Endah Nurrohwinta Djuwarno
Endah Nurrohwinta Djuwarno
Endah Nurrohwinta Djuwarno
SKRIPSI
Oleh :
ENDAH NURROHWINTA DJUWARNO
08613180
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat mencapai gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Islam Indonesia
Oleh :
ENDAH NURROHWINTA DJUWARNO
08613180
i
SKRIPSI
Oleh :
ii
iii
PERNYATAAN
Dengan ini saya menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya
yang pernah diajukan untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu Perguruan
Tinggi dan sepanjang pengetahuan saya, juga tidak terdapat karya atau pendapat
yang pernah ditulis atau diterbitkan oleh orang lain kecuali yang secara tertulis
diacu dalam naskah ini dan diterbitkan dalam daftar pustaka.
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
Adik tercinta :
Arif Rahman Wicaksono Djuwarno
E.N.D.
v
KATA PENGANTAR
vi
waktu, tenaga, pikiran, semangat, kerjasama dan semuanya yang telah kalian
berikan.
5. Teman, keluarga yang telah mendoakan serta semua pihak yang tidak bisa
saya sebutkan satu persatu yang telah membantu terlaksananya penelitian ini.
Penulis berdoa semoga Allah S.W.T. membalas dengan kebaikan dan
keberkahan. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan saran dan kritik yang bersifat membangun
dari semua pihak. Akhirnya besar harapan penulis semoga skripsi ini dapat
memberikan manfaat dan dapat dipergunakan oleh berbagai pihak yang
berkepentingan serta dapat memberikan sumbangan bagi kemajuan keilmuan
farmasi. Amin.
Wassalamu’alaikum Wr. Wb.
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL........................................................................................ i
HALAMAN PENGESAHAN PEMBIMBING ............................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN PENGUJI ....................................................... iii
HALAMAN PERNYATAAN ........................................................................ iv
HALAMAN PERSEMBAHAN ..................................................................... v
KATA PENGANTAR .................................................................................... vi
DAFTAR ISI ................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... x
DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi
DAFTAR PERSAMAAN ................................................................................ xii
DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. xiii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiv
INTISARI ........................................................................................................ xv
ABSTRACT ...................................................................................................... xvi
BAB I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah ............................................................... 1
B. Perumusan Masalah ...................................................................... 4
C. Tujuan Penelitian .......................................................................... 4
D. Manfaat Penelitian ....................................................................... 4
BAB II. STUDI PUSTAKA
A. Tinjauan Pustaka .......................................................................... 5
1. Kangkung Darat ..................................................................... 5
2. Standardisasi ........................................................................... 6
3. Metode Ekstraksi ..................................................................... 8
4. Spektrofotometri Serapan Atom ........................................... 9
5. Kromatografi .......................................................................... 12
6. Antioksidan ............................................................................. 15
7. Karotenoid ............................................................................... 15
B.Keterangan Empirik ...................................................................... 17
viii
BAB III. METODE PENELITIAN
A. Alat dan Bahan ............................................................................. 18
B. Cara Penelitian ............................................................................. 19
1. Pengambilan dan Determinasi Sampel .................................... 19
2. Ekstraksi Sampel ..................................................................... 19
3. Parameter Spesifik .................................................................. 20
a. Deskripsi Tanaman ........................................................... 20
b. Organoleptik ..................................................................... 20
c. Pola Kromatogram dan Pengukuran Kadar Senyawa
Marker .............................................................................. 20
4. Parameter Nonspesifik ........................................................... 20
a. Bobot Jenis ....................................................................... 20
b. Kadar Air ......................................................................... 21
c. Kadar Abu ....................................................................... 21
d. Cemaran Logam ................................................................ 22
e. Cemaran Mikroba .............................................................. 23
f. Cemaran Kapang dan Khamir............................................ 24
g. Uji Perkiraan Angka Koliform .......................................... 24
h. Uji Sisa Pelarut Etanol ...................................................... 25
C. Analisis Hasil ............................................................................. 27
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Tanaman .................................................................. 28
B. Preparasi Sampel .......................................................................... 28
C. Ekstraksi Sampel .......................................................................... 29
D. Parameter Spesifik ........................................................................ 30
E. Parameter Nonspesifik................................................................... 34
F. Hasil Standardisasi......................................................................... 40
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan .................................................................................. 42
B. Saran ............................................................................................. 42
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 43
LAMPIRAN .................................................................................................... 46
ix
DAFTAR GAMBAR
x
DAFTAR TABEL
xi
DAFTAR PERSAMAAN
xii
DAFTAR SINGKATAN
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
xiv
STANDARDISASI EKSTRAK ETANOLIK
KANGKUNG DARAT ( Ipomoea reptans Poir ) BERDASARKAN
PADA PARAMETER SPESIFIK DAN NONSPESIFIK
INTISARI
xv
STANDARDIZATION ETHANOLIC EXTRACT
OF Ipomoea reptans Poir BASED ON
THE SPECIFIC AND NONSPECIFIC PARAMETERS
ABSTRACT
xvi
BAB I
PENDAHULUAN
Saat ini penggunaan obat herbal banyak diminati oleh masyarakat. Isu
tentang back to nature sekarang sedang banyak dilirik masyarakat. Masyarakat
beranggapan bahwa penggunaan obat herbal pasti aman dan tidak memiliki efek
samping. Di samping itu banyak anggapan bahwa penggunaan obat herbal yang
berlebihan tidak akan memberikan dampak yang berbahaya sebab obat herbal
merupakan obat alami yang tidak berasal dari bahan kimia. Anggapan masyarakat
yang seperti ini perlu diluruskan bahwa obat herbal juga memiliki kandungan
kimia yang nantinya berefek farmakologi atau berkhasiat pada tubuh. Seperti
layaknya obat sintesis, kandungan kimia yang terkandung dalam ekstrak obat
herbal perlu mendapatkan standardisasi agar memiliki mutu yang terukur sehingga
menjamin keamanan dan efikasinya pada masyarakat1.
