Com a exceção de um pequeno grupo de

moléculas de RNA com capacidade catalítica

TODOS OS ENZIMAS SÃO PROTEÍNAS

Catalase 1
 Enzimas
§ Os enzimas estão presentes nas células e tecidos e têm
como função aumentar a velocidade das reações
químicas em que participam.

§ Na sua maioria são proteínas globulares (solúveis) que

podem ter diferentes pesos moleculares e serem
monoméricas ou oligoméricas.

§ Os enzimas podem encontrar-se em meio intracelular

(lisossomas, citoplasma, etc.) ou extracelular (sangue,
saliva, etc.)
§ Os enzimas apresentam elevada especificidade.

2
A anidrase carbónica catalisa a seguinte reação:

Com enzima, 105 CO2 são hidratados por segundo

Sem enzima, 1 CO2 é hidratado por 10s
3
 Os enzimas assemelham-se aos
catalisadores químicos por:

• Aumentarem a velocidade das reações

– A velocidade é 106-1012 vezes mais rápida do que sem
catálise
• Baixarem a energia de ativação
• Não serem destruídos pelo efeito da reação
• Não alterarem o equilíbrio químico das reações em que
participam

4
5
 Os enzimas diferem dos
catalisadores químicos por:
• Possuírem velocidades de reação superiores
A velocidade é várias ordens de magnitude superior à
catálise química
• Catalisarem em condições moderadas
Catalisam a temperaturas corporais (aproximadamente 37
ºC) , à pressão atmosférica e a pH neutro (alguns enzimas
catalisam em meios ácidos ou básicos).
• Serem reguláveis
A atividade catalítica pode ser regulada.

6
 Enzimas
Por vezes os enzimas necessitam de cofatores para a sua ação.

APOENZIMA (POLIPÉPTIDO)

HOLOENZIMA
IÕES METÁLICOS

Ligação covalente
GRUPO
COFACTOR PROSTÉTICO

COENZIMAS
Moléculas orgânicas
ou metaloorgânicas
7
8
 Sistema internacional de
classificação (IUBMB)
§ Os enzimas dividem-se em classes e subclasses com
base no tipo de reação que catalisam
§ Os enzimas são designados de acordo com a reação
que catalisam: o nome contém os substratos em
primeiro lugar, seguido pelo tipo de reação e
terminando no sufixo -ase
§ Existem nomes que não seguem esta nomenclatura
(pepsina, tripsina)
ATP + D-glucose ADP + D-glucose-6-fosfato

