dikatakan bakteri
gram negatif. Hal ini sesuai pendapat Fitri dan Yasmin (2011) yang menyatakan
bahwa jika hasil pewarnaan gram berwarna merah maka bakteri tersebut
merupakan bakteri gram negatif. Bakteri gram negatif memiliki kandungan lipid
yang tinggi dan dinding sel yang tipis sehingga ketika mendapat perlakuan
alkohol pada proses pewarnaan gram menyebabkan terekstraksinya lipid sehingga
memperbesar daya rembes (permeabilitas) dinding sel, sedangkan warna ungu
pada bakteri gram positif setelah mendapat perlakuan pewarnaan gram
dikarenakan oleh rendahnya kandungan lipid pada dinding sel sehingga lipid
menjadi terdehidrasi perlakuan alkohol. Hal ini sesuai pendapat Irfan (2014) yang
menyatakan bahwa bakteri gram negatif mengandung lipid yang tinggi, lipid akan
memperbesar daya rembes dinding sel ketika bereaksi dengan alkohol, warna
71
ungu bakteri gram positif setelah pewarnaan gram karena mengandung lipid yang
rendah, sehingga akan terdehidrasi oleh alkohol.
4.2. Identifikasi Fungi
Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, diperoleh data sebagai
berikut: (Tabel 2.)
Tabel 2. Identifikasi Fungi

Asal Isolat Potato Dextrose Agar (PDA)
Koloni berwarna putih,
permukaan koloni halus mengkilap,
Kacang Tanah (Arachis hypogaea)
tepian koloni bergerigi,
bentuk koloni tidak tetap
Sumber: Data Primer Praktikum Mikrobiologi, 2019.
Berdasarkan data diatas diketahui bahwa ciri-ciri kenampakan fungi yang
bisa dilihat yaitu koloni berwarna putih, permukaan halus mengkilap, dengan tepi
permukaan serrate atau bisa dikatakan bergerigi (Lampiran 3.). Hal ini sesuai
dengan pendapat Kawuri (2016) yang menyatakan bahwa koloni yang dibiakkan
pada media Potato Dextrose Agar (PDA) tumbuh koloni berwarna putih,
permukaannya halus, dan pinggiran yang berupa gerigi. Identifikasi secara
mikroskopis artinya identifikasi yang dilakukan dengan bantuan alat yaitu
mikroskop. Bentuk fungi secara mikroskopis yaitu ada yang berbentuk miselium,
bentuk konidia, bentuk fialid, dan lain lain (Lampiran 3.). Hal ini sesuai dengan
pendapat Ngittu dkk. (2014) yang menyatakan bahwa pengamatan mikroskopis
dengan melihat bentuk miselium, bentuk konidia, bentuk fialid, bentuk makro dan
mikrokonidia yang ada pada media Potato Dextrose Agar (PDA).

72
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan, secara makroskopis
fungi memiliki ukuran koloni large, warna depan dan belakangnya putih,
permukaannya halus mengkilap dengan tepian koloni bergerigi, dan bentuk koloni
tidak tetap (Lampiran 3.). Hal ini sesuai pendapat Ngittu dkk. (2014) yang
menyatakan bahwa ciri fungi secara maksroskpis adalah berwarna putih dan
bentuknya bergerigi. Fungi secara mikroskopis berbentuk bulat dan memiliki
warna putih (Lampiran 3,). Hal ini sesuai pendapat Nainggolan dkk. (2014) yang
menyatakan bahwa ciri fungi secara mikroskopis adalah berbentuk bulat dan
berwarna putih. Bentuk makroskopis fungi meliputi bentuk dan ukuran
peritesium, askus dan askospora, warna dan bentuk piknidium dan konidium.
Fungi biasanya berwarna putih dan hidup berkoloni. Hal ini sesuai dengan
pendapat Khastini dan Wahyuni (2017) yang menyatakan bahwa pada media
Potato Dextrose Agar (PDA) maka koloni yang berwarna putih pucat membentuk
diameter koloni yang berukuran 4–5 cm. Fungi sebagai organisme eukariotik,
tidak berklorofil dan mengambil makanan secara absorbtif, menghasilkan spora
seksual atau aseksual, mempunyai struktur somatik berupa hifa yang dapat
bercabang membentuk miselium. Hal ini sesuai pendapat Samingan (2010) yang
menyatakan bahwa fungi sebagai organisme kosmopolit yang hidup secara
heterotropik, bentuk vegetatifnya berupa filamen yang memiliki dinding sel
tersusun dari kitin dan glukan, bersifat eukariotik, bereproduksi secara aseksual
dan seksual, propagulnya berupa spora yang dihasilkan dalam jumlah yang besar.
73
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
ciri Rhizobium secara makroskopis pada media Yeast Extract Mannitol Agar
Congo Red (YEMA CR) adalah warna koloni putih susu, tidak transparan, bentuk
koloni sirkuler, konveks, dan semitranslusen, pada media Yeast Extract Mannitol
Agar Brome Thymol Blue (YEMA BTB) bakteri berwarna kuning yang
menunjukkan bersifat asam. Ciri Rhizobium secara mikroskopis pada media Yeast
Extract Mannitol Agar Congo Red (YEMA CR) berbentuk batang dan merupakan
bakteri gram negatif karena menghasilkan warna merah. Ciri fungi secara
makroskopis berbentuk lingkaran yang tidak beraturan, tepi bergerigi, dan
berbentuk large. Ciri fungi secara mikroskopis berbentuk berbentuk bulat dan
berwarna putih.
5.2. Saran
Saran yang diberikan untuk praktikum identifikasi mikroba adalah
mengambil bakteri Rhizobium dengan hati-hati agar media tidak ikut, dalam
pewarnaan gram harus dilakukan denga teliti agar mendapatkan hasil yang
maksimal.
74
ACARA V
PERHITUNGAN MIKROORGANISME
75
BAB I
PENDAHULUAN
Perhitungan bakteri merupakan cara bagaimana kita dapat mengetahui
jumlah bakteri yang ada pada suatu biakan. Perhitungan bakteri biasanya dibantu
dengan alat colony counter,mikroskop ataupun dengan cara perhitungan secara
manual yaitu dengan menggunakan rumus Total Plate Count (TPC). Jumlah
bakteri dapat dihitung menggunakan dua metode yaitu metode langsung dan
metode tidak langsung.
Perhitungan bakteri dapat dilakukan dengan dua cara yaitu dengan cara
metode langsung dan tidak langsung. Metode langsung dengan cara menghitung
jumlah bakteri yang tumbuh dengan menggunakan alat bantu. Perhitungan bakteri
dengan metode langsung menggunakan alat yaitu mikroskop dan colony counter.
Metode tidak langsung menggunakan metode perhitungan Total Plate Count
(TPC) dan melihat secara kasat mata koloni bakteri yang tumbuh pada cawan
petri. Metode pengenceran yaitu dengan pengambilan bakteri dari satu larutan ke
larutan selanjutnya dengan bertahap. Jumlah bakteri dapat dikategorikan menjadi
2 yaitu terlalu banyak untuk dihitung ataupun terlalu sedikit untuk dihitung.
Jumlah mikroba yang dapat dihitung adalah 30 – 300 bakteri.
Tujuan praktikum acara perhitungan bakteri untuk mengamati bagaimana
cara menghitung bakteri. Manfaaat acara perhitungan bakteri adalah mampu
mengetahui cara perhitungan bakteri dengan cara metode langsung dan metode
tidak langsung.
76
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Perhitungan Jumlah Bakteri
Bakteri adalah mikroorganisme kecil yang tersebar dimana mana, baik di
tanah, sisa-sisa makanan, udara dan yang lainnya. Pengamatan bakteri dapat
dilakukan dengan mikroskop dan dapat dihitung. Perhitungan bakteri memiliki
fungsi untuk mengetahui banyaknya bakteri pada sampel (Ariyanti dkk., 2016).
Total Plate Count (TPC) merupakan salah satu metode tidak langsung yang dapat
digunakan untuk menghitung jumlah mikroba. Metode tidak langsung paling
banyak digunakan dalam analisa, karena koloni dapat dilihat langsung tanpa
menggunakan mikroskop. Cara perhitungan bakteri metode TPC yaitu jumlah
bakteri yang terlihat pada cawan petri dikalikan 1/ faktor pengenceran dan
dikalikan lagi dengan 1/ volume (Palawe dan Antahari, 2018).
Metode dalam perhitungan bakteri terdapat dua macam yaitu metode
langsung dan metode tidak langsung. Penghitungan bakteri yang dilakukan
dengan metode langsung biasanya menggunakan alat bantu. Alat bantu yang
digunakan dalam penghitungan bakteri dengan metode langsung yaitu mikroskop
dan colony counter (Wibowo dan Andrivani, 2016). Metode penghitungan secara
tidak langsung disebut juga penghitungan secara manual. Metode penghitungan
tidak langsung dilakukan dengan cara menghitung secara manual banyaknya
koloni bakteri yang masih hidup pada cawan petri (Sariyem dkk., 2015). Jumlah
77
koloni yang akan dihitung secara manual dapat dilihat langsung dengan cara
menandai pada cawan petri. Perhitungan jumlah koloni secara manual atau tidak
langsung dengan cara menandai bakteri yang ada di cawan petri dan dihitung satu-
satu (Khotib dkk., 2015). Metode langsung dan tidak langsung, keduanya juga
menggunakan teknik pengenceran untuk mendapatkan koloni bakteri. Metode
pengenceran dilakukan dengan cara mengambil 1 gram sampel yang dimasukkan
ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml akuades sehingga mendapatkan
pengenceran 10-1 selanjutnya untuk mendapatkan pengenceran 10-2 maka diambil
0,1 ml dari pengenceran 10-1 dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi
9 ml akuades, dan seterusnya sampai pengenceran 10-8 (Yulvizar, 2013). Fungsi
pengenceran untuk membuat jumlah bakteri menjadi lebih sedikit pada tingkat
pengenceran selanjutnya. Prinsip pengenceran adalah untuk menurunkan jumlah
mikroba pada suspensi sehingga semakin banyak jumlah pengenceran maka
semakin sedikit jumlah mikroba pada suatu tabung (Panjaitan dkk., 2014).
Terlalu Banyak Untuk Dihitung (TBUD) adalah keadaan dimana bakteri
melampaui jumlah koloni yang ditetapkan atau tidak terhingga. Hal ini
disebabkan oleh tidak mampunya menghitung jumlah bakteri karena bakteri
tumbuh dengan sangat cepat dan banyak. Keadaan Terlalu Banyak Untuk
Dihitung (TBUD) adalah keadaan dimana bakteri tidak bisa dihitung karena
jumlahnya terlalu banyak (Chandra dan Amilah, 2017). Terlalu Sedikit Untuk
Dihitung (TSUD) adalah keadaan dimana bakteri tidak bisa dihitung akibat
jumlah bakteri yang tumbuh pada cawan petri terlalu sedikit dan
perkembangannya yang membutuhkan waktu lama. Jumlah koloni yang ideal

