Metode Kromatografi yang Divalidasi untuk Penentuan Perindopril dan

Amlodipine di Formulasi Farmasi di Hadapan Produk Degradasi mereka

Dua metode kromatografi spesifik, sensitif, dan presisi yang menunjukkan stabilitas telah dikembangkan,
dioptimalkan, dan divalidasi untuk penentuan arginin perindopril (PER) dan amlodipine (AML) dalam
campuran mereka dan di hadapan degradasi Produk mereka. Metode pertama didasarkan pada
kromatografi lapisan tipis (TLC) dikombinasikan dengan penentuan kepadatanmetrik Band. Pemisahan
yang memadai dicapai menggunakan silika gel 60 F254 Pelat TLC dan etil asetat –metanol– toluena –
larutan amonia, 33% (6,5:2:1:0,5 berdasarkan volume), sebagai sistem berkembang. Metode kedua
didasarkan pada kromatografi cair berkinerja tinggi, di mana komponen yang diusulkan dipisahkan pada
kolom analitik C18 fase terbalik menggunakan fase seluler yang terdiri dari penyangga fosfat (pH 2.5,
0.01 M)–asetonitrile– tetrahydrofuran (60:40:0.1% berdasarkan volume) dengan deteksi ultraviolet pada
218 nm. Parameter yang berbeda mempengaruhi metode yang disarankan dioptimalkan untuk pemisahan
maksimum komponen yang dikutip. Parameter kesesuaian sistem dari dua metode yang dikembangkan
adalah juga diuji. Metode yang disarankan divalidasi sesuai dengan pedoman ICH dan berhasil diterapkan
untuk kuantifikasi PER dan AML dalam tablet komersial mereka. Kedua metode juga secara statistik
dibandingkan satu sama lain dan metode referensi tanpa perbedaan kinerja yang signifikan.

Perkenalan

Perindopril (PER), (2S,3aS,7aS)-1-[(2S)-2-[[(1S)-1-(ethoxycarbonyl) butil] amino]-1-oxopropyl]

oktahydro-1H-indole-2-asam kardusylik, adalah inhibitor enzim angiotensin-converting yang digunakan
dalam pengobatan hipertensi dan gagal jantung. Ini juga digunakan untuk mengurangi risiko kejadian
kardiovaskular pada pasien dengan penyakit jantung iskemik stabil (1). PER dikonversi dalam ke dalam
metabolit aktifnya, perindoprilate. Amlodipine (AML), 2-[(2-aminoethoxy) metil]-4-(2-klorohenyl)-1,4-
dihydro6-metil-3,5-pyridinedicarboxylic asam 3-ester ester 5-ester, adalah turunan dihydropyridine
dengan aktivitas kalsium antagonis (1). Ini digunakan dalam pengelolaan hipertensi, stabil kronis angina
pectoris dan prinzmetal varian angina (2).

Baru-baru ini, perindopril arginin telah dipasarkan dalam kombinasi dengan amlodipine besylate dalam
tablet untuk pengobatan hipertensi esensial. Kombinasi ini disarankan untuk pasien yang tekanan
darahnya tidak cukup dikendalikan oleh obat saja, karena telah terbukti unggul dalam menurunkan
tekanan darah systolik dan diastolik jika dibandingkan dengan salah satu rejimen monoterapi. Kombinasi,
dengan demikian juga memiliki pengalaman merugikan tergantung dosis yang jauh lebih sedikit daripada
monoterapi antagonis kalsium dosis tinggi (3).

PER dirumuskan dalam bentuk sediaan dalam dua bentuk garam, yaitu Perindopril Erbumine dan
Perindopril Arginin. Keuntungan dari arginine garam di atas erbumin adalah bahwa ia memberikan
stabilitas tertentu untuk perindopril dan menghambat proses cyclyzation dalam wadah terbuka atau pada
suhu tinggi (4). Sebuah survei literatur mengungkapkan bahwa kedua erbumine perindopril garam dan
amlodipine besylate resmi di Inggris Farmakopoeia (5). Namun, baik perindopril arginin maupun
kombinasi farmasinya dengan amlodipine besylate (Tablet Coveram) resmi di apotekkope apa pun. Survei
literatur rinci menemukan bahwa erbumin perindopril telah ditentukan dalam cairan biologis dan
formulasi farmasi baik dalam campuran biner, campuran enantiomerik atau dalam metabolitnya dengan
teknik yang berbeda seperti kromatografi lapisan tipis (TLC) (6–8), kinerja tinggi kromatografi cair
(HPLC) (9, 10), LC (11, 12), kromatografi gas (GC) (13–15), elektroda selektif potentiometric (16–18),
elektroforesis zona kapiler (CZE) (19–21), biosensor selektif (22–24), spektrofotometri (25, 26) dan
radioimmunoassay (RIA) (27), tetapi tidak ada metode yang dilaporkan untuk analisis arginin perindopril.

