Revisi 1

LAPORAN PRAKTIK KERJA LAPANGAN (PKL)
PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT),

Escherechia coli dan Salmonella spp. PADA IKAN
BANDENG PRESTO DAN FILLET IKAN PATIN
AURELLIA SALSABILA PUTRI

11180950000043
PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGRI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
2021 M / 1442 H
LAPORAN PRAKTIK KERJA LAPANGAN (PKL)
PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT),

Escherechia coli dan Salmonella spp. PADA IKAN
BANDENG PRESTO DAN FILLET IKAN PATIN
Sebagai salah satu syarat untuk memenuhi mata kuliah PKL pada Program
Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negri
Syarif Hidayatullah Jakarta
AURELLIA SALSABILA PUTRI

11180950000043
PROGRAM STUDI BIOLOGI

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI
UNIVERSITAS ISLAM NEGRI SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
ii
2021 M / 1442H
HALAMAN PENGESAHAN
Nama Penulis : Aurellia Salsabila Putri

NIM : 11180950000043
Judul : Penentuan Angka Lempeng total (ALT), Escherechia
coli dan Salmonella spp. Pada Ikan Bandeng Presto dan
Fillet Ikan Patin
Lokasi : Laboratorium Mikrobiologi Mutu, Balai Uji Standar
Karantina Ikan dan Pengendalian Mutu Kementerian
Kelautan dan Perikanan Jakarta
Waktu : 1 Februari 2021 – 28 Februari 2021
Mengetahui,
Pembimbing I Pembimbing II
Dr. Priyanti, M.Si Sigit Hendra I. P. S. Pi.

NIP. 19750526 200012 2 001 NIP.
198505012006041002
Ketua Program Studi Biologi
Dr. Priyanti, M.Si.
iii
NIP. 19750526 200012 2 001
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT, Tuhan Semesta Alam atas

Rahmat dan Karunia yang diberikan sehingga penulis dapat
menyelesaikan Laporan Praktik Kerja Lapangan ini dengan baik dan
tepat pada waktunya. Laporan Praktik Kerja Lapangan ini merupakan
salah satu syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Sains pada Program
Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
Dalam laporan Praktik Kerja Lapangan ini, penulis mengambil judul
“Penentuan Angka Lempeng Total (ALT), Escherechia coli dan
Salmonella spp. Pada Ikan Bandeng Presto dan Fillet Ikan Patin”.
Hasil dari laporan ini diharapkan menjadi sumber informasi mengenai
Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada semua
pihak yang telah banyak membantu dan memberikan dukungan baik
dalam bentuk moril maupun material yaitu kepada:
1. Dr. Priyanti, M.Si. selaku Ketua Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan
Teknologi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dan selaku pembimbing 1 atas
ketersediaannya dalam bimbingan dan memberikan nasehat yang
membangun kepada penulis.
2. Dr. Ir. Woro Nur Endang Sariati, M.P. selaku kepala BUSKIPM beserta
seluruh jajarannya.
3. Sigit Hendra I. P, S.Pi., selaku pembimbing II yang telah memberikan
arahan, bimbingan, serta saran yang bermanfaat selama kegiatan Praktik
Kerja Lapangan berlangsung dan dalam penyusunan Laporan Praktik Kerja
Lapangan.
4. Rizky Amalia Rahman, S.St. Pi dan Sari Utami Hidayati, S.Pi. selaku
pembimbing di Laboratorium Mikrobiologi Mutu atas ilmu dan masukkan
membangun selama menjalani Praktik Kerja Lapangan.
5. Semua pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan penulisan
laporan praktik kerja lapangan yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
iv
Penulis menyadari penyusunan laporan praktik kerja lapangan ini
masih jauh dari sempurna, penulis sangat mengharapkan kritik dan
saran yang membangun dari pembaca titik akhirnya penulis berharap
semoga laporan praktik kerja lapangan ini
dapat bermanfaat bagi pembaca.
Jakarta, Maret 2021
Penulis
v
IDENTITAS INSTITUSI
Nama Instuisi : Balai Uji Standar Karantina Ikan,

Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil
Perikanan (BUSKIPM)
Alamat : Jl. Raya Mabes Hankam No.26, RT.2/RW.5,
Setu, Kec. Cipayung, Kota Jakarta Timur,
Daerah Khusus Ibukota Jakarta 13890
Telepon/Fax : (021) 844 8506 / (021) 8448679
E-mail : [email protected]
Website : buski.bkipm.kkp.go.id
Kepala Balai : Dr. Ir. Woro Nur Endang Sariati, M.P
Penyelia Lab. Mikro Mutu : Rizky Amalia Rahman, S.St. Pi
Pembimbing PKL : Sigit Hendra Irawan P, S.Pi
IDENTITAS UNIVERSITAS
Nama Universitas : Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah

Jakarta
Alamat : Jl. Ir. H. Juanda No. 95 Ciputat 15412
Telepon/Fax : (021) 7401925 / (021) 7402982
Rektor Universitas : Prof. Dr. Hj. Amany Burhanuddin Umar
Lubis, Lc., M.A
Dekan FST : Prof. Dr. Lily Surayya Eka Putri, M.Env.Stud
Ketua Prodi Biologi : Dr. Priyanti, M.Si
Pembimbing PKL : Dr. Priyanti, M.Si
vi
IDENTITAS MAHASISWA
Nama : Aurellia Salsabila Putri

NIM : 11180950000043
Jenis Kelamin : Perempuan
Tempat/ Tanggal Lahir : Jakarta, 31 Oktober 2000
Alamat : Jl. Otista Raya Gg. Ayub 05/08 No. 20
No. Telp/HP : 081294998991
Program Studi : Biologi
Fakultas : Sains dan Teknologi
Universitas : Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah
Jakarta
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL……………………………………………………………i
HALAMAN JUDUL………………………………………………………...........ii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii
KATA PENGANTAR............................................................................................iv
IDENTITAS INSTITUSI.......................................................................................vi
IDENTITAS UNIVERSITAS................................................................................vi
IDENTITAS MAHASISWA.................................................................................vii
DAFTAR LAMPIRAN...........................................................................................xi
DAFTAR TABEL..................................................................................................xii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................xiii
BAB I.......................................................................................................................1
1.1 Latar Belakang...............................................................................................1
1.2 Tujuan............................................................................................................3
1.3 Manfaat Praktik Kerja Lapangan (PKL)........................................................3
BAB II......................................................................................................................4
2.1.Sejarah BUSKIPM.........................................................................................4
2.2.Visi dan Misi BUSKIPM...............................................................................5
2.3.Struktur Organisasi BUSKIPM......................................................................5
2.4.Tugas Pokok dan Fungsi BUSKIPM.............................................................6
BAB III....................................................................................................................7
3.1 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Bandeng.......................................................7
3.2 Habitat Ikan Bandeng.....................................................................................8
3.3 Bandeng Presto dan Pengolahannya..............................................................8
3.4 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Patin.............................................................9
3.5 Habitat Ikan Patin.........................................................................................10
3.6 Kebiasaan Makan Ikan Patin........................................................................11
3.7 Fillet Ikan patin............................................................................................11
3.8 Mutu dan Daya Simpan................................................................................12
3.9 Teknik Angka Lempeng Total (ALT)..........................................................12
3.10 Escherechia coli.........................................................................................13
3.11. Salmonella spp..........................................................................................14
BAB IV..................................................................................................................16
4.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan..................................................................16
4.2 Alat dan Bahan.............................................................................................16
4.2.1 Alat dan Bahan Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI
2332.3:2015………………………………………………………………..16
viii
4.2.2 Alat dan Bahan Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015………………………………………….....16
4.2.3 Alat dan Bahan Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017…………17
4.3 Prosedur Kerja…………………………………………………………….17
4.3.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015……………17
4.3.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015…………………………………………….19
4.3.3 Pengujian Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017 21
BAB V....................................................................................................................25
5.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015........................25
Tabel 1. Hasil Pengujian ALT.......................................................................26
Filet Patin.......................................................................................................26
Bandeng Presto..............................................................................................26
Nilai 26
1,3 x 10-6 CFU/g.............................................................................................26
4,4 x 10-5 CFU/g.............................................................................................26
Tabel 2. Nilai Pengujian ALT........................................................................26
5.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015..........................................................................28
5.2.1 Persiapan Pengujian..............................................................................28
5.2.2 Pendugaan Koliform.............................................................................29
5.2.3 Uji Pendugaan E.coli.............................................................................30
5.2.4 Uji Penegasan E.coli.............................................................................31
5.2.5 Uji Biokimia..........................................................................................33
5.3 Pengujian Salmonella spp. ISO 6579-1:2017……………………………..40
5.3.1 Pengayaan Pada Media Selektif………………………………………...40
5.3.2 Inokulasi Pada Media Selektif…………………………………………..41
5.3.3 Pengujian biokimia……………………………………………………...42
BAB VI..........................................................................................................49
6.1 Kesimpulan..................................................................................................49
6.2 Saran.............................................................................................................50
DAFTAR PUSTAKA....................................................................................51
LAMPIRAN……………………………………………………………… ..55
ix
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1 Tahapan Pembuatan Media………………………………….55

Lampiran 2 Peralatan yang Digunakan…………………………………..56
Lampiran 3 Tahap PengujianALT………… …………………………….61
Lampiran 4 Hasil Pengujian ALT………………………………………..63
Lampiran 5 Hasil Pengujian Salmonella sp...……………………………68
Lampiran 6 Hasil Pengujian E.coli………………………………………69
Lampiran 7 Sampel….…………………………………………………...69
Perhitungan ALT...………………………………………………………69
xi
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1 Hasil Pengujian ALT……………………………………………..26

Tabel 2 Rata-Rata Nilai Pengujian ALT………………………………….26
Tabel 3 Hasil Pengujian Koliform dan Escherechia coli…………………37
Tabel 4 Interpretasi Hasil…………………………………………………38
Tabel 5 Hasil Pengujian Biokimia…………………………………..……46
Tabel 6I nterpretasi Hasil…………………………………………………47
xii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1 Struktur organisasi Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan

Keamanan Hasil Perikanan…………………………………………......5
Gambar 2 Morfologi Ikan Bandeng (Chanos chanos)
……………………………..7
Gambar 3 Morfologi Ikan Patin……………………………………………………
9
Gambar 4 Konrol pengencer (Aquadest) (A); Kontrol media (PCA) (B)…………
27
Gambar 5 Hasil Positif dan Negatif Media
LTB………………………………….30
Gambar 6 Hasil Positif dan Negatif Media EC
broth……………………………..31
Gambar 7 Hasil Positif dan Negatif Media L-EMB………………………………
32
Gambar 8 Pertumbuhan Bakteri pada Media TSA..………………………………
32
Gambar 9 Hasil Positif dan Negatif Uji
Indol…………………………………….33
Gambar 10 Hasil Pengujian methyl red
…………………………………………..33
Gambar 11 Hasil Pengujian voges-
prokauer……………………………………..35
Gambar 12 Hasil Pengujian Sitrat………………………………………………..36
Gambar 13 Hasil Pengujian Biokimia Escherechia coli …………………….......39
Gambar 14 Hasil Pengujian RVS dan MKTTn…………………………………..40
Gambar 15 Hasil Positif dan Negatif XLD dan HE………………………………
42
xiii
Gambar 16 Hasil Positif dan Negatif TSIA………………………………………
43
Gambar 17 Hasil Positif dan Negatif
Urea……………………………………….43
Gambar 18 Hasil Positif dan Negatif LIA………………………………………..43
Gambar 19 Hasil Positif dan Negatif
ONPG……………………………………..44
Gambar 20 Hasil Positif dan Negatif Pengujian Indol …………………………..44
xiv
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang

Makanan merupakan kebutuhan pokok manusia yang merupakan
komponen penting untuk keberlangsungan hidup dalam menjalankan
aktivitasnya. Proses pengubahan zat-zat makanan menjadi energi dapat
dilakukan melalui sistem pencernaan, baik secara pencernaan mekanis
maupun kimiawi. Fungsi makanan antara lain menyediakan materi yang
dibutuhkan oleh tubuh untuk tumbuh serta memperbaiki jaringan yang
rusak, maka dari itu manusia dihimbau untuk memperhatikan makanan yang
mereka konsumsi setiap harinya (Mary, 2007).
Terjaminya kualitas dan keamanan pangan merupakan titik fokus
pemerintah untuk meningkatkan kualitas hidup dan daya saing dalam
masyarakat. Berbagai kebijakan untuk menangani keamanan pangan
diarahkan untuk menjamin tersedianya produk aman untuk dikonsumsi oleh
masyarakat agar terhindar dari bahaya cemaran kimia dan kehadiran
mikroba yang dapat mengganggu, merugikan, dan membahayakan
kesehatan. Kualitas dan keamanan pangan dapat ditinjau dari berbagai
aspek, baik secara fisik (warna, bau, rasa, dan tekstur), mikrobiologis, dan
kandungan gizi. Menurut Undang-Undang Republik Indonesia Nomor 18
Tahun 2012 tentang pangan, keamanan pangan adalah kondisi dan upaya
yang diperlukan untuk mencegah pangan dari kemungkinan cemaran
biologis, kimia, dan benda lain yang dapat mengganggu, merugikan, dan
membahayakan kesehatan manusia serta tidak bertentangan dengan agama,
keyakinan, dan budaya masyarakat sehingga aman untuk dikonsumsi.
Proses pembuatan olahan pangan yang tidak mementingkan tingkat
aseptikvitas, membuat peluang terjadi pencemaran pada olahan pangan,
seperti kehadiran aktivitas mikrobiologis. Penyimpangan mutu mikrobiologi
merupakan salah satu aspek yang mengakibatkan produk pangan tidak layak
dipasarkan dan dikonsumsi. Banyak penelitian menunjukkan bahwa
konsumsi pangan yang nilai mikrobiologinya menyimpang atau melewati
standar dapat menyebabkan diare, pusing, muntah, mual dan demam.
Bahkan beberapa bakteri tertentu dapat menyebabkan pingsan, kerusakan
sel saraf hingga kematian (Ray, 2000).
Pemeriksaan Angka Lempeng Total (ALT) adalah menentukan jumlah
bakteri dalam suatu sampel. Dalam test tersebut diketehui perkembangan
banyaknya bakteri dengan mengatur sampel, di mana total bakteri
tergantung atas formasi bakteri di dalam media tempat tumbuhnya dan
masing-masing bakteri yang dihasilkan akan membentuk koloni yang
tunggal (Mursalim, 2018).
Pengujian pendugaan Escherechia coli dan Salmonella spp. dilakukan
untuk mengetahui kualitas mutu suatu bahan pangan. Pengujian ini
mencakup uji fisik, uji kimia, uji mikrobiologi, dan uji organoleptik. Bahan
pangan dapat menjadi racun apabila telah terkontaminasi oleh bakteri
patogen yang tumbuh dan berkembang. E . coli adalah bakteri yang sering
dijadikan standar utama kebersihan pangan, karena bakteri ini merupakan
indikasi awal adanya cemaran bakteri lain yang dapat menyebabkan
penyakit. Apabila teridentifikasi positif Escherechia coli dalam produk
pangan, maka terdapat kemungkinan bahan pangan tersebut juga positif
Salmonella spp. (Lindiawati, 2013).
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta menetapkan Praktik Kerja Lapangan
(PKL) sebagai salah satu kurikulum wajib yang harus ditempuh oleh
mahasiswa Jurusan Biologi. Kegiatan praktik kerja lapangan ini diambil
sesuai dengan spesifikasi yang diminati oleh masing-masing mahasiswa.
Diharapkan bahwa mahasiswa sebagai calon lulusan dari perguruan tinggi
dapat lebih mengenal suasana kerja sebenarnya dalam institusi yang akan
sangat membantu mahasiswa dalam mengatasi kecanggungan ketika terjun
langsung sebagai pekerja di sebuah instansi.
Kegiatan ini secara khusus bagi mahasiswa Biologi diharapkan dapat
menambah pemahaman mengenai teknik perhitungan Angka Lempeng Total
(ALT), Escherichia coli, dan Salmonella spp. terhadap olahan pangan ikan
bandeng presto dan fillet ikan patin. Pemahaman tersebut diharapkan ilmu
yang telah diperoleh di bangku kuliah dapat diaplikasikan pada tempat yang
2
sesuai, sehingga mahasiswa dapat menjadi salah satu sumber daya manusia
yang siap menghadapi tantangan.
1.2 Tujuan
1. Mengetahui, memahami, dan mempelajari secara langsung sistem
Balai Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan
Hasil Perikanan (BUSKIPM) dalam melakukan pengujian standar
karantina ikan.
2. Mempelajari dan memahami teknik pengujian perhitungan Angka
Lempengan Total (ALT), Escherichia coli dan Salmonella spp. pada
produk olahan ikan bandeng presto.
3. Mempelajari dan memahami teknik pengujian perhitungan Angka
Lempengan Total (ALT), Escherichia coli dan Salmonella spp. pada
produk olahan ikan fillet ikan patin.
4. Mempelajari dan memahami dampak nilai Angka Lempeng Total
(ALT), Escherichia coli, dan Salmonella spp. di dalam produk olahan
ikan bandeng dan fillet ikan patin
1.3 Manfaat Praktik Kerja Lapangan (PKL)