78
dapat dinyatakan antara 30 sampai 300 cfu. Jumlah bakteri yang kurang dari 30
cfu adalah bakteri dalam kategori jumlah yang terlalu sedikit untuk dihitung
(TSUD) atau bahkan tidak bisa dihitung (Wijayanti dan Febrinasari, 2017 ).
TBUD merupakan singkatan terlalu banyak untuk dihitung atau dalam
bahasa inggrisnya too numerous to court (TNTC). TBUD merupakan keadaan
dimana bakteri terlalu banyak dihitung yaitu melebihi batas perhitungan 30
sampai 300. Hal ini terjadi karena faktor pengenceran masih rendah, maka solusi
untuk mengatasi Terlalu Banyak Untuk Dihitung (TBUD) adalah dengan
membuat pengenceran yang lebih tinggi sampai dapat dipastikan terdapat satu
bakteri dalam satu tabung (Sukmawati dan Hardianti, 2018). Terlalu Sedikit
Untuk Dihitung (TSUD) terjadi karena jumlah bakteri terlalu sedikit untuk
dihitung akibat kontaminasi oleh bakteri patogen. TSUD terjadi karena bakteri
Rhizobium terkontaminasi oleh bakteri patogen, sehingga untuk mencegah agar
tidak terjadi kontaminasi bakteri patogen maka dalam pembuatan media untuk
perhitungan bakteri digunakan alat dan media yang higienis (Safrida dkk., 2019).
Bakteri Rhizobium merupakan bakteri yang tidak tahan terhadap kondisi
asam. Kondisi asam menjadi salah satu faktor yang dapat menekan pertumbuhan
dan penghambatan simbiosis Rhizobium penyebab kondisi tanah asam
dikarenakan penggunaan pupuk yang tidak sesuai (Widyasari dkk., 2013). Tanah
yang baik memiliki kandungan pH netral. Pertumbuhan yang baik memerlukan
pH dari 6 sampai 7 dengan suhu sampai 30°C (Rezki, 2018). Unsur zat hara dalam
tanah sangat diperlukan bagi tanaman maupun bakteri Rhizobium. Pertumbuhan
tanaman berkaitan dengan ketersediaan zat hara bagi tanaman dari bakteri
79
Rhizobium menyebabkan penambatan nitrogen yang nantinya digunakan oleh
tanaman inangnya (Pamungkas dan Irfan, 2018). Kesuburan tanah sangat
berpengaruh terhadap bakteri Rhizobium, sehingga media untuk inkubasi bakteri
Rhizobium harus memenuhi syarat yang baik. Tingkat kesuburan tanah menjadi
keserasian bakteri Rhizobium dengan tanaman inangnya dalam menyediakan
makanan bagi yang bersimbiosis dengan tanaman tersebut, sehingga untuk
membuat media inkubasi bakteri Rhizobium, pH dan suhu harus sesuai, nutrisi
dapat memenuhi kebutuhan, dan kelembaban terjaga (Widyasari dkk., 2013).
Terdapat beberapa metode yang dapat dilakukan untuk pembiakan
bakteri. Metode tersebut dapat dibedakan atas dua cara yaitu metode tuang (Pour
plate) dan metode permukaan (surface plate) (Wijaya dkk., 2015). Pour plate
merupakan teknik penumbuhan mikroorganisme dalam media penumbuhan
dengan cara menuangkan media yang masih cair dalam koloni bakteri yang telah
diencerkan sebelumnya kemudian dibiarkan memadat di cawan petri. Hal yang
pertama kali dilakukan pada metode pour plate adalah pengenceran agar
menggunakan stomacher kemudian dicampur dengan media PCA (Plate Count
Agar) dan ditutup rapat (Yunita dkk., 2015). Metode surface plate adalah metode
isolasi bakteri yang dilakukan setelah media tumbuh memadat dan bakteri yang
telah mengalami pengenceran dipipetkan ke permukaan media lalu diratakan.
Penumbuhan isolat bakteri dengan metode surface plate dilakukan dengan
menginkubasi isolat bakteri pada permukaan media (Wijaya dkk., 2015). Kedua
metode ini, yaitu surface plate dan pour plate menghasilkan jumlah bakteri yang
tumbuh akan berbeda. Hal ini dipengaruhi oleh jumlah permukaan koloni bakteri
80
yang tertutup oleh media yang berarti jumlah penyerapan nutrisi menjadi lebih
mudah. Metode surface plate lebih efektif digunakan karena dapat dipakai untuk
bakteri aerob seperti Rhizobium yang membutuhkan oksigen yang cukup agar
mudah menyerap nutrisi yang dibutuhkan untuk bertahan hidup dan berkembang
biak (Widyasari dkk., 2013).
Penumbuhan koloni bakteri Rhizobium dilakukan dengan menggunakan
media Nutrient Agar (NA). Penggunaan media Nutrient Agar (NA) untuk
menumbuhkan bakteri Rhizobium kurang efektif. Hal ini disebabkan media
Nutrient Agar (NA) merupakan media umum untuk bakteri namun tidak spesifik
untuk bakteri Rhizobium karena nutrisi yang diperlukan untuk tumbuh memiliki
variasi berbeda (Pamungkas dan Irfan., 2018). Media Yeast Extract Mannitol
Agar Congo-Red (YEMA CR) lebih efektif untuk menumbuhkan bakteri
Rhizobium dari pada Nutrient Agar (NA). Yeast Extract Mannitol Agar Congo-
Red (YEMA CR) efektif untuk menumbuhkan bakteri Rhizobium karena
mengandung komposisi yang sesuai untuk pertumbuhan bakteri Rhizobium.
Komposisi Yeast Extract Mannitol Agar Congo-Red (YEMA CR) yaitu senyawa
K2HPO4, MgSO4.7H2O, NaCl, mannitol, ekstrak khamir, agar, akuades, dan
indicator pertumbuhan congo red (Gebremariam dan Assefa, 2017). Metode
penghitungan bakteri secara surface plate lebih efektif daripada menggunakan
metode pour plate khususnya pada bakteri aerob.

81
BAB III
MATERI DAN METODE
Praktikum Mikrobioogi dilaksanakan pada hari Selasa, tanggal 22
Oktober 2019 di Laboratorium Fisiologi dan Pemuliaan Tanaman, Fakultas
Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang.
3.1. Materi
Materi yang digunakan acara perhitungan bakteri terdiri dari alat dan
bahan. Bahan yang digunakan adalah isolat bakteri. Alat yang digunakan adalah
alat tulis berfungsi untuk menulis hasil perhitungan bakteri, buku berfungsi untuk
mencatat hasil perhitungan bakteri, dan kamera berfungsi untuk
mendokumentasikan kegiatan praktikum.
3.2. Metode
Penghitungan jumlah bakteri diawali dengan pembuatan media
pertumbuhan bakteri yang terbuat dari Nutrient Agar (NA). Proses pembuatan,
NA dilarutkan dengan aquades di dalam erlenmeyer. NA yang telah dilarutkan,
kemudian dihomogenkan menggunakan alat Hot Plate Stirer hingga larutan
benar-benar homogen. Ciri-ciri larutan yang sudah homogen yaitu tidak ada
endapan di bagian bawahnya dan suhu larutan meningkat.
Metode yang digunakan dalam praktikum perhitungan bakteri adalah
pembuatan metode pengenceran yang akan digunakan untuk pour plate dan
82
surface plate. Metode pengenceran dilakukan dengan cara bakteri diambil
sebanyak 1 gram dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi 9 ml
akuades sehingga mendapatkan pengenceran 10-1. 1 ml air dari pengenceran 10-1
diambil dan dipindahkan ke tabung reaksi selanjutnya yang sama berisi 9 ml
akuades, dilakukan sampai dengan pengenceran ke 10-8. 1 ml air yang
mengandung bakteri diambil dari pengenceran ke 10-6, 10-7, 10-8 dan dipindahkan
ke cawan petri untuk metode pour plate dan spread plate. Metode pour plate
dengan cara 1 ml air dari pengenceran 10-6, 10-7, 10-8 diambil dan dipindahkan ke
cawan petri. 1 ml agar dituangkan ke cawan petri yang sudah ada bakterinya.
Metode perhitungan bakteri adalah dengan cara perhitungan yang
menggunakan Total Plate Count (TPC). Bakteri di hitung satu persatu yang
tampak pada cawan petri. Jumlah bakteri dihitung dengan rumus Total Plate
Count (TPC).
83
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHSAN
4.1. Perhitungan Jumlah Bakteri
Berdasarkan hasil praktikum proses penghitungan jumlah bakteri yang
telah dilakukan, diperoleh data sebagai berikut : (Tabel 3.)
Tabel 3. Hasil Perhitungan Koloni Bakteri