EC 2.7.1.1 ATP:glucose fosfotransferase

9
 CLASSES DE ENZIMAS

1. Oxi-redutases Ared + Boxid Aoxid + Bred

2. Transferases AB + C A + BC

3. Hidrolases A + H2O B+C

4. Liases A B+C

5. Isomerases Isomero 1 Isomero 2

6. Ligases A + B + ATP AB + ADP

10
 Exemplos de subclasses de
oxidoreductases
• Desidrogenases dador + NAD+ à dador oxidado + NADH + H+

• Reductases dador + NADP+ à dador oxidado + NADPH + H+

• Peroxidases dador + H2O2 à dador oxidado + H2O

• Catalase H2O2 + H2O2 à O2 + 2 H2O

• Oxigenase dador + O2 à dador-o-o-oxidado

• Hidrogenases H2 + aceitador à aceitador-H-H-reduzido

11
 Exemplos de subclasses de
transferases
• Aminotransferases NH2A + B à A + NH2B

• Cinases ATP + A à ADP + A-fosfato

• Fosforilases fosfato + A à H2O + A-fosfato

• Acetiltransferases RCO-A + B à A + RCO-B

• Glicosiltransferases Glícido -A + B à A + glícido -B

12
 Exemplos de subclasses de hidrolases

• Esterases R-COOR’ + H2O à R-COOH + HOR

• Glicosidases Glícido-Glícido+ H2O à Glícido + Glícido

• Peptidases aa - aa + H2O à aa + aa

• Fosfatases R-fosfato + H2O à ROH + fosfato

• Desaminases R-NH2 + H2O à ROH + NH3+

• Ribonucleases Nt - Nt + H2O à Nt + Nt
• Aminoácido –aa
Nucleótido -Nt

13
 Exemplos de subclasses de liases
• Descarboxilases RCOOH à RCH + CO2

• Aldolases RR´-CHO à R +R´-CHO

• Dehidratases/Hidratases RCH2CHOH à H2O + RCH=CHR

14
 Exemplos de subclasses de isomerases
• Racemases L-estereoisomero à D-estereoisomero

• Epimerases Epimero 1 à Epimero 2

• Isomerases cis à trans (e outros)

• Mutases
• X-grupo-R à Y-grupo-R (2-metilR à 3-metilR

Exemplos de subclasses de ligases

• Sintetases

15
 Passos da reação enzimática
§ Ligação do enzima e do substrato, formando um complexo ES
§ Catálise (formação do produto)
§ Libertação do produto ou produtos e retorno do enzima à sua
conformação inicial

16
Hexocinase

17
Unidades de atividade enzimática

18
 Cinética Enzimática

Estuda as reações químicas catalisadas por

enzimas, em especial a velocidade das reações.

19
A velocidade de uma reação pode ser calculada pela
variação da concentração dos produtos ou dos
reagentes por unidade de tempo, em condições ótimas
de temperatura e pH

AàB

20
 Leis diferenciais de velocidade
As velocidades das reações estão relacionadas com as
concentrações dos reagentes através das leis
diferenciais de velocidade

Ordens da reacção

v0 = k [R1]x [R2]y [R3]z …

Constante específica da reação

21
A velocidade da reação enzimática
pode variar com:
§ A concentração dos substratos
§ A concentração do enzima
§ A temperatura
§ O pH
§ A presença de moléculas ativadoras ou inibidoras da reação

22
 Efeito da concentração do enzima

v0 = k [E]

A velocidade é diretamente proporcional

à concentração de enzima, pelo que é
uma cinética de 1ª ordem 23
 Efeito do substrato

V max [S]
V=
Km + [S]
24
O Km é característico de uma reação entre um dado
enzima e um dado substrato.

O valor de Km é igual ao da concentração do

substrato, quando a velocidade é igual a metade da
velocidade máxima.

O Kcat ou turnover mede a velocidade do processo

catalítico.

Turnover = Vmax/[E] (s-1)

25
Se um enzima atua sobre mais do que um substrato, a
relação entre os valores de KM pode ser utilizada como
uma medida da afinidade relativa do enzima para cada
um dos diferentes substratos.

26
 Efeito da temperatura
A diminuição da temperatura
Provoca diminuição da velocidade mas não desnaturação do
enzima.

O aumento da temperatura pode conduzir ao:

• Aumento da velocidade :
O aumento da temperatura aumenta o
movimento das moléculas e
consequentemente a velocidade
das reações enzimáticas.
• Diminuição da velocidade:
O aumento da temperatura afeta a
estabilidade do enzima. Pode ocorrer
devido a desnaturação do enzima. 27
 Efeito do pH
O pH atua na catálise enzimática a três níveis

§ Sobre a reação
– O H+ pode intervir diretamente como substrato ou produto,
pelo que a alteração do pH pode afetar o equilíbrio e a
velocidade da reação.

NAD+ + AH2 à NADH + A + H+

§ Sobre o substrato ou o produto

O H+ pode alterar o estado de ionização do substrato ou do
produto, transformando-o numa molécula diferente com
uma afinidade diferente para o enzima.

28
§ Sobre o enzima
O H+ vai alterar o estado de ionização dos resíduos de
aminoácidos que constituem o enzima, o que conduz a
alterações nas conformações dos enzimas e à modificação das
suas estruturas.