Praktik kerja lapangan ini diharapkan dapat memberikan manfaat bagi
mahasiswa, sehingga dapat menambah ilmu serta memberikan informasi
kepada mahasiswa mengenai teknik pengujian Angka Lempengan Total
(ALT), Escherichia coli dan Salmonella spp. serta dampak yang
ditimbulkan dari berbagai aspek terhadap kehadiran cemaran Escherichia
coli dan Salmonella spp. pada produk olahan ikan bandeng presto dan fillet
ikan patin, serta memahami sistem kerja Balai Uji Standar Karantina Ikan,
Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil Perikanan (BUSKIPM)dalam
melakukan pengujian standar karantina ikan.
3
BAB II
TINJAUAN UMUM
2.1. Sejarah BUSKIPM

Balai Uji Standar Karantina Ikan (BUSKI) diresmikan pada tanggal 1
Februari 2005 berdasarkan Keputusan Menteri Kelautan dan Perikanan No.
KEP33/MEN/2004 tertanggal 30 Juli 2004. BUSKI merupakan organisasi
setingkat eselon 3a yang terdiri dari Kepala Balai, Kasubbag Tata Usaha, dan
Kepala Seksi Pelayanan Teknis. Pembentukan BUSKI dimaksudkan untuk
meningkatkan daya guna dan hasil guna pelaksanaan pengujian standar karantina
ikan dengan tugas melaksanakan pengujian yang diperlukan dalam penyiapan
bahan penyusunan pengembangan teknik dan metoda serta standar uji
laboratorium karantina ikan. Selain itu, BUSKI juga diharapkan dapat berfungsi
sebagai tempat pelatihan bagi petugas laboratorium lingkup UPT Pusat Karantina
Ikan dan penghasil produk/bahan diagnosa penyakit ikan (KKP, 2014).
Seiring dengan pesatnya perkembangan mobilitas perikanan serta tuntutan
pasar (market) terhadap jaminan mutu serta keamanan produk yang akan
dipasarkan, khususnya pada produk-produk perikanan yang merupakan salah satu
andalan pasar ekspor Indonesia, melalui Peraturan Presiden Nomor 24 tahun 2010
dibentuklah Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil
Perikanan (BKIPM). Menindaklanjuti Peraturan Presiden tersebut dan dalam
rangka optimalisasi pelaksanaan tugas dan fungsi karantina ikan, pengendalian
mutu, dan keamanan hasil perikanan, maka Kementerian Kelautan dan Perikanan
menerbitkan Peraturan Menteri Kelautan dan Perikanan Nomor:
PER.25/MEN/2011 tanggal 26 September 2011 tentang Organisasi dan Tata kerja
Unit Pelaksana Teknis Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil
Perikanan (KKP, 2014).
Sejak diterbitkannya peraturan tersebut, Balai Uji Standar Karantina Ikan
(BUSKI) berubah menjadi Balai Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu,
dan Keamanan Hasil Perikanan (BUSKIPM). Perubahan tersebut diikuti dengan
perubahan Struktur Organisasi, Tugas dan Fungsi yaitu Kepala Balai, Kasubbag
Tata Usaha, Kasie Pengujian HPI, Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan, dan
Kasie Bimtek dan Informasi (KKP, 2014).
4
2.2. Visi dan Misi BUSKIPM
A. Visi
BUSKIPM merupakan Unit Pelaksana Teknis di bidang pelayanan Uji
Standar Karantina Ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan
yang berada di bawah dan bertanggung jawab kepada Kepala Badan
Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan
(BKIPM), dengan visi: “Mewujudkan laboratorium BUSKIPM sebagai
acuan internasional”
B. Misi
Dalam upaya mewujudkan visi tersebut, Balai uji Standar Karantina
Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan menetapkan misi:
“Melakukan pengujian dan pengembangan teknik dan metoda pengujian
laboratorium sesuai standar Internasional.
2.3. Struktur Organisasi BUSKIPM
KEPALA BUSKIPM
Dr. Ir. Woro Nur Endang
Sariati, M.P
KASUBAG TATA USAHA

Ade Noor Kusumahati, A.Pi, M.Si
KASIE PENGUJIAN HPI DAN

KASIE BIMTEK DAN
MUTU
INFORMASI
Slamet Andriyanto, S.Si, M.Si
Ir. Mahlani Widjiastuti
KOORDINATOR JABATAN
FUNGSIONAL
M. Tony W. Silaban, S.Si
Gambar 1. Struktur Organisasi

BUSKIPM (Sumber : KKP, 2014)
5
2.4. Tugas Pokok dan Fungsi BUSKIPM
Hasil Perikanan mempunyai tugas melaksanakan pengujian dan
pengembangan teknik dan metode pengujian karantina ikan, mutu dan
keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan dalam rangka uji
standar karantina ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan,
dan keamanan hayati ikan.
Hasil Perikanan menyelenggarakan fungsi:
a. Pelaksanaan pengujian terhadap Hama dan Penyakit Ikan Karantina,
mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan dalam
rangka uji standar Hama dan Penyakit Ikan Karantina, mutu dan
keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan;
b. Pengembangan teknik dan metode pengujian Hama dan Penyakit Ikan
Karantina, mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati
ikan;
c. Pelaksanaan uji profisiensi;
d. Pelaksanaan rancangan standardisasi metode pengujian karantina ikan,
pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan
hayati ikan;
e. Pembuatan koleksi standar media pembawa dan/atau Hama dan
Penyakit Ikan Karantina;
f. Penyiapan bahan informasi dan publikasi hasil pengujian laboratorium
karantina ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan, dan
keamanan hayati ikan;
g. Pelaksanaan kerja sama teknis laboratorium nasional dan
internasional;
h. Pelaksanaan bimbingan teknis laboratorium;
i. Pengumpulan dan pengolahan data; dan
j. Pelaksanaan urusan tata usaha dan rumah tangga.
6
BAB III
TINJAUAN PUSTAKA
3.1 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Bandeng

Klasifikasi ikan bandeng menurut Saanin (1984), adalah sebagai
berikut ; Filum : Chordata, subfilum : vertebrata, kelas : pisces, subkelas :
teleoste, ordo : malacopterygii, famili : Chanidae, genus : chanos, spesies :
chanos chanos. Ikan bandeng (Chanos chanos) secara morfologi dicirikan
dengan bentuk memanjang berbentuk seperti torpedo (Gambar 2). Sirip
ekornya bercabang (forked). Pada bagian tubuhnya tersusun sisik-sisik kecil
yang teratur membentuk cycloid. Tubuhnya berwarna putih keperakan
terutama pada bagian perut (vebtral), sedangkan pada bagian punggung
(dorsal) berwarna biru kehitaman. Garis linea lateralis terlihat jelas
memanjang dari bagian belakang tutup insang hingga ke bagian pangkal
ekor. Ikan bandeng dewasa dapat mencapai bobot 4-14 kg dengan Panjang
ikan menapai 50-150 cm (Gotanco 7 Menez, 2004).
Gambar 2. Morfologi Ikan Bandeng (Chanos chanos)

(sumber : Moler, 1986 dalam Mas’ud, 2011).
Keterangan gambar :
a) Mata;
b) Tutup insang;
c) Sirip pectoralis;
7
d) Sirip abdomalis;
e) Sirip analis;
f) Sirip caudal;
g) Sirip dorsalis;
h) Linea laterals;
i) Mulut
Menurut Achmad dkk (1993), Ikan bandeng jantan memiliki ciri-ciri
warna sisik tubuh cerah dan mengkilap keperakan serta memiliki dua lubang
kecil di bagian anus yang tampak jelas pada saat bandeng jantan dewasa.
Bandeng betina memiliki ciri-ciri perut agak buncit dan terdapat tiga lubang
di bagian anus yang tampak jelas pada saat bandeng betina dewasa.
3.2 Habitat Ikan Bandeng

Ikan bandeng merupakan ikan yang memiliki penyebaran di laut
tropik Indo Pasifik namun lebih dominan di daerah Asia (Priyono et al.,
2011). Bandeng dewasa pada umumnya hidup pada perairan laut dengan
dengan kedalaman 1 hingga 30 meter dan berkarang. Nener Bandeng yang
baru menetas pada umumnya akan hidup pada perairan laut dangkal selama
2 hingga 3 minggu kemudian bermigrasi ke hutan mangrove, muara sungai,
hingga danau ketika remaja sebelum kembali ke laut dengan kedalaman 10-
30 meter ketika dewasa untuk berkembang biak.
Ikan bandeng termasuk dalam jenis ikan euryhaline,dimana dapat
hidup dalam kadar garam yang cukup tinggi yaitu berkisar antara 0-140
promil. Oleh sebab itu ikan bandeng dapat hidup di daerah air tawar
(kolam/sawah), air payau (tambak), dan air asin (laut) (Purnowati et al.,
2007).
3.3 Bandeng Presto dan Pengolahannya

Salah satu hasil olahan ikan bandeng adalah bandeng presto. Bandeng
presto merupakan olahan dari bandeng utuh yang mengalami perlakuan
yaitu penerimaan bahan baku, sortasi, penyiangan, pencucian, perendaman,
pembungkusan, pendinginan, pengemasan, dan penyimpanan (Badan
Standarisasi Nasional, 2009). Menurut Susanto, (2010) Pengolahan ikan
8
bandeng presto terbagi menjadi dua cara yaitu pengolahan secara tradisional
dan pengolahan secara modern. Pengolahan ikan bandeng secara tradisional
dilakukan dengan prinsip pemindangan yaitu pengawetan dengan teknik
penggaraman dan pemanasan (Adawyah, 2011). Pemindangan adalah proses
merebus ikan dalam wadah selama kurun waktu tertentu. Dalam proses
pemindangan kandungan air pada ikan akan mengalami penurunan karena
terjadinya penarikan cairan ikan oleh larutan garam (Anjarsari, 2010).
Pengolahan ikan bandeng secara modern dilakukan dengan menggunakan
autoclave atau pressure cooker dalam sekala rumah tangga. Proses
pengolahan bandeng presto menggunakan suhu yang tinggi yaitu 115°-
121°C dengan tekanan 1 atm. Tekanan yang tinggi dari autoclave atau
pressure cooker ini yang menyebabkan duri ikan bandeng presto menjadi
lunak (Adawyah, 2011).
3.4 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Patin

Berikut adalah klasifikasi Ikan Patin Siam (Pangasius
hypophthalamus) menurut Ghufran (2010) :
Kingdom : Animalia
Filum : Chordata
Kelas : Pisces
Ordo : Siluriformes
Famili : Pangasidae
Genus : Pangasius
Species : Pangasius sp.
9
Gambar 3. Morfologi Patin (Sumber : Hamilton, 1982). Keterangan gambar :
1. Mulur, 2. Mata; 3. Sirip dada: 4. Patil; 5. Sirip punggung; 6. Sirip
perut; 7. Sirip anal; 8. Gurat sisi; 9. Sirip ekor
Ikan Patin (Pangasius sp.) memiliki tubuh yang memanjang

berwarna putih perak dengan bagian punggung berwarna agak kebiruan.
Memiliki kepala yang relatif kecil dengan mulut yang terletak di ujung
kepala dan agak kebawah (Susanto, 2002). Ikan patin tidak memiliki
sisik, hal ini merupakan ciri khas golongan catfish, panjang tubuh
mencapai 120 cm, sudut mulutnya terdapat dua pasang kumis yang
berfungsi sebagai peraba. Pada permukaan punggung terdapat sirip
lemak dengan ukuran yang sangat kecil dan sirip ekornya membentuk
cagak dengan bentuk simetris (Subagja, 1999). Menurut Kordi (2005),
ikan patin memiliki sirip punggung dengan jari-jari keras yang berubah
menjadi patil yang besar dan bergerigi pada bagian belakang,
sedangkan jari-jari lunak pada sirip punggungnya terdapat 6-7 buah.
Sirip ekornya berbentuk cagak dan bentuknya simetris. Sirip duburnya
yang panjang terdiri dari 30-33 jari-jari lunak. Sirip perutnya memiliki
8-9 jari-jari lunak Sirip punggung (dorsal) mempunyai jari-jari keras
yang berubah menjadi patil bergerigi di sebelah belakangnya. Jari-jari
lunak sirip punggung berjumlah 7-8 buah.
3.5 Habitat Ikan Patin

