Pemeriksaan Mutu

Simplisia & Metode

Penetapannya (lanjutan)
Dra. Suprihatin, M.Si
Penetapan Kadar Simplisia

A. Pe n e ta pa n Ka d a r A b u

B . Pe ne ta pa n Ka d a r C e m a ra n L o g a m B e ra t

C . Pe n e ta pa n Ka d a r C e m a ra n M i k r ob a d a n J a m u r
A. Penetapan Kadar Abu

▪ U n tu k p e n e ta pa n k ad ar a b u s u d a h d i b a h a s p a d a k u l iah m i n g g u la lu ( m a te r i s e b e l u mnya )
B. Penetapan Kadar Cemaran Logam Berat

▪ Sam pel ter cem ar ad alah s a mp el ya n g m en ga nd un g b a ha n b er bah aya , a ta u me r ugika n dan

m emb ah aya ka n ke se ha ta n a tau jiwa ma n u sia , s er ta m e ga nd un g ce ma ra n ya ng m elam paui
a m b a n g b a ta s m a k s i mal ya n g d i te ta pk an

▪ B a ta s m ak simu m me ru pa kan ko n se ntra si ma k simu m ce ma ra n log am be ra t yan g dii zink an atau

d i r e ko me nd as ika n d a n d a p a t d i te rima

▪ C e m a ra n l og a m b e ra t p a d a s i m p lisia h e r b a l a n ta ra l a i n: Ti m b a l ( Pb ) , Ka d m ium ( C d ) .

▪ Pen etap an Ka da r log am b e ra t da pa t diten tu ka n m en gg un ak an me to de Spe kt rof oto me tri

Se ra pa n Atom ( SSA ) den g an me mb an din gk an h as il pr ep ara si d e s truk si ke rin g de n gan
d e s tr u k si b a s ah
Instrumentasi Spektrofotometri Serapan Atom

▪ SSA b e r p r in sip p a d a a b s o r b s i ca h aya o l e h a to m

▪ Atom -atom me nyerap ca h aya ter s eb ut p ad a p anj ang g el om ba ng te r te ntu , t er ga nt u ng p ada

s i f a t u n s u r nya

▪ Prin si p da sa r s p e ktrof otom etri se ra pan a to m a dalah in te ra k si an ta ra ra dia si ele ktrom ag netik
dengan sampel
Instrumentasi Spektrofotometri Serapan Atom

▪ C a ra ker ja s p ek tr ofo tom et ri s erap an a to m a dal ah b e rd a sa rk an a ta s pe ng ua pa n l ar utan

s a m p e l , ke m u d ian l o g a m ya n g te r k a n du ng d i d a l a mnya d i u b a h m e n j a di a to m b e b a s

▪ Atom ter se b ut men ga b so r bs i radi a si da ri s u mb er cah aya yan g di pan ca rka n d ari la mp u ka toda
ya n g m e n g a nd u ng u n s u r ya n g a k a n d i te n tu kan

▪ B a nyak nya pe nyerap an radi a si kem udian diu ku r p ada pa nja ng gelom ba n g te r te nt u me n ur ut
j e ni s l og a mnya
Penetapan Kadar Timbal
(Pb), Kadmium (Cd),
Arsen (As), dan Raksa
(Hg)
▪ M e n u r u t P e r a t u r a n Ke p a l a B P O M R I N o m o r 1 2
Ta h u n 2014 Te n t a n g Persyaratan Mutu Obat
Tr a d i s i o n a l

➢ Batas kadar timbal (Pb) pada serbuk simplisia

adalah ≤ 10 mg /kg atau mg /L atau ppm

➢ Batas kadar kadmium (Cd) pada serbuk

simplisia adalah ≤ 0,3 mg /kg atau mg /L atau
ppm

➢ Batas kadar arsen (As) pada serbuk simplisia

adalah ≤ 5 mg /kg atau mg /L atau ppm

➢ Batas kadar raksa (Hg) pada serbuk simplisia

adalah ≤ 0,5 mg /kg atau mg /L atau ppm
Penetapan Kadar Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)

▪ Pe ny ia pa n L ar utan B a k u Ke r j a

➢ L ar utan ba ku 1 0 0 0 p pm un tuk lo gam Pb d an 1 00 0 p pm untuk log am C d di ence rk an hingga

di pe role h b aku s e ri d en gan kon s en tra si b a ku s e ri de ng an kon s en tra si 1, 2 , 5 , 6, 8 , ppm
u n tu k Pb d a n C d

