Revisi 1
Revisi 1
Revisi 1
Sebagai salah satu syarat untuk memenuhi mata kuliah PKL pada Program
Studi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Islam Negri
Syarif Hidayatullah Jakarta
ii
2021 M / 1442H
HALAMAN PENGESAHAN
Mengetahui,
Pembimbing I Pembimbing II
iii
NIP. 19750526 200012 2 001
KATA PENGANTAR
iv
Penulis menyadari penyusunan laporan praktik kerja lapangan ini
masih jauh dari sempurna, penulis sangat mengharapkan kritik dan
saran yang membangun dari pembaca titik akhirnya penulis berharap
semoga laporan praktik kerja lapangan ini
dapat bermanfaat bagi pembaca.
Penulis
v
IDENTITAS INSTITUSI
IDENTITAS UNIVERSITAS
vi
IDENTITAS MAHASISWA
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN SAMPUL……………………………………………………………i
HALAMAN JUDUL………………………………………………………...........ii
HALAMAN PENGESAHAN................................................................................iii
KATA PENGANTAR............................................................................................iv
IDENTITAS INSTITUSI.......................................................................................vi
IDENTITAS UNIVERSITAS................................................................................vi
IDENTITAS MAHASISWA.................................................................................vii
DAFTAR LAMPIRAN...........................................................................................xi
DAFTAR TABEL..................................................................................................xii
DAFTAR GAMBAR............................................................................................xiii
BAB I.......................................................................................................................1
1.1 Latar Belakang...............................................................................................1
1.2 Tujuan............................................................................................................3
1.3 Manfaat Praktik Kerja Lapangan (PKL)........................................................3
BAB II......................................................................................................................4
2.1.Sejarah BUSKIPM.........................................................................................4
2.2.Visi dan Misi BUSKIPM...............................................................................5
2.3.Struktur Organisasi BUSKIPM......................................................................5
2.4.Tugas Pokok dan Fungsi BUSKIPM.............................................................6
BAB III....................................................................................................................7
3.1 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Bandeng.......................................................7
3.2 Habitat Ikan Bandeng.....................................................................................8
3.3 Bandeng Presto dan Pengolahannya..............................................................8
3.4 Klasifikasi dan Morfologi Ikan Patin.............................................................9
3.5 Habitat Ikan Patin.........................................................................................10
3.6 Kebiasaan Makan Ikan Patin........................................................................11
3.7 Fillet Ikan patin............................................................................................11
3.8 Mutu dan Daya Simpan................................................................................12
3.9 Teknik Angka Lempeng Total (ALT)..........................................................12
3.10 Escherechia coli.........................................................................................13
3.11. Salmonella spp..........................................................................................14
BAB IV..................................................................................................................16
4.1 Waktu dan Tempat Pelaksanaan..................................................................16
4.2 Alat dan Bahan.............................................................................................16
4.2.1 Alat dan Bahan Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI
2332.3:2015………………………………………………………………..16
viii
4.2.2 Alat dan Bahan Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015………………………………………….....16
4.2.3 Alat dan Bahan Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017…………17
4.3 Prosedur Kerja…………………………………………………………….17
4.3.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015……………17
4.3.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015…………………………………………….19
4.3.3 Pengujian Penentuan Salmonella spp. ISO 6579-1:2017 21
BAB V....................................................................................................................25
5.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015........................25
Tabel 1. Hasil Pengujian ALT.......................................................................26
Filet Patin.......................................................................................................26
Bandeng Presto..............................................................................................26
Nilai 26
1,3 x 10-6 CFU/g.............................................................................................26
4,4 x 10-5 CFU/g.............................................................................................26
Tabel 2. Nilai Pengujian ALT........................................................................26
5.2 Pengujian Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015..........................................................................28
5.2.1 Persiapan Pengujian..............................................................................28
5.2.2 Pendugaan Koliform.............................................................................29
5.2.3 Uji Pendugaan E.coli.............................................................................30
5.2.4 Uji Penegasan E.coli.............................................................................31
5.2.5 Uji Biokimia..........................................................................................33
5.3 Pengujian Salmonella spp. ISO 6579-1:2017……………………………..40
5.3.1 Pengayaan Pada Media Selektif………………………………………...40
5.3.2 Inokulasi Pada Media Selektif…………………………………………..41
5.3.3 Pengujian biokimia……………………………………………………...42
BAB VI..........................................................................................................49
6.1 Kesimpulan..................................................................................................49
6.2 Saran.............................................................................................................50
DAFTAR PUSTAKA....................................................................................51
LAMPIRAN……………………………………………………………… ..55
ix
x
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
xi
DAFTAR TABEL
Halaman
xii
DAFTAR GAMBAR
Halaman
xiii
Gambar 16 Hasil Positif dan Negatif TSIA………………………………………
43
Gambar 17 Hasil Positif dan Negatif
Urea……………………………………….43
Gambar 18 Hasil Positif dan Negatif LIA………………………………………..43
Gambar 19 Hasil Positif dan Negatif
ONPG……………………………………..44
Gambar 20 Hasil Positif dan Negatif Pengujian Indol …………………………..44
xiv
BAB I
PENDAHULUAN
2
sesuai, sehingga mahasiswa dapat menjadi salah satu sumber daya manusia
yang siap menghadapi tantangan.
1.2 Tujuan
1. Mengetahui, memahami, dan mempelajari secara langsung sistem
Balai Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan
Hasil Perikanan (BUSKIPM) dalam melakukan pengujian standar
karantina ikan.
2. Mempelajari dan memahami teknik pengujian perhitungan Angka
Lempengan Total (ALT), Escherichia coli dan Salmonella spp. pada
produk olahan ikan bandeng presto.
3. Mempelajari dan memahami teknik pengujian perhitungan Angka
Lempengan Total (ALT), Escherichia coli dan Salmonella spp. pada
produk olahan ikan fillet ikan patin.
4. Mempelajari dan memahami dampak nilai Angka Lempeng Total
(ALT), Escherichia coli, dan Salmonella spp. di dalam produk olahan
ikan bandeng dan fillet ikan patin
3
BAB II
TINJAUAN UMUM
4
2.2. Visi dan Misi BUSKIPM
A. Visi
BUSKIPM merupakan Unit Pelaksana Teknis di bidang pelayanan Uji
Standar Karantina Ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan
yang berada di bawah dan bertanggung jawab kepada Kepala Badan
Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan
(BKIPM), dengan visi: “Mewujudkan laboratorium BUSKIPM sebagai
acuan internasional”
B. Misi
Dalam upaya mewujudkan visi tersebut, Balai uji Standar Karantina
Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan menetapkan misi:
“Melakukan pengujian dan pengembangan teknik dan metoda pengujian
laboratorium sesuai standar Internasional.