Ikan Patin cukup luas di dalam penyebarannya, hampir terdapat di
seluruh wilayah Indonesia. Yaitu di sungai-sungai besar dan berair
tenang seperti di Sumatera, yaitu di Sungai Way Rarem, Musi,
Batanghari dan Indragiri. Sungai-sungai besar lainnya di Jawa seperti di
Sungai Brantas dan Bengawan. Di Kalimantan ikan patin ini yang
merupakan keluarga dekat dengan ikan lele dapat ditemukan di Sungai
Kayan, Berau, Mahakam, Barito, Kahayan dan juga Kapuas (Agribisnis
dan Aquacultures, 2009).
Ikan Patin merupakan hewan yang bersifat nokturnal, yaitu melakukan
aktivitas atau aktif pada malam hari. Ikan ini suka bersenbunyi di liang-
10
liang tepi sungai. Benih patin di alam biasanya bergerombol dan
sesekali muncul di permukaan air untuk menghirup oksigen langsung
dari udara pada menjelang fajar. Untuk budidaya ikan patin, media atau
lingkungan yang dibutuhkan tidaklah rumit, karena patin termasuk
golongan ikan yang mampu bertahan pada lingkungan perairan yang
jelek. Walaupun patin dikenal ikan yang mampu hidup pada lingkungan
perairan yang jelek, namun ikan ini ikan ini lebih menyukai kondisi
perairan yang baik (Kordi, 2005).
3.6 Kebiasaan Makan Ikan Patin

Ikan Patin (Pangasius sp.) merupakan ikan pemakan segala
(omnivora), tetapi cenderung ke arah karnivora (pemakan
daging/hewani). Di alam, makanan utama ikan Patin Siam (Pangasius
sp.) berupa udang renik (Crustacea), Insekta dan Molusca. Sementara
makanan pelengkap ikan patin berupa rotifera, ikan kecil dan daun-
daunan yang ada di perairan. Ikan patin juga Sumber energi yang
didapatkan dari makanan tersebut digunakan sebagai pertumbuhan dan
kelangsungan hidup Ikan Patin (Mahyuddin, 2010).
Menurut Kustiyawati, (2016) Ikan patin memiliki kebiasaan
makan didasar perairan atau kolam (bottom feeder). Ikan patin termasuk
kedalam ikan yang bersifat omnivora (pemakan segala). Namun pada
saat fase larva, ikan patin cenderung bersifat carnivora. Pada saat larva
ikan patin bersifat canibalisme yaitu memiliki sifat memangsa
kawannya sendiri. Karena hal itu, Ketika pada tahap larva, pemberian
pakan pada ikan patin tidak boleh terlambat.
Kebiasaan makan ikan dibagi menjadi dua golongan, yaitu ikan
yang fasif dan ikan yang agresif. Ikan fasif akan menunggu datangnya
pakan, lalu menangkapnya untuk dimakan, sedangkan ikan agresif/aktif
akan bergerak cepat ke arah pakan dan cepat menangkapnya untuk
dimakan. Ikan patin siam termasuk ke dalam golongan ikan bersifat
tidak aktif dan juga tidak pasif (Nugraha, 2007).
11
3.7 Fillet Ikan patin
Fillet ikan patin atau yang dikenal dengan nama dory fillet. Ikan patin
memilki keunggulan tersendiri, antara lain tidak bersisik, durinya relatif
sedikit dan dagingnya putih kemerahan serta mudah dikuliti sehingga
relatif mudah dibuat filet yang baik. Selain itu, filet juga memiliki
beberapa keuntungan sebagai bahan baku olahan, antara lain bebas duri
dan tulang, dapat disimpan lebih lama dan mengefisienkan proses
produksi serta meningkatkan mutu produk olahannya (Putri et al. 2014).
Filet patin merupakan produk yang cepat mengalami kebusukan
sehingga menyebabkan umur simpan menjadi pendek. Proses
pembusukan pada ikan disebabkan oleh aktivitas autolisis, enzimatis,
reaksi kimia dan pertumbuhan mikroorganisme (Ghaly et al. 2010).
Berbagai mikroba pembusuk yang ditemukan dalam fillet ikan patin
terkemas termasuk dalam genus Serratia dan Pseudomonas (Noseda et
al. 2012).
3.8 Mutu dan Daya Simpan

Ikan merupakan produk yang high perishable (mudah rusak) oleh
karena itu diperlukan penanganan yang khusus agar mutu ikan tetap
terjaga (Nanakurnia, 2008). Permasalahan mutu serta keamanan produk
hasil perikanan terjadi pada berbagai jenis produk, tahapan kegiatan
maupun wilayah dengan berbagai jenis bahan berbahaya dan sumbernya
dengan karakteristik yang berbeda. Timbulnya permasalahan ini
disebabkan oleh berbagai aspek meliputi teknis, ekonomi, sosial
budaya, maupun kelembagaan. Dalam rangka meningkatkan keamanan
pangan produk hasil perikanan perlu dilakukan kajian terhadap
perumusan pengembangan kebijakan jaminan mutu dan keamanan
produk hasil perikanan.
Kondisi penyimpanan bahan pangan akan mempengaruhi jenis bakteri
yang berkembang dan menyebabkan kerusakan pangan. Ikan yang
disimpan didalam suhu kamar akan mempercepat proses pembusukan
karena bakteri yang terdapat pada ikan dapat melakukan metabolism
12
dengan sempurna. Oleh sebab itu umur mutu ikan yang rendah serta
masa simpan ikan yang singkat menjadi masalah utama bagi industry
pengolah ikan (Fradiaz, 1989).
3.9 Teknik Angka Lempeng Total (ALT)

Menurut WHO (2011), Angka Lempeng Total (ALT) disebut juga
angka lempeng heterotropik (Heterotro Plate Count/HCP) merupakan
indikator keberadaan mikroba heterotropik termasuk bakteri dan kapang
yang sensiif terhadap proses desinfektan seperti bakteri coliform,
mikroba resisten desinfektan seperti pembentukkan spora dan mikroba
yang dapat berkembang cepat pada air olahan tanpa residu desinfektan.
Meski telah mengalami proses desinfeksi yang berbeda, umum bagi
mikroba tumbuh selama perlakuan (treatment) dan distribusi dengan
konsentrasi berkisar 104-105 sel/ml. Nilai ALT bervariasi tergantung
berbagai faktor diantaranya kualitas sumber air, jenis perlakuan,
konsentrasi residu desinfektan, lokasi sampling, suhu air mentah, waktu
pengujian, metode uji meliputi suhu dan waktu inkubasi (Martoyo dkk.,
2014).
Metode kuantitatif digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba yang
ada pada suatu sampel, umumnya dikenal dengan ALT. Uji Angka
Lempengan Total aerob mesofil atau anaerob meosfil menggunakan
media padat dengan hasil akhir berupa koloni yang dapat diamati secara
visual berupa angka dalam koloni (cfu) per ml/g atau koloni/100 ml.
prinsip pengujian ALT menurut Metode Analisis Mikrobiologi (MA
PPMON nomor 96/mik/00) yaitu pertumbuhan koloni bakteri aerob
mesofil setelah cuplikan diinokulasikan pada media lempeng agar
dengan metode pour plate dan diinkubasi pada suhu yang sesuai. Pada
pengujian ALT menggunakan media PCA (Plate Count Agar) sebagai
media padatnya. Digunakan pula pereaksi Triphenyl Tetrazolium
Chloride 0,5% (TTC) (BPOM RI, 2008).
Angka Lempeng Total harus ditekan sekecil mungkin mikroba tersebut
tidak membahayakan kesehatan, namun terkadang karena pengaruh
13
sesuatu dapat menjadi mikroba membahayakan. Perhitungan jumlah
bakteri yang hidup menggambarkan jumlah sel yang hidup. Metode
perhitungan sel mikroba yang hidup dalam suspensi akan tumbuh
menjadi 1 koloni. Koloni bakteri yang tumbuh tidak berasal dari satu
mikroba karena terdapat beberapa mikroba tertentu yang hidup
berkelompok atau berantai. Apabila ditumbuhkan pada satu media atau
lingkungan yang sesuai maka akan menghasilkan satu koloni sehingga
sering digunakan istilah Colony Forming Unit (CFU) untuk menghitung
jumlah mikroba hidup. Lempeng agar yang dihitung apabila hanya
terdapat 25-250 koloni saja (PPOMN, 2006).
3.10 Escherechia coli

Morfologi dan identifikasi E. coli adalah bakteri Gram negatif yang
berbentuk pendek (kokobasil), berukuran 0,4-0,7 μm, bersifat anaerobik
fakultatif dan mempunyai flagella peritrikal. Bakteri ini banyak
ditemukan di dalam usus manusia sebagai flora normal (Wijayanti,
2009). Berikut merupakan klasifikasi Escherichia coli :
Divisi : Procaryota ,Kelas : Schizomycetes ,Ordo :
Eubacteriales, Famili: Enterobacteriaceae,Marga : Escherichia, Spesies:
Escherichia coli
Escherichia coli termasuk dalam famili Enterobacteriaceae yang

apabila terdapat dalam saluran pencernaan dalam jumlah yang besar
dapat menimbulkan infeksi dan berbagai macam penyakit. Infeksi
Escherichia coli sering kali ditandai dengan diare yang disertai dengan
darah, kejang perut, demam, dan terkadang dapat menyebabkan
gangguan ginjal. Selain itu beberapa galur Escherichia coli menjadi
penyebab infeksi pada manusia se[erti infeksi saluran kemih, infeksi
meningitis pada neonates, dan gastroenteritis (Radji, 2010).
Berbagai cara pengujian E. coli telah dikembangkan, tetapi analisis
konvensional yang masih banyak dipraktikkan adalah dengan 4 tahap
analisis yang memerlukan waktu 5-7 hari. Empat tahap analisis tersebut
14
adalah uji pendugaan dengan metode MPN (most probable number), uji
penguat pada medium selektif, uji pelengkap dengan medium lactose
broth, serta uji identifikasi dengan melakukan reaksi IMViC (indol,
methyl red, Voges-Proskauer, dan citrate). Jadi untuk dapat
menyimpulkan E. coli berada dalam air atau makanan diperlukan
seluruh tahapan pengujian di atas. Apabila dikehendaki untuk
mengetahui serotipe dari E. coli yang diperoleh untuk memastikan
apakah E.coli tersebut patogen atau bukan maka dapat dilakukan uji
serologi. Meskipun demikian, beberapa serotipe patogen tertentu seperti
O157:H7 yang ganas tidak dapat diuji langsung dengan pengujian 4
tahap ini dan memerlukan pendekatan analisis khusus sejak awal
(Dwiari et al, 2008).
3.11. Salmonella spp.

Bakteri Salmonella sp. merupakan genus bakteri penyebab
utama penyakit bawaan makanan di seluruh dunia. Secara umum,
bakteri ini mengkontaminasi manusia melalui makanan yang
terkontaminasi bakteri ini yakni daging, unggas, telur, dan susu (WHO,
2014). Berikut merupakan klasifikasi Salmonella spp menurut Todar
(2008) :
Kingdom : Bacteria, Phylum : Proteobacteria, Class : Gamma
Proteobacteria, Genus : Salmonella, Species : Salmonella spp.
Salmonella sp. merupakan bakteri batang lurus, gram negatif, tidak
berspora, bergerak dengan flagel peritrik, berukuran 2-4 µm x 0.5-0,8
µm. Salmonella spp. dapat tumbuh cepat dalam media yang sederhana
(Jawet’z, dkk, 2005). Bakteri Salmonella sp. tumbuh pada suasana
aerob dan fakultatif anaerob, pada suhu 15-41 °C (suhu pertumbuhan
optimum 37,5 °C) dan pH pertumbuhan bakteri ini yaitu 6-8. Pada
umumnya isolat bakteri Salmonella sp. memiliki sifat-sifat berupa gerak
positif, reaksi fermentasi positif pada manitol dan sorbitol dan
fermentasi negatif pada reaksi indol, DNase, fenilalanin deaminase,
urease, Voges Proskauer, sukrosa, laktosa, adonitol, serta tidak tumbuh
15
dalam larutan KCN. Sebagian besar isolat Salmonella yang berasal dari
bahan klinik menghasilkan H2S. Salmonella sp. akan mati pada suhu 56
°C dan pada kondisi kering, di dalam air bakteri ini dapat bertahan
selama 4 minggu (Jawetz, Melnick, and Adelberg’s, 2012).
16
BAB IV
METODE PENELITIAN
4.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

Kegiatan PKL dilakukan pada hari Senin tanggal 1 Februari 2021
sampai dengan Jum’at 26 Februari 2021 di Laboratorium Mutu Balai
Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil
Perikanan (BUSKIPM), JL. Raya Mabes Hankam No. 26 Cipayung
Jakarta Timur.
4.2 Alat dan Bahan
4.2.1 Alat dan Bahan Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI
2332.3:2015
Alat yang digunakan untuk melakukan pengujian penentuan
Angka Lempeng Total (ALT) pada produk perikanan sesuai dengan
SNI 2332.3:2015 adalah botol pengencer, autoclave, stomacher, cawan
petri, inkubator, timbangan, mikropipet dan microtip, Biological Safety
Cabinet, gelas ukur, tisu, label, spidol, pemantik, dan bunsen.
Bahan yang digunakan antara lain sampel ikan bandeng presto,
sampel fillet ikan patin, Plate count agar (PCA), aquadest steril,
buffered peptone water (BPW), biakan murni bakteri Escherichia coli,
biakan murni bakteri Salmonella spp., dan alkohol 70%.
4.2.2 Alat dan Bahan Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015
koliform dan Escherichia coli pada produk perikanan sesuai dengan
SNI 2332.1:2015 adalah Waterbath, Bio Safety Cabinet, tabung reaksi,
tabung Durham, rak tabung reaksi, inkubator, botol pengencer,
timbangan, stomacher, gelas ukur, jarum Ose, mikropipet dan mikrotip,
cawan petri, vortex, bunsen, pemantik, tisu, pulpen, dan label.
17
Bahan yang digunakan antara lain buffered peptone water,
aquadest steril, lauryl tryprose broth (LTB), EC broth, Levine’s eosin
methylene blue (L-EMB) agar, MR-VP broth, simmon citrate agar,
pereaksi Kovacs, pereaksi Voges-proskauer, indikator methyl red,
Sulfide indol motility (SIM), Tryptic soy agar (TSA), alkohol 70%,
biakan murni bakteri Salmonella sp. , biakan murni bakteri Escherecia
coli, ikan bandeng presto, dan fillet ikan patin beku.
4.2.3 Alat dan Bahan Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017

salmonella spp. ISO 6579-1:2017 adalah Waterbath, Bio Safety
Cabinet, tabung reaksi, tabung Durham, rak tabung reaksi, inkubator,
botol pengencer, timbangan, stomacher, gelas ukur, jarum Ose,
mikropipet dan mikrotip, cawan petri, vortex, bunsen, pemantik, tisu,
pulpen, dan label.
Bahan yang digunakan antara lain Buffered peptone water
(BPW), tryptic soy agar (TSA), Sulfide indol motility (SIM), Xylose
Lysine Deoxycholate (XLD) agar, Muller-Kauffmann Tetrathinate-
Novobionic (MKTTn) broth, Rappaport-Vassiliadis Soya (RVS) broth,
Hektoen enteric (HE) agar, Christensen’s urea agar base, Triple sugar
iron agar, Lysine iron agar, alkohol 70%, NaCl, biakan murni bakteri
Salmonella sp. , biakan murni bakteri Escherecia coli, ikan bandeng
presto, fillet ikan patin beku (Pangasius sp).
4.3 Prosedur Kerja

