Roteiro de Prática Laboratorial Microbk

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ROTEIRO DE PRTICA LABORATORIAL

EXPERIMENTO: PREPARAO DE UM MEIO DE CULTURA COM CALDO


VERDE BRILHANTE PARA IDENTIFICAO DE MICROORGANISMOS EM
AMOSTRAS DE GUA

1- INTRODUO
Meios de cultura so frequentemente utilizados em laboratrios. Sua
finalidade fornecer nutrientes para o cultivo de microorganismos. Com o
desenvolvimento da bactria, possvel identific-la atravs do uso de meios
de cultura seletivos. Meios de cultura com essa especificao inibem o
desenvolvimento de alguns grupos de microorganismos e permite assim, o
crescimento de outros. Um exemplo disso o caldo verde brilhante que
usado para o isolamento da Salmonella. um meio seletivo para deteco de
coliformes e coliformes fecais em leite, produtos lacticnios e em outros
alimentos.
Caldo bile verde brilhante 2%
Finalidade de uso:
recomendado para a confirmao de testes presuntivos para organismos
coliformes em anlises bacteriolgicas de gua, alimentos, leite e lacticnios.
Composio em g/L:
Digesto pptica de tecido animal: 10.00 Bile de boi: 20.00
Lactose: 10.00 Verde Brilhante: 0.0133
pH final (a 25C): 7.2 +/- 0.2

2- MATERIAIS
Para execuo do experimento os devidos instrumentos sero necessrios:
1- Balo de fundo chato
2- Tubos de ensaio
3- Banho- Maria
4- Balana analtica
5- Autoclave
6- Caldo bile verde brilhante 2%
7- gua destilada



3- MTODOS
Preparo do meio de cultura:
Seguindo as especificaes das instrues de uso, a referncia na
pesagem est de acordo com o volume do solvente a ser adicionado na
dissoluo.
O padro indicado 40g de verde brilhante para 1000ml de gua,
qualquer variao nos valores massa/volume devem ser proporcionais.
Aps pesagem do verde-brilhante na balana analtica, deve-se
transferir o contedo para o balo de fundo chato. A substncia deve ser
dissolvida adicionando gua destilada em volume cuja proporcionalidade
est definida por padro.
A seguir o material deve ferver em banho-maria para dissolver
totalmente o verde brilhante e evitar a permanncia de grnulos.
Preparo para esterilizao (Autoclave)
Aps aquecimento, distribuir a soluo em tubos de ensaio e isolar o
meio de cultura do ambiente tampando os tubos e o que sobrou no
balo de fundo chato.
Levar o material a autoclave para esterilizao.
Autoclavao: realizada em autoclaves (aparelhos que utilizam
vapor saturado sob presso). Ao esterilizante. Causa a morte
por promover a desnaturao das protenas que constituem os
microrganismos.
- Condies para esterilizao: 121 C por 15 a 30 minutos a 1
atmosfera a mais de presso.
Inoculao das amostras de gua
Ao concluir essa etapa, esperar alguns instantes para os tubos
esfriarem, depois, coletar amostras de gua em diversas fontes para
inoculao nos tubos (deve ser feito em triplicata para cada amostra).
Em cada tubo adiciona-se 1ml de amostra. No inocular a cultura no
balo de fundo chato.
Levar todo o material para a estufa e deixar por um perodo de 48 horas.
Ao trmino desse perodo observar os meios de cultura e anotar os
resultados

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