▪ Pe m b u a tan Ku r va Kalibras i

➢ Ku r va k alibras i dib ua t den g an m en ghu b un gka n a nta ra ko n se ntra si d en ga n s e rap an d ari

l a r u tan b a k u l o g a m Pb d a n C d , ko n s e n tras i b a k u ya n g d i g u n ak an a d a l ah 1 , 2 , 5 , 6 , 8 p p m

▪ Va l i da s i M e to d e

➢ Valid a si metod e p eneta pa n ka da r lo ga m b e rat ti mbal d an k ad mium de ng an d estr uk si ba sah

m e l ip uti linie ritas , b a ta s d e te k s i , b atas k u a n tis a s i , a k u ra s i d an p r e s i s i
Penetapan Kadar Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)

▪ Uji Linieritas

➢ Uji linieritas metode analisis dilakukan dengan menggunakan satu seri larutan baku logam Pb dan Cd
d e n g a n ya n g b e r b e d a

➢ Ku r va k a l i b ra s i d i p e r o l e h d e n g a n m e m p l o t h u b u n g a n a n t a ra k o n s e n t ra s i d e n g a n s e ra p a n a t a u a b s o r b a n s i
ya n g t e r u k u r. S e b a g a i p a ra m e t e r a d a n ya h u b u n g a n l i n i e r d i g u n a k a n k o e f i s i e n k o l e ra s i ( r ) d a n k o e f i s e n
va r i a n s i f u n g s i r e g r e s i p a d a a n a l i s i s r e g r e s i l i n i e r y = b x + a

➢ B e r d a s a r k a n k u r va k a l i b ra s i ya n g d i p e r o l e h , d i l a k u k a n p e r h i t u n g a n d a n u j i s t a t i s t i k m e l i p u t i h o m o g e n i t a s
va r i a n s i , l i n i e r i t a s , b a t a s d e t e k s i , d a n b a t a s k u a n t i s a s i

➢ Pe n e n t u a n k e l i n i e ra n d i l a k u k a n d e n g a n m e m p l o t r e s p o n i n s t r u m e n ya n g d i n ya t a k a n d e n g a n s e ra p a n ,
d e n g a n k o n s e n t ra s l a r u t a n b a k u l o g a m P b d a n C d ya n g t e r d i r i d a r i 5 t i n g k a t k o n s e n t ra s i

➢ S a t u l e ve l k o n s e n t ra s i b a k u d i s u n t i k a n m a s i n g – m a s i n g s e b a n ya k 3 k a l i

➢ Ke m u d i a n d i p e r o l e h k u r va k a l i b ra s i d a n d i t e n t u k a n p a ra m e t e r k o r e l a s i ( r ) d a n k o e f i s i e n f u n g s i r e g r e s i
Penetapan Kadar Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)

▪ B a ta s D e te k s i d a n B a ta s Ku a n tis a s i

➢ Penentuan ba ta s d ete k si d a n ba ta s k ua nti sa si dila kuk an d enga n me ng guna ka n data dari

p e n e n tua n linie ritas

➢ Pen en tu an b ata s de tek si d an b ata s ku an ti sa si be r da sa rk an di hitu n g s e ca ra s ta ti stik d ari kur va

k a l ib ras i

▪ A k u ra s i

➢ Pa ram eter aku ra si diten tuk an de ng an m en ghitu ng pe r se n p er ole ha n kemb ali mel alui me tode
p e n a m b ah an b a k u ( s ta n d a r d a d d i ti o n me th o d ) u n tu k s a m p e l o b a t h e r b a l

➢ Pad a samp el s a b un ko sm etika , ditam ba hk an b aku loga m Pb da n Cd d enga n kons e nt ra si ya ng

d i ke ta hu i d a n d i h itun g p e r s e n p e r o l eh an ke m b a li
Penetapan Kadar Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)

▪ Presisi

➢ Presisi diukur dengan mengulang pengukuran suatu konsentrasi senyawa baku Pb dan Cd dalam produk sebanyak 6 kali