Badan Pengawasan Obat dan Makanan (BPOM) menggolongkan bahan
obat alam menjadi tiga kategori yaitu obat tradisional empirik atau jamu, obat
herbal terstandar (OHT), dan fitofarmaka. Kriteria jamu adalah aman sesuai
persyaratan yang telah ditetapkan, belum pernah dilakukan standardisasi, dan
klaim khasiat jamu dibuktikan dengan data empirik. Kriteria obat herbal terstandar
(OHT) adalah aman, sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan, telah dilakukan
standardisasi terhadap bahan baku yang digunakan dalam produk jadi, dan
pembuktian khasiat OHT adalah secara praklinik. Kriteria fitofarmaka adalah
aman, sesuai dengan persyaratan yang ditetapkan, telah dilakukan standardisasi
terhadap bahan baku yang digunakan dalam produk jadi, dan pembuktian khasiat
fitofarmaka adalah secara praklinik dan klinik. Sebagai upaya peningkatan
kualitas obat tradisional menjadi bentuk fitofarmaka, suatu ekstrak herbal perlu
distandardisasi menjadi obat herbal terstandar (OHT) sebelum menjadi
fitofarmaka2.
1
2
kangkung baru dikenal sebagai tanaman sayur dan belum banyak yang
mengetahui khasiat kangkung. Sehingga penelitian ini perlu dilakukan untuk
dapat melengkapi data standardisasi ekstrak herbal khususnya kangkung darat
(Ipomoea reptans Poir).
4
B. Perumusan Masalah
1. Bagaimana nilai parameter spesifik dan nonspesifik standardisasi ekstrak
kangkung darat ?
2. Apakah standardisasi ekstrak kangkung darat memenuhi standar yang
ditetapkan BPOM atau acuan lainnya?
C. Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui nilai parameter spesifik dan nonspesifik standardisasi
ekstrak kangkung darat.
2. Untuk mengetahui bahwa standardisasi ekstrak kangkung darat memenuhi
standar yang ditetapkan BPOM atau acuan lainnya.
D. Manfaat Penelitian
Penelitian ini diharapkan dapat melengkapi data standardisasi ekstrak
herbal khususnya kangkung darat (Ipomoea reptans Poir) serta dapat segera
dilakukan uji praklinik dan klinik sehingga pada akhirnya dapat diketahui efikasi
dan keamanan dari ekstrak kangkung darat yang terstandar.
BAB II
STUDI PUSTAKA
A. Tinjauan Pustaka
1. Kangkung Darat
a. Deskripsi tanaman
Kangkung darat yang bernama latin Ipomoea reptans Poir
yang biasa tumbuh ditempat basah, rawa, dataran rendah sampai
dataran dengan ketinggian 1000 meter dari permukaan laut biasa
dimanfaatkan untuk sayur-sayuran. Tumbuhan ini berwarna hijau,
tumbuh menjalar, batang berbentuk bulat, beruas dan berongga. Daun
kangkung bertangkai panjang dan letaknya berselang-seling.
Permukaan daun berwarna hijau tua, sedang bagian bawah berwarna
hijau muda. Daun dan batang kangkung dimakan sebagai sayuran dan
lalapan9. Tanaman kangkung darat ditunjukkan oleh gambar 1.
b. Kandungan kimia
Kandungan kimia kangkung adalah protein, mineral, (kalsium,
fosfor, besi), vitamin (A, B 1 , C, karotenoid), hentriakontan, dan
sitosterol9. Kangkung darat memiliki vitamin C paling tinggi
dibandingkan dengan akar kiambang (Salvinia cuculata), Kastanye
(Trapa natans), dan mata lele (Lemna minor)10. Vitamin C adalah agen
antioksidan yang merupakan senyawa yang dapat melindungi sel
terhadap radikal bebas. Tingginya radikal bebas dan menurunnya
5
6
Kingdom : Plantae
Subkingdom : Tracheobionta
Superdivisi : Spermathopyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub-kelas : Asteridae
Ordo : Solanales
Familia : Convolvulaceae
Genus : Ipomoea
Spesies : Ipomoea reptans Poir.
2. Standardisasi
Standardisasi dalam kefarmasian adalah serangkaian parameter,
prosedur, dan cara pengukuran yang hasilnya merupakan unsur-unsur
terkait paradigma mutu kefarmasian yaitu memenuhi syarat standar dalam
aspek kimia, biologi, dan farmasi. Pengertian standardisasi juga berarti
proses menjamin bahwa produk obat ataupun ekstrak mempunyai nilai
parameter yang konstan. Salah satu tujuan standardisasi adalah
memberikan data kandungan kimia yang nantinya dapat dijadikan sebagai
senyawa yang bertanggungjawab dalam efek farmakologis. Ruang lingkup
standardisasi berupa parameter spesifik dan parameter nonspesifik3.
Parameter spesifik adalah aspek yang terkait dengan kandungan
kimia baik secara kualitatif dan kuantitatif yang bertanggungjawab
terhadap aktifitas farmakologis. Sedangkan parameter nonspesifik adalah
segala aspek yang tidak berkaitan dengan efek farmakologis namun
7
Parameter Persyaratan
3. Metode Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan cair yang diperoleh dari mengekstraksi
suatu simplisia dengan menggunakan pelarut yang sesuai. Selanjutnya
pelarut diuapkan dan sisa ekstrak dimanfaatkan sedemikian rupa hingga
memenuhi baku yang telah ditetapkan. Ekstrak cair biasanya
menggunakan pelarut etanol. Tiap ml ekstrak akan mengandung 1 gram
simplisia yang memenuhi syarat. Ekstrak tumbuhan bisa sebagai bahan
awal, bahan antara, atau bahan produk jadi. Ekstrak dinilai sebagai bahan
awal jika digunakan sebagai bahan baku untuk teknologi fitofarmasi
menjadi produk jadi. Ekstrak dinilai sebagai bahan antara jika menjadi
bahan yang masih perlu diproses lagi menjadi fraksi-fraksi ataupun isolat
sebagai campuran dengan ekstrak lain. Ekstrak dinilai sebagai bahan
produk jadi jika ekstrak merupakan sediaan yang siap digunakan oleh
pasien/ konsumen3.