Pengenceran
Sampel Metode SPC Keterangan
10-.6 10-7 10-8
Surface Dapat
Tanaman Kacang Plate 32 40 32 104
dihitung
Tanah (Arachis
hypogeae L.) Pour
2 1 5 8 TSUD
Plate
Sumber: Data Primer Praktikum Mikrobiologi, 2019
Berdasarkan data diatas, diketahui bahwa jumlah bakteri dalam metode
surface plate merupakan bakteri yang dapat dihitung karena jumlahnya antara 30
sampai 300 yaitu 32 pada pengenceran 10-6, 40 pada pengenceran 10-7, dan 32
pada pengenceran 10-8 (Lampiran 4.). Metode surface plate termasuk dalam
jumlah bakteri yang dapat dihitung karena jumlah bakteri antara 30 sampai 300.
Hal ini sesuai dengan pendapat Sari dkk. (2015) yang menyatakan bahwa
penghitungan bakteri dapat dilakukan bila bakteri tiap petridish antara 30 sampai
300 koloni. Koloni bakteri pada metode surface plate dapat tumbuh dengan baik
sehingga dapat dihitung karena media yang digunakan tidak tercemar dan
kondisinya sesuai. Hal ini sesuai pendapat Gebremariam dan Assefa (2017) yang
84
menyatakan bahwa bakteri Rhizobium akan tumbuh dengan baik pada media yang
memenuhi nutrisi dan tidak terkontaminasi.
Terlalu Sedikit Untuk Dihitung (TSUD) terjadi karena jumlah bakteri
yang ada pada cawan petri sebelumnya terkontaminasi oleh bakteri patogen. Hal
ini sesuai dengan pendapat Safrida dkk. (2019) yang menyatakan bahwa TSUD
terjadi karena bakteri Rhizobium pada media terkontaminasi oleh bakteri patogen
sehingga jumlah bakteri yang hidup hanya sedikit. Bakteri yang tumbuh pada
metode pour plate termasuk TSUD karena jumlah bakteri yang tumbuh kurang
dari 30, yaitu pada pengenceran 10-6 bakteri yang tumbuh 2, pengenceran 10-7
bakteri yang tumbuh 1, dan pengenceran 10-8 bakteri yang tumbuh 5. Hal ini
sesuai dengan pendapat Wijayanti dan Febrinasari (2017) yang menyatakan
bahwa jumlah bakteri yang kurang dari 30 cfu adalah bakteri dalam kategori
jumlah yang terlalu sedikit untuk dihitung (TSUD) atau bahkan tidak bisa
dihitung. Faktor yang mempengaruhi terjadinya terlalu sedikit untuk dihitung
jumlah bakterinya karena kemungkinan pada saat pengenceran bakteri
terkontaminasi oleh bakteri lain yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri
Rhizobium itu sendiri. Hal ini sesuai pendapat Safrida dkk. (2019) yang
menyatakan bahwa faktor yang mempengaruhi perhitungan jumlah bakteri terlalu
sedikit untuk dihitung adalah karena mikroba tercemar oleh bateri patogen dan
penggunaan alat-alat yang tidak higeinis maka diperlukannya solusi untuk
tersebut yaitu dengan menggunakan alat-alat yang steril dan bahan yang steril.
Berdasarkan praktikum mikrobiologi acara penghitungan jumlah bakteri
diperoleh hasil bahwa jumlah bakteri pada surface plate termasuk bakteri yang
85
dapat dihitung sedangkan pada surface plate termasuk pada bakteri yang terlalu
sedikit untuk dihitung. Metode penghitungan bakteri secara surface plate lebih
efektif daripada menggunakan metode pour plate khususnya pada bakteri aerob
yang membutuhkan oksigen. Hal ini sesuai pendapat Widyasari dkk. (2013) yang
menyatakan bahwa metode surface plate lebih efektif digunakan karena dapat
dipakai untuk bakteri aerob seperti Rhizobium yang membutuhkan oksigen yang
cukup agar mudah bertahan hidup untuk menyerap nutrisi yang dibutuhkan.
Berdasarkan hasil pengamatan, jumlah bakteri pada metode surface plate lebih
banyak, disebabkan karena pada saat suspensi bakteri dilarutkan dalam akuades
pada proses pengenceran bertingkat kurang merata, alat-alat yang digunakan
masih kurang steril. Hal ini sesuai pendapat Nurtjahyani dan Shyntya (2014) yang
menyatakan bahwa dalam proses pengenceran bertingkat diperlukan teknik
pengenceran agar suspensi tercampur secara homogen dan mendapatkan hasil
yang sesuai.
Metode dalam perhitungan bakteri terdapat dua macam yaitu metode
langsung dan metode tidak langsung. Metode penghitungan secara tidak langsung
disebut juga penghitungan secara manual yaitu penghitungan dilakukan dengan
menghitung koloni yang terlihat pada cawan petri satu persatu. Hal ini sesuai
dengan pendapat Sariyem dkk. (2015) yang menyatakan bahwa metode
penghitungan tidak langsung dilakukan dengan cara menghitung secara manual
banyaknya koloni bakteri yang masih hidup pada cawan petri. Jumlah koloni
dihitung secara manual dapat dilihat langsung dengan cara menandai pada cawan
petri dan selanjutnya dhitung dengan perhitungan Total Plate Count (TPC). Hal
86
ini sesuai dengan pendapat Khotib dkk. (2015) yang menyatakan bahwa
perhitungan jumlah koloni dengan manual dengan cara menandai bakteri yang ada
di cawan petri dan dihitung satu-satu. Fungsi pengenceran untuk membuat jumlah
bakteri menjadi lebih sedikit pada tingkat pengenceran selanjutnya. Hal ini sesuai
dengan pendapat Panjaitan dkk. (2014) yang menyatakan bahwa prinsip
pengenceran adalah menurunkan jumlah mikroba sehingga semakin banyak
jumlah pengenceran maka semakin sedikit jumlah mikroba pada suatu tabung
sampai pada tabung tersebut hanya terdapat satu mikroba.

87
BAB V
SIMPULAN DAN SARAN
5.1. Simpulan
Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan dapat disimpulkan
bahwa penghitungan dengan metode surface plate termasuk dapat dihitung
karena nutrisinya terpenuhi dan masih steril, sedangkan metode pour plate
termasuk TSUD karena alat yang digunakan kurang steril dan ketika pengenceran,
pencampuran suspensi bakteri dengan akuades kurang merata. Solusi yang dapat
dilakukan agar bakteri dapat tumbuh dengan baik yaitu menggunakan media
dengan komposisi yang memenuhi nutrisi, menggunakan alat-alat yang steril, dan
akuades untuk pengenceran dan tahapannya dikurangi agar tidak terlalu encer.
5.2. Saran
Saran yang diberikan untuk praktikum perhitungan bakteri yaitu pada
saat perhitungan bakteri harus dilihat secara teliti agar tidak salah perhitungan dan
pada saat memasukkan rumus jumlah bakteri ke dalam Totat Plate Count (TPC)
harus benar dan teliti. Proses pembuatan media harus menggunakan alat dan
bahan yang steril agar menghasilkan hasil yang maksimal.

88
DAFTAR PUSTAKA
Afid, S. N. 2016. Potensi sluidge biogas dari feses sapi potong sebagai sumber
bakteri anaerob penghasil gas metana. J. Students. 5 (3) : 1 - 8.
Agustian, A., Nuriyani, L. Maira, dan O. Emalinda. 2010. Rhizobakteria
penghasil fitohormon IAA pada rhozosfir tumbuhan semak karamunting,
titonia, dan tanaman pangan. J. Solum. 7 (1) : 49 – 60.
Amalia, A., R. D. Dwiyanti, dan H. Haitami. 2016. Daya hambat NaCl terhadap
pertumbuhan Staphylococcus aureus. J. Medical Laboratory Technology. 2
(2) : 42 - 45.
Ansiga, R. E., A. Rumambi, D. Kaligis, I. Mansur, dan W. Kaunang. 2017.
Eksplorasi Fungi Mikoriza Arbuskula (FMA) padarizosfirhijauanpakan. J.
Zootek. 37 (1) : 167 – 178.
Antonius, S., M. Rahmansyah, dan D. A. Muslichah. 2015. Pemanfaatan inokulan
mikroba sebagai pengkaya kompos pada budidaya sayuran. J. Ilmu-ilmu
Hayati. 14 (3) : 22 - 234.
Arifuddin, M., M. Bone, Iswahyudi, A. Ibrahim, dan L. O. Rijal. 2017. Isolasi dan
karakteristik fungi endofit tanaman tapak dara (Catharanthus roseus). J.
Tropical Pharma Chemistry. 4 (1) : 22 – 26.
Arimurti, S. 2009. Karakterisasi Rhizobia Indigenous Edamame sebagai kandidat
pupuk hayati. J. Ilmu Dasar. 10 (1) : 30 – 37.
Ariyanti, V. N., Supriharyono, dan N. Widyorini. 2016. Hubungan kerapatan
lamun dengan kelimpahan bakteri heterotrof di perairan pantai kartini
Kabupaten Jepara. J. Manajemen Sumber Daya Perairan. 5 (4) : 142 - 149.
Ashari, C., R. A. Tumbal, dan M. E. F. Kolopita. 2014. Diagnosa penyakit
bakterial pada ikan nila (Oreoatiomis miloatiaus) yang dibudidaya pada
jaring tankap di danau fendano. J. Budidaya perairan. 2 (2) : 24 - 30.
Astriyani, W., P. Surjowardojo, dan T. E. Susilorini. 2017. Daya hambat ekstrak
buah mahkota dewa (Phaleria macrocarpa L.) dengan pelarut ethanol dan
aquades terhadap bakteri Staphylococcus Aureus penyebab mastitis pada
sapi perah. J. of Tropical Animal Production. 18 (2) : 8 - 13.
Barus, W. N. U., H. Sitorus, dan I. Lesmana. 2013. Uji efektivitas antibakteri
ekstrak daun kamboja (Plumiera rubra) pada konsentrasi yang berbeda
terhadap pertumbuhan Aeromonas hydrophila secara in vitro. J.
Aquacoastmarine. 1 (1) : 1 – 7.
Cahyani, V. R. 2009. Pengaruh beberapa metode sterilisasi tanah terhadap status
hara, populasi mikrobiota, potensi infeksi mikorisa dan pertumbuhan
tanaman. J. Ilmiah Ilmu Tanah dan Agroklimatologi. 6 (1) : 43 – 52.
89
Cahyo, F. A. D., H. Setiawan, dan S. Sirajuddin. 2017. Strategi diversifikasi