Amlodipine besylate telah dihapuskan menggunakan HPLC (28–30), TLC (31–33), elektroforesis kapiler
(CE) (34–36), LC–massa spektrometri (MS) –resonansi magnetik nuklir (NMR), elektrospray ionisasi
(ESI) (37, 38) dan teknik voltammetric (39, 40) baik dalam campuran biner atau enantiometrik. Meskipun
perindopril erbumine dan amlodipine besylate telah dianalisis dengan dua metode dalam campuran biner
(41, 42), tidak ada metode yang dilaporkan telah menjelaskan metode yang menunjukkan stabilitas untuk
penentuan PER dan AML secara serentak dalam tablet bentuk sediaan. Oleh karena itu, tujuan dari
naskah ini adalah untuk menetapkan dan memvalidasi metode yang menunjukkan stabilitas untuk
penentuan kedua senyawa aktif di hadapan produk degradasi. Untuk menetapkan stabilitas-menunjukkan
metode, degradasi paksa PER dan AML dilakukan dalam kondisi stres, dan sampel yang ditekankan
dianalisis dengan menggunakan TLC yang diusulkan dan fase terbalik (RP)-Metode HPLC, yang mampu
memisahkan obat senyawa yang dihasilkan selama studi degradasi paksa.

Eksperimental

Instrumen Sistem kromatografi cair terdiri dari isokratis pompa, Model G1310A (Agilent Technologies,
Santa Clara, CA), detektor panjang gelombang variabel ultraviolet (UV) (Model G1314A, Agilent 1100
Series), injektor Rheodyne, Model 7725 I (Sigma-Aldrich, Taufkirchen bei Mu ̈nchen, Jerman) dilengkapi
dengan loop injektor 20 mL (Agilent Technologies). Fase stasioner adalah 250 4,6 mm yaitu Nucleosil
C18 kolom analitis dari Alltech Associates (Deerfield, IL). The fase seluler adalah larutan penyangga
fosfat (1,74 g dipotassium hidrogen fosfat anhidrat dibubarkan dan diencerkan ke volume 900 mL dengan
air deionisasi, dan disesuaikan dengan pH 2,5 dengan 85% asam fosfat)–asetonitrile – tetrahydrofuran
(60:40:0.1% berdasarkan volume). Ponsel disaring melalui filter membran Millipore 0,45 mm dan diurai
selama 15 menit dalam mandi ultrasonik sebelum digunakan.

Deteksi UV dilakukan pada 218 nm. Sampel disaring juga melalui filter membran 0,45 mm, dan
disuntikkan oleh bantuan jarum suntik analitik Agilent 20 mL. Juga digunakan adalah Camag Linomat 5
autosampler (Muttenz, Swiss), Camag microsyringe (100 mL) dan Camag TLC scanner 3 S/N 130319
dengan perangkat lunak winCATS. Berikut ini persyaratan dipertimbangkan: dimensi celah, 5 0, 2 mm;
kecepatan pemindaian, 20 mm/d; tingkat penyemprotan, 10 s / mL; Data resolusi, 100 mm/langkah.
Instrumen tambahan termasuk pelat TLC pracocokasi, silica gel 60 F254 (20 20 cm, 0,25 mm) (Merck,
Darmstadt, Jerman). Spektrometer massa adalah Shimadzu Qp-2010 (Kyoto, Jepang), yang dioperasikan
pada electron impact (EI) mode pada 70 eV. Spektrofotometer inframerah (IR) adalah Shimadzu 435;
sampel diambil sebagai kalium bromide Cakram. Meteran pH adalah meteran pH/MV/TEMP/ATC
digital, Model 5005 (Instrumen Jenco, San Diego, CA).
Bahan Dan Reagen

Standar Murni

STANDAR PER (99. 68%) dan AML (100,14%) dipasok oleh Servier Egypt Industries (Kairo, Mesir).
Kemurnian mereka dinilai sesuai dengan metode produsen dan pejabat (5) Metode HPLC, masing-
masing.

Formulasi Farmasi

Tablet coveram tersedia dalam beberapa kombinasi kekuatan yang berbeda, termasuk 5/5, 10/10, 5/10 dan
10/5 mg PER dan AML, masing-masing. Mereka diproduksi oleh Servier (Irlandia) Industri Terbatas
untuk Les Laboratories Servier (Prancis). Batch nomor 77597, 376112, 73935 dan 59423 dibeli dari pasar
Mesir.