Prosedur kerja pengujian mengacu pada SNI 2332.1:2015 tentang Cara
uji mikrobiologi – Bagian 1 : Penentuan Koliform dan Escherecia coli
Pada Produk Perikanan, SNI 2332.3:2015 tentang Cara uji mikrobiologi
– Bagian 3 : Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) pada produk
perikanan, ISO 6579-1:2017 Microbiology of the food chain –
Horizontal Method of detection, enumeration and serotyping of
salmonella – Part 1 : Detection Salmonella spp.
18
4.3.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015
Mikroorganisme ditumbuhkan dengan metode agar tuang,
diinkubasikan dalam kondisi aerob atau anaerob pada suhu dan waktu
yang sesuai hingga tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk
koloni yang dapat dihitung (BSN, 2015).
4.3.1.1 Persiapan Pengujian

Sampel dengan berat lebih kecil atau sama dengan 1 kg atau 1L sampai
dengan 4,5 kg atau 4,5L di timbang sebanyak 25 gr atau 25 mL bila
dalam bentuk cair. Kemudian dimasukan ke dalam plastic atau wadah
steril dan ditambahkan 225 mL Buffered peptone water. Sampel di
homogenkan dengan menggunakan stomacher selama 2 menit,
homogenat ini merupakan larutan dengan pengenceran 10-1.
Homogenat pengenceran 10-1 diambil dengan menggunakan syringe
steril sebanyak 10 mL kemudian dimasukan ke dalam 90 mL aquadest
steril untuk mendapatkan pengenceran 10-2. Pengenceran selanjutnya
(10-3) disiapkan dengan mengambil 10 mL homogenat pengenceran 10-2
kemudian dimasukan ke dalam 90 mL aquadest steril. Pada setiap
pengenceran dilakukan pengocokan minimal sebanyak 25 kali. Lakukan
hal yang sama untuk pengenceran 10-4, 10-5 dan seterusnya sesuai
dengan kondisi contoh.
4.3.1.2 Tahap Pengujian ALT Aerob

Ambil sebanyak 1 mL dari setiap pengenceran dengan menggunakan
mikropipet dan dimasukan ke dalam cawan petri steril. Pada setiap
pengenceran dilakukan secara duplo. Kemudian tambahkan 12 mL – 15
mL PCA ke dalam masing-masing cawan petri yang sudah berisi
sampel. Lakukan pemutaran cawan petri ke depan-ke belakang, ke
kanan-ke kiri agar tercampur dengan sempurna. Cawan-cawan petri
kemudian di inkubasi dengan posisi terbalik di dalam inkubator dengan
suhu 35°C ± 1°C untuk bakteri mesofilik atau pada suhu 45°C ± 1°C
untuk bakteri termofilik selama 48 jam ± 2 jam.
19
4.3.1.3 Pembacaan dan Perhitungan Koloni Pada Cawan Petri
Perhitungan dilakukan apabila jumlah koloni pada cawan petri
sebanyak 25 koloni – 250 koloni. Apabila jumlah koloni pada cawan
petri lebih besar dari 250 koloni maka hasil dilaporkan sebagai terlalu
banyak untuk dihitung (TBUD).Apabila jumlah koloni pada cawan petri
kurang dari 25 koloni, catat koloni yang ada tetapi dinyatakan
perhitungan kurang dari 25 koloni dan dilakukan dengan 1/d, dimana d
adalah faktor pengenceran pertama yang digunakan dan dilaporkan
sebagai perkiraan ALT. berikut merupakan rumus perhitungan ALT :
Keterangan :
N : Jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per mLatau koloni per g
C : Jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung
n1 : Jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dihitung
n2 : Jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dihitung
d : Pengenceran pertama yang digunakan
Untuk menghasilkan pergitungan yang akurat dan teliti, maka

hasil di laporkan dengan dua angka (digit) pertama sebagai hasil
pembulatan. Bulatkan keatas dengan cara menaikkan angka kedua
menjadi angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 6, 7, 8 atau 9
dan gunakan angka 0 untuk masing-masing angka pada digit
berikutnya. Bulatkan ke bawah bila angka ketiga adalah 1, 2, 3 atau 4.
Bila angka ketiga 5, bulatkan keatas bila angka kedua ganjil dan
bulatkan kebawah bila angka kedua genap.
4.3.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk

Perikanan SNI 2332.1:2015
Sampel dengan berat lebih kecil atau sama dengan 1 kg atau 1L sampai
dengan 4,5 kg atau 4,5L di timbang sebanyak 25 gr atau 25 mL bila
dalam bentuk cair. Kemudian dimasukan ke dalam plastik atau wadah
steril dan ditambahkan 225 mL Buffered peptone water. Sampel di
homogenkan dengan menggunakan stomacher selama 2 menit,
homogenat ini merupakan larutan dengan pengenceran 10-1.
20
4.3.2.2 Tahapan Pengujian
4.3.2.2.1 Uji Pendugaan Koliform (Presumptive coliform)

-2 -
Siapkan pengenceran 10 dengan cara melarutkan 1 mL larutan 10
1
ke dalam 9 mL aquadest steril. Lakukan tahap yang sama pada
pengenceran selanjutnya sesuai dengan pendugaan kepadatan contoh.
Pada setiap pengenceran dilakukan pengocokan minimal 25 kali.
Pindahkan sebanyak 1 mL larutan dari setiap pengenceran ke dalam
3 atau 5 tabung lauryl tryptose broth (LTB) yang berisi tabung Durham
dengan menggunakan mikropipet dengan microtip steril. Media
lactosebroth juga dapat digunakan.
Tabung-tabung tersebut di inkubasi pada suhu 35 °C ± 0.5 °C.
setelah inkubasi 24 jam ± 2 jam di perhatikan gas yang terbentuk.
Tabung positif ditandai dengan kekeruhan dan gas dalam tabung
Durham. Tabung-tabung negatif di inkubasi kembali selama 24 jam dan
catat hasilnya pada 48 jam ± 3 jam. Kemudia dilakukan “uji penegasan
koliform” untuk tabung-tabung positif.
4.3.2.2.2 Uji Pendugaan E.coli (faecal coliform, presumptive E.coli)

Inokulasikan dari setiap tabung LTB yang positif ketabung-
tabung EC Broth yang berisi tabung Durham dengan menggunakan
jarum Ose. .Inkubasi EC Broth dalam waterbath sirkulasi selama 48 jam
± 2 jam pada suhu 45,5°C ± 0,2°C. Waterbath harus dalam keadaan
bersih, air di dalamnya harus lebih tinggi dari tinggi cairan yang ada
dalam tabung yang akan diinkubasi.
Periksa tabung-tabung EC Broth yang menghasilkan gas selama 24
jam ± 2 jam, apabila negatif inkubasi kembali dan periksa pada 48 jam
± 2 jam. Tabung positif ditandai dengan kekeruhan dan gas dalam
tabung Durham.
21
4.3.2.2.3 Uji penegasan E.Coli (Confirmed E.Coli)
Inokulasikan 1 Ose dari tabung-tabung EC broth yang positif
dengan menggunakan jarum Ose bulat ke L-EMB agar. Inkubasi selama
18 - 24 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C.Koloni E. coli terduga
memberikan ciri yang khas (typical) yaitu hitam pada bagian tengah,
datar dan dengan atau tanpa hijau metalik.
Ambil sampai dengan 5 koloni (typical) E. coli dari masing-masing
cawan L-EMB kemudian goreskan ke media TSA dengan
menggunakan jarum Ose. Inkubasi selama 18 jam - 24 jam pada suhu
35°C ± 0,5°C dan gunakan untuk pengujian selanjutnya.
4.3.2.3 Uji Biokimia
4.3.2.3.1 Produksi indol

Inokulasikan 1 Ose dari media TSA (Tryptic soy agar) ke dalam SIM (Sulfide
indol motility) dan inkubasi selama 24 jam ±2 jam pada suhu 35°C ±
0,5°C. Uji indol dilakukan dengan menambahkan 0,2 mL – 0,3 mL pereaksi
Kovacs. Apabila reaksi positif maka akan membentuk cincin merah pada
lapisan bagian atas media dan negative apabila terbentuk cincin warna
kuning.
4.3.2.3.2 Uji Methyl red
Inokulasikan 1 Ose dari media TSA (Tryptic soy agar) ke dalam MRVP Broth.
Inkubasi selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Tambahkan 5
tetes inikator methyl red pada setiap MRVP Broth. Reaksi positif apabila
terjadi perubahan warna merah dan negatif apabila terbentuk warna kuning.
4.3.2.3.3 Uji Voges Proskauer
Inokulasikan 1 Ose dari media TSA (Tryptic soy agar) ke dalam MRVP
Broth. Inkubasi selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. kemudian
ditambahkan 0,6 mL alpha naphtol dan 0,2 mL 40% KOH. Kocok dan
tambahkan sedikit kristal keratin untuk mempercepat reaksi. Kocok
Kembali dan diamkan selama 2 jam. Reaksi positif apabila terbentuk warna
merah muda eosin sampai merah delima (ruby).
22
4.3.2.3.4 Uji Sitrat
Goreskan 1 Ose dari media TSA (Tryptic soy agar) ke permukaan Simmon
Citrate agar. Kemudian inkubasi selama 96 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C.
Reaksi positif jika terjadi pertumbuhan dan perubahan warna pada media
menjadi biru. Reaksi negative apabila tidak ada pertumbuhan dan media
tetap berwarna hijau.
4.3.3 Pengujian Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017

Sampel dengan berat lebih kecil atau sama dengan 1 kg atau 1L
sampai dengan 4,5 kg atau 4,5L di timbang sebanyak 25 gr atau 25 mL
bila dalam bentuk cair. Kemudian dimasukan ke dalam plastic atau
wadah steril dan ditambahkan 225 mL Buffered peptone water. Sampel
di homogenkan dengan menggunakan stomacher selama 2 menit.
Kemudian homogenate di inkubasi selama 18 jam ± 2 jam pada suhu
antara 34 °C sampai dengan 38 °C.
4.3.3.2 Pengayaan Pada Media Selektif

Ambil sebanyak 0,1 mL sampel kemudian pindahkan ke dalam larutan
RVS (Rappaport-Vassiliadis Soya) 10 mL. Ambil sebanyak 1 mL
sampel kemudian pindahkan ke dalam larutan MKTTn (Muller-
Kauffmann Tetrathinate-Novobionic) Broth 10 mL. Inkubasi RVS yang
telah telah di inokulasi pada suhu 41,5 °C selama 24 jam ± 3 jam.
Inkubasi MKTTn (Muller-Kauffmann Tetrathinate-Novobionic) Broth
yang telah di inokulasi pada suhu 37 C selama 24 jam ± 3 jam.
4.3.3.3 Inokulasi Pada Media Padat Selektif

Inokulasikan 1 Ose kultur dari larutan RVS dan MKTTn (4.3.3.2) pada
media padat selektif XLD (Xylose Lysine Deoxycholate) agar. Inkubasi
pada suhu 37 °C selama 24 jam. Reaksi positif apabila tumbuh koloni
Salmonella spp. pada agar XLD dengan pusat hitam dan zona
kemerahan agak transparan. Inokulasikan 1 Ose kultur dari larutan RVS
dan MKTTn (4.3.3.2) pada media padat selektif Hektoen enteric (HE)
agar. Inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. Reaksi positif apabila
23
tumbuh koloni Salmonella spp. pada agar HE dengan warna koloni
hijau kebiruan.
4.3.3.4 Uji Biokimia
4.3.3.4.1 Uji TSI agar

Goreskan kemudian tusuk pantatnya 1 Ose kultur bakteri dari media
selektif XLD dan HE (4.3.3.3) ke agar miring TSIA. Kemudian inkubasi di
dalam incubator pada suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam.
● Bagian tegak (tusuk)
− Apabila terjadi fermentasi glukosa (glukosa positif) maka akan terjadi
perubahan warna media menajadi kuning.
− Apabila tidak terjadi fermentasi glukosa (glukosa negatif) maka akan
terjadi perubahan warna media menjadi merah atau tidak berubah warna
− Apabila terdapat pembentukan hydrogen sulfida (H2S), maka media
akan berwarna hitam
− Apabila terdapat pembentukan gas dari glukosa maka akan terdapat
gelembung atau retakan.
● Permukaan Miring (gores)
− Apabila berwarna kuning maka terjadi fermentasi laktosa atau sukrosa
(laktosa atau sukrosa positif)
− Apabila terjadi perubahan warna media menjadi merah atau tidak
berubah warna maka tidak terjadi fermentasi laktosa atau sukrosa
(laktosa atau sukrosa negatif)
Mayoritas ciri khas Salmonella spp. menunjukan daerah miring basa
(merah), dan bagian pantat berwarna kuning (asam) terdapat pembentukan gas
(gelembung), serta hampir 90% kausus terdapat pembentukan hydrogen sulfida
(H2S) (agar menghitam).
4.3.3.4.2 Uji Agar Urea

Goreskan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE (4.3.3.3)
ke agar miring urea. Inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam. Reaksi
24
positif ditandai dengan hidrolisis urea membebaskan ammonia. Reaksi ini
merubah warna fenol menjadi merah muda sampai merah mawar.
Ciri khas Salmonella spp. tidak menghidrolisis urea sehingga warna urea
agar akan tetap tidak berubah.
4.3.3.4.3 Uji LIA (Lysine iron agar)

Tusukan Ose ke bagian bawah kemudian goreskan. Bukan merupakan
biakan yang baru diambil melainkan menggunakan Ose yang telah di goreskan
pada media TSIA (4.3.3.4 (a) ). inkubasi di dalam inkubator pada suhu 37 °C
selama 24 jam ± 3 jam. Reaksi positif ditunjukkan dengan perubahan warna
media menjadi lebih ungu. Reaksi negatif ditunjukkan dengan perubahan
warna media menjadi kuning.
Mayoritas Salmonella spp. akan menunjukkan reaksi positif pada
pengujian LIA.
4.3.3.4.4 Deteksi β-galaktosidase

Inokulasikan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE
(4.3.3.3) ke dalam larutan NaCl kemudian tambahkan cakram ONPG. Inkubasi
pada suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam. Reaksi positif ditandai dengan media
menjadi keruh.
Pada umumnya Salmonella spp. akan menunjukkan hasil negatif.
4.3.3.4.5 Produksi Indol