➢ Ditimbang saksama sejumlah lebih kurang ditimbang lebih kurang 1 gram sampel obat herbal, lalu dimasukkan ke dalam
labu destruksi untuk dilakukan destruksi basah dengan menggunakan campuran asam nitrat 65% dan hidrogen peroksida
30%

➢ Destruksi dilakukan dengan asam nitrat 65% sebanyak 15 ml ditambahkan ke dalam labu destruksi dan sambil
dipanaskan pada suhu lebih kurang 100oC. Proses ini dilakukan sampai hilangnya asap berwarna coklat

➢ Setelah itu larutan ditambahkan dengan hidrogen peroksida 30% sebanyak 5 ml sedikit demi sedikit sambal dilakukan
pemanasan pada suhu lebih kurang 100 derajat C

➢ Proses destruksi dihentikan sampai larutan jernih yang menandakan bahwa proses destruksi telah sempurna. Setelah
proses destruksi selesai, larutan didiamkan sampai dingin, lalu larutan dimasukan ke labu ukur 50 ml dan ditambahkan
aquabides sampai tanda batas labu ukur, kemudian larutan dihomogenkan, lalu disaring dengan menggunakan kertas
saring dan dimasukkan ke dalam vial

➢ Destruksi sampel dilakukan dua kali ulangan. Hasil pengukuran presisi dinyatakan sebagai simpangan baku relatif (SBR)
C. Penetapan Kadar Cemaran Mikroba dan Jamur

▪ Pr i n s ip p e m e r iks aa n :

➢ M e ne ntukan a d a nya m i k r o ba ya n g p a t o g en d e n g a n a na l isis m i k r obiologis

▪ Tu j u a n :

➢ M em be rika n ja mina n b ahwa ba ha n he rb al / ja mu tid ak b ole h me ng a nd un g mikr o ba p ato gen

d a n ti d a k m e n g a n d un g m ikro ba n o n p a to g e n m e l e bih i b a ta s ya n g d i te ta pka n

▪ B a ta s cem a ra n mik roo r ga ni sme ya n g d i per sya ratk an d ari s edi aa n di te ntuk an d en gan
p e n e ta pa n A n g k a L e m p e n g Total ( A LT) d a n A n g k a Ka p a n g K h a m ir ( A K K)

▪ M i k r o or ga nis me p a to g e n ya n g ti d a k b ole h a d a :

➢ P s e ud o mo na s a e r ug i no sa , S ta p hi l o co c c us a u r e u s , Cl os tr i d ia s p , S hi g el l a s p, d an S a l mon e lla
sp
Prosedur Pengujian Cemaran Mikroba

1 . A n g k a L e m p e ng To ta l ( ALT)

2 . U j i A ng k a Ka p a ng / Kha mir ( AKK)

3 . U j i C e m a ra n A f l atoks in
1. Angka Lempeng Total (ALT)

▪ An gk a L emp en g Total (ALT) m er up aka n a n gka yan g m en un juk ka n j umla h kolo ni bak te ri ae rob
m e sof ilik ya ng ter da pa t pa da p er g ram atau p un pe r milliliter s a mp el uji ya n g ditentuk an
m e l a lui m e to d e s ta n d a r

▪ A n g k a L e m p e ng To ta l m en un ju kka n j u m l a h m i k r o ba d a l a m s u a tu p r od uk

▪ Prin si p ALT ial ah m etod e ya ng dima k sud ka n u ntuk m en ghitu ng p er tum b uh an koloni bak teri
a er ob me sof il se telah s amp el dita nam p ad a le mp eng m edia p ad at d enga n c ara tua ng ( po ur
p l a te ) ya ng s el anj utnya diin ku ba si s ela m a 2 4- 48 j am p ad a s u hu 3 5 - 37° C. Di pilih nya s u hu 3 5 -
3 7° C ka re na m en ur ut C a pp u cin o ( 20 0 8 ) b ak te ri a ero b me s of ilik d ap at tum buh d e ng an b aik
p a d a s u h u te r s e b u t
Prosedur Uji Angka Lempeng Total (ALT) dan Uji Angka
Jamur (AJ)

➢ D i timb an g 1 g r s a m p e l d a n d i l a ru tka n d ala m 1 0 m L N a C l 0 , 9 % , d i a d uk h i n g g a h o mog en