2.3. Struktur Organisasi BUSKIPM
KEPALA BUSKIPM
Dr. Ir. Woro Nur Endang
Sariati, M.P
KOORDINATOR JABATAN
FUNGSIONAL
M. Tony W. Silaban, S.Si
5
2.4. Tugas Pokok dan Fungsi BUSKIPM
Balai Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan
Hasil Perikanan mempunyai tugas melaksanakan pengujian dan
pengembangan teknik dan metode pengujian karantina ikan, mutu dan
keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan dalam rangka uji
standar karantina ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan,
dan keamanan hayati ikan.
Balai Uji Standar Karantina Ikan, Pengendalian Mutu, dan Keamanan
Hasil Perikanan menyelenggarakan fungsi:
a. Pelaksanaan pengujian terhadap Hama dan Penyakit Ikan Karantina,
mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan dalam
rangka uji standar Hama dan Penyakit Ikan Karantina, mutu dan
keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati ikan;
b. Pengembangan teknik dan metode pengujian Hama dan Penyakit Ikan
Karantina, mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan hayati
ikan;
c. Pelaksanaan uji profisiensi;
d. Pelaksanaan rancangan standardisasi metode pengujian karantina ikan,
pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan, dan keamanan
hayati ikan;
e. Pembuatan koleksi standar media pembawa dan/atau Hama dan
Penyakit Ikan Karantina;
f. Penyiapan bahan informasi dan publikasi hasil pengujian laboratorium
karantina ikan, pengendalian mutu dan keamanan hasil perikanan, dan
keamanan hayati ikan;
g. Pelaksanaan kerja sama teknis laboratorium nasional dan
internasional;
h. Pelaksanaan bimbingan teknis laboratorium;
i. Pengumpulan dan pengolahan data; dan
j. Pelaksanaan urusan tata usaha dan rumah tangga.
6
BAB III
TINJAUAN PUSTAKA
Keterangan gambar :
a) Mata;
b) Tutup insang;
c) Sirip pectoralis;
7
d) Sirip abdomalis;
e) Sirip analis;
f) Sirip caudal;
g) Sirip dorsalis;
h) Linea laterals;
i) Mulut
Menurut Achmad dkk (1993), Ikan bandeng jantan memiliki ciri-ciri
warna sisik tubuh cerah dan mengkilap keperakan serta memiliki dua lubang
kecil di bagian anus yang tampak jelas pada saat bandeng jantan dewasa.
Bandeng betina memiliki ciri-ciri perut agak buncit dan terdapat tiga lubang
di bagian anus yang tampak jelas pada saat bandeng betina dewasa.
8
bandeng presto terbagi menjadi dua cara yaitu pengolahan secara tradisional
dan pengolahan secara modern. Pengolahan ikan bandeng secara tradisional
dilakukan dengan prinsip pemindangan yaitu pengawetan dengan teknik
penggaraman dan pemanasan (Adawyah, 2011). Pemindangan adalah proses
merebus ikan dalam wadah selama kurun waktu tertentu. Dalam proses
pemindangan kandungan air pada ikan akan mengalami penurunan karena
terjadinya penarikan cairan ikan oleh larutan garam (Anjarsari, 2010).
Pengolahan ikan bandeng secara modern dilakukan dengan menggunakan
autoclave atau pressure cooker dalam sekala rumah tangga. Proses
pengolahan bandeng presto menggunakan suhu yang tinggi yaitu 115°-
121°C dengan tekanan 1 atm. Tekanan yang tinggi dari autoclave atau
pressure cooker ini yang menyebabkan duri ikan bandeng presto menjadi
lunak (Adawyah, 2011).
9
Gambar 3. Morfologi Patin (Sumber : Hamilton, 1982). Keterangan gambar :
1. Mulur, 2. Mata; 3. Sirip dada: 4. Patil; 5. Sirip punggung; 6. Sirip
perut; 7. Sirip anal; 8. Gurat sisi; 9. Sirip ekor
10
liang tepi sungai. Benih patin di alam biasanya bergerombol dan
sesekali muncul di permukaan air untuk menghirup oksigen langsung
dari udara pada menjelang fajar. Untuk budidaya ikan patin, media atau
lingkungan yang dibutuhkan tidaklah rumit, karena patin termasuk
golongan ikan yang mampu bertahan pada lingkungan perairan yang
jelek. Walaupun patin dikenal ikan yang mampu hidup pada lingkungan
perairan yang jelek, namun ikan ini ikan ini lebih menyukai kondisi
perairan yang baik (Kordi, 2005).
11
3.7 Fillet Ikan patin
Fillet ikan patin atau yang dikenal dengan nama dory fillet. Ikan patin
memilki keunggulan tersendiri, antara lain tidak bersisik, durinya relatif
sedikit dan dagingnya putih kemerahan serta mudah dikuliti sehingga
relatif mudah dibuat filet yang baik. Selain itu, filet juga memiliki
beberapa keuntungan sebagai bahan baku olahan, antara lain bebas duri
dan tulang, dapat disimpan lebih lama dan mengefisienkan proses
produksi serta meningkatkan mutu produk olahannya (Putri et al. 2014).
Filet patin merupakan produk yang cepat mengalami kebusukan
sehingga menyebabkan umur simpan menjadi pendek. Proses
pembusukan pada ikan disebabkan oleh aktivitas autolisis, enzimatis,
reaksi kimia dan pertumbuhan mikroorganisme (Ghaly et al. 2010).
Berbagai mikroba pembusuk yang ditemukan dalam fillet ikan patin
terkemas termasuk dalam genus Serratia dan Pseudomonas (Noseda et
al. 2012).
12
dengan sempurna. Oleh sebab itu umur mutu ikan yang rendah serta
masa simpan ikan yang singkat menjadi masalah utama bagi industry
pengolah ikan (Fradiaz, 1989).
13
sesuatu dapat menjadi mikroba membahayakan. Perhitungan jumlah
bakteri yang hidup menggambarkan jumlah sel yang hidup. Metode
perhitungan sel mikroba yang hidup dalam suspensi akan tumbuh
menjadi 1 koloni. Koloni bakteri yang tumbuh tidak berasal dari satu
mikroba karena terdapat beberapa mikroba tertentu yang hidup
berkelompok atau berantai. Apabila ditumbuhkan pada satu media atau
lingkungan yang sesuai maka akan menghasilkan satu koloni sehingga
sering digunakan istilah Colony Forming Unit (CFU) untuk menghitung
jumlah mikroba hidup. Lempeng agar yang dihitung apabila hanya
terdapat 25-250 koloni saja (PPOMN, 2006).