Inokulasikan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE
(4.3.3.3) ke dalam media Sulfide indol motility (SIM). Inkubasi pada suhu 37
°C selama 24 jam ± 3 jam. Setelah inkubasi kemudian tambahkan 1 mL reagen
Kovacs. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya cincin merah pada lapisan
permukaan. Reaksi negatif ditandai dengan terbentuknya cincin kuning-coklat
pada permukaan.
Pada umumnya Salmonella spp. akan menunjukan reaksi negatif pada
indol.
25
26
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
5.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015

Pengujian yang dilakukan untuk menentukan nilai Angka Lempeng
Total (ALT) dilakukan di Laboratorium Mutu Balai Uji Standar
Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan Hasil Perikanan
(BUSKIPM). Pengujian dilakukan berdasarkan Standar Nasional
Indonesia (SNI) 2332.3:2015 menggunakan dua sampel produk ikan
yaitu ikan bandeng presto (Chanos chanos) dan ikan patin fillet
(Pangasius sp. ). Sampel ikan bandeng presto yang digunakan berasal
dari pasar tradisional yang diolah secara konvensional serta tidak
menggunakan pembungkus sedangkan fillet ikan patin merupakan
produk olahan pabrik dengan merek dagang “Frosh”.
Langkah awal yang dilakukan untuk melakukan pengujian Angka
Lempeng Total (ALT) adalah menyiapkan sampel. Sampel ditimbang
sebanyak 25 gr atau 25 mL apabila jumlah total sampel 1kg atau 1 L
sampai dengan 4,5 kg atau 4,5 L dalam bentuk cair. Kemudian sampel
ditambahkan dengan larutan Buffered peptone water (BPW) sebanyak
225 mL. Kemudian sampel dihomogenkan dengan menggunakan
stomacher selama 2 menit. Langkah selanjutnya dilakukan pengenceran
sampel sebanyak 5 kali hingga ke pengenceran 10-5 dengan
menggunakan Aquadest steril. Pengenceran dilakukan dengan cara
memindahkan 10 mL sampel dari pengenceran pertama 10-1 kemudian
di inokulasikan ke dalam 90 mL aquadest steril dengan menggunakan
Syringe steril ukuran 10 mL.
Penanaman sampel menggunakan media pertumbuhan PCA
(plate count agar). Media PCA merupakan media umum yang
digunakan untuk penumbuhan bakteri karena mengandung nutrisi yang
cukup untuk pertumbuhan mikroorganisme heterotrof. Selain itu, media
ini juga tidak mengandung agen inhibitor yang hanya membatasi
pertumbuhan mikrob tertentu saja, sehingga hampir semua mikrob
27
mesofil aerob dapat tumbuh pada media ini. Menurut Corry et al,
(2011) media PCA adalah media padat yang biasa digunakan untuk
teknik jumlah hitungan koloni lempeng atau colony forming unit (CFU)
dari inoculum standar mikroba. Perhitungan koloni dapat digunakan
untuk melihat rasio produktifitas yang mengkuantifikasi pertumbuhan
relatif dari mikroba pada media pengujian.
Dari masing-masing sampel pengujian dilakukan secara duplo
dengan tujuan untuk memberikan akurasi jumlah mikroba yang tumbuh
pada pengujian ALT dengan pengkodean a dan b. Perlakuan duplo
bertujuan untuk mengantisipasi kesalahan atau kegagalan sehingga
masih terdapat cadangan yang berisi inokulum sama dan untuk
membandingkan hasil kedua pengenceran yang sama jika memiliki
cemaran mikrob yang nilainya jauh berbeda maka kemungkinan
terdapat kesalahan atau kontaminasi pada saat penanaman (Indrasuari et
al., 2014).
Tabel 1. Hasil Pengujian ALT
Kode Pengenceran
10-2 10-3 10-4 10-5
Sa
a b a b a b a b
mp
el
Fillet TBUD TBUD TBUD TBUD 113 114 31 27

Pat
in
(FP
)
Bandeng TBUD TBUD TBUD TBUD 42 45 11 14
Pre
28
sto
(B
P)
Kontrol 25
Aq
uad
es
Kontrol 3
PC
A
Keterangan :
TBUD : Tidan Dapat Untuk Dihitung, >250 Koloni
Tabel 2. Nilai Pengujian ALT

Filet Patin Bandeng Presto
Nilai 1,3 x 10-6 CFU/g 4,4 x 10-5 CFU/g
Untuk mengidentifikasi kelayakan jumlah koloni yang tumbuh

pada media PCA, maka dibuat kontrol pengencer dan media PCA.
Berdasarkan data pada tabel 1. Terdapat kontaminan pada kontrol
pengencer dan juga media. Pada kontrol pengencer (aquadest steril)
terdapat 25 koloni bakteri dan pada kontrol media (PCA) terdapat 3
koloni bakteri. Pengujian kontrol dilakukan untuk mengetahui tingkat
sterilitas media dan pengencer serta keaseptisan selama pengujian. Uji
kontrol pengencer dilakukan untuk menjamin bahwa sampel tidak
terdapat kontaminan sedangkan uji kontrol media dilakukan untuk
memastikan bahwa bakteri yang tumbuh murni berasal dari sampel
(Indrasuari et al., 2014). Kontaminasi yang terjadi dapat di sebabkan
oleh banyak faktor seperti, sterilisasi media yang kurang sempurna,
pengerjaan dan lingkungan yang kurang steril, dan masuknya benda-
benda asing yang berukuran kecil ke dalam media (Agalloco and
Carleton, 2008 )
29
Sterilisasi alat dan bahan sangat diperlukan sebelum melakukan
pengujian mikrobiologi karena dapat mempengaruhi keakuratan hasil
pengujian. Sterilisasi merupakan upaya yang secara effektif dapat
membunuh atau menghilangkan mikroorganisme yang dapat berpindah
seperti bakteri, jamur, atau virus pada permukaan alat atau bahan.
Terdapat dua kelompok umum sterilisasi yaitu secara fisik dan kimia.
Sterilisasi yang lebih efektif digunakan adalah sterilisasi secara fisik
dengan menggunakan suhu yang tinggi (Rakhmatullah et al, 2007) .
A B
Gambar 4. Konrol pengencer (Aquadest) (A); Kontrol media (PCA) (B)
Berdasarkan tabel hasil perhitungan koloni yang tumbuh pada

media PCA, sampel Fillet patin (FP) dan Bandeng presto (BP) pada
pengenceran 10-2 dan 10-3 menunjukan hasil TBUD (tidak bisa untuk
dihitung). Dikatan TBUD jika koloni yang tumbuh pada media PCA
>250. Nilai perhitungan angka lempeng total (ALT) pada fillet ikan
patin (Pangasius sp.) (FP) menunjukkan nilai 1,3 x 10-6 CFu/g.
sedangkan nilai pada sampel ikan bandeng presto yaitu 4,4 x 10 -5 CFu/g.
Dari kedua sampel tersebut bakteri pada sampel fillet ikan patin
melebihi batas maksimum angka lempeng total yang telah ditetapkan
oleh Badan Standar Nasional Indonesia (BSNI). Berdasarkan hasil data
tersebut dapat dikatakan bahwa fillet ikan patin kurang layak untuk
dikonsumsi. Menurut BSNI jenis ikan, filet ikan dan hasil perikanan
termasuk moluska dan echinodermata jumlah Total Plate Count
5
mikroba atau Angka Lempeng Total jumlah maksimalnya ialah 5 x 10
30
CFu/mL (SNI, 2015). Tingginya nilai ALT pada fillet ikan patin dapat
disebabkan oleh kurangnya sanitasi higienis pengolahan produk yaitu
pengolahan, pengemasan atau penyimpanan produk.
5.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada

Produk Perikanan SNI 2332.1:2015
5.2.1 Persiapan Pengujian

Persiapan sampel untuk pengujian penentuan bakteri
Escherechia coli pada produk olahan ikan dilakukan dengan mencacah
sampel menjadi bagian-bagian kecil kemudian sampel ditimbang
sebanyak 25 gr atau 25 mL apabila sampel memiliki berat 1 kg atau 1L
sampai 4,5 kg atau 4,5 L. Sampel ditimbang dengan menggunakan
plastik steril dengan tujuan menghindari terjadinya kontaminasi dengan
bakteri yang bukan berasal dari sampel. Kemudian sampel ditambahkan
dengan larutan Buffered peptone water sebanyak 225 mL atau dengan
perbandingan 9 : 1. Buffered peptone water merupakan larutan
pengencer yang digunakan untuk mengencerkan media. Pengenceran
adalah melarutkan atau melepaskan mikroorganisme dari substratnya ke
dalam air sehingga lebih mudah di dalam penanganannya. Pengenceran
biasanya dilakukan dengan perbandingan 1:10, 1:100, 1:1000, dan
seterusnya. Tujuan dilakukan pengenceran adalah untuk memperkecil
atau mengurangi kepadatan bakteri yang ditanam sehingga akan
mempermudah dalam pengamatan perhitungan jumlah mikroorganisme.
Sampel kemudian di homogenkan dengan menggunakan Stomacher
selama 2 menit untuk mendapatkan pengenceran 10-1. Proses
homogenisasi sampel dilakukan dengan tujuan untuk memperoleh
sampel dengan distribusi mikroba yang merata sehingga sampel dapat
dengan mudah untuk diamati. Selain itu homogenisasi sampel juga
berfungsi untuk membebaskan sel-sel bakteri yang masih terlindungi
oleh partikel dari sampel yang akan diperiksa serta mengaktifkan
Kembali sel-sel bakteri yang pertumbuhannya terganggu karena kondisi
yang kurang sesuai dalam sampel (Radji, 2011).
31
Sampel yang digunakan untuk pengujian adalah ikan bandeng
presto yang berasal dari pasar tradisional dan fillet ikan patin dengan
merek dagang “Frosh”. Pada pengujian ini terdapat 4 sampel dengan 2
sampel non spek (BPNS dan FPNS) dan 2 sampel spek bakteri E-coli
(BPS dan FPS) yaitu sampel yang di tambahkan biakan murni bakteri
Escherechia coli. Maksud dari penambahan sampel dengan spek biakan
murni bakteri Escherechia coli adalah untuk memperlihatkan secara
jelas reaksi positif pengujian penentuan koliform dan Escherechia coli.
Penambahan biakan murni bakteri dilakukan pada sampel yang telah
dilakukan pengenceran 10-1 atau yang telah di tambahkan dengan
larutan Buffered peptone water (BPW). Peambahan dilakukan dengan
mengambil sebanyak 1 mL biakan bakteri murni Escherechia coli
kemudian di inokulasikan ke dalam sampel pengenceran 10 -1. Inkubasi
selama 24 jam dengan suhu 35 °C ± 0.5 °C
5.2.2 Pendugaan Koliform

Pengujian pendugaan koliform dilakukan dengan melakukan
pengenceran sampel (persiapan pengujian) terlebih dahulu.
Pengenceran dilakukan dengan melarutkan 1 mL sampel 10-1 ke dalam
9 mL aquadest steril untuk mendapatkan pengenceran 10-2. Hal yang
sama dilakukan hingga mendapatkan pengenceran 10-5. Pada setiap
pengenceran dilakukan pengocokan minimal 25 kali agar larutan
homogen.
Pengenceran sampel yang telah diperoleh kemudian
dipindahkan masing-masing 1 mL ke dalam 3 atau 5 tabung yang berisi
lauryl tryptose broth (LTB) dan tabung Durham dengan menggunakan
mikropipet dengan microtip steril. Kemudian tabung-tabung tersebut di
inkubasi pada suhu 35 °C ± 0.5 °C. Setelah inkubasi 24 jam ± 2 jam,
tabung-tabung di periksa dan di perhatikan ada atau tidaknya gas yang
terbentuk. Apabila belum terbentuk gas maka inkubasi Kembali selama
24 jam ± 2 jam dengan suhu 35 °C ± 0.5 °C. Menurut Nollet (2007),
pengujian koliform menggunakan media LTB atau Lauryl Tryptose
32
Broth dengan tabung Durham. Reaksi positif diketahui dengan
terjadinya fermentasi dan terbentuknya gas di dalam tabung Durham.
Serial dilusi sampel diinokulasikan ke dalam media LTB kemudian
diinkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam kemudian diinkubasi
kembali selama 24 jam apabila tidak terjadi pertumbuhan pada 24 jam
pertama. Bakteri koliform yang terdapat dalam sampel akan
memproduksi gas atau asam hasil fermentasi laktosa. Sampel Uji dapat
dinyatakan positif apabila pada tabung durham terbentuk gas hasil
hidrolisis laktosa oleh enzim bakteri dari kelompok koliform. Laktosa
pada senyawa sulfat digunakan oleh bakteri sebagai sumber karbon
untuk melakukan fermentasi. Fosfat dan nutrisi yang tinggi dalam
media ini akan mempercepat pertumbuhan bakteri E.coli dan
meningkatkan pembentukan gas (Bridson 2006).
a b
c
Gambar 5. hasil positif pada media LTB (a), hasil negatif pada media
LTB (b)
5.2.3 Uji Pendugaan E.coli

Hasil positif pengujian pendugaan koliform dilanjutkan ke
pengujian pendugaan E.coli dengan menggunakan media EC broth.
Pengujian pendugaan dilakukan dengan menginokulasikan hasil positif
dari media LTB ke tabung-tabung yang berisi media EC broth dan
tabung Durham dengan jarum Ose bulat. Kemudian di inkubasi di
dalam waterbath sirkulasi selama 48 jam ± 2 jam pada suhu 45,5°C ±
0,2°C. Setelah inkubasi 24 jam ± 2 jam, tabung-tabung di periksa dan di
perhatikan ada atau tidaknya gas yang terbentuk. Apabila belum
33
terbentuk gas maka inkubasi Kembali selama 24 jam ± 2 jam dengan
suhu 45,5°C ± 0,2°C. EC broth berfungsi untuk diferensiasi fekal
koliform dan uji konfirmasi untuk E.coli dari makanan dan sampel
lingkungan. Bila media berubah dari kuning jernih menjadi kuning
keruh dan terdapat gas di dalam tabung durham menunjukkan hasil
positif terhadap bakteri koliform terutama E.coli (Lal & Cheepthman
2007).
a b
c
Gambar 6. hasil positif media EC broth (a), hasil negatif media EC

broth (b). tanda panah menunjukan adanya udara dalam tabung
Durham.
5.2.4 Uji Penegasan E.coli