Tahap awal sebelum pembuatan ekstrak adalah pembuatan
simplisia kering (penyerbukan). Proses penyerbukan yang baik akan
semakin efektif dan efisien dalam proses ekstraksi. Saat penyerbukan
dengan menggunakan alat-alat logam dihindari panas yang dihasilkan dari
proses gesekan. Sebab panas yang dihasilkan dikhawatirkan akan
9
Tabung Pemenggal
katoda putar Penguat
nyala monokromator a-c
detektor pembacaan
motor
Bahan bakar oksigen
5. Kromatografi
Kromatografi merupakan suatu teknik pemisahan. Berdasarkan akar
katanya kromatografi dapat memisahkan senyawa yang berwarna. Namun
dewasa ini kromatografi tidak hanya untuk pemisahan senyawa berwarna
namun juga untuk senyawa yang tidak berwarna. Kromatografi
menggunakan dua fase dalam prinsip pemisahannya yaitu fase diam dan
fase gerak. Fase diam dapat berupa padatan maupun cairan. Jika fase diam
berbentuk padatan maka sifat pemisahan yang terjadi adalah serapan.
Sedangkan untuk fase diam yang berbentuk cairan maka sifat pemisahan
yang terjadi adalah partisi. Kromatografi lapis tipis terdiri atas fase diam
padatan dan fase gerak cairan. Sedangkan kromatografi gas terdiri atas
fase diam padatan dan fase gerak gas. Keuntungan dari kromatografi selain
ekonomis, pengerjaannya tidak memakan waktu lama, dan hanya
membutuhkan jumlah sampel yang sedikit16.
13
gas cair (KGC) dan kromatografi gas padat (KGP). Kromatografi gas cair
menggunakan fase diam berupa cairan sehingga solut atau analit akan
terlarut pada fase diam. Mekanisme pemisahan pada kromatografi gas cair
adalah partisi. Kromatografi gas padat menggunakan fase diam berupa
padatan misalnya polimerik sehingga mekanisme pemisahan pada
kromatografi padat adalah adsorbsi13.
Fase gerak pada kromatografi gas disebut sebagai gas pembawa.
Syarat gas pembawa adalah tidak reaktif, murni, dan dapat disimpan dalam
tangki bertekanan tinggi. Terdapat beberapa contoh gas pembawa seperti
helium, nitrogen, hidrogen, argon dan metana. Penentuan gas pembawa
tergantung dengan detektor yang akan digunakan. Misalnya helium cocok
untuk detektor hantar panas, ionisasi nyala, fotometri nyala, dan
termoionik13.
Fase diam pada kromatografi gas terdapat pada kolom. Ada dua
jenis kolom yaitu kolom kemas dan kolom kapiler. Kolom kemas
mengandung fase cair yang tersebar pada permukaan penyangga yang
terdapat pada tabung yang relatif besar. Kolom kapiler memiliki diameter
yang lebih kecil dari kolom kemas dan fase diam dilapiskan pada dinding
kolom atau bercampur dengan penyangga untuk memperbesar luas
permukaan efektif. Semakin sempit diameter kolom pemisahan kolom
akan semakin besar dan puncak kromatogram akan semakin tajam. Jenis
fase diam akan mempengaruhi komponen-komponen senyawa yang
terelusi. Misalnya golongan sampel steroid, pestisida, alkaloid, ester fase
diam yang biasa digunakan adalah metal silikon yang non polar.
Sedangkan untuk Carbowax 20M yang polar, golongan sampel yang biasa
dianalisis adalah alkohol, amina aromatik, dan keton13.
Kromatografi gas dapat memisahkan senyawa-senyawa namun
tidak dapat mengidentifikasi senyawa tersebut. Sehingga seringkali
kromatografi gas digabungkan dengan instrumen lain seperti spektrometri
massa (SM). Spektrometri masa digunakan untuk memisahkan isotop-
isotop unsur dan menentukan massanya. Spektrum masa yang merupakan
intensitas berkas ion pada detektor dibanding masa terhadap muatan (m/e)
15
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
Gambar 3. Kandungan karotenoid di dalam Ipomoea aquatica. (a) Zeaxantin, (b)Lutein,
(c)Neoxantin, (d)β-karoten, (e)violoxantin, dan (f)criptoxantin6.
17
B. Keterangan Empirik
Keterangan empirik yang ingin didapatkan dari penelitian ini adalah nilai
parameter spesifik dan nonspesifik standardisasi ekstrak kangkung darat (Ipomoea
reptans Poir) yang dibandingkan dengan standar yang terdapat dalam BPOM
ataupun acuan lainnya. Pengujian ataupun pemeriksaan persyaratan parameter
standar ekstrak mutlak dilakukan dengan berpegang pada manajemen
3
pengendalian mutu .
BAB III
METODE PENELITIAN
1. Bahan
Kangkung darat di daerah Krajan, Wedomartani, dipanen pada tanggal
16 Februari 2012, etanol 96% teknis, ekstrak kental kangkung darat,
aquabidestilata steril (PT. Ikapharmindo Putramas), etanol, asam nitrat, natrium
klorida 0,9%, plat KLT silica gel 60 F 254, diklorometan, aseton, dietilamin
(Merck), aquades (Laboratorium Teknologi Farmasi Universitas Islam
Indonesia), plate count agar, czapek dox agar, brilliant green lactose bile
broth (Oxoid), n-heksan (J.T. Baker), toluen, petroleum eter (Brataco
Chemika), dan standar β-karoten dari laboratorium kimia farmasi Universitas
Islam Indonesia (Calbiochem).
2. Alat
Timbangan analitik (Mettler toledo), pengaduk kaca, pisau, lemari
pengering, topples kaca, kain putih, kertas saring, penyaring Buchner, rotary
evaporator (Heidolph- L4000), erlenmeyer, gelas beker, gelas ukur, labu ukur,
corong gelas, piknometer, panci, termometer, kruss porselen, pemijar (
Vulcan A-550), instrument Karl Fischer (Mettler toledo V30), inkubator
(Memmert), cawan petri, laminar air flow (Esco airstream), tabung reaksi,
tabung reaksi bertutup, tabung durham, mikropipet, pipet tetes, pipet volum,
instrumen AAS (Perkin-Elmer 5100 PC), instrumen GC-MS (Shimadzu
QP2010SE), Chamber KLT, microsyiringe (Hamilton), instrumen KLT
Densitometri (Camag TLC Scanner 3).