14
adalah uji pendugaan dengan metode MPN (most probable number), uji
penguat pada medium selektif, uji pelengkap dengan medium lactose
broth, serta uji identifikasi dengan melakukan reaksi IMViC (indol,
methyl red, Voges-Proskauer, dan citrate). Jadi untuk dapat
menyimpulkan E. coli berada dalam air atau makanan diperlukan
seluruh tahapan pengujian di atas. Apabila dikehendaki untuk
mengetahui serotipe dari E. coli yang diperoleh untuk memastikan
apakah E.coli tersebut patogen atau bukan maka dapat dilakukan uji
serologi. Meskipun demikian, beberapa serotipe patogen tertentu seperti
O157:H7 yang ganas tidak dapat diuji langsung dengan pengujian 4
tahap ini dan memerlukan pendekatan analisis khusus sejak awal
(Dwiari et al, 2008).
15
dalam larutan KCN. Sebagian besar isolat Salmonella yang berasal dari
bahan klinik menghasilkan H2S. Salmonella sp. akan mati pada suhu 56
°C dan pada kondisi kering, di dalam air bakteri ini dapat bertahan
selama 4 minggu (Jawetz, Melnick, and Adelberg’s, 2012).
16
BAB IV
METODE PENELITIAN
4.2.1 Alat dan Bahan Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI
2332.3:2015
Alat yang digunakan untuk melakukan pengujian penentuan
Angka Lempeng Total (ALT) pada produk perikanan sesuai dengan
SNI 2332.3:2015 adalah botol pengencer, autoclave, stomacher, cawan
petri, inkubator, timbangan, mikropipet dan microtip, Biological Safety
Cabinet, gelas ukur, tisu, label, spidol, pemantik, dan bunsen.
Bahan yang digunakan antara lain sampel ikan bandeng presto,
sampel fillet ikan patin, Plate count agar (PCA), aquadest steril,
buffered peptone water (BPW), biakan murni bakteri Escherichia coli,
biakan murni bakteri Salmonella spp., dan alkohol 70%.
4.2.2 Alat dan Bahan Penentuan Koliform dan Escherichia coli Pada Produk
Perikanan SNI 2332.1:2015
Alat yang digunakan untuk melakukan pengujian penentuan
koliform dan Escherichia coli pada produk perikanan sesuai dengan
SNI 2332.1:2015 adalah Waterbath, Bio Safety Cabinet, tabung reaksi,
tabung Durham, rak tabung reaksi, inkubator, botol pengencer,
timbangan, stomacher, gelas ukur, jarum Ose, mikropipet dan mikrotip,
cawan petri, vortex, bunsen, pemantik, tisu, pulpen, dan label.
17
Bahan yang digunakan antara lain buffered peptone water,
aquadest steril, lauryl tryprose broth (LTB), EC broth, Levine’s eosin
methylene blue (L-EMB) agar, MR-VP broth, simmon citrate agar,
pereaksi Kovacs, pereaksi Voges-proskauer, indikator methyl red,
Sulfide indol motility (SIM), Tryptic soy agar (TSA), alkohol 70%,
biakan murni bakteri Salmonella sp. , biakan murni bakteri Escherecia
coli, ikan bandeng presto, dan fillet ikan patin beku.
18
4.3.1 Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) SNI 2332.3:2015
Mikroorganisme ditumbuhkan dengan metode agar tuang,
diinkubasikan dalam kondisi aerob atau anaerob pada suhu dan waktu
yang sesuai hingga tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk
koloni yang dapat dihitung (BSN, 2015).
19
4.3.1.3 Pembacaan dan Perhitungan Koloni Pada Cawan Petri
Perhitungan dilakukan apabila jumlah koloni pada cawan petri
sebanyak 25 koloni – 250 koloni. Apabila jumlah koloni pada cawan
petri lebih besar dari 250 koloni maka hasil dilaporkan sebagai terlalu
banyak untuk dihitung (TBUD).Apabila jumlah koloni pada cawan petri
kurang dari 25 koloni, catat koloni yang ada tetapi dinyatakan
perhitungan kurang dari 25 koloni dan dilakukan dengan 1/d, dimana d
adalah faktor pengenceran pertama yang digunakan dan dilaporkan
sebagai perkiraan ALT. berikut merupakan rumus perhitungan ALT :
Keterangan :
N : Jumlah koloni produk, dinyatakan dalam koloni per mLatau koloni per g
C : Jumlah koloni pada semua cawan yang dihitung
n1 : Jumlah cawan pada pengenceran pertama yang dihitung
n2 : Jumlah cawan pada pengenceran kedua yang dihitung
d : Pengenceran pertama yang digunakan
20
4.3.2.2 Tahapan Pengujian
1
ke dalam 9 mL aquadest steril. Lakukan tahap yang sama pada
pengenceran selanjutnya sesuai dengan pendugaan kepadatan contoh.
Pada setiap pengenceran dilakukan pengocokan minimal 25 kali.
Pindahkan sebanyak 1 mL larutan dari setiap pengenceran ke dalam
3 atau 5 tabung lauryl tryptose broth (LTB) yang berisi tabung Durham
dengan menggunakan mikropipet dengan microtip steril. Media
lactosebroth juga dapat digunakan.
Tabung-tabung tersebut di inkubasi pada suhu 35 °C ± 0.5 °C.
setelah inkubasi 24 jam ± 2 jam di perhatikan gas yang terbentuk.
Tabung positif ditandai dengan kekeruhan dan gas dalam tabung
Durham. Tabung-tabung negatif di inkubasi kembali selama 24 jam dan
catat hasilnya pada 48 jam ± 3 jam. Kemudia dilakukan “uji penegasan
koliform” untuk tabung-tabung positif.
21
4.3.2.2.3 Uji penegasan E.Coli (Confirmed E.Coli)
Inokulasikan 1 Ose dari tabung-tabung EC broth yang positif
dengan menggunakan jarum Ose bulat ke L-EMB agar. Inkubasi selama
18 - 24 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C.Koloni E. coli terduga
memberikan ciri yang khas (typical) yaitu hitam pada bagian tengah,
datar dan dengan atau tanpa hijau metalik.
Ambil sampai dengan 5 koloni (typical) E. coli dari masing-masing
cawan L-EMB kemudian goreskan ke media TSA dengan
menggunakan jarum Ose. Inkubasi selama 18 jam - 24 jam pada suhu
35°C ± 0,5°C dan gunakan untuk pengujian selanjutnya.
22
4.3.2.3.4 Uji Sitrat
Goreskan 1 Ose dari media TSA (Tryptic soy agar) ke permukaan Simmon
Citrate agar. Kemudian inkubasi selama 96 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C.
Reaksi positif jika terjadi pertumbuhan dan perubahan warna pada media
menjadi biru. Reaksi negative apabila tidak ada pertumbuhan dan media
tetap berwarna hijau.
23
tumbuh koloni Salmonella spp. pada agar HE dengan warna koloni
hijau kebiruan.
24
positif ditandai dengan hidrolisis urea membebaskan ammonia. Reaksi ini
merubah warna fenol menjadi merah muda sampai merah mawar.
