Pemeriksaan Mutu Simplisia Metode Penetapannya (Lanjutan)
Pemeriksaan Mutu Simplisia Metode Penetapannya (Lanjutan)
Pemeriksaan Mutu Simplisia Metode Penetapannya (Lanjutan)
A. Pe n e ta pa n Ka d a r A b u
B . Pe ne ta pa n Ka d a r C e m a ra n L o g a m B e ra t
C . Pe n e ta pa n Ka d a r C e m a ra n M i k r ob a d a n J a m u r
A. Penetapan Kadar Abu
▪ U n tu k p e n e ta pa n k ad ar a b u s u d a h d i b a h a s p a d a k u l iah m i n g g u la lu ( m a te r i s e b e l u mnya )
B. Penetapan Kadar Cemaran Logam Berat
▪ C e m a ra n l og a m b e ra t p a d a s i m p lisia h e r b a l a n ta ra l a i n: Ti m b a l ( Pb ) , Ka d m ium ( C d ) .
▪ Prin si p da sa r s p e ktrof otom etri se ra pan a to m a dalah in te ra k si an ta ra ra dia si ele ktrom ag netik
dengan sampel
Instrumentasi Spektrofotometri Serapan Atom
▪ Atom ter se b ut men ga b so r bs i radi a si da ri s u mb er cah aya yan g di pan ca rka n d ari la mp u ka toda
ya n g m e n g a nd u ng u n s u r ya n g a k a n d i te n tu kan
▪ B a nyak nya pe nyerap an radi a si kem udian diu ku r p ada pa nja ng gelom ba n g te r te nt u me n ur ut
j e ni s l og a mnya
Penetapan Kadar Timbal
(Pb), Kadmium (Cd),
Arsen (As), dan Raksa
(Hg)
▪ M e n u r u t P e r a t u r a n Ke p a l a B P O M R I N o m o r 1 2
Ta h u n 2014 Te n t a n g Persyaratan Mutu Obat
Tr a d i s i o n a l
▪ Pe ny ia pa n L ar utan B a k u Ke r j a
▪ Pe m b u a tan Ku r va Kalibras i
▪ Va l i da s i M e to d e
▪ Uji Linieritas
➢ Uji linieritas metode analisis dilakukan dengan menggunakan satu seri larutan baku logam Pb dan Cd
d e n g a n ya n g b e r b e d a
➢ Ku r va k a l i b ra s i d i p e r o l e h d e n g a n m e m p l o t h u b u n g a n a n t a ra k o n s e n t ra s i d e n g a n s e ra p a n a t a u a b s o r b a n s i
ya n g t e r u k u r. S e b a g a i p a ra m e t e r a d a n ya h u b u n g a n l i n i e r d i g u n a k a n k o e f i s i e n k o l e ra s i ( r ) d a n k o e f i s e n
va r i a n s i f u n g s i r e g r e s i p a d a a n a l i s i s r e g r e s i l i n i e r y = b x + a
➢ B e r d a s a r k a n k u r va k a l i b ra s i ya n g d i p e r o l e h , d i l a k u k a n p e r h i t u n g a n d a n u j i s t a t i s t i k m e l i p u t i h o m o g e n i t a s
va r i a n s i , l i n i e r i t a s , b a t a s d e t e k s i , d a n b a t a s k u a n t i s a s i
➢ Pe n e n t u a n k e l i n i e ra n d i l a k u k a n d e n g a n m e m p l o t r e s p o n i n s t r u m e n ya n g d i n ya t a k a n d e n g a n s e ra p a n ,
d e n g a n k o n s e n t ra s l a r u t a n b a k u l o g a m P b d a n C d ya n g t e r d i r i d a r i 5 t i n g k a t k o n s e n t ra s i
➢ S a t u l e ve l k o n s e n t ra s i b a k u d i s u n t i k a n m a s i n g – m a s i n g s e b a n ya k 3 k a l i
➢ Ke m u d i a n d i p e r o l e h k u r va k a l i b ra s i d a n d i t e n t u k a n p a ra m e t e r k o r e l a s i ( r ) d a n k o e f i s i e n f u n g s i r e g r e s i
Penetapan Kadar Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)
▪ B a ta s D e te k s i d a n B a ta s Ku a n tis a s i
▪ A k u ra s i