• Dissociação em subunidades
• Alteração do centro ativo (com ganho ou perda de
atividade)
• Perda de estruturas terciárias e/ou secundárias
• Em casos extremos, desnaturação do enzima.

29
Em consequência, a maioria dos enzimas possui uma faixa
estreita de pH onde possui atividade catalítica, com um pH
ótimo de atividade

30
 Inibidores enzimáticos
Inibidores são moléculas ou iões que se associam ao enzima
influenciando a ligação ao substrato.

Irreversíveis
Ligam-se covalentemente ao enzima modificando o centro ativo.
Pode ocorrer por:

Ligação covalente ao centro ativo

Análogos do estado de transição
Metais pesados

Reversíveis
Ligam-se através de ligações não covalentes podendo dissociar-
se facilmente.
Inibidores competitivos, não competitivos, incompetitivos ou
31
mistos.
Inibição por ligação covalente ao centro ativo

32
Inibição por análogos do estado de transição
São compostos inativos que após modificação pelo enzima,
no processo normal de catálise, se tornam inibidores
formando um complexo estável com o enzima.

33
34
Exemplos metais pesados

• Mercúrio Hg
O mercúrio liga-se a grupos sulfidrilo.

R-SH + HgCl2 R-S-Hg-Cl + HCl

Não é especifico para o enzima mas inativa qualquer

enzima com este grupo no centro ativo

• Chumbo Pb
Para além de se ligar a grupos sulfidrilo, pode substituir
outros metais no enzima que funcionam normalmente
como cofatores (por exemplo o Ca2+) inativando-a.

35
Inibições reversíveis

36
FORMA LINEAR DA EQUAÇÃO DE MICHAELIS-
MENTEN (LINEWEAVER – BURK)

37
Inibição competitiva

38
39
40
Inibição não competitivo

41
42
Inibidores Mistos

Inibidores que se ligam ao enzima ou ao complexo ES

em locais distintos do centro ativo, não competindo com
o substrato.

43
44
Moduladores alostéricos

Inibição por feedback 45

As proteínas cinases introduzem um grupo fosfato numa
serina/treonina ou tirosina na proteína alvo. O grupo fosfato
induz uma mudança de conformação.
46
47
Aplicação clínica: enfarte do miocárdio

CPK- CREATINA CINASE; HBDH –DESIDROGENASE DO

HIDROXIBUTIRATO, LDH – LACTATO DESIDROGENASE 48
 Creatina cinase
A creatina cinase (CK) catalisa a transferência reversível do grupo
fosfato do ATP para a creatina originando fosfato de creatina.
Este enzima é dimérico, as subunidades são designadas por M (muscle) e
B (brain) e combinam-se formando três isoenzimas, BB ou CK1, MB ou
CK2 e MM ou CK3.
A CK1 encontra-se em elevadas concentrações no cérebro, pulmão e
intestino. A CK2 é específica do músculo cardíaco e a CK3 existe em
elevadas concentrações no músculo esquelético e coração.
O aumento de CK2 é um indicador de destruição do miocárdio. Em casos
de enfarte agudo do miocárdio a CK2 é libertado na circulação
aproximadamente entre 2 a 12 horas depois das queixas de dor no peito e
normalmente volta aos valores normais depois de 30 horas.

49
 Lactato desidrogenase
A lactato desidrogenase (LDH) é um enzima intracelular
citoplasmático com funções na via glicolítica.
É um enzima tetramérico e apresenta cinco isoenzimas originas da
combinação das quatro subunidades: LDH1 (HHHH), LDH2
(HHHM), LDH3 (HHMM), LDH4 (HMMM) e LDH5 (MMMM).
A subunidade H encontra-se em maiores concentrações no coração e
a M no músculo esquelético.
A LDH é um importante indicador de enfarte de miocárdio
aumentando nas 12 a 24 horas seguintes. Neste caso a LDH1
apresenta valores superiores à LDH2

A combinação do estudo da CK e da LDH confere uma

maior sensibilidade e especificidade no diagnóstico do
enfarte do miocárdio 50