Bettiol Controle Qualidade 2022 2
Bettiol Controle Qualidade 2022 2
Bettiol Controle Qualidade 2022 2
OBJETIVOS DE
DESENVOLVIMENTO
SUSTENTÁVEL
Foto: Zayame Vegette Pinto
COMUNICADO
TÉCNICO Controle de qualidade e
conformidade de produtos e
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fermentados à base de Bacillus
spp.: proposta metodológica
Jaguariúna, SP
Agosto, 2022
Wagner Bettiol
Marcelo Augusto Boechat Morandi
Zayame Vegette Pinto
Cleusa Maria Mantovanello Lucon
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está projetado para atingir US$ 11.438 os obtidos via fermentação “on farm”
milhões até 2026, com a previsão de uma ou caseira, são os mais utilizados no
taxa anual de crescimento de 14,5% no controle de doenças de plantas no Brasil.
período de 2021 a 2026 (Research and Atualmente, as espécies utilizadas nos
Markets, 2022). No Brasil, de acordo produtos comerciais registrados no
com Bueno et al. (2020), a área sob Mapa à base de Bacillus são: Bacillus
controle biológico de pragas e doenças amyloliquefaciens, Bacillus licheniformis,
com inimigos naturais e antagonistas Bacillus methylotrophicus, Bacillus
foi superior a 30 milhões de hectares, pumilus, Bacillus subtilis e Bacillus
considerando as informações de 2017. velezensis. Ao analisar a distribuição
Esse número coloca o Brasil como o país dessas espécies nos 79 biofungicidas
com a maior área sob controle biológico e bionematicidas à base de Bacillus,
no mundo. Contudo, este número deve registrados até março de 2022 no Mapa,
ter ultrapassado a área de 50 milhões de observa-se que 44,3% dos produtos são
hectares em 2021. à base de Bacillus amyloliquefaciens;
A importância do controle biológico, no 31,6% à base de Bacillus subtilis; 7,6%
Brasil, pode ser avaliada considerando- à base de Bacillus velezensis; 7,6% à
se a progressão do número de produtos base de Bacillus licheniformis; 6,3% à
biológicos registrados no Ministério da base de Bacillus pumilus; e 2,6% à base
Agricultura, Pecuária e Abastecimento de Bacillus methylotrophicus (Agrofit,
(Mapa), que em agosto de 2011 era de 2021). Além do Brasil, essas espécies
27, passando para 137 em meados de são comercializadas em muitos outros
2018, subindo para 200 em março de países (Bettiol et al., 2012; Cawoy et al.,
2019 (Agrofit, 2021). Em dezembro de 2012). Contudo, com o enorme interesse
2021, o número de produtos biológicos das empresas e dos agricultores,
registrados foi superior a 400, que novas espécies de Bacillus deverão
dobrou em um curto espaço de tempo. ser comercializadas brevemente. Há,
Esses dados indicam a importância também, necessidade de se considerar
crescente dos biopesticidas no que existe um grande número de
agronegócio brasileiro. De acordo com produtos registrados no Mapa (Agrofit,
a indústria nacional de produção de 2021) à base de Bacillus thuringiensis
agentes de controle biológico, em 2018 para o controle de pragas.
ocorreu um dos maiores crescimentos Os Bacilii são caracterizados por
de vendas de sua recente história. Estas apresentarem forma de bastonete entre
informações indicam a tendência de 4 a 10 μm de comprimento e 0,15 a 1 μm
adoção crescente desta tecnologia mais
de diâmetro com flagelos que permitem
sustentável pelos agricultores.
sua movimentação e forma endósporo
Os produtos formulados com (estrutura de resistência) (Earl et al.,
bactérias do gênero Bacillus, bem como 2008; Madigan et al., 2016).
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Lote ou amostra:
Data de produção: Data de recebimento:
Nome do responsável:
Contato do responsável:
Data do início da avaliação:
Continua.
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Tabela 3. Continuação.
[ ] Passo 8
Misturar o conteúdo do frasco em agitador de tubo de ensaio, colocando e tirando três vezes do
aparelho. O tubo deve ser retirado quando observar o turbilhonamento da suspensão.
[ ] Passo 9
Tratar termicamente os tubos em banho-maria a 80 ± 2 °C por 12 minutos.
[ ] Passo 10
Resfriar os tubos em banho gelado (água + gelo) por 10 segundos.
[ ] Passo 11
Preparar diluições decimais de cada um dos tubos tratados termicamente. Transferir 1,0 mL do
conteúdo para outro tubo com 9,0 mL de diluente (será obtida a diluição 10-3). Descartar a ponteira
em seguida.