18
19
B. Cara Penelitian
2. Ekstraksi sampel
Sampel terlebih dahulu disortasi dan dicuci dengan menggunakan air
bersih. Selanjutnya sampel dirajang kecil-kecil dan kemudian mulai
dikeringkan dengan memisahkan antara batang dan daun kangkung. Batang
kangkung yang bulat dibelah dua dan dipotong kecil-kecil. Sedangkan untuk
daun kangkung dipotong halus. Lama pengeringan untuk batang ± 2 hari
sedangkan untuk daun membutuhkan waktu ± 1 hari. Setelah kering semua
sampel diserbukkan hingga menjadi simplisia. Kurang lebih 2 kg simplisia
diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi yaitu jenis ekstraksi cara
dingin (suhu kamar 25ºC) yang mengunakan pelarut etanol 96%. Proses
ekstraksi dilakukan pengadukan yang berkala sehingga melakukan
penambahan pelarut setelah penyaringan maserat pertama (remaserasi)3. Proses
ekstraksi dilakukan selama kurang lebih enam hari dengan dua kali remaserasi.
Setelah dihasilkan maserat cair, kemudian dilakukan pemekatan dengan
menggunakan alat rotary evaporator pada suhu ±60ºC dengan kecepatan
60rpm. Lama pemekatan kurang lebih membutuhkan waktu dua jam hingga
menghasilkan ekstrak kental. Selanjutnya ekstrak kental akan diuji parameter
spesifik dan nonspesifik.
20
3. Parameter Spesifik
a. Deksripsi tanaman
Deskripsi tanaman dibimbing oleh tenaga berpengalaman yang
dilakukan secara visual dari buku sumber Flora, Voor De Scholen in
Indonesia karangan DR. C.G.G.J. Van Stenis tahun 1965 dengan
mendeskripsikan nama latin, morfologi tumbuhan, dan nama Indonesia21.
b. Organoleptik
Uji oraganoleptik menggunakan panca indra yang mendeskripsikan
bentuk, warna, bau, dan rasa dari ekstrak3.
c. Pola kromatogram dan pengukuran kadar senyawa marker
Dibuat ekstrak dengan konsentrasi 3% yang menggunakan pelarut
etanol 96%. Fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 F 254 . Sebelum
analisis dilakukan optimasi fase gerak dengan tiga variasi yang terdiri atas
n-heksan:toluen (9:1), n-heksan:diklorometan (9:1)22, dan petroleum
eter:aseton:dietilamin (10:4:1)23. Masing-masing fase gerak dijenuhkan di
dalam chamber KLT. Plat KLT sebelumnya diaktifkan dengan dioven pada
suhu 100º kurang lebih selama satu jam. Senyawa marker yang digunakan
untuk pengujian pola kromatogram adalah β-karoten. Masing-masing
konsentrasi dari standar β-karoten yang disiapkan yaitu 0,5%, 7,5%, dan
1%. Setelah penotolan ekstrak dan standar β-karoten pada plat KLT maka
plat dimasukkan ke dalam chamber untuk dielusi. Setelah dielusi maka
akan dipilih variasi fase gerak yang memberikan pemisahan lebih banyak
pada plat KLT. Untuk pengukuran kadar senyawa identitas di dalam
ekstrak, menggunakan fase gerak yang terbaik dan hasil elusi dimasukkan
ke dalam KLT densitometri untuk diukur nilai AUC dari spot yang
dihasilkan.
4. Parameter Nonspesifik
a. Bobot jenis
Pengukuran bobot jenis menggunakan alat piknometer yang telah
dikeringkan dan dikalibrasi dengan menetapkan bobot piknometer dan
bobot air yang telah dididihkan pada suhu 25ºC. Ekstrak yang telah diatur
21
𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚𝑚
𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏 𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗𝑗 =
𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣𝑣
b. Kadar Air
Pengukuran kadar air dilakukan baik dengan cara titrasi, destilasi,
atau gravimetri3. Cara titrasi menggunakan alat Karl Fischer, yang
menggunakan reaksi reduksi iodin oleh sulfurdioksida dengan adanya air24.
Pada awalnya ekstrak diambil ± 3 ml kemudian ditimbang bobotnya.
Kemudian bobot dan volume ekstrak diatur di dalam alat karl fischer.
Ekstrak dimasukkan ke dalam Karl Fischer dan dilihat persentasi kadar
airnya. Untuk mendapatkan hasil yang presisi dilakukan tiga kali replikasi
pengukuran kadar air3.
c. Kadar Abu
Pengukuran kadar abu terdiri atas dua hal yaitu penetapan kadar
abu total dan penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam.
(1). Penetapan kadar abu total
Ditimbang 3-5 g ekstrak, yang selanjutnya dimasukkan
kedalam kurss porselen kemudian mulai dipijarkan pada suhu
800ºC selama ±4 jam yang kemudian didiamkan semalam.
Pemijaran dilakukan hingga arang habis. Selanjutnya hasil
pijaran ditimbang kembali. Jika cara ini arang tidak dapat
dihilangkan, maka tambahkan air panas dan saring dengan
menggunakan kertas saring bebas abu. Dipijarkan sisa dan
22
𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏 𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎
𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 = 𝑥𝑥 100%
𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏𝑏 𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒𝑒
d. Cemaran Logam
Pengukuran cemaran logam menggunakan alat Spektrofotometri
Serapan Atom (SSA) dengan metode kurva kalibrasi. Dibuat kurva baku
dari timbal (Pb) dan kadmium (Cd). Larutan induk timbal berkonsentrasi
(Pb) 1000 ppm dan larutan induk kadmium berkonsentrasi (Cd) 1000 ppm1.