produk pisau pada industri kreatif dengan pendekatan Quality Function
Deployment (QFD). J. Teknik Industri Untirta. 4 (2) : 1 - 7.
Chandra, M. I., dan S. Amilah. 2017. Pengaruh lama penyimpanan infused water
lemon (Citrus limon) dan mentimun (Cucumissativus L) terhadap
pertumbuhan bakteri. J. Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Unipa. 10
(2) : 68 – 73.
Diana, F. dan A. Marziah. 2017. Uji efektivitas bubuk bawang putih (Allium
sativum) terhadap pertumbuhan bakteri Edwardsiella tarda. J. Akuakultura.
1 (1) : 54 – 59.
Djais, A. A., dan C. F. Theodorea. 2019. The effect of presto cooker as an
alternative sterilizer device for standard dental equipment. J. of indonesian
dental association. 1 (2) : 41 - 47.
Fajarin, R., H. Purwaningsih, M. A. Baqiya, dan R. H. Warit. 2015. Pengaruh
temperatur sintering terhadap sifat ferroelektrik dan dielektrik PbTiO3
DOPING ZnO dengan metode mechanical alloying. J. Mekanika. 14 (1) : 13
- 20.
Fatmariza, M., N. Inayati, dan R. Rohmi. 2019. Tingkat kepadatan media nutrient
agar terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. J. Analis
Medika Biosains. 4 (2) : 69 - 73.
Febriyanti, L. E., M. Martosudiro, dan T. Hadiastono. 2015. Pengaruh plant
growth promoting rhizobacteria terhadap infeksi peanut stripe virus (PStV),
pertumbuhan dan produksi tanaman kacang tanah (Arachis hypogaea L.)
varietas gajah. J. Hama dan Penyakit Tumbuhan. 3 (1) : 84 - 92.
Fitri, L. dan Y. Yasmin. 2011. Isolasi dan pengamatan morfologi koloni bakteri
kitinolitik. J. Ilmiah Pendidikan Biologi. 3 (2) : 20-25.
Fitriadi, B. R., dan A. C. Putri. 2016. Penentuan residu pestisida deltametrinan λ-
sihalotrin pada lada (Piper nigrum L.) menggunakan metode QuEChERS. J.
of Chemical Science. 5 (2) : 92 - 97.
Fitriana, D. A., T. Islami, dan Y. Sugito. 2015. Pengaruh dosis Rhizobium serta
macam pupuk kandang terhadap pertumbuhan dan hasil tanaman kacang
tanah (Arachis hipogaea L.) varietas kancil. J. Produksi Tanaman. 3 (7) :
547 – 555.
Fuskhah, E., R. D. Soetrisno, S. Anwar, dan F. Kusmiyati. 2014. Uji asosiasi

bakteri Rhizobium terseleksi dengan leguminose pakan dalam kondisi
tercekam salin. J. Agripet. 14 (1) : 65 – 70.
90
Gandi, N. L. P. G., I. W. Getas, dan M. Jannah. 2019. Studi jamur

Aspergillus fumigatus penyebab Aspergillosis di Pasar Cakranegara Kota
Mataram dengan media pertumbuhan potato dextrose agar (PDA). J. Analis
Medika Bio Sains. 6 (1) : 11 – 18.
Geantaresa, E., dan F. T. Supriyanti. 2010. Pemanfaatan ekstrak kasar papain
sebagai koagulan pada pembuatan keju Cottage menggunakan bakteri. J
Sains dan Teknologi Kimia. 1 (1) : 38 - 43.
Gebremariam, A., dan F. Assefa. 2017. The effect of inter cross-inoculation host
group rhizobia on the growth and nitrogen fixation of faba bean (Vicia faba
L.) varieties in North Showa, Amhara Regional State, Ethiophia. J. of
Agricultural and Sustainable Development. 10 (2) : 25 – 33.
Habib, I. dan M. Aminudin. 2016. Pengaruh lamanya penyimpanan terhadap

pertumbuhan bakteri pada nasi yang di masak di rice cooker dengan nasi
yang dikukus. J. Kedokteran dan Kesehatan. 9 (2) : 18 – 22.
Habibah, R., D. Y. Nasution, dan Y. Muis 2013. Penentuan berat molekul dan
derajat polimerisasi α–selulosa yang berasal dari alang-alang (Imperata
cylindrica) dengan metode viskositas. J. Saintia Kimia. 1 (2) : 1 - 6.
Hamid, A., dan A. Mustafa. 2018. Aspek reproduksi ikan sikuda (Lethrinus
ornatus) hasil tangkapan di perairan Teluk Luar Kendari yang didaratkan di
Kecamatan Abeli Kota Kendari. J. Manajemen Sumber Daya Perairan. 2 (4)
: 317 - 325.
Harjanto, S., dan R. Raharjo. 2019. Peran laminar air flow cabinet dalam uji
mikroorganisme bagi mahasiswa tugas akhir di laboratorium biokimia. J.
Pengelolaan Laboratorium Pendidikan. 1 (1) : 15 – 18.
Hartutik. 2012. Metode Analisis Mutu Pakan. Malang : UB Press.
Hidayatussalihin, H., E. Nurhayati, dan E. Suwandi. 2019. Perbedaan presisi
pemipetan sampel menggunakan pipet sahli dan mikropipet pada
pemeriksaan hemoglobin metode cyanmethemoglobin. J. Laboratorium
Khatulistiwa. 2 (1) : 21 - 25.
Indira, C. 2015. Pembuatan indikator asam basa karamunting. J. Kaunia. 11 (1) :
1 - 10.
Indrawati, A., N. A. Hartih, dan M. Muyassara. 2019. Isolasi dan uji potensi fungi
endofit kulit batang langsat (lansium domesticum corr) penghasil antibakteri
terhadap staphylococcus aureus dan escherichia coli. J. Media farmasi. 15
(1) : 36 - 42.
91
Indriati, N., N. Priyanto, dan R. Triwibowo. 2010. Penggunaan Dichloran Rose

Bengal Chloramponicol agar (DRBC) sebagai media tumbuh kapang pada
produk perikanan. J. Pascapanen dan bioteteknologi kelautan dan perikanan.
5 (2) : 117 – 122.
Irfan, M. 2014. Isolasi dan enumerasi bakteri tanah gambut di perkebunan kelapa
sawit PT. Tambang Hijau kecamatan Tambang kabupaten Tampar. J.
Agroteknologi. 5 (1) : 1 – 8.
Juvitasari, P. M., H. A. Melati, dan I. Lestari. 2012. Pengetahuan alat praktikum
kimia dan kemampuan psikomotorik siswa MAN 1 Pontianak. J. Pendidikan
Kimia. 2 (1): 1– 13.
Kaburuan, R., Hapsoh, dan Gusmawartati. 2014. Isolasi dan karakterisasi bakteri
penambat nitrogen non-simbiotik tanah gambut cagar biosfer giam siak
kecil-bukit batu. J. Agroekoteknologi. 5 (1) : 35 – 39.
Kawuri, R. 2016. Isolasi dan identifikasi Streptomyces sp. pada rhizosfer tanaman
pisang (Musa paradiasica) di desa Pendem Jembrana Bali. J. Metamorfosa.
3 (2): 140 - 148.
Kharisma, A. dan A. Manan. 2012. Kelimpahan bakteri vibrio sp. pada air
pembesaran udang vannamei (Litopenaeusvannamei) sebagai deteksi dini
serangan penyakit vibriosis. J. Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 4 (2): 129 -
134.
Khastini, R. O. dan I. Wahyuni. 2017. Eksplorasi keragaman fungi entomopatogen
di Desa Cikeusik-Baduy Dalam Banten .J. Scientium. 6 (1) : 1 - 10.
Khotib, B. N., Y. Prasetyaningsih, dan F. Nadifah. 2015. Pengaruh lama
penyimpanan susu kedelai dalam lemari es terhadap pertumbuhan bakteri
psikrofilik. J. of Health. 2 (1) : 37 – 41.
Kowal, A. L., E. D. Angkouw, N. J. Kawung, K. Khemer, H. Manoppo, dan D. A.
Sumilat. 2018. Antibacterial potential of soft coral lobophytum sp. from
pangalisang waters of bunaken island to pseudomonas aeruginosa and
staphylococcus aure. J. Ilmiah platax 6 (2) : 89-97.
Kurniaty, K., S. Bustomi, dan E. Widyati. 2013. Penggunaan rhizobium dan
mikoriza dalam pembentukan bibit kaliandra (Calliandra callothyrsus)
umur 5 bulan. J. Perbenihan Tanaman Hutan. 1 (2) : 71 – 81.
Latupapua, H. J. D., dan S. Suliasih. 2018. Daya pacu mikroba pelarut fosfat dan
penambat nitrogen pada tanaman jagung. J. Biologi Indonesia. 3 (2) : 99 -
107.
92
Lestari, A. R. A., S. A. Syahfitri, S. T. Cahyo, I. Wardaniati, dan M. A. Herli.