[ ] Passo 12
Homogeneizar o conteúdo em agitador de tubo de ensaio, colocando e tirando três vezes do
aparelho até ser observado o turbilhonamento da suspensão em cada uma das passagens.
[ ] Passo 13
Repetir os passos 10 e 11 utilizando a última diluição preparada, até alcançar a diluição apropriada.
A diluição apropriada para produtos com 1010 UFC/mL ou g é 10-8; para 109 é 10-7 e assim por
diante. Para cada diluição, trocar a ponteira da pipeta. Se não souber a concentração da amostra, a
sugestão é utilizar as diluições de 10-4, 10-5, 10-6 e 10-7.
[ ] Passo 14
Transferir de cada diluição apropriada, com uma micropipeta esterilizada, 100 µL para a superfície
de cinco placas de Petri com meio de cultura. Atenção: as placas e o meio não podem estar com
água condensada, devem estar com a superfície seca.
[ ] Passo 15
O volume transferido da diluição deve ser uniformizado sobre a superfície do meio com uma alça de
Drigalski esterilizada, imediatamente após a transferência. Para cada grupo de cinco placas utilizar
uma alça de Drigalski esterilizada.
[ ] Passo 16
Deixar a amostra ser absorvida pelo meio por 2 minutos antes de inverter as placas e incubar a 37
± 2 °C por 17-20 horas.
[ ] Passo 17
Incubar as culturas a 30 ± 2 ºC até a formação da colônia.
[ ] Passo 18
Contar o número de colônias crescidas e verificar se as colônias formadas são realmente de Bacillus
spp., por meio da visualização da colônia na placa*.
[ ] Passo 19 (Opcional)
Se possível, visualizar em microscópio ótico as células e esporos bacterianos colocando um pouco
do crescimento bacteriano em lâmina de microscopia (preparação padrão de lâminas para visualizar
bactérias). Observar em microscópio em aumento entre 400 a 1.000X (com óleo de imersão).
*As colônias típicas de Bacillus podem ser visualizadas na Figura 2.
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Figura 1. Esquema das diluições e das repetições utilizadas na metodologia para análise da
qualidade de produtos à base de Bacillus. Criado por: Zayame Vegette Pinto
64/2008. A metodologia foi, também, BETTIOL, W.; MORANDI, M. A. B.; PINTO, Z. V.;
avaliada no âmbito no projeto por: Dr. PAULA JÚNIOR, T. J. de; CORRÊA, É. B.; MOURA,
Murillo Lobo Júnior da Embrapa Arroz e A. B.; LUCON, C. M. M.; COSTA, J. de C. do B.;
Feijão, Dr. Trazilbo José de Paula Júnior BEZERRA, J. L. Produtos comerciais à base de
agentes de biocontrole de doenças de plantas.
da Empresa de Pesquisa Agropecuária
Jaguariúna: Embrapa Meio Ambiente, 2012. 155 p.
de Minas Gerais, Dra. Andrea Bittencourt
(Embrapa Meio Ambiente. Documentos, 88).
Moura da Universidade Federal de
Pelotas, Dr. José Luiz Bezerra e Dr. BUENO, V. H. P.; PARRA, J. R. P.; BETTIOL,
W.; VAN LENTEREN, J. C. Biologicalcontrol in
João de Cassia B. Costa da Comissão
Brazil. In: VAN LENTEREN, J. C.; BUENO, V.
Executiva do Plano da Lavoura Cacaueira
H. P., LUNA, M. G.; COLMENAREZ, Y. C. (ed.).
(Ceplac/Cepec). Agradecimentos às Biological control in Latin America and the
sugestões da bióloga Ligia Godoi da Chr. Caribbean: its rich history and bright future. CABI,
Hansen Indústria e Comércio Ltda. p. 1-20, 2020. DOI: https://doi.org/10.1079/97817
89242430.0000.
MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; BENDER, K. UNITED STATES. Food and Drug Administration.
S.; BUCKLEY, D. H.; STAH L, D. A. Microbiologia Good laboratory practices for conducting nonclinical
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Acesso em: 3 jul. 2022.
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www.researchandmarkets.com/reports/5165415/
biopesticides-market-growth-trends-covid-
19?utm_source=MC&utm_medium=Email&utm_
code=mzrsvl929&utm_ss=24&utm_
campaign=1554826+-+Biopesticides+Market+-
+Growth%2c+Trends%2c+COVID-19+Impac
t%2c+and+Forecasts+(2021+-+2026)&utm_
exec=adke277mtd>. Acesso em: 01 jul. 2022.