Sampel Yang Terdegradasi

Baik PER dan AML ditekankan untuk studi degradasi alkali. Solusi disiapkan dengan melarutkan, secara
terpisah, 25 mg bubuk PER dan AML murni dalam 25 mL 0,1 M dan 1 M NaOH, masing-masing, dan
solusinya diisi ulang selama 2 jam di per dan 1 jam untuk AML. Proses degradasi diikuti oleh TLC
menggunakan 33% etil asetat –metanol– toluena – larutan amonia (6,5:2:1:0,5 berdasarkan volume)
sebagai Sistem. Produk degradasi diendapkan pada pH tertentu untuk setiap produk degradasi dengan
mengendalikan pH menggunakan asam klorida, dicuci tiga kali masing-masing dengan 10 mL air suling
dan dikristalkan kembali dari metanol. Degradasi produk disucikan oleh IR dan MS.

Bahan kimia dan reagen

Semua bahan kimia yang digunakan sepanjang pekerjaan ini beralur

nilai, dan pelarut adalah kelas spektroskopi. Ini

termasuk asam klorida, larutan amonia 33%, toluena,

etil asetat, natrium hidroksida, metanol dan kloroform

(El-Nasr Pharmaceutical Chemicals Cairo, Mesir); tetrahydrofuran (THF) dan asetonitrile; HiPerSolv,
kelas HPLC (Merck); asam ophosphoric (85%) (BDH, Poole, Inggris); de-ionisasi

air, bi-suling dari Aquatron Automatic Water Still

A4000 (Bibby Sterillin Staffordshire, Inggris).

Solusi standar

Solusi standar stok baik perindopril arginin maupun amlodipine besylate (2 mg/mL) disiapkan dalam
metanol (untuk
Metode densitometriK TLC) dan 0,1 mg/mL di perangkat seluler

fase untuk metode HPLC.

Solusi standar stok dari produk degradasi alkali

berasal dari degradasi lengkap solusi standar

per dan AML (1 mg/mL) disiapkan dalam metanol (untuk

metode kepadatan TLC) dan 0,1 mg/mL di perangkat seluler

fase untuk metode HPLC.

Semua solusi standar stok baru disiapkan pada hari itu

analisis dan disimpan di lemari es yang akan digunakan dalam 24 jam.

Prosedur

Kondisi kromatografi

TLC dilakukan pada lembaran aluminium TLC 20 10 cm yang diacokasi dengan gel silika 0,25 mm 60
F254; sampel

diterapkan sebagai pita (bandwidth: 4 mm; penspasian: 13,8 mm; 15 mm

dari tepi bawah piring). Pengembangan naik linear dilakukan dalam tangki kromatografi, sebelumnya

jenuh dengan 33% etil asetat–metanol – toluena –amonia

larutan (6,5:2:1:0,5, berdasarkan volume) selama 1 jam pada suhu kamar.

Pelat yang dikembangkan dikeringkan dan dipindai pada 218 nm untuk

PER dan 237 nm untuk AML pada Camag TLC scanner 3 dioperasikan

dalam mode penyerapan, dengan lampu deuterium sebagai sumber

Radiasi.

HPLC dilakukan pada kolom RP-C18 (250 4,6 mm

Yaitu, 5 mm p.s.). Fase seluler terdiri dari penyangga fosfat

(pH 2.5, 0.01 M)–asetonitrile – tetrahydrofuran (60:40:0.1% oleh

volume). Fase seluler difilter melalui 0,45 mm

Filter membran Millipore (Billerica, MA) dan didegass

15 menit dalam mandi ultrasonik sebelum digunakan. Deteksi UV dilakukan pada 218 nm. Sistem ini
dioperasikan pada suhu sekitar. Laju aliran adalah isokratis pada 1 mL / menit. Sampel

juga disaring melalui filter membran 0,45 mm, dan

disuntikkan oleh bantuan jarum suntik analitik Hamilton 20 mL.

Linearitas

Untuk TLC–densitometri, aliquot setara dengan 2 –14 mg PER

dan 1 –4 mg AML dipindahkan dari

solusi standar (2 mg/mL dalam metanol) menjadi dua

rangkaian termos ukur 10 mL, lalu volume masing-masing

sabu-sabu dilengkapi dengan metanol. Dua puluh mikroliter dari setiap solusi diterapkan dalam tiga kali
perjalanan ke pelat TLC dalam bentuk pita

menggunakan aplikator Camag Linomat IV, lalu kromatografi