Pengenceran larutan induk dilakukan secara bertingkat mulai dari 100ppm,
10 ppm , dan menjadi 1 ppm. Konsentrasi larutan baku timbal (Pb) dibuat
dengan seri kadar 0,01ppm, 0,05ppm, 0,1ppm, 0,5ppm. Sedangkan untuk
konsentrasi larutan kadmium (Cd) dibuat dengan seri kadar 0,01ppm,
0,05ppm, 0,1ppm dan 0,2ppm. Konsentrasi larutan sampel dapat diukur
setelah absorbansi sampel ditemukan dan diintrapolasi di dalam kurva
baku.
Ekstrak ditimbang 3 g dan dimasukkan ke dalam kruss porselen
selanjutnya dipijarkan hingga arangnya habis. Selanjutnya ditambahkan
asam nitrat di dalam lemari asam hingga sampel terdekstruksi secara
23
terdapat sembilan tabung yang terdiri atas tiga tabung mengandung sampel
dengan pengenceran 10-2, tiga tabung mengandung sampel dengan
pengenceran 10-3, dan tiga tabung lainnya sebagai kontrol negatif. Semua
prosedur dilakukan secara aseptik di dalam LAF. Sterilisasi alat dan bahan
menggunakan autoklaf pada suhu 121º C selama 30 menit. Kemudian
semua tabung diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam dan dilanjutkan 48
jam, diamati hasil yang diperoleh setelah 48 jam apakah terdapat
gelembung udara3.
h. Uji Sisa Pelarut Etanol
Uji ini dilakukan dengan menggunakan alat GC-MS. Ekstrak pekat
diencerkan hingga menjadi konsentrasi 0,1% dengan menggunakan pelarut
metanol. Selanjutnya sampel diinjeksikan ke dalam alat GC-MS dimulai
dari suhu 70ºC hingga 200ºC. Kemudian adanya gugus etanol dianalisis
melalui similar index dan pola kromatogram yang dihasilkan.
26
Pengambilan
sampel kangkung
Determinasi
Kangkung Darat
(Ipomea reptans )
Ekstraksi dengan
metode maserasi
Pengujian
Bobot jenis
Kadar abu
Organoleptik
Cemaran logam
Cemaran mikroba
Kadar senyawa
marker
Cemaran kapang
dan khamir
Analisis Hasil
C. Analisis Hasil
Ekstrak yang telah didapat diuji parameter spesifik dan nonspesifiknya.
Pengukuran bobot jenis, kadar air, dan kadar abu dilakukan dengan tiga kali
replikasi dan selanjutnya dirata-rata. Pengukuran kadar sisa pelarut menggukan
alat GC-MS. Pengukuran cemaran logam, cemaran mikroba, kapang dan koliform
dibandingkan dengan acuan standar BPOM. Data deskripsi tanaman mengacu
pada buku flora Voor De Scholen in Indonesia. Kadar senyawa identitas dan pola
kromatogram mengacu pada penelitian dan literatur lainnya.
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman adalah sebuah langkah yang digunakan untuk
memastikan identitas sebuah tanaman dengan membandingkan ciri-ciri yang
dimiliki tanaman dengan ciri-ciri tanaman yang telah diketahui identitasnya.
Tujuan dari determinasi ini adalah mencegah kekeliruan tanaman yang akan
digunakan sebagai bahan penelitian. Determinasi tanaman dilakukan di
Laboratorium Biologi Farmasi yang mengacu pada buku Flora, Voor De
Scholen in Indonesia karangan DR. C.G.G.J, Van Stenis tahun 196520.
Determinasi dipandu oleh tenaga yang berpengalaman dengan mulai
mendeterminasikan morfologi tanaman, berupa akar, batang, daun, biji, dan
bunga. Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan
adalah tanaman kangkung darat (Ipomoea reptans Poir.). Uraian
selengkapnya terkait kunci determinasi Ipomoea reptans Poir terlampir pada
lampiran 2. Kunci determinasi kangkung darat adalah sebagai berikut :
1b-2b-3b-4b-6b-7b-9b (golongan 8)
109b-119b-120a-121a-122b-123b (Convolvulaceae)
1b-2b-3b-4b-5b-6b (Ipomoea reptans Poir.)
B. Preparasi sampel
1. Pemanenan dan Perlakuan Pasca Panen
Lokasi pemanenan kangkung bertempat di daerah Krajan,
Wedomartani, Ngamplak, Kabupaten Sleman. Pemanenan dilakukan pada
usia tanaman ±25-30 hari. Waktu pemanenan dipilih pada pagi hari agar
tanaman masih tampak segar dan diharapkan saat itu tanaman memproduksi
metabolitnya secara maksimal1. Setelah pemanenan, kemudian tanaman
dicuci dan disortasi. Tujuan pencucian ini untuk membersihkan tanaman
dari sisa-sisa tanah ataupun kontaminan yang lainnya. Sedangkan tujuan
untuk sortasi adalah memilihan tanaman yang masuk dalam kriteria baik
untuk diekstraksi. Sebelum dikeringkan terlebih dahulu dilakukan
28
29
perajangan untuk batang dan daun tanaman. Perajangan ini bertujuan untuk
memperkecil ukuran tanaman sehingga mempercepat waktu pengeringan.
Rata-rata waktu pengeringan yang diperlukan untuk batang adalah ±2 hari
dan untuk daun adalah ±1 hari. Pengeringan dilakukan di dalam lemari
pengering dengan suhu ±40°C. Di dalam lemari pengering antara batang dan
daun dipisahkan satu sama lain karena mengingat waktu kering antara
keduanya yang berbeda.
Berat basah tanaman kangkung darat ± 100 kg. Saat pengeringan
terdapat ± 20 kg yang tidak dapat digunakan dikarenakan telah terjadi
perubahan warna dan adanya kontaminan sehingga tidak memenuhi kriteria
untuk diekstraksi. Pada akhirnya berat basah tanaman kangkung yang di
gunakan ± 80 kg. Proses pengeringan menyebabkan penyusutan sebesar
10% sehingga total berat kering tanaman kangkung darat ± 8,2 kg.