2018. Aktivitas antibakteri seduhan biji pepaya (carica papaya l) terhadap
escherichia coli, salmonella thypi dan staphlycocus aureus. J. of pharmacy
and science. 1 (2) : 39-45.
Marfuah, I., E. N. Dewi, dan L. Rianingsih. 2018. Kajian potensi ekstrak anggur
laut (Caulerpa racemosa) sebagai antibakteri terhadap bakteri Escherichia
coli dan Staphylococcus aureus. J. Pengolahan dan Bioteknologi Hasil
Perikanan. 7 (1) : 7 – 14.
Marwan, P. dan E. F. B. Handayani. 2019. Biological seed treatmeant dengan
bakteri rhizobium sp. untuk meningkatkan pertumbuhan dan hasil kacang
tanah (Arachis hypogaea L.). J. Pertanian dan Pangan. 1 (1) : 6 – 9.
Maryoto, A. 2009. Pengaruh penggunaan high volume fly asli pada kuat tekan
mortar. J. Teknik sipil dan perencaan. 10 (2) : 103 - 114.
Mawartiningsih, L. 2017. Pemanfaatan kulit kacang tanah (Arachis hypogaea L.)
untuk membuat minyak aromatic sebagai petunjuk praktikum pada bab
bioteknologi. J. Teladan. 2 (2) : 125 – 134.
Mirani, E. D., dan R. Suryantini. 2016. Uji pertumbuhan fusarium sp pembentuk
gubal gaharu (Aquilaria Malaccensis) pada varian media tumbuh dan suhu.
J. Hutan Lestari. 4 (4) : 446 – 452.
Misna, M., dan K. Diana. 2016. Aktivitas antibakteri ekstrak kulit bawang merah
(Allium cepa L.) terhadap bakteri staphylococcus aureus. J. Of pharmacy. 2
(2): 138 – 144.
Muhibuddin, A. 2018. Efektivitas strain bradyrhizobium japonicum pada tanaman

kedelai varietas Mahameru dan Baluran. J. of Agronomy. 3 (1) : 28 – 34.
Mujipradhana, V. N. 2018. Aktivitas antimikroba dari ekstrak ascidan
Herdmania momus pada mikroba patogen manusia. J. Pharmacon. 7 (3) :
338 – 347.
Mukaromah, U., S. H. Susetyorini, dan S. Aminah. 2010. Kadar vitamin c, mutu
fisik, ph dan mutu organ oleptik sirup rosella (Hibiscus sabdariffa, L)
berdasarkan cara ekstraksi. J. Pangan dan Gizi. 1 (1): 43 – 51.
Mukminin, A., H. A. Santoso, dan C. Supriyanto. 2017. Analisis dan perancangan
model fuzzy untuk sistem pakar pendeteksi tingkat kesuburan tanah dan
jenis tanaman. J. Cyberku. 13 (1) : 20 – 29.
Murtiana, D., A. F. Hemon, dan S. Sumarjan. 2018. Deskripsi galur mutan
generasi m6 hasil iradiasi sinar gamma kacang tanah (Arachis hypogaea L.)
kultivar lokal bima. J. Scientific of Agronomy. 10 (1) : 9 – 22.
93
Mutia, U., C. Saleh, dan Daniel. 2016. Uji kadar asam laktat pada kacang tanah
(Arachis hypogaea L.) berdasarkan variasi waktu dan konsentrasi bakteri
Lactobacillus bulgaricus dan Strepcoccus lactis. J. Kimia Mulawarman. 10
(2) : 58 – 62.
Nainggolan, R. T., I. G. P. Wirawan, dan I. G. K. Susrama. 2014. Identifikasi

fungi mikoriza arbuskular secara mikroskopis pada rhizozfer tanaman
alang-alang (Imperata cylindrical L.) di Desa Sanur Kaja. J.
Agroekoteknologi Tropika. 3 (4) : 242 – 250.
Ngajow, M., J. Abidjulu, dan V. S. Kamu. 2013. Pengaruh anti bakteri ekstrak
kulit batang matoa (pomesia pinnata) terhadap bakteri staphylococcus aures
secara in vito. J. Mipa. 2 (2) : 128 - 132.
Ngittu, Y. S., F. R. Mantiri, T. E. Tallei, dan F. E. F. Kandou. 2014. Identifikasi
genus jamur fusarium yang menginfeksi eceng gondok
(Eichhornia crassipes) di Danau Tondano. J. Ilmiah Farmasi. 3 (3): 156 -
161.
Novalia, R., .Fadiawati, dan I. Rosilawati. 2015 .Pengembangan instrument
asesmen kinerja pada praktikum pengaruh konsentrasi terhadap laju reaksi.
J. pendidikan dan pembelajaran kimia. 4 (2): 568 - 580.
Nursanti, I. 2017. Teknologi produksi dan aplikasi mikroba pelarut hara sebagai
pupuk hayati. J. Media Pertanian. 2 (1) : 24-36.
Nurtjahyani, S. D., dan D. Shyntya. 2014. Efektivitas pengenceran terhadap
pertumbuhan koloni mikroba pada saus tomat. J. Saintek. 11 (2) : 65 - 68.
Palawe, J. F., dan J. Antahari. 2018. TPC (Total Plate Count), WAC (Water
Adsorbtion Capacity) abon ikan selar dan cooking loss daging ikan selar
(Selaroides leptolesis). J. Ilmiah Tindalung. 4 (2) : 57 – 60.
Pamungkas, R. D. S. dan M. Irfan. 2018. Isolasi Bakteri Rhizobium dari tumbuhan
leguminosa yang tumbuh di lahan bergambut. J. Agroteknologi. 9 (1) : 31-
42.
Panjaitan, D., I K. Suada, dan M. Sritamin. 2014. uji keefektivn ekstrak bebrapa
biji tanaman untuk menghambat pertumbuhan bakteri bercak daun
(Xanthomonas campestris) pada tanaman tomat. J. Agroekoteknologi
Tropika. 3 (2) : 89 – 96.
Pratama, D. G. A. Y., I. G. A. G. Bawa, dan I. W. G. Gunawan. Isolasi dan
identifikasi senyawa minyak atsiri dari tumbuhan sembukan (Paederia
foetida L.) dengan metode kromatografi gas-spektroskopi massa (gc-ms). J.
Kimia. 10 (1) : 149 - 154.
Pratiwi, N. W., E. Juliantari, dan L. K. Napsiyah. 2016. Identifikasi jamur
penyebab penyakit pascapanen pada beberapa komoditas bahan pangan. J.
Riau Biologi. 1 (1) : 86 – 94.
94
Prihanto, A. A., A. Fatchiyah, H. Kartikaningsih, dan K. A. Pradarameswari.