Ciri khas Salmonella spp. tidak menghidrolisis urea sehingga warna urea
agar akan tetap tidak berubah.
25
26
BAB V
HASIL DAN PEMBAHASAN
27
mesofil aerob dapat tumbuh pada media ini. Menurut Corry et al,
(2011) media PCA adalah media padat yang biasa digunakan untuk
teknik jumlah hitungan koloni lempeng atau colony forming unit (CFU)
dari inoculum standar mikroba. Perhitungan koloni dapat digunakan
untuk melihat rasio produktifitas yang mengkuantifikasi pertumbuhan
relatif dari mikroba pada media pengujian.
Dari masing-masing sampel pengujian dilakukan secara duplo
dengan tujuan untuk memberikan akurasi jumlah mikroba yang tumbuh
pada pengujian ALT dengan pengkodean a dan b. Perlakuan duplo
bertujuan untuk mengantisipasi kesalahan atau kegagalan sehingga
masih terdapat cadangan yang berisi inokulum sama dan untuk
membandingkan hasil kedua pengenceran yang sama jika memiliki
cemaran mikrob yang nilainya jauh berbeda maka kemungkinan
terdapat kesalahan atau kontaminasi pada saat penanaman (Indrasuari et
al., 2014).
Kode Pengenceran
10-2 10-3 10-4 10-5
Sa
a b a b a b a b
mp
el
28
sto
(B
P)
Kontrol 25
Aq
uad
es
Kontrol 3
PC
A
Keterangan :
TBUD : Tidan Dapat Untuk Dihitung, >250 Koloni
29
Sterilisasi alat dan bahan sangat diperlukan sebelum melakukan
pengujian mikrobiologi karena dapat mempengaruhi keakuratan hasil
pengujian. Sterilisasi merupakan upaya yang secara effektif dapat
membunuh atau menghilangkan mikroorganisme yang dapat berpindah
seperti bakteri, jamur, atau virus pada permukaan alat atau bahan.
Terdapat dua kelompok umum sterilisasi yaitu secara fisik dan kimia.
Sterilisasi yang lebih efektif digunakan adalah sterilisasi secara fisik
dengan menggunakan suhu yang tinggi (Rakhmatullah et al, 2007) .
A B
30
CFu/mL (SNI, 2015). Tingginya nilai ALT pada fillet ikan patin dapat
disebabkan oleh kurangnya sanitasi higienis pengolahan produk yaitu
pengolahan, pengemasan atau penyimpanan produk.
31
Sampel yang digunakan untuk pengujian adalah ikan bandeng
presto yang berasal dari pasar tradisional dan fillet ikan patin dengan
merek dagang “Frosh”. Pada pengujian ini terdapat 4 sampel dengan 2
sampel non spek (BPNS dan FPNS) dan 2 sampel spek bakteri E-coli
(BPS dan FPS) yaitu sampel yang di tambahkan biakan murni bakteri
Escherechia coli. Maksud dari penambahan sampel dengan spek biakan
murni bakteri Escherechia coli adalah untuk memperlihatkan secara
jelas reaksi positif pengujian penentuan koliform dan Escherechia coli.
Penambahan biakan murni bakteri dilakukan pada sampel yang telah
dilakukan pengenceran 10-1 atau yang telah di tambahkan dengan
larutan Buffered peptone water (BPW). Peambahan dilakukan dengan
mengambil sebanyak 1 mL biakan bakteri murni Escherechia coli
kemudian di inokulasikan ke dalam sampel pengenceran 10 -1. Inkubasi
selama 24 jam dengan suhu 35 °C ± 0.5 °C
32
Broth dengan tabung Durham. Reaksi positif diketahui dengan
terjadinya fermentasi dan terbentuknya gas di dalam tabung Durham.
Serial dilusi sampel diinokulasikan ke dalam media LTB kemudian
diinkubasi pada suhu 35 °C selama 24 jam kemudian diinkubasi
kembali selama 24 jam apabila tidak terjadi pertumbuhan pada 24 jam
pertama. Bakteri koliform yang terdapat dalam sampel akan
memproduksi gas atau asam hasil fermentasi laktosa. Sampel Uji dapat
dinyatakan positif apabila pada tabung durham terbentuk gas hasil
hidrolisis laktosa oleh enzim bakteri dari kelompok koliform. Laktosa
pada senyawa sulfat digunakan oleh bakteri sebagai sumber karbon
untuk melakukan fermentasi. Fosfat dan nutrisi yang tinggi dalam
media ini akan mempercepat pertumbuhan bakteri E.coli dan
meningkatkan pembentukan gas (Bridson 2006).
a b
c
Gambar 5. hasil positif pada media LTB (a), hasil negatif pada media
LTB (b)
33
terbentuk gas maka inkubasi Kembali selama 24 jam ± 2 jam dengan
suhu 45,5°C ± 0,2°C. EC broth berfungsi untuk diferensiasi fekal
koliform dan uji konfirmasi untuk E.coli dari makanan dan sampel
lingkungan. Bila media berubah dari kuning jernih menjadi kuning
keruh dan terdapat gas di dalam tabung durham menunjukkan hasil
positif terhadap bakteri koliform terutama E.coli (Lal & Cheepthman
2007).
a b
c
34
dan metilen biru sehingga bakteri gram negatif akan tumbuh dengan
baik dan menghambat pertumbuhan bakteri gram positif. Eosin dan
metilen biru berfungsi untuk membedakan antara bakteri fermentasi
laktosa dengan bakteri nonfermentasi laktosa. Perubahan warna media
menjadi hijau metalik merupakan reaksi positif pada meda EMBA yang
disebabkan peningkatan keasaman agar dan fermentasi. E.coli yang
tumbuh akan memberikan warna yang khas kemilau hijau metalik
(KKP, 2018).
Gambar 7. Koloni diduga positif E.coli berwarna hijau metalik dan koloni
negatif E.coli tidak berwarna hijau metalik
35
Gambar 8. Pertumbuhan bakteri pada media TSA
5.2.5 Uji Biokimia
Pengujian biokimia dilakukan untuk mengetahui sifat-sifat fisiologis
koloni bakteri hasil isolasi. Uji biokimia bakteri berkaitan dengan
proses metabolisme sel bakteri. Untuk mengidentifikasi bakteri, tidak
dapat dilakukan dengan mengetahui sifat morfologinya saja melainkan
juga mengetahui sifat fisiologisnya karena apabila identifikasi hanya
dari sifat morfologinya saja akan sulit untuk menentukan spesies bakteri
karna akan tampak sama (Handayani, Ekowati, & Pakpahan, 2013) .