➢ L ar utan samp el di sa rin g d e ng an m en g gu nak an ke r ta s sa ring dan corong ya ng telah

d i s te rilka n

➢ Di sia pka n 5 b u a h tab un g r eak si da n dila ku ka n pen ge n ce ran s am pel d ari 1 02 s am pai 1 06 .
Pa d a u j i A J s a m p a i 1 0 4

➢ D ari se tiap pen ge n ce ran dipi pe t 1 m L ke d alam ca wa n p etri s te ril , ke mu dia n ke dal am ma si ng
m a sin g cawan p etri ditua ng ka n 1 5 -2 0 m L me dia PCA (Pla te Co u nt A ga r ) ste ril u n tuk uji A LT
d a n PD A ( Po ta to D extro s e A g a r ) s te r i l u n tu k u j i A J

➢ D i h itun g kolon i b a k te ri d an j a m u r ya n g tu m b u h p a d a m e d i a

➢ Ko n tr ol : M e d i a l a r u tan N a C l 0 , 9 % d a n m e d i a s a j a
a. Media Pengujian ALT

➢ Pada pengujian mikrobiologi, bakteri dibiakkan pada bahan berisi nutrisi yang disebut media

➢ Media bisa berupa cairan seperti kaldu serta dapat pula berupa padatan seperti agar dan gelatin

➢ Fungsi dari media sendiri yaitu untuk menunjang pertumbuhan bakteri yang memiliki persyaratan nutrisi yang rumit agar dapat
tumbuh dengan optimal

➢ Adapun media yang digunakan pada pengujian ALT ialah PCA (Plate Count Agar)

➢ Masa inkubasi yang berisi biakan dilakukan dengan cara cawan petri dibalik

➢ Cara inokulasi yang dipilih adalah cara tuang, dimana hal ini dimaksudkan untuk melihat pertumbuhan bakteri aerob mesofil yang
membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya, sehingga akan teramati pertumbuhan bakteri aerob mesofil tersebut akan berada
dipermukaan lempeng agar, dikarenakan pertumbuhannya yang mencari oksigen

➢ Pada pengamatan angka lempeng total ini, koloni bakteri yang dicari atau dihitung yakni yang tumbuh di permukaan lempeng
agar

➢ Penggunaan Media PCA untuk uji ALT ini terlebih dahulu ditambahkan TTC 0.5% (trifeniltetrazolium klorida)

➢ Pengunaan TTC pada PCA ini biasanya ditambahkan sebanyak 1 ml dalam 1000 ml media PCA. TTC ini berfungsi sebagai indikator
yang akan direduksi sehingga memberikan warna pada koloni bakteri yang akan diamati, yang dapat membedakan antara koloni
bakteri dengan kotoran yang bisa saja berasal dari residu sampel yang dapat mengganggu pengamatan koloni bakteri
b. Metode Pengujian ALT

▪ Pe n g u jia n ALT m e l e wa ti d u a ta h a p p e n t i n g ya i tu ta h a p p e n g e n c e ra n d a n ta h a p p e n ca wan an

➢ Ta ha p pe ng ence ra n bia sanya dilak ukan s e ca ra desimal , yaitu 1 : 1 0, 1: 1 00 , 1 : 1 00 0 da n

s e te r u s nya

➢ L ar utan ya ng d ig u nak an un tuk pe ng en ce ran d ap at be r upa la ru ta n b u f fe r fo sf at, 0 .8 5 % N a Cl

a ta u l a r u tan r i n g e r

➢ Sela nju tnya p a d a tah ap p en ca wa na n , m eto de yang s eri ng digu n aka n yaitu m eto de hitun g
ca wa n. Prin sip d ari metod e i ni i alah s el mik ro ba yan g m a sih hid u p di tu mb uhk an p ad a m edium
a ga r, kem udia n sel mik rob a te r se b ut a ka n be rke mb a ng bi ak d an mem be ntuk koloni yang
d a p a t d i l ih at s e c a ra v i s u a l d a n ke m u d ian d i h i tun g ta n p a m e n g g u n ak an m i k r os ko p

➢ M etod e hitu ng cawan d apa t dibe dak an a ta s d ua ca ra , ya it u metod e tu an g (p ou r p la te ) d an

m e to d e s e b aran ( s p r e a d p l a te )
b. Metode Pengujian ALT

➢ U ntuk mel ap or ka n h a sil a nali si s mikr obiol ogi d en ga n c a ra hitun gan ca wa n di gun a k a n s uatu
s ta n d a r ya n g d i s e b u t Sta n d a r d Plate C o u n ts ( SPC ) ya i tu s e b a g a i b e r i k ut