➢ Pa ram eter aku ra si diten tuk an de ng an m en ghitu ng pe r se n p er ole ha n kemb ali mel alui me tode
p e n a m b ah an b a k u ( s ta n d a r d a d d i ti o n me th o d ) u n tu k s a m p e l o b a t h e r b a l
▪ Presisi
➢ Presisi diukur dengan mengulang pengukuran suatu konsentrasi senyawa baku Pb dan Cd dalam produk sebanyak 6 kali
➢ Ditimbang saksama sejumlah lebih kurang ditimbang lebih kurang 1 gram sampel obat herbal, lalu dimasukkan ke dalam
labu destruksi untuk dilakukan destruksi basah dengan menggunakan campuran asam nitrat 65% dan hidrogen peroksida
30%
➢ Destruksi dilakukan dengan asam nitrat 65% sebanyak 15 ml ditambahkan ke dalam labu destruksi dan sambil
dipanaskan pada suhu lebih kurang 100oC. Proses ini dilakukan sampai hilangnya asap berwarna coklat
➢ Setelah itu larutan ditambahkan dengan hidrogen peroksida 30% sebanyak 5 ml sedikit demi sedikit sambal dilakukan
pemanasan pada suhu lebih kurang 100 derajat C
➢ Proses destruksi dihentikan sampai larutan jernih yang menandakan bahwa proses destruksi telah sempurna. Setelah
proses destruksi selesai, larutan didiamkan sampai dingin, lalu larutan dimasukan ke labu ukur 50 ml dan ditambahkan
aquabides sampai tanda batas labu ukur, kemudian larutan dihomogenkan, lalu disaring dengan menggunakan kertas
saring dan dimasukkan ke dalam vial
➢ Destruksi sampel dilakukan dua kali ulangan. Hasil pengukuran presisi dinyatakan sebagai simpangan baku relatif (SBR)
C. Penetapan Kadar Cemaran Mikroba dan Jamur
▪ Pr i n s ip p e m e r iks aa n :
▪ Tu j u a n :
▪ B a ta s cem a ra n mik roo r ga ni sme ya n g d i per sya ratk an d ari s edi aa n di te ntuk an d en gan
p e n e ta pa n A n g k a L e m p e n g Total ( A LT) d a n A n g k a Ka p a n g K h a m ir ( A K K)
▪ M i k r o or ga nis me p a to g e n ya n g ti d a k b ole h a d a :
➢ P s e ud o mo na s a e r ug i no sa , S ta p hi l o co c c us a u r e u s , Cl os tr i d ia s p , S hi g el l a s p, d an S a l mon e lla
sp
Prosedur Pengujian Cemaran Mikroba
1 . A n g k a L e m p e ng To ta l ( ALT)
3 . U j i C e m a ra n A f l atoks in
1. Angka Lempeng Total (ALT)
▪ An gk a L emp en g Total (ALT) m er up aka n a n gka yan g m en un juk ka n j umla h kolo ni bak te ri ae rob
m e sof ilik ya ng ter da pa t pa da p er g ram atau p un pe r milliliter s a mp el uji ya n g ditentuk an
m e l a lui m e to d e s ta n d a r
▪ A n g k a L e m p e ng To ta l m en un ju kka n j u m l a h m i k r o ba d a l a m s u a tu p r od uk
▪ Prin si p ALT ial ah m etod e ya ng dima k sud ka n u ntuk m en ghitu ng p er tum b uh an koloni bak teri
a er ob me sof il se telah s amp el dita nam p ad a le mp eng m edia p ad at d enga n c ara tua ng ( po ur
p l a te ) ya ng s el anj utnya diin ku ba si s ela m a 2 4- 48 j am p ad a s u hu 3 5 - 37° C. Di pilih nya s u hu 3 5 -
3 7° C ka re na m en ur ut C a pp u cin o ( 20 0 8 ) b ak te ri a ero b me s of ilik d ap at tum buh d e ng an b aik
p a d a s u h u te r s e b u t
Prosedur Uji Angka Lempeng Total (ALT) dan Uji Angka
Jamur (AJ)
➢ Di sia pka n 5 b u a h tab un g r eak si da n dila ku ka n pen ge n ce ran s am pel d ari 1 02 s am pai 1 06 .