2. Penyerbukan
Penyerbukan dilakukan dengan menggunakan blender bersih dan
steril. Tujuan dari penyerbukan sebelum ekstraksi adalah untuk
memperkecil ukuran sehingga memperluas daerah kontak antara simplisia
dengan pelarut maserasi. Proses penyerbukan perlu memperhatikan derajat
panas yang dihasilkan dari logam pada blender. Sehingga lama penyerbukan
yang digunakan rata-rata 3-5 menit dari simplisia hingga berbentuk serbuk.
Sebelum maserasi terlebih dahulu dilakukan pengukuran kadar air simplisia
dengan hasil rata-rata ± 10,13%.
C. Ekstraksi sampel
Metode ekstraksi yang digunakan adalah maserasi. Proses maserasi
dilakukakan dua kali remaserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%.
Pemilihan pelarut etanol 96% diantaranya karena memiliki indeks polaritas
yang lebar, ekonomis, pelarut yang umum digunakan, serta relatif aman jika
dibandingkan dengan pelarut lainnya. Sedangkan metode maserasi dipilih
karena lebih sederhana dan menggunakan suhu ruangan. Maserasi
menggunakan 2 kg simplisia yang dilarutkan dengan etanol 96% sebanyak 8,8
liter. Proses maserasi dilakukan selama enam hari dengan dua kali pengulangan
30
D. Parameter spesifik
1. Deskripsi tanaman
Kangkung darat berupa tumbuhan herba berwarna hijau, pada buku-
bukunya keluar akar. Berbunga sejati dengan bunga majemuk berbentuk
panjang atau bunga tunggal. Batang berbentuk bulat, tebal, beruas dan
berongga. Bakal buah gundul dan biji-biji berbulu rapat. Daun bertangkai
panjang, tidak berbagi menyirip dan letaknya berselang-seling. Tumbuhan
bergetah dan memiliki akar serabut. Uraian selengkapnya terkait kunci
determinasi kangkung darat terlampir pada lampiran 2. Dibawah ini adalah
gambar morfologi tumbuhan kangkung darat.
31
2. Organoleptik ekstrak
Pengujian organoleptik ekstrak dilakukan dengan menggunakan panca
indra mendeskripsikan bentuk, warna, bau, dan rasa. Tujuan dari pengujian
ini adalah pengenalan awal dan pemastian secara kualitatif untuk ekstrak
kangkung darat.
Tabel II. Hasil pengamatan uji organoleptik
Paremeter Organoleptik Hasil
Warna Hitam kehijauan
Bau Khas Kangkung
Rasa Asam, pahit
Bentuk Kental
fase gerak yang menunjukkan pemisahan yang banyak adalah fase gerak
petroleum eter:aseton:dietilamin (10:4:1). Sehingga kombinasi fase gerak
inilah yang digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif kandungan
senyawa di dalam esktrak. Hasil kromatogram menunjukkan nilai Rf ekstrak
yaitu 0,2; 0,37; 0,43; 0,48; 0,57; 0,67; dan 0,92 . Nilai Rf 0,92 merupakan
nilai Rf dari β-karoten di dalam ektrak yang merupakan persamaa nilai Rf
dengan standar β-karoten.
Perhitungan kadar β-karoten di dalam ekstrak menggunakan alat
densitometri. Prinsip densitometri adalah interaksi radiasi elektromagnetik
dengan analit atau spot yang dihasilkan. Radiasi elektromagnetik akan
mengukur luas daerah yang dihasilkan dari tiap-tiap spot. Sehingga nilai
absorbansi yang dihasilkan dari densitometri adalah luas daerah. Preparasi
KLT menggunakan fase diam silika GF 254 ukuran 5x10 cm dan fase gerak
petroleum eter:aseton:dietilamin (10:4:1). Sebelum proses elusi, plat KLT
diaktifkan di dalam oven pada suhu 100°C selama ±1 jam. Konsentrasi
ekstrak kangkung yang digunakan sebesar 3% dengan volume penotolan 4
µL. Sedangkan untuk standar β-karoten dibuat konsentrasi 0,5%, 0,75%,
dan 1% dengan volume penotolan masing-masing 15µL. Perhitungan
pembuatan seri kadar standar β-karoten terlampir pada lampiran 4.
Penotolan ekstrak dan standar β-karoten menggunakan microsyiringe. Hasil
elusi memberikan banyak spot pemisahan dari ekstrak itu sendiri. Spot yang
dihasilkan dibaca menggunakan densitometri pada panjang gelombang
maksimal 450nm. Nilai Rf dan luas daerah (AUC) yang dihasilkan terlampir
pada lampiran 5. Hasil elusi kromatografi dapat dilihat pada gambar 7.
33
E. Parameter Nonspesifik
1. Bobot jenis
Parameter ini diujikan dengan menggunakan piknometer. Pengukuran
parameter ini dilakukan tiga kali replikasi. Hasil pengukuran bobot jenis
dapat dilihat pada tabel III.
Tabel III. Hasil perhitungan bobot jenis
Ekstrak Berat ekstrak Volume Kerapatan Bobot jenis
(gram) ekstrak (ml) 𝒎𝒎 (g/ml)
𝝆𝝆 =
𝒗𝒗
I 28,01 24,81 1,13 1,13
II 28,13 24,81 1,13 1,13
III 28,21 24,81 1,14 1,14
Bobot jenis rata-rata (x) 1,13
Standar Deviasi (SD) 0,004
2. Kadar air
Metode yang digunakan untuk mengetahui kadar air ekstrak etanol
kangkung darat adalah dengan alat Karl-Fischer. Prinsip dari metode ini
adalah titrasi. Selama proses titrasi akan terjadi reaksi reduksi iodin oleh
sulfurdioksida dengan adanya air. Reaksi ini akan terus berlangsung sampai
air habis25. Titik akhir titrasi ditentukan secara elektromagnetik dengan
menggunakan teknik penghentian titik akhir yang digambarkan pada
lampiran 7. Kadar air yang terbaca dari ekstrak kangkung darat
sebesar16,40%, 16,48%, dan 16,48%. Nilai ini masuk dalam ketentuan
rentang kadar air untuk ekstrak kental yaitu antara 5%-30%1. Pengukuran
kadar air pada simplisia kering kangkung darat menunjukkan nilai ±
10,13%. Sehingga setelah maserasi dengan etanol 96% dan pemekatan
35
ekstrak dengan rotary evaporator kadar air ekstrak kangkung darat menjadi
16,45 ±0,05%. Hasil pengukuran kadar air dapat dilihat pada tabel IV.