➢ C awan ya ng dipilih d an hitun g a dala h yan g me ng an dun g a nta ra 30 -3 0 0 kolo ni bak te ri . H al ini
di ka ren ak an ju mla h mikr oor g ani sm e dala m sam pel tid ak diketah ui s e bel umnya , m aka un tu k
m emp er ole h s e ku ra n g- ku ra n gnya s a t u ca wa n yan g m en ga nd un g koloni dala m j umla h yang
m e m e n uh i s ya ra t te r s e b u t h a ru s d i l a kuk akn s e d e r e tan p e n g e n cera n d a n p e n ca wa na n

➢ B e be ra pa kolo ni yan g b er ga b un g me njadi s a tu m em be ntuk k um pula n kol oni be sa r, yan g ma na

j u m l ah ko l o ninya d i ra g u ka n d a p a t d i h it un g s e b a g a i s a tu ko l on i
c. Kelebihan dan Kelemahan ALT

KELEBIHAN KELEMAHAN

▪ Ke l e b i h a n d a r i u j i A LT d e n g a n m e t o d e h i t u n g ➢ Terdapat potensi koloni yang berasal dari lebih dari satu

sel mikroba, misalnya mikroba berpasangan, rantai atau
cawan: kelompok sel

➢ Sensitif untuk menghitung mikroba, karena ➢ Adanya kemungkinan pengurangan jumlah sel mikroba
yang sebenarnya
h a n ya s e l h i d u p ya n g d i h i t u n g
➢ Adanya kemungkinan untuk spesies mikroba yang tidak
➢ Selain itu b e b e ra p a jenis mikroba dapat dapat tumbuh selama masa inkubasi karena penggunaan

dihitung sekaligus serta dapat digunakan media agar, suhu, pH, dan kadar oksigen

u n t u k i s o l a s i d a n Id e n t i f i k a s i m i k r o b a s e b a g a i ➢ Memungkinkan jenis mikroba tertentu untuk tumbuh dan

koloni ya n g terbentuk dapat b e ra s a l dari menyebar di permukaan media agar, sehingga
menghalangi mikroba lain yang dapat mempengaruhi
m i k r o b a ya n g m e m i l i k i k e n a m p a k a n t e r t e n t u
proses penghitungan
Pengujian Mikrobiologi
▪ Se s uai Kep utu s a n Me nte ri Ke se ha ta n
No 6 6 1/SK / VII/ 1 9 94 ten ta ng
Pe r s ya rata n O ba t Tra d i s io nal

➢ Per sya ratan A LT p ad a o ba t tradi sio nal

d alam b en tuk raja n ga n a dal ah tid ak
le bih da ri 10^7 kolo ni / g ram
s e da ng ka n be ntuk raja ng a n a dala h
ti d a k le bih d a r i 1 0 ^ 6 ko l o ni / g ra m

➢ Per sya ratan AKK pa da oba t tra di sion al

d alam be ntuk raj an ga n dan s er buk
a dal ah tidak l ebih d a ri 1 0^ 4
ko l o ni / g ra m
2. Uji Angka Kapang atau Khamir (AKK)

▪ Uji A n gka Kap a ng atau Kha mir a dala h sal ah s a tu p ara meter s ya rat m u tu p r od uk b a kteri yan g
d i te ta pk an s e s u a i M e to d e A n a l isis ( M A )

▪ Tu j u a n p e n g u j ian i n i a d a l a h u n tu k m e n e n t uka n AKK p a d a s e d i a a n kos m etik p ele mba b m uk a

▪ Kap an g me rup ak an ce n dawa n yan g b er sif at m ulti selule r d an tum bu h me mb en tuk f ilame n
b er cab an g yan g di se bu t hif a , ti ap s el m emiliki i nti / n ukl ei yan g i den tik da n tum bu h dalam
ko l o ni s e b a g a i s a tu o r g a n i s me

▪ Kh amir i ala h ce n dawan b er s el t un g ga l yan g be r wa rn a p uti h, s e d an gka n k ap an g dapat

b e r wa r n a h i j a u , o ra nye , h i ta m , co kla t, p i n k , a ta u u n g u