Pengujian biokimia untuk E.coli berdasarkan SNI terdiri atas 4
pengujian yaitu :
36
diartikan bahwa sumber karbon berasal dari triptophan yang
membentuk indol (Lumantouw, Rondonuwu, & Singkoh, 2013).
a b
c
Gambar 9. Hasil negatif pengujian indol (a), hasil positif pengujian indol (b)
a b37
c c
Gambar 10. Hasil negatif pengujian methyl red (a), hasil positif pengujian methyl
red (b)
a b
c
38
5.2.5.4 Uji Sitrat
Pengujian sitrat dilakukan dengan menginokulasikan 1 Ose dari media
TSA ke media Simonn citrate agar. Kemudian diinkubasi selama 48
jam ± 2 jam pada suhu 35°C ± 0,5°C. Reaksi positif jika terjadi
pertumbuhan dan perubahan warna pada media menjadi biru. Reaksi
negative apabila tidak ada pertumbuhan dan media tetap berwarna
hijau. Menurut Ummamie et al (2017), Uji sitrat berfungsi untuk
mengetahui sumber karbon bakteri menggunakan sitrat atau tidak. Hasil
uji sitrat dapat diketahui positif (+) ditandai dengan perubahan warna
media bakteri dari hijau menjadi biru, hal ini dapat diartikan bahwa
salah satu sumber karbon bakteri menggunakan sitrat. Hasil negatif (-)
ditandai dengan media bakteri tidak mengalami perubahan warna yaitu
tetap berwarna hijau.
a b
c
Gambarv12. Hasil negatif pengujian sitrat (a), hasil positif pengujian sitrat (b)
39
IMViC IMViC IMViC MPN
Kode MPN E
s Pengen faec .
a ce LTB EC LEMB al c
a b c colif o
m ra
p n orm l
el i
a b c a b c a b c I MR VP C I MR VP C I MR VP C
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
10-1
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
FPS 10-2
+ + + + + + + + + + + + - + + + - + + + -
10-3
+ + + - - - - - -
10-1
- - + - - - - - -
FPNS 10-2
- - - - - - - - -
10-3
+ + + + + + - - - + + + + + + + + + + +
10-1
+ + + + + + + + - + + - - + + - - + + + +
BPS 10-2
+ + + - + + + + + + + - - + + - - + + - -
10-3
+ + + - - - - - -
10-1
- + - - - - - - -
BPNS 10-2
- + - - - - - - -
10-3
40
Tabel 4. Interpretasi Hasil
Kriteria Biotipe 1 B-iotipe 2
Gas pada tabung + +
LTB
Indol + -
Methyl Red (MR) + +
Voges Proskauer - -
(VP)
Sitrat - +
Uji Morfologi Gram negatif, Gram negatif,
bentuk batang bentuk batang
pendek tidak pendek tidak
berspora. berspora.
41
sampel yaitu ikan bandeng presto dan fillet ikan patin negatif koliform
dan E.coli.
Pengujian Pendugaan E.coli dengan menggunakan media
selektif L-EMB agar dilakukan pada hasil positif pengujian penegasan
E.coli. Jadi pengujian hanya dilakukan pada sampel FPS dan BPS.
Berdasarkan hasil pengujian dengan media selektif L-EMB agar
terdapat 4 sampel yang menunjukan hasil negatif yaitu pada sampel
BPS 10-1a, 10-1b, 10-1c, dan 10-2c. Hasil negatif menunjukan kolonitidak
berwarna berwarna hijau metalik. Hal tersebut mungkin dapat
disebabkan karena pengerjaan yang kurang aseptis dan menyebabkan
kontaminasi pada sampel.
Hasil positif pada media L-EMB agar kemudian dilanjutkan ke
pengujian biokimia untuk mengetahui bakteri dengan tepat berdasarkan
sifat fisiologisnya. Uji biokimia dilakukan dengan 4 pengujian atau
yang biasa disebut dengan IMViC yaitu pengujian produksi indol,
methyl red, voges-proskauer, dan sitrat. Pengujian biokimia tidak
dilakukan pada semua sampel melainkan hanya pada sampel FPS 10-1b,
10-2b, dan 10-3b serta sampel BPS 10-1a, 10-2a, 10-3a, 10-1b, 10-2b, 10-3b.
Berdasarkan hasil data yang diperoleh, sampel FPS menunjukan hasil
yang sesuai dengan interpretasi hasil sesuai dengan ketentuan SNI
2332.1: 2015 yaitu merupakan bakteri E.coli biotipe 1 dengan
membentuk pola seperti pada tabel 4.
42
Gambar 13. Hasil pengujian biokimia Escherechia coli
43
Gambar 14 Pengujian media RVS (a), pengujian MKTTn (b)
44
al., (2019), bakteri Salmonella sp. dapat mengfermentasi xylose,
mendekarboksilasi lysin dan memproduksi hidrogen sulfida dari
natrium tiosulfat. Hasil fermentasi tersebut dapat merubah pH media
XLD menjadi basa sehingga dapat merubah warna media menjadi
merah jambu (pink) dan koloni berwarna hitam dihasilkan dari hidrogen
sulfida (Samiea et al., 2019)
Media HE merupakan media selektif diferensial yang terdiri dari
bile salt agar dan berfungsi untuk menghambat pertumbuhan bakteri
gram positif, sehingga diharapkan hanya Salmonella spp. yang tumbuh
pada media ini. Media ini juga dapat membedakan bakteri Salmonella
spp dengan bakteri lainnya. Salmonella spp tidak dapat memfermentasi
laktosa sehingga asam yang dihasilkan sedikit. Hal ini yang
menyebabkan Salmonella spp berwarna hijau kebiruan karena asam
yang dihasilkan bereaksi dengan indikator yang ada pada media yaitu
fuksin asam dan bromtimol blue (Sativa, 2010).
a b
c
v
c d
Gambar 15. Hasil negatif pada media XLD (a), hasil positif pada media XLD (b),
hasil negatif pada media HE (c), hasil positif pada media HE (d).
45
5.3.3.1 Uji TSIA
Pengujian biokimia pada media agar miring TSIA dilakukan
dengan menggoreskan kemudian tusuk pantatnya dengan 1 Ose kultur
bakteri dari media selektif XLD dan HE ke agar miring TSIA.