Pa d a u j i A J s a m p a i 1 0 4
➢ D ari se tiap pen ge n ce ran dipi pe t 1 m L ke d alam ca wa n p etri s te ril , ke mu dia n ke dal am ma si ng
m a sin g cawan p etri ditua ng ka n 1 5 -2 0 m L me dia PCA (Pla te Co u nt A ga r ) ste ril u n tuk uji A LT
d a n PD A ( Po ta to D extro s e A g a r ) s te r i l u n tu k u j i A J
➢ D i h itun g kolon i b a k te ri d an j a m u r ya n g tu m b u h p a d a m e d i a
➢ Ko n tr ol : M e d i a l a r u tan N a C l 0 , 9 % d a n m e d i a s a j a
a. Media Pengujian ALT
➢ Pada pengujian mikrobiologi, bakteri dibiakkan pada bahan berisi nutrisi yang disebut media
➢ Media bisa berupa cairan seperti kaldu serta dapat pula berupa padatan seperti agar dan gelatin
➢ Fungsi dari media sendiri yaitu untuk menunjang pertumbuhan bakteri yang memiliki persyaratan nutrisi yang rumit agar dapat
tumbuh dengan optimal
➢ Adapun media yang digunakan pada pengujian ALT ialah PCA (Plate Count Agar)
➢ Masa inkubasi yang berisi biakan dilakukan dengan cara cawan petri dibalik
➢ Cara inokulasi yang dipilih adalah cara tuang, dimana hal ini dimaksudkan untuk melihat pertumbuhan bakteri aerob mesofil yang
membutuhkan oksigen dalam pertumbuhannya, sehingga akan teramati pertumbuhan bakteri aerob mesofil tersebut akan berada
dipermukaan lempeng agar, dikarenakan pertumbuhannya yang mencari oksigen
➢ Pada pengamatan angka lempeng total ini, koloni bakteri yang dicari atau dihitung yakni yang tumbuh di permukaan lempeng
agar
➢ Penggunaan Media PCA untuk uji ALT ini terlebih dahulu ditambahkan TTC 0.5% (trifeniltetrazolium klorida)
➢ Pengunaan TTC pada PCA ini biasanya ditambahkan sebanyak 1 ml dalam 1000 ml media PCA. TTC ini berfungsi sebagai indikator
yang akan direduksi sehingga memberikan warna pada koloni bakteri yang akan diamati, yang dapat membedakan antara koloni
bakteri dengan kotoran yang bisa saja berasal dari residu sampel yang dapat mengganggu pengamatan koloni bakteri
b. Metode Pengujian ALT
➢ Sela nju tnya p a d a tah ap p en ca wa na n , m eto de yang s eri ng digu n aka n yaitu m eto de hitun g
ca wa n. Prin sip d ari metod e i ni i alah s el mik ro ba yan g m a sih hid u p di tu mb uhk an p ad a m edium
a ga r, kem udia n sel mik rob a te r se b ut a ka n be rke mb a ng bi ak d an mem be ntuk koloni yang
d a p a t d i l ih at s e c a ra v i s u a l d a n ke m u d ian d i h i tun g ta n p a m e n g g u n ak an m i k r os ko p
➢ U ntuk mel ap or ka n h a sil a nali si s mikr obiol ogi d en ga n c a ra hitun gan ca wa n di gun a k a n s uatu
s ta n d a r ya n g d i s e b u t Sta n d a r d Plate C o u n ts ( SPC ) ya i tu s e b a g a i b e r i k ut
➢ C awan ya ng dipilih d an hitun g a dala h yan g me ng an dun g a nta ra 30 -3 0 0 kolo ni bak te ri . H al ini
di ka ren ak an ju mla h mikr oor g ani sm e dala m sam pel tid ak diketah ui s e bel umnya , m aka un tu k
m emp er ole h s e ku ra n g- ku ra n gnya s a t u ca wa n yan g m en ga nd un g koloni dala m j umla h yang
m e m e n uh i s ya ra t te r s e b u t h a ru s d i l a kuk akn s e d e r e tan p e n g e n cera n d a n p e n ca wa na n
KELEBIHAN KELEMAHAN
➢ Sensitif untuk menghitung mikroba, karena ➢ Adanya kemungkinan pengurangan jumlah sel mikroba
yang sebenarnya
h a n ya s e l h i d u p ya n g d i h i t u n g
➢ Adanya kemungkinan untuk spesies mikroba yang tidak
➢ Selain itu b e b e ra p a jenis mikroba dapat dapat tumbuh selama masa inkubasi karena penggunaan