▪ Kap an g b er ep r od uk si se ca ra a s ek su al a ta up u n sek s ual m elalui s p o ra , se dan gk an kh amir

tum b uh m e l a lui m i to s is a ta u p e m b e lah an

▪ Ka p a n g d a n k h a m ir m e r u p a kan p e nye b ab p e m b u s u kan s i m p lis ia a ta u m a k a n an

Prinsip Uji AKK
▪ Salah satu parameter keamanan sampel
s i m p l i s i a a d a l a h A n g k a Ka p a n g / K h a m i r ( A K K )

▪ Prinsip uji AKK adalah pertumbuhan kapang

atau khamir setelah sampel diinokulasi pada
media yang sesuai dan pada suhu 20 – 25
derajat C, yang diamati pada hari ke tiga hari
ke-5

▪ Media yang digunakan antara lain: SDA

(Saboraod Dextrose Agar), PDA (Patato
Dextrosa Agar) dan lain-lain.

▪ Setelah diinkubasi, kemudian dihitung koloni

yang tumbuh pada media dengan colony
counter

▪ Penetapan AKK dinyatakan dengan koloni /ml

3. Uji Cemaran Aflatoksin

▪ Af latok sin adal ah s enya wa o r ga nik h a sil me ta boli sme s ek un de r da ri ja mu r A sp e r gi l lu s s p,

ya n g m e m p u nyai s if at tok sik ( ra cu n ) b a g i ke s e h a tan m a n u s i a a ta u h e wa n

▪ Af latok sin palin g se rin g me ra cu ni ba han pa n ga n sep er ti be ra s , ja g un g , k a ca ng ta na h, dan

ke d e lai

▪ Af latok sin me r upa ka n cem a ra n alami ya ng dih a silk an oleh beb e ra pa s pe sie s da ri fu ngi
A sp er gillus ya ng ba nyak di tem uk an di d ae ra h b eriklim p ana s da n lem ba p, te r uta ma p ada
s u h u 2 7 - 4 0 ° C ( 8 0 - 1 0 4 ° F ) d a n ke l e mb ap an r e l a tif 8 5 %

▪ Af latok sin me r upa ka n mikoto k sin be ra cu n , m en gan d un g sifa t h ep atotok sik yan g m er u sa k
h ati ; h ep atok ar si no ge nik ya ng menye ba bk an k anker ha ti; m utag enik yan g m enyeb ab kan
p e r ub a han g e ne tik p e r m a n en ; d a n b e r s i fa t te ra to ge nik yan g m e ni m bulkan ke l ainan a na tom is
Struktur Kimia Aflatoksin
▪ Sp e sie s As pe rgillu s yan g palin g b anyak
di tem uk an ad ala h A s pe rg i l lu s f lavu s
ya ng me mp ro d uk si af la tok si n B, da n
A sp e rg i l u s pa ra s i ti c u s me ng ha silk an
a f l atok sin B d a n G

▪ Sem en ta ra i tu , af la to k sin M 1 da n M2
m er up aka n me ta bolit ha sil hi d rok sila si
af la to k sin B1 dan B2 oleh s ito kr om
p 4 50 1 A 2 pad a ma nu sia a ta u he wa n
ya ng me ng on s um si maka na n yang
te r ce m ar a f l a to ks in

▪ Af latok sin M dij um pai dalam air s u s u

dan urin
Uji Aflatoksin

▪ A n a lis is a f l a to ks in d a l a m s a m p e l b is a d ilaku ka n d e n g a n u j i :

➢ K r om a tog raf i L a p i s Ti p i s D e n s i tome tri ( KLT D en s itom etr i )

➢ K r o m a tog raf i C a i r K i n er ja Ti n g g i ( KC KT)

➢ E n z yme L i n ke d I mmu n o s o r b e n t A s s ay ( E L ISA )

▪ Pr e p a ra si sa mp el a f l a to ks in b e r va ria si b e rg an tu ng p a d a m e t o d e a na l isisnya

▪ Se ca ra um um , ek strak si af la tok si n da ri s am pel dilak uka n me ng g un aka n p ela ru t or ganik

s e p e r ti k l o r of or m , m e ta n o l , a s e to n , a s e to n itril , d a n b e n ze n
a. Kromatografi Lapis Tipis Densitometri (KLT
Densitometri)