Kemudian diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 37 °C selama 24
jam ± 3 jam. Pada media TSIA, hasil positif ditandai dengan warna
kuning pada media agar tegak dan warna merah pada media agar miring
dengan atau tanpa H2S. Warna merah disebabkan oleh bakteri
Salmonella sp. tidak dapat memfermentasi laktosa dan sukrosa,
sedangkan warna kuning pada media tegak disebabkan oleh reaksi
bakteri Salmonella sp. yang dapat mengfermentasi glukosa untuk
pertumbuhannya Pembentukan H2S yaitu penghitaman media
disebabkan oleh fermentasi H2 dan CO2 (Anjung, 2016).
a b
Gambar 16. Hasil negatif media TSIA (K/A) (a), hasil positif media TSIA (A/A)
(b)
46
± 3 jam. Reaksi positif ditandai dengan hidrolisis urea membebaskan
ammonia. Reaksi ini merubah warna fenol menjadi merah muda sampai
merah mawar. Menurut Mirmomeni (2009), pengujian biokimia urea
pada salmonella spp. menunjukkan hasil negatif yaitu tidak terjadi
perubahan warna pada media. Hal tersebut disebabkan oleh ciri khas
bakteri Salmonella spp. yang tidak menggunakan urea sebagai sumber
karbon sehingga tidak terjadinya perubahan warna pada media sitrat
karena tidak terjadi fermentasi pada media surea.
a b
Gambar 17. Hasil negatif media urea (a), hasil positif media urea (b)
47
a b
Gambar 18. Hasil negatif media LIA (a), hasil positif media LIA
a b
v
Gambar 19. Hasil negatif ONPG (a), hasil positif ONPG (b)
5.3.3.5 Uji Indol
Pengujian biokimia pada media indol dilakukan dengan
menginokulasikan 1 Ose kultur bakteri dari media selektif XLD dan HE
48
ke dalam media Sulfide indol motility (SIM). Kemudian diinkubasi pada
suhu 37 °C selama 24 jam ± 3 jam. Setelah inkubasi kemudian
ditambahkan 1 mL reagen Kovacs. Reaksi positif ditandai dengan
terbentuknya cincin merah pada lapisan permukaan. Reaksi negatif
ditandai dengan terbentuknya cincin kuning-coklat pada permukaan
atas. Uji indol dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui kemampuan
bakteri dalam memecah asam amino triptofan. Asam amino triptofan
merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada protein,
sehingga asam amino ini dengan mudah digunakan oleh
mikroorganisme akibat penguraian protein (Rondonuwu, & Singkoh,
2013).
a b
c
Gambar 20. Hasil negatif pengujian indol (a), hasil positif pengujian indol
(b)
49
Tabel 5. Hasil Pengujian Biokimia
β-
galac
tosid KESIMPU
TSI LIA Urease Indol Serologi
ase LAN
Kode
(onpg
sam Media HE XLD
)
pel
Gas
glu
Glucose Lactose Sucrose H2S O H
co
se
RVS
FPS Positif
MKTTn + + + - - - + + - - -
RVS - - + - + + + - + - +
FPNS
MKTTn - - + - + + + - + - +
RVS
BPS Positif
MKTTn + + + - - - + + - - -
BPNS RVS - - + + + + - + + - -
50
MKTTn - - + + + + - + + - -
Salmonella strain
Test S.Typhi S.Paratyp S. S. Paratyphi S. S. Other
hi A Parat C Gilli Gilli strai
yphi naru naru ns
B m m
biov biov
ar ar
galli pullo
naru rumb
b
m
Reaction %+c Reaction %+c Reaction %+d Reaction %+d Reaction %+c Reaction %+c Reaction %+c
TSI acid + 100 + 100 + 100 + 100 + 100 + 100 + 100
from
gluco
se
TSI gas -e 0 + 96,1 + 96,1 + 96,1 - 0 + 95,1 + 92
from
gluco
se
TSI acid - 2 - 0 - 0 - 00 - 0 - 0 - 1h
from
lacto
se
51
TSI acid - 0 - 0,6 - 0,6 - 0,0,66 - 0,6 - 0,6 - 1
from
sucro
se
+
TSI + 97 - 10 + 10 100 Vf Vf + 92
hydr
ogen
sulfid
e
prod
uced
Lysine - 0 - 0 - 0 - 0 - 0 - 0 - 1
decar
boxyl
ation
Urea + 98 - 0 + 95 + 100 + 95 + 95 + 95
hydr
olysi
s
β- - 0 - 0 - - - <10 - <10 - 2h
Gala
ctosi
dase
Production - 0 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1,2 - 1
of
indol
e
52
Tabel 6. Interpretasi Hasil
53
Salmonella spp. adalah bakteri gram negatif berbentuk batang
bukan pembentuk spora yang terdiri dari sekitar 2500 serotipe yang
kesemuanya diketahui bersifat patogen baik pada manusia atau hewan.
Salmonella sp bersifat aerob atau fakultatif anaerob. Dapat
memfermentasi glukosa dengan membentuk asam atau gas dan dapat
mereduksi nitrat menjadi nitrit. Mempunyai sifat katalase positif dan
oksidase negatif serta mudah tumbuh pada kebanyakan media. Bakteri
ini bukan indikator sanitasi, melainkan bakteri indikator keamanan
pangan. Artinya, karena semua serotipe Salmonella sp. yang diketahui
di dunia ini bersifat patogen maka dianggap membahayakan kesehatan.
Oleh karena itu berbagai standar air minum maupun makanan siap
santap mensyaratkan tidak ada Salmonella spp. dalam 100 ml air
minum atau 25 gram sampel makanan ( Dewanti dan Hariyadi, 2005).
Menurut Adam and Moss., (2000) untuk mengetahui isolat
dugaan Salmonella sp maka perlu dilakukan isolasi dan karakterisasi.
Hal tersebut harus di konfirmasi dengan melakukan uji biokimia dan
juga serologi. Uji biokimia ini yang meliputi uji katalase, uji oksidase,
uji TSIA, uji urease, uji Methyl Red, uji citrate, uji sukrosa, laktosa,
maltosa, dan manitol serta uji serologis polyvalent O.
Berdasarkan tabel uji biokimia dapat diketahui bahwa sampel
FPS dan BPS menunjukan hasil positif Salmonella spp. yaitu
menunjukan hasil positif pada media TSIA, terdapat pembentukan H2S,
dan positif pada media LIA. Hal tersebut terkonfirmasi sesuai dengan
tabel interpretasi hasil (tabel 6.) yaitu merupakan Salmonella typhi.
Menurut Mirmonemi, (2009) pengujian biokimia Salmonella spp. pada
media citrate, TSIA dan MR akan menunjukkan reaksi positif. Pada uji
urease dan uji oksidase, Salmonella spp. Akan menunjukkan reaksi
negatif dengan tidak ada perubahan warna media.
Kandungan bakteri Salmonella spp. pada produk makanan yang
dikonsumsi oleh manusia dapat menyebabkan penyakit salmonelosis
yang ditunjukkan dengan adanya gejala gastroenteritis, demam
enteritika, focal infection, dan sequelae (Jay, 2005). Kontaminasi pada
54
produk perikanan diakibatkan adanya kontaminasi silang akibat dari
keadaan yang buruk selama proses pengolahan. Faktor prningkatan
kontaminasi bakteri Salmonella spp. dapat disebabkan oleh keberadaan
nutrisi dan kondisi lingkungan yang mendukung pertumbuhan bakteri
tersebut (Nugraha dkk., 2012).
