Spectrofotometrie
Spectrofotometrie
Spectrofotometrie
valori
c= =⋅
T
Spectrofotometria = masuratoare cantitativa a spectrelor
de absorbtie / emisie ale unei substante
Absorbtia radiatiei EM:
➔
Apare la orice substanta
➔
Este maxima la o anume lungime de unda (specifica substantei analizate)
Emisia radiatiei EM:
➔
Emisia anumitor lungimi de unda, in functie de molecula, ca rezultat al excitarii
moleculei (transfer de energie)
Analiza cantitativa
➔
Amplitudinea absorbtiei depinde de concentratia
substantei
Determinari de concentratii ADN/ARN
Determinarea densitatii bateriilor intr-o cultura
Screening toxicologic etc
− C d
I= I 0 10
N.B. - pentru gaze, legea se scrie
de obicei in forma exponentiala
I 1
T= = 10
− C d
E= log = −log T
I0 T
T ∈[0, 1] E= C d
E∈0, ∞
E x C cunoscuta
x=
E cunoscuta
UMF Carol Davila – Catedra de Biofizica Spectrofotometrie
Activitate experimentala
Exemplu (Atentie! Nu corespunde cu datele ce se vor obtine la LP!)
Obtinem 3 varfuri de absorbtie, la 415 nm, 500 nm si 570 nm, dupa
cum se vede in figura
Alegem valorile corespunzatoare lungimii de unda de 570 nm (cel
mai mare varf de absorbtie)
λ 2 4 8 x
570 0.75 1.5 3 1.2
Concentratia solutiei
necunoscute va fi (‰):
Ex 8 1.2⋅8
x= ; x=
E8 3
x= 3.2
UMF Carol Davila – Catedra de Biofizica Spectrofotometrie