2018. Identifikasi bakteri endofit mangrove api-api putih
(Avicennia marina) penghasil enzim L-asparaginase. J. Ilmiah perikanan
dan kelautan. 10 (2) : 84 – 90.
Purwaningsih, S. 2010. Isolasi, populasi, dan karakterisasi bakteri rhizobium pada
daerah perakaran dan tanah dari Bengkulu, Sumatra. J. Biosfera. 27 (1): 46 -
52.
Purwantisari, S., dan R. B. Hastuti. 2009. Isolasi dan identifikasi jamur
Indigenous Rhizosfer tanaman kentang dari lahan pertanian kentang organik
di Desa Pakis, Magelang. J. Bioma. 11 (2) : 45 – 53.
Puspitasari, F. D., M. Shovitri, dan N. D. Kuswytasari. 2012. Isolasi dan
karakteristik bakteri aerob proteolitik dari tengki septik. J. Sains dan seni
ITS. 1(1) : 1 – 4.
Rakhman, K. A., A. R. Saraha, dan N. Sugrah. 2017. Pengembangan video
penggunaan alat gelas laboratorium kimia. J. Inovasi Pendidikan IPA. 3 (2) :
161 – 171.
Ratri, M. I., P. R. Sarjono, dan A. L. Aminin. 2009. Studi filogeni dan uji potensi
bioremediasi serta enzim termostabil ekstraseluler isolat Geobacillus sp.
dari sumber air panas Gedong Songo. J. Kimia Sains dan Aplikasi. 12 (2) :
31 - 39.
Raya, A. S., A. Hidayatno, dan A. A. Zahra. 2013. Modifikasi mikroskop dengan
perbesaran digital menggunakan sistem kamera. J. Transient. 2 (3) : 728 –
733.
Rezki, A. D. 2018. Studi waktu simpan dan kemasan terhadap kualitas pupuk
hayati rhizobium sp.dalam bentuk cair dan padat. J. Universitas of
Muhammadiyah Malang. 1 (1) : 5 - 20.
Rizky, V. A., S. Siregar, V. Kridsianilo, dan J. P. Sinurat. 2019. Perbedaan teknik
penanaman terhadap hasil jumlah koloni bakteri escherchia coli pada suhu
inkubasi 36 c. J. Farmasimed. 1 (1) : 24 – 26.
Rohmah, N., W. Muslihatin, dan T. Nurhidayati. 2016. Pengaruh kombinasi
media pembawa pupuk hayati bakteri penambat nitrogen terhadap pH dan
unsur hara nitrogen dalam tanah. J. Sains dan Seni ITS. 4 (1) : 44 – 46.
Roostika, I., R. Purnamaningsih, dan A. V. Noviati. 2016. Pengaruh sumber
karbon dan kondisi inkubasi terhadap pertumbuhan kultur in vitro
Purwoceng (Pimpinella pruatjan Molk). J. AgroBiogen. 4 (2) : 65 - 69.
Sabbathini, G. C., dan S. Pujiyanto. 2017. Isolasidan identifikasibakteri
genusSphingomonasdari daun padi (Oryza sativa) di area
persawahanCibinong. J. Akademika Biologi. 6 (1) : 59 – 64.
95
Safrida, Y. D., Raihanaton, dan Ananda. 2019. Uji cemaran mikroba dalam susu
kedelai tanpa merek di Kecamatan Jaya Baru Kota Banda Aceh secara Total
Plate Count (TPC). J. Serambi Engineering. 4 (1) : 364 – 371.
Samingan. 2010. Jenis fungi yang terdapat pada serasah daun acacia mangium
(Fungi on Acacia mangium leaves litter). J. Biologi Edukasi. 1 (1) : 19 – 23.
Saputri, R., A. Syauqi, dan H. Santoso. 2019. Penambahan nutrisi pottato dextrose
agar pada pembuatan starter mikroorganisme jamur dengan bahan baku
tepung beras. J. Biosantropis. 4 (2) : 40 – 45.
Sari, I. G. A. D. V., G. N. A. S. Wirya, I. P. Sudiarta. 2018. Identifikasi penyebab
penyakit layu pada tanaman stroberi (fragaria sp.) di desa pancasari dan
potensi pengendaliannya dengan mikroba antagonis. J. Agroekoteknologi
Tropika 1 (7) : 104 – 107.
Sari, I. N., dan D. F. Saputri. 2017. Analisis kesalahan menggunakan alat ukur
pada mahasiswa program studi pendidikan fisika IKIP PGRI Pontianak. J.
Pendidikan. 14 (2) : 237 – 248.
Sari, R., dan R. Prayudyaningsih. 2015. Rhizobium: pemanfaatannya sebagai
bakteri penambat nitrogen. J. Buletin Eboni. 12 (1) : 51 – 64.
Sari, T. N., dan S. Amilah. 2015. Penentuan jumlah bakteri daging ayam broiler
(Gallus domesticus) setelah direndam dalam larutan lidah mertua
(Sansevieria trifasciata). J. Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Unipa.
8 (02) : 25 – 31.
Sariyem, Sadimin, L. Sunarjo, dan M. Haniyati. 2015. Efektivitas ekstrak daun
sukun hasil perebusan terhadap pertumbuhan koloni bakteri Streptococcus
mutans. J. Kesehatan Gigi. 2 (2) : 104 – 109.
Saskiawan, I., M. Munir, dan S. S. Achmadi. 2017. Optimasi produksi serta
analisis aktivitas antioksidan dan antimikroba senyawa eksopolisakarida
dari jamur tiram putih (Pleurotus ostreatus) pada media cair. J. Berita
Biologi. 15 (2) : 133 – 140.
Sembiring, A. 2019. Isolasi dan uji aktivitas bakteri penghasil selulase asal tanah
kandang sapi. J. Penelitian Sains dan Pendidikan. 8 (1) : 21 – 28.
Shetta, N. D., T. S. Al-Shaharani, dan M. Abdel-Aal. 2011. Identification and
characterization of Rhizobium associated with woody legume trees grown
under Saudi Arabia condition. J. Agriculture and Environment Sciences. 10
(3) : 410 – 418.
96
Shofiyani, A., dan Damajanti, N. 2017. Pengembangan metode sterilisasi pada

berbagai eksplan guna meningkatkan keberhasilan kultur kalus kencur
(Kaemferia Galangal L). J. Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah
Purwokerto. 17 (1) : 55 – 64.
Sridevi, V., M. Raghuram, dan D. Ravisankar 2018. Isolation and screening of
heavy metal resistant microorganisms from industrial soil. J. of Pure and
Applied Microbiology. 12 (3) : 1667 – 1674.
Subandi, S. 2015. Modifikasi oven bekas sebagai alat pengering multi fungsi. J.
Ilmiah Teknik Pertanian-TekTan. 7 (2) : 113 – 123.
Sukawaty, Y., M. Kamil, dan E. Kusumawati. 2017. Uji cemaran bakteri coliform
pada minuman tebu. J. Ilmiah manutung. 2 (2) : 248 – 253.
Sukmawati, S., dan F. Hardianti. 2018. Analisis total plate count (TPC) mikroba
pada ikan asin kakap di Kota Sorong Papua Barat. J. Biodjati. 3 (1) : 72 –
78.
Surjowardojo, P., T. E. Susilawati, dan G. R. Sirait. 2016. Daya hambat dekok
kulit apel manalagi (Malus sylvestrs Mill.) terhadap pertumbuhan
Staphylococcus aureus dan Pseudomonas sp. penyebab mastitis pada sapi
perah. J. Of tropical animal production. 16 (2) : 40 – 48.
Suryana, S., Y. Y. A. Nuraeni, dan T. Rostinawati. 2017. Aktivitas antibakteri
ekstrak etanol dari lima tanaman terhadap bakteri staphylococcus
epidermidis dengan metode mikrodilusi M7–A6CLSI. J. Pharmaceutical
Science and Technology of Indonesian. 4 (1) : 1 – 9.
Syakri, S., dan D. N. Putra. 2017. Formulasi dan uji aktivitas sirup sari buah sawo
manilla (Manilkara zapota Linn) terhadap beebrapa mikroba penyebab
diare. J. Farmasi UIN Alauddin Makassar. 5 (2) : 72 – 83.
Taurisia, P. P., M. W. Proborini, dan I. Nuhantoro. 2015. Pengaruh media
terhadap pertumbuhan dan biomassa cendawan Alternaria alternata (Fries)
Keissler. J. Biologi. 19 (1): 30 – 33.
Tyanjani, E. F., dan Y. Yunianta. 2014. Pembuatan dekstrin dari pati sagu
(Metroxylon sagus Rottb) dengan β–amilase terhadap sifat fisiko kimia. J.
Pangan dan Agroindustri. 3 (3) : 1119 – 1127.
Udiyana, F., Hairida, dan R. P. Sartika. 2015. Analisis keterampilan menggunakan
dan merangkai alat praktikum melalui self dan peer asessment pada
mahasiswa. J. Pendidikan dan pembelajaran. 4 (12) : 1 – 11.
97
Wang, F., E. T. Wang, L. J. Wu, X. H. Sui, Y. Li Jr, dan W. X. Chen. 2011.

Rhizobium vallis sp. nov., isolated from nodules of three leguminous
species. J. International of systematic and evolutionary microbiology. 61
(11) : 2582 - 2588.
Wantini, S., dan A. Octavia. 2018. Perbandingan pertumbuhan jamur Aspergillus
flavus pada media PDA (Potato Dextrose Agar) dan media aternatif dari
singkong (Manihot esculenta Crantz). J. Analis Kesehatan. 6 (2) : 625 - 631.
Wibowo, A. P., dan R. Andrivani. 2016. Perhitungan jumlah bakteri Escherichia
coli dengan pengolahan citra melalui metode thresholding dan counting
morphology. J. Ilmiah Teknologi Informasi Terapan. 11 (3) : 235 – 244.
Wicaksono, D., R. R. Isnanto, dan O. D. Nurhayati. 2014. Perancangan perangkat
lunak untuk analisis tingkat fokus pada citra mikroskop digital
menggunakan proses ekstraksi ciri. J. Teknologi dan sistem komputer. 2 (1)
: 16 - 22
Widawati, S. 2015. Uji bakteri simbiotik dan non simbiotik pelarutan Ca vs P dan
efek inokulasi bakteri pada anakan turi (Sesbania grandiflora L. Pers.). J.
Biologi Indonesia. 11 (2) : 295 – 307.
Widianingsih, M., dan A. M. De jesus. 2018. Isolasi Escherichia Coli dari urine
pasien infeksi saluran kemih di Rumah Sakit Bhayangkara Kediri. J. Al-
Kauniyah. 11 (2) : 99 - 108.
Widyasari, N. M., W. Retno dan M. Ketut. 2013. Pengaruh pH pada media
pertumbuhan terhadap ketahanan dari rhizobium sp.pada tanah yang bersifat
asam. J. Biologi. 17 (2) : 56 - 60.
Wijaya, R.C., E. L. Utari, dan Y. Yudianingsih. 2015. Perancangan alat
penghitungan bakteri. J. Teknologi Informasi Respati. 10 (29) : 1 – 8.
Wijayanti, R., dan N. Febrinasari. 2017. Karakterisasi ekstrak biji pepaya (Carica
pubescens) serta uji antibakteri terhadap Enteropathogenic Escherichia coli
(EPEC) penyebab diare pada mencit jantan. J. Ilmu Kesehatan. 12 (25) : 4 –
8.
Yulvizar, C. 2013. Isolasi dan identifikasi bakteri probiotik pada Rastrelinger sp.
J. Biopecies. 6 (2) : 1 – 7.
Yunita, M., Y. Hendrawan, dan R. Yulianingsih. 2015. Analisis kuanti
mikrobiologi pada makan penerbangan (aerofood acs) garuda
indonesiaberdasarkan tpc (total plate count) dengan metode pour plate. J.
Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem. 3 (3) : 237 – 248.
Yunita, W., E. Cahyono, dan N. Wijayati. 2016. Pengembangan kit stoikiometri
untuk meningkatkan pemahaman konsep siswa melalui pembelajaran
scientific approach. J. Of Innovative Science Education. 5 (1): 63 - 72.
98
Zahidah, D. dan M. Shovitri. 2013. Isolasi, karakterisasi, dan potensi bakteri aerob
sebagai pendegradasi limbah organik. J. Sains dan Seni Pomits. 2 (1) : 12 –
15.
Zakiah, K. dan N. F. Nurhakiki. 2018. Pengaruh beberapa jenis pupuk organik dan
fungi mikoriza arbuskula terhadap c-organik tanah, tinggi tanaman, dan
bobot tongkol jagung semi (Zea mays L.). J. Agro Wiralodra. 1 (2) : 48 –
51.
Zuhra, Z., S. Sofyana, dan C. Erlina. 2012. Pengaruh kondisi operasi alat
pengering semprot terhadap kualitas susu bubuk jagung. J. Rekayasa Kimia
dan Lingkungan. 9 (1) : 36 – 44.
99
LAMPIRAN
Lampiran 1. Dokumentasi Alat Praktikum Mikrobiologi