BAB VI
PENUTUP
6.1 Kesimpulan
Berdasarkan tiga pengujian yang telah dilakukan berdasarkan
SNI 2332.1:2015 tentang Cara uji mikrobiologi – Bagian 1 : Penentuan
Koliform dan Escherecia coli Pada Produk Perikanan, SNI 2332.3:2015
tentang Cara uji mikrobiologi – Bagian 3 : Penentuan Angka Lempeng
Total (ALT) pada produk perikanan, ISO 6579-1:2017 Microbiology of
the food chain – Horizontal Method of detection, enumeration and
serotyping of salmonella – Part 1 : Detection Salmonella spp. maka
dapatmdisimpulkan sebagai berikut : -Angka Lempeng Total (ALT)
Penentuan Angka Lempeng Total (ALT) adalah pengujian yang
dilakukan untuk yang dilakukan unruk menentukan jumlah bakteri
dalam suatu sampel. Dalam test tersebut diketehui perkembangan
banyaknya bakteri dengan mengatur sampel, di mana total bakteri
tergantung atas formasi bakteri di dalam media tempat tumbuhnya dan
masing-masing bakteri yang dihasilkan akan membentuk koloni yang
tunggal. Pengujian dilakukan berdasarkan SNI 2332.3:2015,
menunjukkan nilai ALT pada fillet ikan patin melebihi batas SNI yaitu
> 5 x 105 CFU/gr. Hal tersebut dapat dikatakan bahwa fillet ikan patin
tidak layak untuk dikonsumsi. Adapun faktor penyebabnya yaitu
kurangnya sanitasi higienis pengolahan produk yaitu pengolahan,
pengemasan atau penyimpanan produk. Selain itu pengerjaan yang
kurang aseptis juga akan sangat berpengaruh terhadap hasil pengujian.
Escherichia coli; Pengujian penentuan koliform dan Escherichia coli
dilakukan berdasarkan SNI 2332.1:2015. Pengujian ini dilakukan untuk
mengetahui apakah terdapat cemaran bakteri Escherechia coli dalam
55
suatu produk pangan. Pengujian menggunakan spec bakteri dalam
sampel bertujuan untuk melihat bagaimana hasil positif Escherichia
coli. Hasil pengujian biokimia menunjukan bahwa sampel pengujian
merupakan E.coli Biotipe 1 yang menunjukan hasil positif pada
pengujian menggunakan LTB, indol dan MR, serta menunjukkan hasil
negative pada pengujian VP dan sitrat. Salmonella spp; Pengujian
penentuan Salmonella spp. dilakukan berdasarkan ISO 6579-1:2017.
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui apakah terdapat cemaran
bakteri Salmonella spp. dalam suatu produk pangan. Pengujian
menggunakan spec bakteri dalam sampel bertujuan untuk melihat
bagaimana hasil positif Salmonella spp. Hasil pengujian biokimia
menunjukan bahwa sampel pengujian merupakan Salmonella typhi.
Yang ditandai dengan hasil positif pada fermentasi glucose,
pembentukan H2S, dan lysine, serta menunjukan hasil negatif pada
fermentasi laktosa dan sukrosa, fermentasi urea dan pembentukan gas.
6.2 Saran
Pengerjaan pengujian harus selalu memperhatikan keaseptisan
dalam bekerja. Karena apabila pekerjaan yang dilakukan tidak aseptis
maka akan menyebabkan kontaminasi baik itu pada sampel ataupun
pada media yang digunakan sehingga dapat mempengaruhi keakuratan
hasil yang di peroleh.
56
DAFTAR PUSTAKA, gunakan mendeley, APA style versi 6
Spasi lihat aturannya di pedoman penulisan skripsi prodi bio
57
Haryani Y., Chainulfifah dan Rustiana. (2012). Fermentasi Karbohidrat oleh
Isolat Salmonella spp. Dari Jajanan Pinggir Jalan. Jurnal Ind. Che.Acta Vol.
3(1) : 24.
Haryani Y., Chainulfifah dan Rustiana. (2012). Fermentasi Karbohidrat oleh
Isolat Salmonella spp. Dari Jajanan Pinggir Jalan. Jurnal Ind. Che.Acta Vol.
3(1) : 24.
Hernowo. (2001). Pembenihan Ikan Patin. Penebar Swadaya, Jakarta.
Indrasuari AAA, Wijayanti NPAD, Dewantara IGNA. (2014). Standarisasi Mutu
Simplisia Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana, L.). Jurnal Farmasi
Udayana. 3(1): 99- 101.
ISO. (2017). Microbiology of the food chain – Horizontal Method of detection,
enumeration and serotyping of salmonella – Part 1 : Detection Salmonella
spp. 6579-1:2017
Jawetz, E., Melnick, J.L. & Adelberg, E.A., (2005). Mikrobiologi Kedokteran,
diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih,
N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L., Edisi XXII, 327-335, 362-363.
Jakarta : Penerbit Salemba Medika
58
Lal A, Cheeptham N. 2007. Eosin Methylen Blue Agar Protocol. ML Library
American Society for Microbiology
Laluraa LFH, Lohoo HJ, Mewengkang HW. (2014). Identifikasi
bakteri Escherichia pada ikan selar (Selaroides sp.) bakar di beberapa resto
di Kota Manado. Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan 2(1):5-8.
Lindiawati, Riris. (2013). Kualitas Jajanan Siswa Disekolah Dasar. Jurnal Al
Azhar Indonesia Seri Sains dan Teknologi. Vol 2 (1).
M. Y. Rakhmatullah, I. W. R. Kawitana, and M. T. Akif Rakhmatillah, S.T.,
(2007). Rancang Bangun Sistem Sterilisasi Alat-alat Kedokteran secara
Otomatis. vol. 136, no. 1, pp. 23– 42, 2007.
Mahyuddin, K. 2010. Panduan Lengkap Agribisnis Patin. Jakarta: Penebar
Swadaya.
Mary, E.B. (2007). At Glance Ilmu Gizi. Jakarta: Erlangga.
Mirmomeni, M. H., S. Naderi, H. A. Colagar, and S. Sisakhtnezhad. (2009).
Isolation of Salmonella enteritidis using biochemical tests and diagnostik
potential of SdfI amplified gene. Res. J Biol. Sci. 4 (6): 656-661.
Mursalim. (2018). Pemeriksaan Angak Lempeng Total Bakteri Pada Minuman
Sari Kedelai yang Diperjual Belikan di Kecamatan Manggala Kota
Makassar. Jurnal Media Analisis Kesehatan. 1(1): e-ISSN : 2621-9557.