dihitung sekaligus serta dapat digunakan media agar, suhu, pH, dan kadar oksigen
▪ Uji A n gka Kap a ng atau Kha mir a dala h sal ah s a tu p ara meter s ya rat m u tu p r od uk b a kteri yan g
d i te ta pk an s e s u a i M e to d e A n a l isis ( M A )
▪ Kap an g me rup ak an ce n dawa n yan g b er sif at m ulti selule r d an tum bu h me mb en tuk f ilame n
b er cab an g yan g di se bu t hif a , ti ap s el m emiliki i nti / n ukl ei yan g i den tik da n tum bu h dalam
ko l o ni s e b a g a i s a tu o r g a n i s me
▪ Af latok sin me r upa ka n cem a ra n alami ya ng dih a silk an oleh beb e ra pa s pe sie s da ri fu ngi
A sp er gillus ya ng ba nyak di tem uk an di d ae ra h b eriklim p ana s da n lem ba p, te r uta ma p ada
s u h u 2 7 - 4 0 ° C ( 8 0 - 1 0 4 ° F ) d a n ke l e mb ap an r e l a tif 8 5 %
▪ Af latok sin me r upa ka n mikoto k sin be ra cu n , m en gan d un g sifa t h ep atotok sik yan g m er u sa k
h ati ; h ep atok ar si no ge nik ya ng menye ba bk an k anker ha ti; m utag enik yan g m enyeb ab kan
p e r ub a han g e ne tik p e r m a n en ; d a n b e r s i fa t te ra to ge nik yan g m e ni m bulkan ke l ainan a na tom is
Struktur Kimia Aflatoksin
▪ Sp e sie s As pe rgillu s yan g palin g b anyak
di tem uk an ad ala h A s pe rg i l lu s f lavu s
ya ng me mp ro d uk si af la tok si n B, da n
A sp e rg i l u s pa ra s i ti c u s me ng ha silk an
a f l atok sin B d a n G
▪ Sem en ta ra i tu , af la to k sin M 1 da n M2
m er up aka n me ta bolit ha sil hi d rok sila si
af la to k sin B1 dan B2 oleh s ito kr om
p 4 50 1 A 2 pad a ma nu sia a ta u he wa n
ya ng me ng on s um si maka na n yang
te r ce m ar a f l a to ks in
▪ A n a lis is a f l a to ks in d a l a m s a m p e l b is a d ilaku ka n d e n g a n u j i :
▪ Pr e p a ra si sa mp el a f l a to ks in b e r va ria si b e rg an tu ng p a d a m e t o d e a na l isisnya
▪ Analisi s af latok sin dilak uka n men g gu nak an fa se diam l emp eng KLT sili ca gel 6 0 F2 5 4 ukura n
2 0 1 0 c m d e n g a n f a s e g e ra k k l o r ofo rm -e til a s etat ( 7 : 3 )
▪ D ete k si da n k ua ntit a si dila k sa nak an me ng g un aka n al at p emin dai K LT de n sitom etri , de tek tor
f l u o re s en si , p a d a p a n j a n g g e l o m ba ng e k s i tas i m a k s i mu m 3 5 4 n m d a n e m i s i 4 0 0 n m
▪ M etod e ini me mp unyai ba ta s de tek si (limit of d ete ctio n, LO D) untuk af l ato k sin B 1 s eb e sar
9 , 6 2 p g d a n u n t u k a f l atok sin G 1 s e b e s a r 1 0 , 9 p g
➢ Panja ng g elom ba ng e k sita si ma k simum d an p anja ng gelom bang emi si untuk d ete ktor
f l u o re s en si a d alah 3 6 5 n m d a n 4 5 5 n m
c. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)
▪ H a s i l d a r i E L ISA a d a l a h s u a tu wa r n a s e b a g a i h a s i l r e a k s i a n ta ra e n z i m d a n s u b s tra t
▪ Pem ba caa n ini mem un gkin ka n d ata dip er ole h d en ga n ce pa t, dap at di simp an d an dia nali sis
s e ca ra s ta ti s tik
▪ Rea k si s pe sif ik an ta ra antig en da n a nti bo di , wak tu a nali si s yan g cep at , da n d a pa t dig u nak an
u n tuk me nde tek si s ampel tu ng gal m au pu n ba nya k sek aligus m er up ak an ke un gg ulan
p e n g g u n aa n E L I S A s e b a g a i te k n i k a n a l is is
TUGAS MANDIRI
▪ Jelaskan cara menguji logam berat Kadm ium (Cd) dan T imbal (Pb ) pada si mplisia yang
akan dibuat menjadi bahan obat minum
▪ Tugas dikum pulkan m elalui Web Kuliah yang akan saya buka dari tanggal 1 5 – 2 6
November 2021
Terimakasih