▪ K LT d e n s i tom etr i m e r u p a kan m e to d e a n a l is is ya n g m a s i h d i m a nfa atkan h i n g g a s a a t i n i

▪ Analisi s af latok sin dilak uka n men g gu nak an fa se diam l emp eng KLT sili ca gel 6 0 F2 5 4 ukura n
2 0 1 0 c m d e n g a n f a s e g e ra k k l o r ofo rm -e til a s etat ( 7 : 3 )

▪ D ete k si da n k ua ntit a si dila k sa nak an me ng g un aka n al at p emin dai K LT de n sitom etri , de tek tor
f l u o re s en si , p a d a p a n j a n g g e l o m ba ng e k s i tas i m a k s i mu m 3 5 4 n m d a n e m i s i 4 0 0 n m

▪ M etod e ini me mp unyai ba ta s de tek si (limit of d ete ctio n, LO D) untuk af l ato k sin B 1 s eb e sar
9 , 6 2 p g d a n u n t u k a f l atok sin G 1 s e b e s a r 1 0 , 9 p g

▪ Sem en ta ra itu , b ata s ku an tita si (limit o f q ua ntitatio n, LO Q) u ntuk af lato k sin B 1 da n G1

m a s i n g -m as ing s e b e s a r 3 2 , 0 8 p g d a n 3 6 , 4 1 p g
b. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT)

▪ An alisi s af la to k sin d en ga n KCK T dila k uk a n de nga n m en gg un ak an si s te m KCKT fa s e te rb alik

d e n g a n ko n d i s i s e b a g a i b e r i ku t:

➢ Kolom silika ya ng terik at d en ga n C - 18 p a nja n g 1 5 cm , f a se gerak ai r - metan ol - a se to nitril

( 5 0 :4 0 :1 0) , ke c ep a t a n alir 0 ,8 ml / meni t, s u h u r u an g , volum e i nje k si 1 0 µl pa da kon s en trasi
0 , 0 4 4 m g / m l , d a n d e te k tor f l u o re s ens i

➢ Panja ng g elom ba ng e k sita si ma k simum d an p anja ng gelom bang emi si untuk d ete ktor
f l u o re s en si a d alah 3 6 5 n m d a n 4 5 5 n m
c. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)

▪ Prin si p da s ar E LISA a dalah an alisi s inte rak si an ta ra a ntig en da n a ntib odi ya ng te ra d so rp si

s e ca ra p a sif p a d a pe rm uka an p ad at d en g an me ng g un ak an ko nj uga t an tibo di atau a ntigen
ya n g d i l ab el e n z i m

▪ H a s i l d a r i E L ISA a d a l a h s u a tu wa r n a s e b a g a i h a s i l r e a k s i a n ta ra e n z i m d a n s u b s tra t

▪ War na yan g di ha silka n d ap at dii de ntif ik a si se ca ra ka s at m ata d an d ib a ca s e ca ra ku an titatif

m e ng g una ka n EL ISA p l a te r e a d e r a t a u s p e k tr o fotom ete r k anal g a nd a

▪ Pem ba caa n ini mem un gkin ka n d ata dip er ole h d en ga n ce pa t, dap at di simp an d an dia nali sis
s e ca ra s ta ti s tik

▪ Rea k si s pe sif ik an ta ra antig en da n a nti bo di , wak tu a nali si s yan g cep at , da n d a pa t dig u nak an
u n tuk me nde tek si s ampel tu ng gal m au pu n ba nya k sek aligus m er up ak an ke un gg ulan
p e n g g u n aa n E L I S A s e b a g a i te k n i k a n a l is is
TUGAS MANDIRI

▪ Jelaskan cara penetapan kadar abu pada simplisia tanaman

▪ Jelaskan cara pengujian af latoksin pada simplisia yang berbentuk jamu

▪ Jelaskan cara menguji logam berat Kadm ium (Cd) dan T imbal (Pb ) pada si mplisia yang
akan dibuat menjadi bahan obat minum

▪ Tugas diketik rapi, dilengkapi dengan gambar bila diperlukan

▪ Tugas dikum pulkan m elalui Web Kuliah yang akan saya buka dari tanggal 1 5 – 2 6
November 2021
Terimakasih