Muslim, M.P. Hotly dan H. Widjajanti. (2009). Penggunaan Ekstrak Bawang
Putih (Allium sativum) untuk Mengobati Benih Ikan Patin Siam (Pangasius
hypophthalmus) yang Diinfeksi Bakteri Aeromonas hydrophylla. Jurnal
Akuakultur Indonesia, 8(1): 91-100.
Nollet, Leo M.L. (2007). Handbook of Water Analysis. Second Edition. Taylor &
Francis Group. Boca Raton.
Noseda B, Islam MT, Eriksson M, Heyndrickx, De-Reu. M, vanLangenhove HK,
dan Devlieghere F. (2012). Microbiological spoilage of vacuum and
modified atmosphere packaged Vietnamese Pangasius hypophthalmus
fillets. Food Microbiology 30: 408-419.
Nugraha, A., Ida, B.N.G.S., dan Ketut, T.P.G. (2012). Deteksi Bakteri Salmonella
spp. Dan Pengujian Kualitas Telur Ayam Buras. Indonesia Medicus
Veterinus. 1(3):320- 329 hal.
59
Putri A, Agustini TW, dan Rianingsih L. (2014). The effect of aloe vera extract to
prevent lipid oxidation of milkfish (Chanos Chanos Forsk) during cold
storage. Journal of Fishery Products Processing and Biotechnology: 11-16.
Radji, M., (2011). Buku Ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa Farmasi dan
Kedokteran. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. 2-1: 33-35
Ray B. (2000). Fundamental Food Microbiology. 2nd Edition. CRC Press: USA.
Samiea, S. A. E. R. A. E., Y. M. Ismaila., S. M. Fayeda., S. S. Hamedb. (2019).
Evaluation Of Modified Semisolid Rappaport Vassiliadis Medium In
Comparison With Conventional Media In The Isolation Of Salmonella
Species From Different Samples. Benha Medical Journal Vol. 35(3): 419-
428.
Satifa, Ratu, Santa, S. N. (2010). Medium Analisis Mikroorganisme (Isolasi dan
Kultur). Jakarta: CV. Trans Info Media. Halaman 1-4.
Subagja J, Slembrouck J, Hung LT, Lengerde M. (1999). Larva Of An Asian
Catfish Pangasius hipophthalamus (siluroidei, pangasiidae): Analysis Of
Precocious Mortality And Proposition Of Appropriate Treatments. Aquatic
Living Resource 12(1) : 37-44
Sumino, A. Supriyadi dan Wardiyanto.2013. Efektivitas Ekstrak Daun Ketapang
(Terminalia catappa L.) untuk Pengobatan Infeksi Aeromonas
salmonicidapada Ikan Patin (Pangasiodon hypopthalmus). Jurnal Sain
Veteriner. 31(1): 79-88.
Susanto, H & K, Amri. (2002). Budidaya Ikan Patin. Penebar Swadaya. Jakarta
Warsiki, Endang., Rahayuningsih. M., dan Anggrani. R. R. (2016). Media
Berindikator Warna Sebagai Pendeteksi Salmonella typhimurium. Jurnal
Teknologi Industri Pertanian. 26 (3): 276-283
Wibisono. F.J. (2016). Deteksi Cemaran Salmonella sp. Pada Ikan Bandeng
(Chanos chanos) Di pasar Ikan Sidoarjo. Jurnal Kajian Veteriner. Vol 5. No
1: 1-10
60
LAMPIRAN
Lampiran 1. Tahapan Pembuatan Media
No Gambar Keterangan
1.
Penimbangan media
2.
Penambahan media
dengan
aquadest
3.
Proses pemasakan
media
4.
Proses penuangan
media di dalam
laminar air
flow cabinet
61
Lampiran 2. Alat-alat Yang Digunakan
No Gambar Keterangan
1.
Autoclave untuk
sterilisasi basah
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
2.
3.
4.
62
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
5.
Timbangan dengan
keakuratan
tinggi untuk
menimbang
media
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
6.
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
7.
Oven untuk
sterilisasi
kering
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
8.
Refrigerator
penyimpanan
media
63
9.
Autoclave sterilisasi
bahan atau alat
setelah
digunakan
(Sumber :
Dokumen Pribadi 2021)
10.
Erlemeyer
11.
Beaker glass
12
Botol reagen
13.
64
Biosafety cabinet
14.
Refrigerator
penyimpanan
sampel
15.
Refrigerator
penyimpanan
reagen
(Sumb er :
Dokumen Pribadi 2021)
16.
Inkubator
(Sumb er :
Dokumen Pribadi 2021)
17.
Waterbath
65
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
18.
Mikropipet
19.
Timbangan untuk
menimbang
sampel
20.
Vortex
21.
Mikrotip
66
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
No Gambar Keterangan
1.
Proses pencacahan
sampel ikan
bandeng
presto
2.
Proses pencacahan
sampel fillet
ikan patin
3.
Proses
penimbangan
sampel ikan
bandeng
presto
(Sumber :
Dokumen Pribadi 2021)
67
4.
Proses
penimbangan
sampel fillet
ikan patin
5.
Proses penambahan
sam[el dengan
larutan
Buffered
peptone water
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
6.
Proses
homogenisasi
sampel dengan
stomacher
(Sumbe r:
Dokumen Pribadi 2021)
7.
Proses pengenceran
sampel
68
8.
Proses penuangan
media agar
PCA
9.
Proses inkubasi
sampel
No Gambar Keterangan
1.
Kontrol aquadest
pengujian
ALT
2.
Kontrol PCA
pengujian
ALT
69
3.
4.
5.
6.
70
7.
8.
9.
10.
71
11.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-2 A
12.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-2 B
13.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-3 A
14.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-3 B
72
15.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-4 A
16.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-4 B
17.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-5 A
18.
Sampel Bandeng
Presto
Pengenceran
10-5 B
73
Lampiran 5. Hasil Pengujian Salmonella sp.
No Gambar Keterangan
1.
Hasil
negatifpengujia
n Salmonella
sp.
2.
Hasil positif
pengujian
Salmonella sp.
Hasil negatif
pengujian
E.coli
2.
Hasil positif
Pengujian
E.coli
74
(Sumber : Dokumen Pribadi 2021)
Lampiran 7. Sampel
No Gambar Keterangan
1.
Sampel ikan
bandeng
presto
Perhitungan ALT
● Fillet Patin
Σc
N =[ ( 1 ×n 1 ) + ( 0.1× n 2 ) ] × d
285
[ 2,2 ] ×10−4
129,4 ×10 4
1,3 106 CFU / g
● Bandeng presto
Σc
N =[ ( 1 ×n 1 ) + ( 0.1× n 2 ) ] × d
75
42+ 45
N =[ ( 1 ×2 ) ] × 10−4
87
N =[ ( 2 ) ] ×10− 4
43,5 × 104
4,4 ×105 CFU / g
76