Numararea

eritrocitelor,
leucocitelor si
trombocitelor
Gheorghe Diana-Cristiana
Anul II-Medicina Generala
UMF Carol Davila
Sangele-Introducere
Sangele-apa
-substante chimice dizolvate
-elemente figurate-eritrocite
-leucocite
-trombocite

Datorita rolului sau de integrare umorala a funtiilor organismului,sangele reflecta

functionarea normal sau patologica a diverselor organe.
Hematopoieza
Prima etapa-embriofetala
-etapa mezoblastica(sap aIII-a – sap aVI-a): eritrocite nucleate cu hemoglobina
embrionara de tip Gowers

-etapa hepatosplenica(sap aVI-a – luna a V-a):are loc in ficat si splina si se produc

eritrocite anucleate care contin hemoglobina fetala

-etapa medulara(din luna aVI-a) :in luna a VIII-a devine principalul sediu al
hematopoiezei
A doua etapa-dupa nastere:
-la nou-nascut si la copil, hematopoieza se desfasoara la nivelul diafizelor
oaselor lungi si a cavitatilor spongioase din oasele late si scurte.
-la adult, hematopoieza se limiteaza la nivelul oaselor scheletului axial

Maduva rosie este activa, functionala, iar cea galbena apare prin
inlocuirea celulelor specializate cu adipocite.

La 20 de ani, inlocuirea este completa, realizandu-se centripet, de la

extremitati spre trunchi.
Hemograma
Numararea, masurarea si clasificarea celulelor sangvine se face cu o categorie de teste
pentru care se foloseste termenul de hemograma (hemoleucograma).

Tabloul sanguin reflecta fidel o serie de boli hematologice si non-hematologice.

Reprezinta atat o metoda de screening, cat si o metoda de diagnostic a pacientului.

Istorie
Primele observatii stiintifice asupra celulelor sangvine au fost posibile in sec al XVII-
lea, datorita inventarii microscopului optic( Antoni van Leeuwenhoeck, 1673).
In a doua jumatate a sec XIX ,au fost construite camere de numarat, numite
hemocitometre.
In 1934 a fost conceput primul si cel mai simplu citometru pentru numararea
automata a elementelor figurate.
In 1949 a fost construit un analizator automat pentru numararea si masurarea
volumetrica a cel sanguine- celoscopul/analizator tip Coulter.
Astazi, in laboratoare, se folosesc citometre care diferentiaza celulele etalate “in sir
indian” prin metoda fluxului laminar.
Toate tipurile de analizoare masoara direct:
•Nr de eritrocite
•Hemoglobina
•Volumul eritrocitar mediu
•Coeficientul de variatie a distributiei eritrocitelor dupa marime
•Nr de leucocite
•Coeficientul de variatie a distributiei leucocitelor
•Diferentierea automata a leucocitelor
•Nr de trombocite
•Coeficientul de variatie a distributiei volumului trombocitar
Ceilalti parametri sunt calculati automat
de ex: hematocritul [nr de eritrocite x(1012/L)x VEM (fl)]/10
Eritrocite
•Forma de disc biconcave
•Diametru de 7µ
•Culoare rosie datorita hemului prezent intracelular
•Durata de viata in circulatie este de 120 zile
•4,5-5 mil/mm3 sg
•nu au nucleu, mitocondrii, reticul endoplasmic, aparat Golgi
Celula Proeritroblasti Hemoglobina
pluripotenta (cel unipotenta)

Eritroblasti bazofili

Eritroblasti policlimatrofili

Eritroblasti oxifili
Pierd nucleul si
reticulul
Diapedeza Circulatia Hematii
endoplasmic Reticulocite
sangvina adulte

In 1-2 zile ,pierd

mitocondriile si aparatul
Golgi
Numarul de reticulocite este un indicator al eficentei eritropoiezei.

Valorile normale: 0,5-2% din hematiile circulante

La pacientii cu anemii se poate face o corectie dupa formula IRt=[Rt(%)xHt(pacient)]/Ht(normal)

Numarul de reticulocite este redus in anemia aplastica sau in patologii care presupun inlocuirea
tesutului hematopoietic cu celule neoplazice(metastaze osoase, leucemii).