No Gambar Fungsi
Untuk mengamati sel, bakteri,

1.
dan mikroorganisme
Mikroskop cahaya
Untuk mensterilkan berbagai

2.
macam alat dan bahan
Autoklaf
Untuk menginkubasi atau

3.
memeram mikroba
Inkubator
100
Untuk menjaga sterilisasi

4. dalam pengkulturan
mikroorganisme
Laminar Air Flow
Untuk menimbang bahan

5.
yang akan digunakan
Timbangan analitik
6. Untuk sterilisasi kering
Oven
101
Untuk menghomogenkan
7. larutan dalam pembuatan
media
Hot Plate Stirrer
Untuk mengukur volume

8.
cairan
Gelas ukur
Untuk membiakkan atau

9.
kultivasi mikroorganisme
Cawan petri
102
Untuk menampung larutan,

bahan, atau cairan, serta
10. meracik dan
menghomogenkan bahan-
bahan komposisi media
Labu erlenmeyer
Untuk memindahkan larutan

atau dapat digunakan untuk
11.
mengambil larutan dalam
jumlah kecil
Pipet tetes
Untuk memindahkan larutan

12.
dengan volume tertentu
Pipet ukur
103
Untuk preparasi media dan

13.
penampung larutan
Gelas beker
14. Untuk sterilisasi pijar
Pembakar bunsen
Untuk uji biokimia dan

15.
menumbuhkan mikroba
Tabung reaksi
104
Untuk meratakan cairan dan

16. bakteri pada agar atau media
Batang L
Untuk menghaluskan,
17. menghancurkan, menumbuk
bahan
Mortar dan penumbuk
Untuk mengukur pH suatu

18.
larutan
pH indikator universal
105
Untuk mengambil benda

19.
dengan menjepitnya
Pinset
Untuk mengambil volume

20.
larutan yang kecil
Mikropipet
Untuk memindahkan media ke

21.
media baru
Jarum inokulum
106
Untuk mengambil bahan untuk

22.
ditimbang
Spatula
Untuk wadah bahan yang akan

23.
disterilisasi
Cawan porselen
Untuk mendokumentasikan
24.
hasil
Kamera
107
Lampiran 2. Dokumentasi Bahan Praktikum Mikrobiologi

No Bahan Fungsi
Untuk pembuatan media Yeast

1. Exract Mannitol Agar
(YEMA) Congo Red
Congo red

Exract Mannitol Agar
2.
(YEMA)
K2HPO4

(YEMA)
MgSO4.7H2O
108

(YEMA)
Mannitol
Untuk membuat media Potato

5.
Dextrose Agar (PDA)
Potato Dextrose Agar
Untuk bahan utama dalam

6.
isolasi Rhizobium
Bintil akar
109
Untuk bahan utama dalam

7.
isolasi fungi
Tanah sekitar tanaman kacang tanah
Lampiran 3. Hasil Pengamatan

No Alat Fungsi
1. Isolat bakteri Rhizobium
2. Isolat Fungi
110
Isolat bakteri Rhizobium

3.
secara makroskopis
Isolat bakteri Rhizobium

4.
secara mikroskopis
Isolat fungi sekitar tanah

5. tanaman kacang tanah
secara makroskopis
111
Isolat fungi sekitar tanah

6. tanaman kacang tanah
secara mikroskopis
Isolat Rhizobium pada Yeast

Extraxt Mnnitol Agar
7.
Bromothymol Blue (YEMA
BTB) secara makroskopis
Lampiran 4. Hasil Perhitungan Bakteri
1
Jumlah bakteri = Jumlah Koloni x Faktor Pengenceran
Metode Surface Plate
Diketahui volume sampel SP = 0,1 ml
1
Pengenceran 10-6 = 32 x = 320.000.000 CFU’s / ml
10-6
1
Pengenceran 10-7 = 40 x = 40.000.000.000 CFU’s / ml
10-7
1
Pengenceran 10-8 = 32 x = 320.000.000 CFU’s / ml
10-8
112
Metode Pour Plate
Diketahui volume sampel PP = 1 ml
1
Pengenceran 10-6 =2x = 2.000.000 CFU’s / ml
10-6
1
Pengenceran 10-7 =1x = 10.000.000 CFU’s / ml
10-7
1
Pengenceran 10-8 =5x = 5.000.000.000 CFU’s / ml
10-8
113
Lampiran 5. Log Book Kegiatan Praktikum

Paraf
Hari dan
No Kegiatan yang dilakukan Keterangan Penanggung
Tanggal
Jawab
1. Rabu, 18 - Mengamati alat-alat yang Lab. Ekologi

September ada di laboratorium. dan Produksi
2019 - Mengamati media Tanaman dan
perbanyakan. Lab.
- Menjelaskan kepada Fisiologi dan
praktikan lain (teman Pemuliaan
sekelas) mengenai fungsi alat Tanaman
dan bahan dalam
laboratorium.
2. Rabu, 25 - Melakukan pembuatan Lab.

September media secara langsung yaitu Fisiologi dan
2019 Yeast Extract Mannitol Agar Pemuliaan
(YEMA CR) dan Potato Tanaman
Dextrose Agar (PDA).
- Melakukan penuangan
media ke cawan petri di
dalam Laminar Air Flow
(LAF) agar tetap steril.
3. Rabu, 2 - Melakukan pengambilan Lab.

Oktober bintil akar pada tanaman Fisiologi dan
2019 kacang tanah. Pemuliaan
- Melakukan kegiatan isolasi Tanaman
bakteri dengan bahan bintil
tanaman kacang tanah
berumur ± 3 minggu.
- Melakukan pengovenan dan
penimbangan tanah seberat 1
gr sebagai bahan isolasi
fungi.
- Melakukan kegiatan isolasi
fungi dengan bahan tanah
yang telah di oven.
114
4. Rabu, 9 - Melakukan pengambilan Lab.

Oktober bakteri yang berwarna putih Fisiologi dan
2019 susu dengan jarum ose dan Pemuliaan
diletakkan pada kaca Tanaman
preparat.
- Melakukan penetesan 4
larutan secara berurutan yaitu
Kristal violet (CV), mordant
(lugol’s iodine), etanol, dan
safranin.
- Setiap pergantian proses
penetesan ditunggu selama 1
menit dan diselingi dengan
penetesan akuades untuk
membersihkan larutan
sebelumya.
- Melakukan pengamatan
dengan menggunakan
mikroskop perbesaran 100x.
- Identifikasi pada fungi
menggunakan pengamatan
makroskopis dan
mikroskopis.
fungi secara makroskopis
yaitu mengamati ukuran
koloni, eksudat, warna depan
dan belakang, permukaan
koloni, dan tepi koloni.
fungi secara mikroskopis
yaitu meggunakan bantuan
mikroskop.
5. Kamis, 17 - Melakukan kegiatan Lab.

Oktober pengenceran bertingkat untuk Fisiologi dan
2019 pour plate dan surface plate. Pemuliaan
- Mengambil bakteri Tanaman
sebanyak 1 gram dan
dimasukkan ke dalam tabung
reaksi berisi 9 ml akuades
sehingga didapat
-1
pengenceran 10 .
- Pengenceran selanjutnya
115
diambil 1 ml air dari

pengenceran 10-1 dan
dipindahkan pada tabung
reaksi lain yang berisi 9 ml
akuades, lakukan sampai
pengenceran 10-8 .
- Hasil pengenceran 10-6, 10-
7
, dan 10-8 digunakan untuk
metode pour plate dan
surface plate.
6. Selasa, 22 - Melakukan kegiatan Lab.