Tabel IV. Hasil pengukuran kadar air
Ekstrak Kadar Air (%)
I 16,48
II 16,40
III 16,48
Kadar air rata-rata (x) 16,45
Standar Deviasi (SD) 0,05
3. Kadar Abu
Pengukuran kadar abu di dalam ekstrak bertujuan untuk memberikan
gambaran kandungan mineral internal dan eksternal yang berasal dari proses
penanaman hingga terbentuknya ekstrak. Dari tiga sampel nilai kadar abu
masing-masing adalah 6,12%, 5,91%, dan 5,88% dengan rata-rata 5,97
±0,13%. Sebuah literatur menunjukkan bahwa kadar abu dalam makanan tidak
melebihi 5% namun ada juga kadar abu yang mencapai 13% seperti serat
daging sapi kering26. Sebuah penelitian tentang kangkung darat menunjukkan
bahwa kadar abu kangkung darat mencapai 13,74%27. Selain pengukuran kadar
abu total, dilakukan juga pengukuran kadar abu tidak larut asam. Kadar abu
tidak larut asam digunakan untuk mengukur kontaminasi permukaan sayuran
dan buah25. Kadar abu tidak larut asam rata-rata 5,44%. Hasil perhitungan
kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam dapat dilihat pada tabel V dan
VI.
respon blanko dan menghitung simpangan baku28. Batas deteksi (LOD) dan
batas kuantitasi (LOQ) timbal untuk instrumen spektrofotometri serapan
atom (SSA) adalah 3,774 x 10-4 ppm dan 1,258 x 10-3 ppm. Kadar timbal
yang terkandung di dalam sampel dapat dilihat pada tabel VII.
Tabel VII. Kadar timbal dalam ekstrak
Sampel Absorbansi Kadar (ppm)
I 0,0002 ND
II -0,0012 ND
III -0,0008 ND
Keterangan : ND (not detected)
b) Analisis Cemaran Kadmium (Cd)
Analisis cemaran kadmium menggunakan standar baku kadmium
dengan seri kadar 0,01ppm, 0,05ppm, 0,1ppm, dan 0,2ppm. Perhitungan
pembuatan kurva baku kadmium terlampir pada lampiran 8. Hasil
Absorbansi yang didapatkan dari standar baku kadmium adalah 0,0001;
0,0009; 0,0124; dan 0,0339. Kurva baku kadmium dapat dilihat pada
gambar 10.
0.03
R² = 0.964
0.02
0.01 0.0124
0 0.00010.0009
-0.01 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25
konsentrasi (ppm)
kadar logam di dalam ekstrak bisa disebabkan oleh beberapa faktor. Faktor
pertama adalah bahwa logam timbal maupun kadmium tidak larut di dalam
pelarut ekstrak yaitu etanol 96%, faktor kedua bahwa usia pemanenan
mempengaruhi kandungan logam, faktor ketiga bahwa pada kebanyakan
tanaman akumulasi logam terbanyak terdapat pada akar sedangkan ekstrak
kangkung darat tidak menggunakan bagian akar, dan faktor keempat adalah
tingginya kandungan air di dalam ekstrak menyebabkan berkurangnya
kandungan logam29,30. Perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi timbal
dan kadmium terlampir pada lampiran 9. Kadar kadmium yang terkandung
di dalam ekstrak ekstrak dapat dilihat pada tabel VIII.
Tabel VIII. Kadar kadmium dalam ekstrak
Sampel Absorbansi Kadar (ppm)
I -0,0123 ND
II -0,0130 ND
III -0,0123 ND
Keterangan : ND (not detected)
5. Cemaran Mikroba
Dalam penetapan parameter ini dilakukan beberapa pengujian diantaranya :
a) Uji Penetapan Angka Cemaran Mikroba
Selama inkubasi ± 24-48 jam dengan suhu 37ºC hasil menunjukan
bahwa dari sebelas cawan petri tidak ada yang ditumbuhi oleh mikroba.
Berdasarkan literatur bila tidak ada pertumbuhan pada semua cawan dan
bukan disebabkan oleh faktor inhibitor, maka angka lempeng total
dilaporkan sebagai kurang dari satu dikalikan faktor pengenceran terendah3.
Gambar hasil penetapan cemaran mikroba terlampir pada lampiran 10. Hasil
penetapan Angka Cemaran Mikroba dapat dilihat pada tabel IX.
Tabel IX. Hasil penetapan angka cemaran mikroba
Hasil pengamatan Petri Disk 1 Petri disk 2
Kontrol negatif 0 0
pengenceran 10-2 0 0
pengenceran 10-3 0 0
pengenceran 10-4 0 0
pengenceran 10-5 0 0
pengenceran 10-6 0 0
39
replikasi dan selanjutnya diambil nilai rata-rata. Di bawah ini adalah tabel hasil
standardisasi ekstrak etanol kangkung darat (Ipomoea reptans Poir).
A. KESIMPULAN
B. SARAN
42
43
DAFTAR PUSTAKA
1. Saifudin, A., Rahayu, V., dan Teruna, H. Y., 2011, Standardisasi Bahan
Obat Alam, Graha Ilmu, Yogyakarta.
8. Bhushan, M.S., Rao C.H. V, Ojha S.K., Vijaykumar M., and Verma A.,
2010, An Analytical Review of Plants for Anti Diabetic Activity with
Their Phytoconstituent & Mechanism of Action, International Journal of
Pharmaceutical Science and Research IJPSR, 1 (1): 29-33.