Pengujian penegasan E.coli dilakukan apabila hasil pengujian
pendugaan E.coli menunjukan hasil positif. Pengujian dilakukan dengan
menginokulasikan 1 Ose dari tabung-tabung EC broth positif ke media
L-EMB agar. Inokulasi dilakukan dengan membagi agar menjadi 4
bagian kemudian di streak zig-zag. Pembagian media menjadi 4 bagian
guna menghemat dalam penggunaan media agar. Kemudian media
diinkubasi selama 18 - 24 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Koloni
terduga E.coli akan memberikan ciri yang khas yaitu koloni berwarna
hijau metalik dengan bitnik warna hitam pada bagian tengah . Media
Eosin Methylene Blue (EMB) agar adalah media selektif diferensial
yang digunakan untuk isolasi dan pertumbuhan bakteri enterik serta
mikroorganisme koliform. Media EMBA mengandung pewarna eosin
34
dan metilen biru sehingga bakteri gram negatif akan tumbuh dengan
baik dan menghambat pertumbuhan bakteri gram positif. Eosin dan
metilen biru berfungsi untuk membedakan antara bakteri fermentasi
laktosa dengan bakteri nonfermentasi laktosa. Perubahan warna media
menjadi hijau metalik merupakan reaksi positif pada meda EMBA yang
disebabkan peningkatan keasaman agar dan fermentasi. E.coli yang
tumbuh akan memberikan warna yang khas kemilau hijau metalik
(KKP, 2018).
Gambar 7. Koloni diduga positif E.coli berwarna hijau metalik dan koloni
negatif E.coli tidak berwarna hijau metalik
Hasil positif pada media EMBA kemudian diinokulasikan ke media

TSA (Tryptone soya agar). Fungsi pemindahan ini adalah untuk
menghilangkan pewarna dari media EMBA sehingga tidak
mempengaruhi hasil pada tahapan pengujian selanjutnya. Media TSA
merupakan media umum untuk pertumbuhan bakteri. Kandungan dalam
media TSA adalah agar,
tryptone, soytone
dan sodium chloride
(Dwinanti, 2014).
35
Gambar 8. Pertumbuhan bakteri pada media TSA
5.2.5 Uji Biokimia
Pengujian biokimia dilakukan untuk mengetahui sifat-sifat fisiologis
koloni bakteri hasil isolasi. Uji biokimia bakteri berkaitan dengan
proses metabolisme sel bakteri. Untuk mengidentifikasi bakteri, tidak
dapat dilakukan dengan mengetahui sifat morfologinya saja melainkan
juga mengetahui sifat fisiologisnya karena apabila identifikasi hanya
dari sifat morfologinya saja akan sulit untuk menentukan spesies bakteri
karna akan tampak sama (Handayani, Ekowati, & Pakpahan, 2013) .
Pengujian biokimia untuk E.coli berdasarkan SNI terdiri atas 4
pengujian yaitu :
5.2.5.1 Produksi Indol

Pengujian produksi indol dilakukan dengan cara menginokulasikan 1
Ose dari media TSA ke media SIM (Sulfide indol motility). Kemudian
media diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Setelah 24
jam kemudian media ditambahkan dengan pereaksi Kovacks sebanyak
0,2 – 0,3 mL. pengujian produksi indol berfungsi untuk mengetahui
apakah bakteri memiliki enzim triptophanase yang dapat mengoksidasi
asam amino triptophan dan membentuk indol. Adanya indol dapat
diketahui dengan penambahan reagen Ehrlich/Kovac’s yang berisi
paradimetil amino bensaldehid. Hasil negatif (-) ditandai dengan tidak
adanya bentukan berwarna merah seperti lapisan cincin di permukaan
biakan. Apabila positif (+) ditandai dengan adanya bentukan berwarna
merah seperti lapisan cincin di permukaan biakan bakteri, dapat
36
diartikan bahwa sumber karbon berasal dari triptophan yang
membentuk indol (Lumantouw, Rondonuwu, & Singkoh, 2013).
a b
c
Gambar 9. Hasil negatif pengujian indol (a), hasil positif pengujian indol (b)
5.2.5.2 Uji Methyl Red (MR)

Pengujian methyl red dilakukan dengan menginokulasikan 1 Ose dari
media TSA ke media MRVP. Kemudian diinkubasi selama 48 jam ± 2
jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Langkah selanjutnya ditambahkan
dengan indikator methyl red sebanyak 5 tetes. Reaksi positif
ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna merah pada media
sedangkan reaksi negatif tidak terjadi perubahan warna atau warna
media tetap kuning. Menurut Rahayu & Gumilar (2017), Uji MR
berfungsi untuk mengatahui ada atau tidaknya fermentasi asam
campuran (metilen glikon) pada koloni bakteri. Hasil uji MR dapat
diketahui positif (+) apabila setelah penambahan indicator methyl red,
media mengalami perubahan warna menjadi merah, hal ini dapat
diartikan bahwa asam campuran (metilen glikon) dihasilkan oleh bakteri
melalui proses fermentasi glukosa pada media methyl red. Hasil negatif
(-) ditandai dengan tidak adanya perubahan warna pada media menjadi
merah setelah ditambahkan dengan indikator methyl red.
a b37
c c
Gambar 10. Hasil negatif pengujian methyl red (a), hasil positif pengujian methyl
red (b)
5.2.5.3 Uji Voges-Prokauer (VP)

Pengujian Voges-prokeuer (VP) dilakukan dengan menginokulasikan 1
Ose dari media TSA ke media MRVP. Kemudian diinkubasi selama 48
jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Langkah Selanjutnya
ditambahkan dengan reagen Alpha-napthol sebanyak 0,6 mL dan KOH
40 % sebanyak 0,2 mL. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya
warna merah muda eosin sampai merah delima (Ruby). Uji VP
berfungsi untuk mengetahui hasil fermentasi glukosa membentuk
(asetoin) asetil metil karbinol. Hasil uji VP dapat diketahui negatif (-)
apabila setelah media kemudian ditambahkan reagen Alpha-napthol dan
KOH 40 % tidak mengalami perubahan warna menjadi merah. Apabila
positif (+) ditandai dengan perubahan warna media menjadi merah
setelah ditambahkan reagen Alpha-napthol dan KOH, hal ini dapat
diartikan bahwa hasil fermentasi glukosa dapat membentuk (asetoin)
asetil metil karbinol (Antriana, 2014).
a b
c
Gambar 11. Hasil negatif pengujian voges-prokauer (a), hasil positif

pengujian
voges-prokauer (b)
38
5.2.5.4 Uji Sitrat
Pengujian sitrat dilakukan dengan menginokulasikan 1 Ose dari media
TSA ke media Simonn citrate agar. Kemudian diinkubasi selama 48
jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Reaksi positif jika terjadi
pertumbuhan dan perubahan warna pada media menjadi biru. Reaksi
negative apabila tidak ada pertumbuhan dan media tetap berwarna
hijau. Menurut Ummamie et al (2017), Uji sitrat berfungsi untuk
mengetahui sumber karbon bakteri menggunakan sitrat atau tidak. Hasil
uji sitrat dapat diketahui positif (+) ditandai dengan perubahan warna
media bakteri dari hijau menjadi biru, hal ini dapat diartikan bahwa
salah satu sumber karbon bakteri menggunakan sitrat. Hasil negatif (-)
ditandai dengan media bakteri tidak mengalami perubahan warna yaitu
tetap berwarna hijau.
a b
c
Gambarv12. Hasil negatif pengujian sitrat (a), hasil positif pengujian sitrat (b)
39
IMViC IMViC IMViC MPN
Kode MPN E
s Pengen faec .
a ce LTB EC LEMB al c
a b c colif o
m ra
p n orm l
el i
a b c a b c a b c I MR VP C I MR VP C I MR VP C
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
10-1
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
FPS 10-2
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
10-3
+ + + - - - - - -
10-1
- - + - - - - - -
FPNS 10-2
- - - - - - - - -
10-3
+ + + + + + - - - + + + + + + + + + + +
10-1
+ + + + + + + + - + + - - + + - - + + + +
BPS 10-2
+ + + - + + + + + + + - - + + - - + + - -
10-3
+ + + - - - - - -
10-1
- + - - - - - - -
BPNS 10-2
- + - - - - - - -
10-3
Tabel 3. Hasil Pengujian Escherichia coli
40
Tabel 4. Interpretasi Hasil
Kriteria Biotipe 1 B-iotipe 2
Gas pada tabung + +
LTB
Indol + -
Methyl Red (MR) + +
Voges Proskauer - -
(VP)
Sitrat - +
Uji Morfologi Gram negatif, Gram negatif,
bentuk batang bentuk batang
pendek tidak pendek tidak
berspora. berspora.
Bakteri Eschericia merupakan bakteri yang dapat hidup pada

usus hewan mamalia termasuk manusia. Bakteri Eschericia juga banyak
mengkontaminasi ikan-ikan segar dan sangat membahayakan jika
dikonsumsi oleh konsumen (Laluraa et al., 2014). Pengujian penentuan
koliform dan Escherechia coli berdasarkan acuan SNI 2332.1: 2015
menggunakan 4 sampel yaitu 2 sampel yang di spec dengan biakan
murni E.coli (BPS dan FPS) dan dua sampel tidak (BPNS dan FPNS).
Pada pengujian menggunakan media LTB terdapat 4 sampel positf pada
sampel FPNS yaitu pada pengenceran 10-1 a, 10-1b, 10-1c, dan 10-2c.
Pada sampel BPNS terdapat 5 sampel positif yaitu pada pengenceran
10-1a,10-1b, 10-1c, 10-2b, dan 10-3c. Sedangkan pada sampel FPS dan
BPS hasil positif di seluruh media LTB. Hal tersebut dapat terjadi
karena sampel tersebut telah di spec atau ditambahkan dengan biakan
murni Escherechia coli.
Pengujian pendugaan E.coli dengan menggunakan media EC
broth menunjukkan hasil negatif pada semua sampel BPNS dan FPNS.
Pada sampel FPS menunjukkan hasil positif dan pada sampel BPS
menujukan hasil positif kecuali pada sampel 10-3a yang menunjukan
hasil negatif. Berdasarkan data tersebut dapat dikatakan bahwa kedua
41
sampel yaitu ikan bandeng presto dan fillet ikan patin negatif koliform
dan E.coli.
Pengujian Pendugaan E.coli dengan menggunakan media
selektif L-EMB agar dilakukan pada hasil positif pengujian penegasan
E.coli. Jadi pengujian hanya dilakukan pada sampel FPS dan BPS.
Berdasarkan hasil pengujian dengan media selektif L-EMB agar
terdapat 4 sampel yang menunjukan hasil negatif yaitu pada sampel
BPS 10-1a, 10-1b, 10-1c, dan 10-2c. Hasil negatif menunjukan kolonitidak
berwarna berwarna hijau metalik. Hal tersebut mungkin dapat
disebabkan karena pengerjaan yang kurang aseptis dan menyebabkan
kontaminasi pada sampel.
Hasil positif pada media L-EMB agar kemudian dilanjutkan ke
pengujian biokimia untuk mengetahui bakteri dengan tepat berdasarkan
sifat fisiologisnya. Uji biokimia dilakukan dengan 4 pengujian atau
yang biasa disebut dengan IMViC yaitu pengujian produksi indol,
methyl red, voges-proskauer, dan sitrat. Pengujian biokimia tidak
dilakukan pada semua sampel melainkan hanya pada sampel FPS 10-1b,
10-2b, dan 10-3b serta sampel BPS 10-1a, 10-2a, 10-3a, 10-1b, 10-2b, 10-3b.
Berdasarkan hasil data yang diperoleh, sampel FPS menunjukan hasil
yang sesuai dengan interpretasi hasil sesuai dengan ketentuan SNI
2332.1: 2015 yaitu merupakan bakteri E.coli biotipe 1 dengan
membentuk pola seperti pada tabel 4.
42
Gambar 13. Hasil pengujian biokimia Escherechia coli
5.3 Pengujian Salmonella spp. ISO 6579-1:2017
5.3.1 Pengayaan Pada Media Selektif

Pengujian pengayaan pada media selektif dilakukan dengan
menginokulasikan 0,1 mL sampel ke dalam 10 mL larutan RVS
(Rappaport-Vassiliadis Soya). Langkah selanjutnya inkubasi pada suhu
41,5 °C selama 24 jam ± 3 jam. Media RVS merupakan media
pengayaan selektif untuk mengisolasi Salmonella spp. yang berasal dari
sampel atau lingkungan. Media ini merupakan media cair selektif
modifikasi dari media Rappaport vassiliadis (RV) enrichment broth
yang ditambahkan dengan kalium di-poyasium sebagai penyangga
medium sehingga pH dapat di pertahankan selama penyimpanan media.
Dalam media ini, magnesium klorida dan natrium klorida berfungsi
mempertahankan tekanan osmotik. Soya peptone memberikan nutrisi
bagi pertumbuhan Salmonella
Tahap selanjutnya inokulasi sebanyak 1 mL sampel kemudian
pindahkan ke dalam larutan MKTTn (Muller-Kauffmann Tetrathinate-
Novobionic) Broth 10 mL. Langkah selanjutnya Inkubasi MKTTn
(Muller-Kauffmann Tetrathinate-Novobionic) Broth yang telah di
inokulasi pada suhu 37 C selama 24 jam ± 3 jam. Media MKTTn
merupakan media yang digunakan untuk uji pengayaan terhadap uji
Salmonella. Media ini mengandung bahan selektif yang dapat
memungkinkan proliferasi Salmonella serta menghambat pertumbuhan
organisme non-Salmonella.
43
Gambar 14 Pengujian media RVS (a), pengujian MKTTn (b)
5.3.2 Inokulasi Pada Media Selektif