Oktober penghitungan bakteri yang Fisiologi dan
2019 telah dilakukan dengan Pemuliaan
metode pour plate dan Tanaman
surface plate.
- Melakukan penghitungan
dengan metode Total Plate
Count (TPC).
Mengetahui,
Asisten Praktikum
Linda Widia Sari

23020218120013
116
Lampiran 6. Dokumentasi Kegiatan Praktikum

ACARA 1
Mencatat hasil pengenalan alat-alat

laboratorium
Pengenalan komposisi media “Congo

Red”
Pengenalan alat-alat laboratorium “hot

plate stirrer”
117
ACARA 2
Komposisi media Yeast Extract

Mannitol Agar (YEMA)
Congo Red sebagai komposisi

pembuatan media Yeast Extract
Mannitol Agar Congo Red (YEMA
CR)
Pembuatan media Potato Dextrose

Agar (PDA)
118
Untuk melarutkan komposisi Yeast

Extract Mannitol Agar Congo Red
Pembuatan media Yeast Extract

Mannitol Agar Congo Red (YEMA
CR) diatas hot plate stirrer
Pembuatan media Potato Dextrose

Agar (PDA) diatas hot plate stirrer
119
Sterilisasi basah pada media Yeast

Extract Mannitol Agar Congo Red
(YEMA CR) dan Potato Dextrose
Agar (PDA) di autoklaf
Alat yang akan disterilisasi kering
Pembungkusan cawan petri yang kan

di sterilisasi kering menggunakan
kertas
120
Cawan petri dimasukkan ke dalam

oven untuk sterilisasi kering
ACARA 3
Pengambilan tanah disekitar bintil

akar
Tanah ditumbuk pada mortar untuk

isolasi bakteri
121
Tanah dimasukkan dimasukkan ke

dalam krus porselen dan disterilisasi
di dalam oven
Pengambilan bintil akar pada tanaman

kacang tanah dan dibersihkan
Bintil akar dibersihkan dan

disterilisasi menggunakan alkohol dan
akuades
122
Pinset dipanaskan diatas pembakar

bunsen dengan tujuan menstrilkan
pinset yang akan digunakan untuk
pengambilan bintil akar
Pengambilan bintil akar dengan

menggunakan pinset
Pemecahan bintil akar menggunakan

jarum ose yang sudah disterilkan
123
Mengambil cairan pada bintil akar

menggunakan jarum ose dan di isolasi
ke dalam media Yeast Extract
Mannitol Agar (YEMA) dengan
teknik streak plate atau penggoresan
secara zigzag
Media di tutup dengan plastik wrap

dan diinkubasi selama 5 – 7 hari
ACARA 4
Mengidentifikasi bakteri Rhizobium

yang dapat di isolasi
124
Bakteri Rhizobium di ambil

menggunakan jarum ose dan dipindah
ke media yang baru
Bakteri diletakkan diatas kaca preparat

dan akan dilakukan pewarnaan gram
Bakteri Rhizobium diberikan pewarna

CV untuk pewarnaan gram 1 dan
ditunggu 1 menit
125
Pembilasan dengan menggunakan

akuades setelah melakukan pewarnaan
pada bakteri dengan cara mengalirkan
air dengan pipet tetes
Pewarnaan bakteri selanjutnya ditetesi

dengan mordant atau gram B

126
Pemberian lariutan pemucat untuk

gram C pada pewarnaan gram

Pemberian safranin sebagai gram D

pada pewarnaan gram
127

Menutup pewarnaan gram dnegan

kaca penutup
Melewatkan kaca preparat diatas

pembakar bunsen dengan agak cepat
dan selanjutnya diamati dengan
menggunakan mikroskop
128
Mengidentifikasi bakteri secara

makroskopis bentuk dan warnanya
pada media Yeast Extract Mannitol
Agar Congo Red (YEMA CR)
Mengidentifikasi bakteri secara

makroskopis
Fungi yang ditumbuhkan pada media

Potato Dextrose Agar (PDA) akan
diidentifikasi secara mikroskopis
129
Mengambil fungi pada media dengan

jarum ose dan dipindahkan ke kaca
preparat
Menutup fungi dengan kaca preparat
Fungi diamati dengan menggunakan

mikroskop kamera
130
ACARA 5
Penuangan 9 ml akuades ke dalam 8

tabung reaksi
Pengambilan bakteri dengan

menggunakan jarum ose yang sudah
disterilkan
Bakteri yang telah diambil kemudian

dimasukkan ke dalam tabung reaksi
pertama (10-1)
131
Pengenceran bertingkat dilakukan

dengan cara memindahkan 1 ml air
pada pengenceran 10-1 ke 10-2 dan
dilakukan secara bertahap sampai ke
pengenceran ke 10-8
Pengambilan isolat pada tingkat

pengenceran 10-6, 10-7, 10-8 dengan
menggunakan mikropipet diambil
sebanyak 1 ml
Pengambilan bakteri sebnayak 1 ml

menggunakan mikropipet selanjutnya
diletakkan diatas media Nutrien Agar
dan diinkubasi semala 5 – 7 hari
132
Pengenceran mikroba dengan

mempersiapkan 8 tabung reaksi dan
diisi 9 ml akuades
Mengambil mikroba dengan jarum ose

dan diletakkan ke dalam tabung reaksi
dengan pengenceran 10-1
Pengenceran bertingkat dengan

pemindahan 0,1 ml dari tabung
pengenceran 10-1 ke tabung
pengenceran 10-2 dan seterusnya
sampai ke tabung pengenceran 10-8
133
Isolat dari pengenceran 10-6, 10-7, 10-8

dituangkan ke dalam cawan petri
sebanyak 0,1 ml
Penuangan agar ke dalam cawan petri

yang sudah terdapat isolat dan akan
diinkubasi5 -7 hari
Perhitungan jumlah bakteri pada

cawan petri yang selanjutnya akan
dihitung jumlah bakteri/ml

Laporan Resmi Mikrobiologi - 8a - Acc

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Resmi Mikrobiologi - 8a - Acc

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Laporan Resmi Mikrobiologi - 8a - Acc

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

i

PROGRAM STUDI S1 AGROEKOTEKNOLOGI

Judul : LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI

Koordinator Praktikum Asisten Pembimbing Praktikum

Semarang, 13 November 2019

KELOMPOK VIIIA. AGROEKOTEKNOLOGI. 2019. Laporan Praktikum

Praktikum Mikrobiologi dilaksanakan pada tanggal 18 September 2019

KATA PENGANTAR ................................................................................ ii

LEMBAR PENGESAHAN ....................................................................... iii

DAFTAR ISI ............................................................................................. v

DAFTAR TABEL ....................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... viii

ACARA I PENGENALAN ALAT DAN MEDIA

BAB I. PENDAHULUAN ............................................................ 2

ACARA II STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIA

BAB I. PENDAHULUAN ........................................................... 30

ACARA III ISOLASI MIKROORGANISME

BAB I. PENDAHUUAN ............................................................ 48

ACARA IV IDENTIFIKASI MIKROORGANISME

BAB I. PENDAHULUAN ........................................................... 60

BAB III.MATERI DAN METODE .............................................. 66

ACARA V PENGHITUNGAN BAKTERI

BAB I. PENDAHULUAN ........................................................ 75

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 88

1. Identifikasi Bakteri Rhizobium .................................................... 68

2. Identifikasi fungi ........................................................................... 71

3. Hasil perhitungan koloni bakteri ................................................... 83

1. Dokumentasi Alat Praktikum Mikrobiologi ....................................... 99

2. Dokumentas Bahan Praktikum Mikrobiologi .................................... 107

3. Hasil Pengamatan .............................................................................. 109

4. Hasil Perhitungan Bakteri .................................................................. 111

5. Log Book Kegiatan Praktikum .......................................................... 113

6. Dokumentasi Kegiatan Praktikum .................................................. 116

PENGENALAN ALAT DAN MEDIA

Pengenalan alat praktikum dan media penyebaran merupakan salah satu

acara praktikum yang sangat berguna untuk praktikum selanjutnya. Tersedianya

alat praktikum akan memudahkan berjalannya kelancaran praktikum. Terdapat

banyak alat-alat yang digunakan saat praktikum mikrobiologi. Alat-alat dalam

Alat elektrik contohnya seperti mikroskop cahaya ataupun mikroskop

keramik contohnya mortar dan penumbuk, pH indikator universal, pinset,

pengenalan alat dan media adalah mampu mengetahui, menggunakan,

mengoperasikan alat-alat dan media sesuai dengan fungsi dan prosedurnya.

2.1. Alat-alat Laboratorium

2.1.1. Alat elektrik

Alat-alat yang digunakan dalam praktikum salah satunya adalah alat

elektrik. Macam-macam alat elektrik yaitu mikroskop cahaya, autoklaf, inkubator,

laboratorium adalah mikroskop cahaya yang sudah digital dengan menggunakan

mengendalikan fokus dan jarak pengamatan dengan memutar sekrup-sekrup yang

waktu yang telah ditentukan (Novalia dkk., 2019).

Inkubator dalam praktikum sama halnya dengan inkubator pada bayi

tetapi bedanya disini inkubator digunakan untuk menginkubasi mikroba. Alat

Inkubator digunakan untuk menginkubasi mikroba dengan suhu tertentu. Prinsip

bar) untuk menghomogenkan media perbanyakan (Sukawaty dkk., 2017).

menjaga sterilisasi ketika menangani pengkulturan mikroba agar tidak terjadi

Air Flow bekerja dengan menggunakan sinar UV untuk menjaga kesterilan

Timbangan analitik adalah timbangan yang dirancang untuk mengukur

tertentu (Subandi, 2015).

2.1.2. Alat gelas