10. Dasgupta, N., and De B., 2006, Antioxidant Actvity of Some leafy
vegetables of India: A Comparative Study, J. Foodchem, 02 (003) : 1-2.
11. Santosa H.B., 2008, Ragam dan Khasiat Tanaman Obat, Agromedia
Pustaka, Jakarta.
13. Gandjar, I. G., dan Rohman, A, 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka
Pelajar, Yogyakarta, 298-312, 419-428.
44
14. Day, R.A., dan Underwood, A.L., 1998, Quantitative Analysis Sixth
Edition, Dalam Sopyan Iis, Wibi H.H., Simarmata L (Eds.), Analisis
Kimia Kuantitatif, Edisi Keenam, Erlangga, Jakarta, 421-423, 570-571.
15. Khopkar, S.M., 1990, Konsep Dasar Kimia Analitik, UI Press, Jakarta.
17. Rohman, A. dan Gandjar I.G., 2007, Metode Kromatografi untuk Analisis
Makanan, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, 11-13.
19. Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius,
Yogyakarta, 77-80, 155-162.
21. Britton, G., in Jensen, S.L., and Pfander, H. (Eds.), 1995, Carotenoids,
Spectroscopy, Volume 1, IB: Birkhauser Verlag, Berlin, 211.
22. Mendez, D.H. and Mosquera, M. I. M., 1998, Isolation and Identification
of The Carotenoid Capslutein from Capsicum Annuum as
Cucurbitaxanthin, A Journal Agric,Food Chem, 46(10), 4087- 4090.
23. Susilowati, 2008, Isolasi dan Identifikasi Senyawa karotenoid dari Cabai
Merah (Capsicum annuum Linn.), Skripsi, Jurusan Kimia, Fakultas Sains
dan Teknologi, Universitas Islam Negri Malang, Malang.
24. Khomsan, A., 2009, Rahasia Sehat dengan Makanan Berkhasiat, Buku
Kompas, Jakarta, 146.
25. Andarwulan N., Kusnandar F., Herawati D., 2011, Analisis Pangan, Dian
Rakyat, Jakarta, 54-57, 73-77.
26. Fennema, O.R., 1997, Food Chemistry, 3 rd edition, Marcel Dekker, New
York.
29. Kohar, I., Hardjo P.H., dan Lika, I.I., 2005, Studi kandungan Logam Pb
dalam Tanaman Kangkung Umur 3 dan 6 mnggu yang ditanam di Media
yang mengandung Pb, Makara Sains, 9(2) : 56-59.
30. Kohar, I., Hardjo P.H., Jonatan M., dan Agustanti O., 2004, Studi
Kandungan Logam Pb dalam Batang dan Daun Kangkung (Ipomoea
reptans) yang Direbus dengan Penambahan NaCl dan Asam Asetat,
Makara Sains, 8(3): 85-88.
LAMPIRAN
47
4.b. Tanaman menjalar pada buku-bukunya keluar akar. Tabung mahkota paling
panjang 5 cm. Kepala putik dan benang-benang sari tertutup di dalam tabung
5.b. Helaian daun tidak seperti kulit. Dengan ujung yang runcing atau tumpul.
Tidak pernah rompang
6.a. Tanaman tanpa umbi dalam tanah. Batang tebal dan berongga atau seperti
bunga karang. Kadang-kadang mengapung. Bakal buah gundul. Biji-biji berbulu
halus rapat. (Ipomoea reptans Poir.)
50
164,19 𝑔𝑔
% 𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅𝑅 = × 100% = 8,21%
2000 𝑔𝑔
51
A = -1302,68
B = 6145,4
r = 0,992
Y= 6145,4 x -1302,68
55
Lampiran 9. Perhitungan LOD dan LOQ Timbal (Pb) dan Kadmium (Cd)
ekstrak
a. Timbal
No Konsentrasi Pb Absorbansi Nilai hitung (Y-Yi)2
(ppm) (Yi) absorbansi (Y)
1 -0,0380 0,0002 0,000203 9x10-12
2 -0,0590 -0,0012 -0,001194 36x10-12
3 -0,0530 -0,0008 -0,000795 25x10-12
Σ = 7x10-11
𝑦𝑦 2 (𝑌𝑌−𝑌𝑌𝑌𝑌) 2
𝑠𝑠 �𝑥𝑥 � = 𝛴𝛴 = 7 x 10-11 / 1 = 7 x 10-11
𝑛𝑛−2
𝑦𝑦
𝑠𝑠 �𝑥𝑥 � = 𝑆𝑆𝑆𝑆 = 8,366 x 10-6
LOD = 3. SD/b
LOD= 3 x 8,366 x10-6
0,0665
= 3,774 x 10-4
LOQ = 10. SD/b
= 10 x 8,366 x 10-6
0,0665
= 12,580 x 10-4
b. Kadmium
No Konsentrasi Cd Absorbansi Nilai hitung (Y-Yi)2
(ppm) (Yi) absorbansi (Y)
1 -0,0925 -0,0123 -0,012299 1x10-12
2 -0,0925 -0,0123 -0,012299 1x10-12
3 -0,0962 -0,0130 -0,012997 9x10-12
Σ = 11x10-12
𝑦𝑦 2 (𝑌𝑌−𝑌𝑌𝑌𝑌) 2
𝑠𝑠 �𝑥𝑥 � = 𝛴𝛴 = 1,1 x 10-11 / 1 = 1,1 x 10-11
𝑛𝑛−2
𝑦𝑦
𝑠𝑠 �𝑥𝑥 � = 𝑆𝑆𝑆𝑆 = 3,316 x 10-6
A B
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba kontrol negatif (a) background putih (b)
background hitam
A B
-2
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba pengenceran 10 (a) background putih (b)
background hitam
A B
-3
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba pengenceran 10 (a) background putih (b)
background hitam
65
A B
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba pengenceran 10-4(a) background putih (b)
background hitam
A B
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba pengenceran 10-5(a) background putih (b)
background hitam
A B
-6
Gambar. Hasil penetapan angka cemaran mikroba pengenceran 10 (a) background putih (b)
background hitam
66