Pengujian media selektif untuk mendeteksi Salmonella
dilakukan dengan mengInokulasikan 1 Ose kultur dari larutan RVS dan
MKTTn (4.3.3.2) pada media padat selektif XLD (Xylose Lysine
Deoxycholate) agar dan media padat selektif Hektoen enteric (HE).
Kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. Reaksi positif
media XLD ditandai dengan tumbuh koloni Salmonella spp. pada agar
XLD dengan pusat hitam dan zona kemerahan agak transparan.
Sedangkan reaksi positif pada media HE adalah tumbuh koloni
Salmonella spp dengan warna koloni hijau kebiruan.
Media selektif XLD akan menunjukan perubahan warna secara
visual yang mudah dilihat yaitu terjadi warna bening transparan (tidak
berwarna) menjadi warna merah muda (fuschia) pada waktu 24-72 jam.
Formulasi ini dapat membedakan bakteri Gram negatif melalui
perbedaan warna yang dihasilkan. Perubahan warna yang terjadi
disebabkan oleh penurunan pH media karena fermentasi glukosa oleh
Salmonella spp. menjadi asam organik menjadi asam laktat, asetat dan
format sehingga pH media menjadi sekitar 4. Media XLD memiliki
kandungan sodium deoxycholate sehingga dapat menghambat
pertumbuhan bakteri Gram positif (Warsiki, 2012). Menurut Samiea et
44
al., (2019), bakteri Salmonella sp. dapat mengfermentasi xylose,
mendekarboksilasi lysin dan memproduksi hidrogen sulfida dari
natrium tiosulfat. Hasil fermentasi tersebut dapat merubah pH media
XLD menjadi basa sehingga dapat merubah warna media menjadi
merah jambu (pink) dan koloni berwarna hitam dihasilkan dari hidrogen
sulfida (Samiea et al., 2019)
Media HE merupakan media selektif diferensial yang terdiri dari
bile salt agar dan berfungsi untuk menghambat pertumbuhan bakteri
gram positif, sehingga diharapkan hanya Salmonella spp. yang tumbuh
pada media ini. Media ini juga dapat membedakan bakteri Salmonella
spp dengan bakteri lainnya. Salmonella spp tidak dapat memfermentasi
laktosa sehingga asam yang dihasilkan sedikit. Hal ini yang
menyebabkan Salmonella spp berwarna hijau kebiruan karena asam
yang dihasilkan bereaksi dengan indikator yang ada pada media yaitu
fuksin asam dan bromtimol blue (Sativa, 2010).
a b
c
v
c d
Gambar 15. Hasil negatif pada media XLD (a), hasil positif pada media XLD (b),
hasil negatif pada media HE (c), hasil positif pada media HE (d).
5.3.3 Pengujian biokimia
45
5.3.3.1 Uji TSIA
Pengujian biokimia pada media agar miring TSIA dilakukan
dengan menggoreskan kemudian tusuk pantatnya dengan 1 Ose kultur
bakteri dari media selektif XLD dan HE ke agar miring TSIA.
Kemudian diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 37 °C selama 24
jam ± 3 jam. Pada media TSIA, hasil positif ditandai dengan warna
kuning pada media agar tegak dan warna merah pada media agar miring
dengan atau tanpa H2S. Warna merah disebabkan oleh bakteri
Salmonella sp. tidak dapat memfermentasi laktosa dan sukrosa,
sedangkan warna kuning pada media tegak disebabkan oleh reaksi
bakteri Salmonella sp. yang dapat mengfermentasi glukosa untuk
pertumbuhannya Pembentukan H2S yaitu penghitaman media
disebabkan oleh fermentasi H2 dan CO2 (Anjung, 2016).
a b
Gambar 16. Hasil negatif media TSIA (K/A) (a), hasil positif media TSIA (A/A)
(b)
5.3.3.2 Uji Urea

Pengujian biokimia pada media agar miring urea yaitu dengan
menggoreskan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE ke
agar miring urea. Kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam
46
± 3 jam. Reaksi positif ditandai dengan hidrolisis urea membebaskan
ammonia. Reaksi ini merubah warna fenol menjadi merah muda sampai
merah mawar. Menurut Mirmomeni (2009), pengujian biokimia urea
pada salmonella spp. menunjukkan hasil negatif yaitu tidak terjadi
perubahan warna pada media. Hal tersebut disebabkan oleh ciri khas
bakteri Salmonella spp. yang tidak menggunakan urea sebagai sumber
karbon sehingga tidak terjadinya perubahan warna pada media sitrat
karena tidak terjadi fermentasi pada media surea.
a b
Gambar 17. Hasil negatif media urea (a), hasil positif media urea (b)
5.3.3.3 Uji LIA

Pengujian biokimia pada media agar miring LIA (Lysine iron agar)
yaitu dengan menusukan Ose ke bagian bawah kemudian mengoreskan
pada bagian permukaan. Bukan merupakan biakan yang baru diambil
melainkan menggunakan Ose yang telah di goreskan pada media TSIA.
Kemudian diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 37 °C selama 24
jam ± 3 jam. Reaksi positif ditunjukkan dengan perubahan warna media
menjadi lebih ungu. Reaksi negatif ditunjukkan dengan perubahan
warna media menjadi kuning. Warna ungu pada media LIA disebabkan
oleh bakteri Salmonella sp. yang dapat mendekarboksilasi lysin dan
menghasilkan amin kadaverin sehingga dapat merubah indikator pH
bromcresol purple menjadi warna ungu (Haryani dkk., 2012).
47
a b
Gambar 18. Hasil negatif media LIA (a), hasil positif media LIA
5.3.3.4 Deteksi β-galaktosidase

Pengujian biokimia dilakukan dengan menginokulasikan 1
Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE ke dalam larutan
NaCl yang ditambahkan dengan cakram ONPG. Langkah selanjutnya
dilakukan inkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam. Reaksi
positif ditandai dengan media menjadi keruh. Menurut Uji beta
-galaktosidase digunakan utuk identifikasi beberapa jenis bakteri seperti
Salmonella sp. Enzim beta-galaktosidase merupakan enzim yang dapat
mengubah laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Hasil positif
ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna larutan menjadi
kuning, sedangkan hasil negatif tidak menunjukkan perubahan warna.
a b
v
Gambar 19. Hasil negatif ONPG (a), hasil positif ONPG (b)
5.3.3.5 Uji Indol
Pengujian biokimia pada media indol dilakukan dengan
menginokulasikan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE
48
ke dalam media Sulfide indol motility (SIM). Kemudian diinkubasi pada
suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam. Setelah inkubasi kemudian
ditambahkan 1 mL reagen Kovacs. Reaksi positif ditandai dengan
terbentuknya cincin merah pada lapisan permukaan. Reaksi negatif
ditandai dengan terbentuknya cincin kuning-coklat pada permukaan
atas. Uji indol dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui kemampuan
bakteri dalam memecah asam amino triptofan. Asam amino triptofan
merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein,
sehingga asam amino ini dengan mudah digunakan oleh
mikroorganisme akibat penguraian protein (Rondonuwu, & Singkoh,
2013).
a b
c
Gambar 20. Hasil negatif pengujian indol (a), hasil positif pengujian indol
(b)
49
Tabel 5. Hasil Pengujian Biokimia
β-
galac
tosid KESIMPU
TSI LIA Urease Indol Serologi
ase LAN
Kode
(onpg
sam Media HE XLD
)
pel
Gas
glu
Glucose Lactose Sucrose H2S O H
co
se
RVS
FPS Positif
MKTTn + + + - - - + + - - -
RVS - - + - + + + - + - +
FPNS
MKTTn - - + - + + + - + - +
RVS
BPS Positif
MKTTn + + + - - - + + - - -
BPNS RVS - - + + + + - + + - -
50
MKTTn - - + + + + - + + - -
Salmonella strain
Test S.Typhi S.Paratyp S. S. Paratyphi S. S. Other
hi A Parat C Gilli Gilli strai
yphi naru naru ns
B m m
biov biov
ar ar
galli pullo
naru rumb
b
m
Reaction %+c Reaction %+c Reaction %+d Reaction %+d Reaction %+c Reaction %+c Reaction %+c
TSI acid + 100 + 100 + 100 + 100 + 100 + 100 + 100
from
gluco
se
TSI gas -e 0 + 96,1 + 96,1 + 96,1 - 0 + 95,1 + 92
from
gluco
se
TSI acid - 2 - 0 - 0 - 00 - 0 - 0 - 1h
from
lacto
se
51
TSI acid - 0 - 0,6 - 0,6 - 0,0,66 - 0,6 - 0,6 - 1
from
sucro
se
+
TSI + 97 - 10 + 10 100 Vf Vf + 92
hydr
ogen
sulfid
e
prod
uced
Lysine - 0 - 0 - 0 - 0 - 0 - 0 - 1
decar
boxyl
ation
Urea + 98 - 0 + 95 + 100 + 95 + 95 + 95
hydr
olysi
s
β- - 0 - 0 - - - <10 - <10 - 2h
Gala
ctosi
dase
Production - 0 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1
of
indol
e
52
Tabel 6. Interpretasi Hasil
53
Salmonella spp. adalah bakteri gram negatif berbentuk batang
bukan pembentuk spora yang terdiri dari sekitar 2500 serotipe yang
kesemuanya diketahui bersifat patogen baik pada manusia atau hewan.
Salmonella sp bersifat aerob atau fakultatif anaerob. Dapat
memfermentasi glukosa dengan membentuk asam atau gas dan dapat
mereduksi nitrat menjadi nitrit. Mempunyai sifat katalase positif dan
oksidase negatif serta mudah tumbuh pada kebanyakan media. Bakteri
ini bukan indikator sanitasi, melainkan bakteri indikator keamanan
pangan. Artinya, karena semua serotipe Salmonella sp. yang diketahui
di dunia ini bersifat patogen maka dianggap membahayakan kesehatan.
Oleh karena itu berbagai standar air minum maupun makanan siap
santap mensyaratkan tidak ada Salmonella spp. dalam 100 ml air
minum atau 25 gram sampel makanan ( Dewanti dan Hariyadi, 2005).
Menurut Adam and Moss., (2000) untuk mengetahui isolat
dugaan Salmonella sp maka perlu dilakukan isolasi dan karakterisasi.
Hal tersebut harus di konfirmasi dengan melakukan uji biokimia dan
juga serologi. Uji biokimia ini yang meliputi uji katalase, uji oksidase,
uji TSIA, uji urease, uji Methyl Red, uji citrate, uji sukrosa, laktosa,
maltosa, dan manitol serta uji serologis polyvalent O.
Berdasarkan tabel uji biokimia dapat diketahui bahwa sampel
FPS dan BPS menunjukan hasil positif Salmonella spp. yaitu
menunjukan hasil positif pada media TSIA, terdapat pembentukan H2S,
dan positif pada media LIA. Hal tersebut terkonfirmasi sesuai dengan
tabel interpretasi hasil (tabel 6.) yaitu merupakan Salmonella typhi.
Menurut Mirmonemi, (2009) pengujian biokimia Salmonella spp. pada
media citrate, TSIA dan MR akan menunjukkan reaksi positif. Pada uji
urease dan uji oksidase, Salmonella spp. Akan menunjukkan reaksi
negatif dengan tidak ada perubahan warna media.
Kandungan bakteri Salmonella spp. pada produk makanan yang
dikonsumsi oleh manusia dapat menyebabkan penyakit salmonelosis
yang ditunjukkan dengan adanya gejala gastroenteritis, demam
enteritika, focal infection, dan sequelae (Jay, 2005). Kontaminasi pada
54
produk perikanan diakibatkan adanya kontaminasi silang akibat dari
keadaan yang buruk selama proses pengolahan. Faktor prningkatan
kontaminasi bakteri Salmonella spp. dapat disebabkan oleh keberadaan
nutrisi dan kondisi lingkungan yang mendukung pertumbuhan bakteri
tersebut (Nugraha dkk., 2012).
BAB VI
PENUTUP
6.1 Kesimpulan
Berdasarkan tiga pengujian yang telah dilakukan berdasarkan
SNI 2332.1:2015 tentang Cara uji mikrobiologi – Bagian 1 : Penentuan
Koliform dan Escherecia coli Pada Produk Perikanan, SNI 2332.3:2015
tentang Cara uji mikrobiologi – Bagian 3 : Penentuan Angka Lempeng
Total (ALT) pada produk perikanan, ISO 6579-1:2017 Microbiology of
the food chain – Horizontal Method of detection, enumeration and
serotyping of salmonella – Part 1 : Detection Salmonella spp. maka
dapatmdisimpulkan sebagai berikut : -Angka Lempeng Total (ALT)
Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) adalah pengujian yang
dilakukan untuk yang dilakukan unruk menentukan jumlah bakteri
dalam suatu sampel. Dalam test tersebut diketehui perkembangan
banyaknya bakteri dengan mengatur sampel, di mana total bakteri
tergantung atas formasi bakteri di dalam media tempat tumbuhnya dan
masing-masing bakteri yang dihasilkan akan membentuk koloni yang
tunggal. Pengujian dilakukan berdasarkan SNI 2332.3:2015,
menunjukkan nilai ALT pada fillet ikan patin melebihi batas SNI yaitu
> 5 x 105 CFU/gr. Hal tersebut dapat dikatakan bahwa fillet ikan patin
tidak layak untuk dikonsumsi. Adapun faktor penyebabnya yaitu
kurangnya sanitasi higienis pengolahan produk yaitu pengolahan,
pengemasan atau penyimpanan produk. Selain itu pengerjaan yang
kurang aseptis juga akan sangat berpengaruh terhadap hasil pengujian.
Escherichia coli; Pengujian penentuan koliform dan Escherichia coli
dilakukan berdasarkan SNI 2332.1:2015. Pengujian ini dilakukan untuk
mengetahui apakah terdapat cemaran bakteri Escherechia coli dalam
55
suatu produk pangan. Pengujian menggunakan spec bakteri dalam
sampel bertujuan untuk melihat bagaimana hasil positif Escherichia
coli. Hasil pengujian biokimia menunjukan bahwa sampel pengujian
merupakan E.coli Biotipe 1 yang menunjukan hasil positif pada
pengujian menggunakan LTB, indol dan MR, serta menunjukkan hasil
negative pada pengujian VP dan sitrat. Salmonella spp; Pengujian
penentuan Salmonella spp. dilakukan berdasarkan ISO 6579-1:2017.
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui apakah terdapat cemaran
bakteri Salmonella spp. dalam suatu produk pangan. Pengujian
menggunakan spec bakteri dalam sampel bertujuan untuk melihat
bagaimana hasil positif Salmonella spp. Hasil pengujian biokimia
menunjukan bahwa sampel pengujian merupakan Salmonella typhi.
Yang ditandai dengan hasil positif pada fermentasi glucose,
pembentukan H2S, dan lysine, serta menunjukan hasil negatif pada
fermentasi laktosa dan sukrosa, fermentasi urea dan pembentukan gas.
6.2 Saran
Pengerjaan pengujian harus selalu memperhatikan keaseptisan
dalam bekerja. Karena apabila pekerjaan yang dilakukan tidak aseptis
maka akan menyebabkan kontaminasi baik itu pada sampel ataupun
pada media yang digunakan sehingga dapat mempengaruhi keakuratan
hasil yang di peroleh.
56
DAFTAR PUSTAKA, gunakan mendeley, APA style versi 6
Spasi lihat aturannya di pedoman penulisan skripsi prodi bio
Anjung, M. U. K. (2016). Identifikasi Cemaran Salmonella sp. Dan Isolasi

Bakteriofage Sebagai Biokontrol dalam Penanganan Pasca Panen Udang
Vannamei (Litopennaus vannamei). Tesis. Fakultas Pertanian Universitas
Lampung. Bandar Lampung. 75 hal.
Bridson EY. (2006). The Oxoid Manual 9th Edition. Wade Road, Basingstoke,
Hampshire RG24 8PW, England
Brooks GF, Carroll KC, Butel JS, Morse SA, Mietzner TA. (2012). Jawetz,
melnick, & adelberg’s medical microbiology. 25th Edition. Terjemahan
Penerbit Buku Kedokteran EGC, 2010. Mikrobiologi kedokteran jawetz,
melnick, & adelberg. Edisi 25. Jakarta: Penerbit Kedokteran EGC. pp:
151-236.
Brooks, G.F. et al. (2005). Medical Microbiology. New York : Mc Graw Hill.
(Hal 55-65).
BSN. (2015). Cara uji mikrobiologi - Bagian 1: Penentuan koliform dan
Escherichia coli pada produk perikanan. SNI 2332.1:2015. Jakarta : Badan
Standarisasi Nasional.
BSN. (2015). Cara uji mikrobiologi - Bagian 3: Penentuan Angka Lempeng Total
(ALT) pada produk perikanan. SNI 2332.3:2015. Jakarta : Badan
Standarisasi Nasional
Corry, J.E., Curtis, G.D. and Baird, R.M. (2011).Handbook of culture media for
food and water microbiology. Royal Society of Chemistry.
Dwinanti, S.H., Tanbiyaskur. (2014). Rekayasa Media Padat Nonselektif Untuk
Bakteri Akuatik. Jurnal Akuakultur Indonesia. 13 (2), 163-166.
Ghaly AE, Dave D, Budge S, dan Brooks MS. (2010). Fish spoilage mechanisms
and preservation techniques: Review. American Journal of Applied Sciences
7(7): 859-877.
Ghufran, M. 2010. Budi Daya Ikan Patin di Kolam Terpal. Lily Publisher.
Yogyakarta.
57
Haryani Y., Chainulfifah dan Rustiana. (2012). Fermentasi Karbohidrat oleh
Isolat Salmonella spp. Dari Jajanan Pinggir Jalan. Jurnal Ind. Che.Acta Vol.
3(1) : 24.
Haryani Y., Chainulfifah dan Rustiana. (2012). Fermentasi Karbohidrat oleh
Isolat Salmonella spp. Dari Jajanan Pinggir Jalan. Jurnal Ind. Che.Acta Vol.
3(1) : 24.
Hernowo. (2001). Pembenihan Ikan Patin. Penebar Swadaya, Jakarta.
Indrasuari AAA, Wijayanti NPAD, Dewantara IGNA. (2014). Standarisasi Mutu
Simplisia Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana, L.). Jurnal Farmasi
Udayana. 3(1): 99- 101.
ISO. (2017). Microbiology of the food chain – Horizontal Method of detection,
enumeration and serotyping of salmonella – Part 1 : Detection Salmonella
spp. 6579-1:2017
Jawetz, E., Melnick, J.L. & Adelberg, E.A., (2005). Mikrobiologi Kedokteran,
diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih,
N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L., Edisi XXII, 327-335, 362-363.
Jakarta : Penerbit Salemba Medika
Jay, J. M., Loenssner, M. J. And Golden, D. A. (2005). Modern Food

th
Microbiology. 7 Edition. Springer Science and Business Media, Inc. New
York. Pp. 619-631pg.
KKP. (2018). Modul: Mikrobiologi Ikan Kompetensi : Beberapa Media Yang

Biasa Digunakan Dalam Analisa Coliform. E-Learning Pusat Pendidikan
Kelautan dan Perikanan
Kordi. (2005). Budidaya Ikan Mas Secara Intensif. Bina Adiaksa dan PT. Rineka
Cipta. Jakarta.
Kustiyawati, Endang sari. (2016). Pengaruh perbedaan waktu fermentasi tepung
onggok singkong dengan Rhizopus oryzae Pada Pembuatan Pakan Ikan
terhadap Pertumbuhan Ikan Patin (Pangasius djambal). [Skripsi].
Universitas Santha Dharma. Yogyakarta.
58
Lal A, Cheeptham N. 2007. Eosin Methylen Blue Agar Protocol. ML Library
American Society for Microbiology
Laluraa LFH, Lohoo HJ, Mewengkang HW. (2014). Identifikasi
bakteri Escherichia pada ikan selar (Selaroides sp.) bakar di beberapa resto
di Kota Manado. Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan 2(1):5-8.
Lindiawati, Riris. (2013). Kualitas Jajanan Siswa Disekolah Dasar. Jurnal Al
Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi. Vol 2 (1).
M. Y. Rakhmatullah, I. W. R. Kawitana, and M. T. Akif Rakhmatillah, S.T.,
(2007). Rancang Bangun Sistem Sterilisasi Alat-alat Kedokteran secara
Otomatis. vol. 136, no. 1, pp. 23– 42, 2007.
Mahyuddin, K. 2010. Panduan Lengkap Agribisnis Patin. Jakarta: Penebar
Swadaya.
Mary, E.B. (2007). At Glance Ilmu Gizi. Jakarta: Erlangga.
Mirmomeni, M. H., S. Naderi, H. A. Colagar, and S. Sisakhtnezhad. (2009).
Isolation of Salmonella enteritidis using biochemical tests and diagnostik
potential of SdfI amplified gene. Res. J Biol. Sci. 4 (6): 656-661.
Mursalim. (2018). Pemeriksaan Angak Lempeng Total Bakteri Pada Minuman
Sari Kedelai yang Diperjual Belikan di Kecamatan Manggala Kota
Makassar. Jurnal Media Analisis Kesehatan. 1(1): e-ISSN : 2621-9557.
Muslim, M.P. Hotly dan H. Widjajanti. (2009). Penggunaan Ekstrak Bawang
Putih (Allium sativum) untuk Mengobati Benih Ikan Patin Siam (Pangasius
hypophthalmus) yang Diinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophylla. Jurnal
Akuakultur Indonesia, 8(1): 91-100.
Nollet, Leo M.L. (2007). Handbook of Water Analysis. Second Edition. Taylor &
Francis Group. Boca Raton.
Noseda B, Islam MT, Eriksson M, Heyndrickx, De-Reu. M, vanLangenhove HK,
dan Devlieghere F. (2012). Microbiological spoilage of vacuum and
modified atmosphere packaged Vietnamese Pangasius hypophthalmus
fillets. Food Microbiology 30: 408-419.
Nugraha, A., Ida, B.N.G.S., dan Ketut, T.P.G. (2012). Deteksi Bakteri Salmonella
spp. Dan Pengujian Kualitas Telur Ayam Buras. Indonesia Medicus
Veterinus. 1(3):320- 329 hal.
59
Putri A, Agustini TW, dan Rianingsih L. (2014). The effect of aloe vera extract to
prevent lipid oxidation of milkfish (Chanos Chanos Forsk) during cold
storage. Journal of Fishery Products Processing and Biotechnology: 11-16.
Radji, M., (2011). Buku Ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. 2-1: 33-35
Ray B. (2000). Fundamental Food Microbiology. 2nd Edition. CRC Press: USA.
Samiea, S. A. E. R. A. E., Y. M. Ismaila., S. M. Fayeda., S. S. Hamedb. (2019).
Evaluation Of Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium In
Comparison With Conventional Media In The Isolation Of Salmonella
Species From Different Samples. Benha Medical Journal Vol. 35(3): 419-
428.
Satifa, Ratu, Santa, S. N. (2010). Medium Analisis Mikroorganisme (Isolasi dan
Kultur). Jakarta: CV. Trans Info Media. Halaman 1-4.
Subagja J, Slembrouck J, Hung LT, Lengerde M. (1999). Larva Of An Asian
Catfish Pangasius hipophthalamus (siluroidei, pangasiidae): Analysis Of
Precocious Mortality And Proposition Of Appropriate Treatments. Aquatic
Living Resource 12(1) : 37-44
Sumino, A. Supriyadi dan Wardiyanto.2013. Efektivitas Ekstrak Daun Ketapang
(Terminalia catappa L.) untuk Pengobatan Infeksi Aeromonas
salmonicidapada Ikan Patin (Pangasiodon hypopthalmus). Jurnal Sain
Veteriner. 31(1): 79-88.
Susanto, H & K, Amri. (2002). Budidaya Ikan Patin. Penebar Swadaya. Jakarta
Warsiki, Endang., Rahayuningsih. M., dan Anggrani. R. R. (2016). Media
Berindikator Warna Sebagai Pendeteksi Salmonella typhimurium. Jurnal
Teknologi Industri Pertanian. 26 (3): 276-283
Wibisono. F.J. (2016). Deteksi Cemaran Salmonella sp. Pada Ikan Bandeng
(Chanos chanos) Di pasar Ikan Sidoarjo. Jurnal Kajian Veteriner. Vol 5. No
1: 1-10
60
LAMPIRAN
Lampiran 1. Tahapan Pembuatan Media
No Gambar Keterangan
1.
Penimbangan media
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
2.
Penambahan media
dengan
aquadest
3.
Proses pemasakan
media
4.
Proses penuangan
media di dalam
laminar air
flow cabinet
61
Lampiran 2. Alat-alat Yang Digunakan
1.
Autoclave untuk
sterilisasi basah
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
2.
Laminar air flow

cabinet untuk
tempat
melakukan
penuangan
(Sumbe r: media
3.
Hot plate untuk

memasak
media
4.
Jarum Ose untuk

menginokulasi
kan sampel
atau biakan
62
5.
Timbangan dengan
keakuratan
tinggi untuk
menimbang
media
(Sumbe r:
6.
Gelas ukur untuk

mengukur
aquadest atau
pelarut
(Sumbe r:
7.
Oven untuk
sterilisasi
kering
(Sumbe r:
8.
Refrigerator
penyimpanan
media
63
9.
Autoclave sterilisasi
bahan atau alat
setelah
digunakan
(Sumber :
10.
Erlemeyer
11.
Beaker glass
12
Botol reagen
13.
64
Biosafety cabinet
14.
Refrigerator
penyimpanan
sampel
15.
Refrigerator
penyimpanan
reagen
(Sumb er :
16.
Inkubator
(Sumb er :
17.
Waterbath
65
18.
Mikropipet
19.
Timbangan untuk
menimbang
sampel
20.
Vortex
21.
Mikrotip
66
Lampiran 3. Tahap Pengujian ALT
1.
Proses pencacahan
sampel ikan
bandeng
presto
2.
Proses pencacahan
sampel fillet
ikan patin
3.
Proses
penimbangan
sampel ikan
bandeng
presto
(Sumber :
67
4.
Proses
penimbangan
sampel fillet
ikan patin
5.
Proses penambahan
sam[el dengan
larutan
Buffered
peptone water
6.
Proses
homogenisasi
sampel dengan
stomacher
(Sumbe r:
7.
Proses pengenceran
sampel
68
8.
Proses penuangan
media agar
PCA
9.
Proses inkubasi
sampel
Lampiran 4. Hasil Pengujian ALT
1.
Kontrol aquadest
pengujian
ALT
(Sumber : Dokumen Pribadi, 2021)
2.
Kontrol PCA
pengujian
ALT
69
3.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-2 A
4.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-2 B
5.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-3 A
6.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-3 B
70
7.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-4 A
8.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-4 B
9.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-5A
10.
Sampel Fillet Patin

Pengenceran
10-5B
71
11.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-2 A
12.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-2 B
13.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-3 A
14.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-3 B
72
15.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-4 A
16.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-4 B
17.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-5 A
18.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-5 B
73
Lampiran 5. Hasil Pengujian Salmonella sp.
1.
Hasil
negatifpengujia
n Salmonella
sp.
2.
Hasil positif
pengujian
Salmonella sp.
Lampiran 6. Hasil Pengujian E.coli

1.
Hasil negatif
pengujian
E.coli
2.
Hasil positif
Pengujian
E.coli
74
Lampiran 7. Sampel
1.
Sampel ikan
bandeng
presto

2. Sampel fillet ikan
patin
Perhitungan ALT
● Fillet Patin
Σc
N =[ ( 1 ×n 1 ) + ( 0.1× n 2 ) ] × d
113 +114+ 31+ 27

N =[ ( 1 ×2 ) + ( 0.1 ×2 ) ] × 10− 4
285
[ 2,2 ] ×10−4
129,4 ×10 4
1,3 106 CFU / g
● Bandeng presto
Σc
N =[ ( 1 ×n 1 ) + ( 0.1× n 2 ) ] × d
75
42+ 45
N =[ ( 1 ×2 ) ] × 10−4
87
N =[ ( 2 ) ] ×10− 4
43,5 × 104
4,4 ×105 CFU / g
76

Revisi 1

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Revisi 1

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Revisi 1

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

LAPORAN PRAKTIK KERJA LAPANGAN (PKL)

PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT),

AURELLIA SALSABILA PUTRI

PROGRAM STUDI BIOLOGI

PENENTUAN ANGKA LEMPENG TOTAL (ALT),

AURELLIA SALSABILA PUTRI

PROGRAM STUDI BIOLOGI

Nama Penulis : Aurellia Salsabila Putri

Dr. Priyanti, M.Si Sigit Hendra I. P. S. Pi.

Ketua Program Studi Biologi

Dr. Priyanti, M.Si.

Puji syukur kehadirat Allah SWT, Tuhan Semesta Alam atas

Jakarta, Maret 2021

Nama Instuisi : Balai Uji Standar Karantina Ikan,

Nama Universitas : Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah

Nama : Aurellia Salsabila Putri

Lampiran 1 Tahapan Pembuatan Media………………………………….55

Tabel 1 Hasil Pengujian ALT……………………………………………..26

Gambar 1 Struktur organisasi Badan Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan

1.1 Latar Belakang

1.3 Manfaat Praktik Kerja Lapangan (PKL)

2.1. Sejarah BUSKIPM

KASUBAG TATA USAHA

KASIE PENGUJIAN HPI DAN

Gambar 1. Struktur Organisasi

3.1 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Bandeng

Gambar 2. Morfologi Ikan Bandeng (Chanos chanos)

3.2 Habitat Ikan Bandeng

3.3 Bandeng Presto dan Pengolahannya

3.4 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Patin

Ikan Patin (Pangasius sp.) memiliki tubuh yang memanjang

3.5 Habitat Ikan Patin

3.6 Kebiasaan Makan Ikan Patin

3.8 Mutu dan Daya Simpan

3.9 Teknik Angka Lempeng Total (ALT)

3.10 Escherechia coli

Escherichia coli termasuk dalam famili Enterobacteriaceae yang

3.11. Salmonella spp.

4.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan

4.2 Alat dan Bahan

4.2.3 Alat dan Bahan Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017

4.3 Prosedur Kerja

4.3.1.1 Persiapan Pengujian

4.3.1.2 Tahap Pengujian ALT Aerob

Untuk menghasilkan pergitungan yang akurat dan teliti, maka

4.3.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk

4.3.2.2.1 Uji Pendugaan Koliform (Presumptive coliform)

4.3.2.2.2 Uji Pendugaan E.coli (faecal coliform, presumptive E.coli)

4.3.2.3 Uji Biokimia

4.3.2.3.1 Produksi indol

4.3.3 Pengujian Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017

4.3.3.2 Pengayaan Pada Media Selektif

4.3.3.3 Inokulasi Pada Media Padat Selektif

4.3.3.4 Uji Biokimia

4.3.3.4.1 Uji TSI agar

4.3.3.4.2 Uji Agar Urea

4.3.3.4.3 Uji LIA (Lysine iron agar)

4.3.3.4.4 Deteksi β-galaktosidase