Numarul de reticulocite este crescut in anemiile hemolitice, anemiile posthemoragice sau la

initierea tratamentului antianemic.

Factori care stimuleaza eritropoieza :

• Inteleukina 3(factor de crestere pentru toate celulele stem)
• Scaderea presiunii partiale a oxigenului
• Eritropoietina
Eritropoietina este un factor de crestere cu structura glicoproteica, sintetizat preponderant de celulele
fibroblast-like din interstitiul cortexului si al zonei medulare externe renale(90%) si in cantitate mai mica
de celulele Kuffer hepatice(10%).
Stimuleaza sinteza de proeritroblasti si diferentierea acestora in hematii.

Sinteza de eritropoietina e stimulate de:

• Hipoxia locala renala • pH-ul alcalin
• Anemie • PGE2
• Reducerea fluxului sanguine renal • Adenozina
• Hipoxemia datorata unei patologii pulmonare sau • Noradrenalina
determinate de scaderea presiunii partiale a oxigenului • Hormonii tiroidieni
in aerul atmosferic • Hormonii androgeni
• Prezenta unor tipuri de hemoglobina cu afinitate mare
pentru oxigen

Sinteza de eritropoietina este inhibata de:

• Hormonii estrogeni

Eritropoietina umana recombinata se foloseste in clinica pentru tratarea anemiilor asociate insuficientei
renale cronice.
Numararea manuala a eritrocitelor- tehnica de lucru

 Recoltarea sangelui
Se foloseste o pipeta Potain formata din -tub capilar pe care sunt 2 repere: 0,5 si 1
-o portiune dilatata cu o bila de culoare rosie cu rol de
omogenizare a solutiei
-o portiune de cauciuc care se termina cu o piesa prin
care se aspira sangele

 Diluarea hematiilor
Se foloseste solutie Hayem(are calitati de a liza leucocitele si trombocitele si asigura mediu izoton
pentru eritrocite).

 Umplerea camerei de numarat(hematocitometrul de tip Burker)

 Numararea eritrocitelor
Se realizeaza cu ajutorul microscopului optic cu obiectivul de 10x si se numara hematiile aflate in
interiorul a 80 de patrate mici. Se calculeaza numarul de hematii/patrat.
Suprafata patrat: 1/400mm2
Adancime : 1/10mm
Volum patrat: 1/400mm3
Nr de hematii pe mm3 de sange diluat=nr mediu de eritrocite dintr-un patrat x 4000
Nr de hematii/mm3 de sange= nr de hematii /mm3 de sange diluat x 100 sau x 200
Valori normale(variaza in functie de varsta si
sex)
La nou nascut:6x106/mm3
Eritropenie/Anemii-val sub 3mil/mm3
La 5 luni:4x106/mm3
• Presiunea atmosferica crescuta
La femei: 4,7x106/mm3
• Efortul fizic excesiv
La barbate: 5,2x106/mm3 • Anemia aplastica(inlocuirea maduvei
Valorile pot varia cu 300.000/mm3 hematogene cu tesut adipos)
• Anemia cronica simpla(fierul necesar
Eritrocitoza(poliglobulie)-val 8-20mil/mm3 sintezei hemului este blocat in
• Expunerea la mediu hipoxic macrofage)
• Efortul fizic moderat • Anemia feripriva(cantitate scazuta de
• Emotii, hipertermie sau sau situati care fier in organism)
determina descarcarea de adrenalina • Anemie posthemoragica
• Bolile pulmonare care induc • Anemie megaloblastica(deficit de acid
hipoxemie(poliglobuluie secundara) folic si vit B12 )
• Policitemia vera(boala proliferativa a • Anemia hemolitica
maduvei hematogene pe linie eritroida)
 Leucocite
Granulocite
 Neutrofile
 Bazofile
 Eozinofile
Agranulocite
 Monocite(stadiu intermediar al macrofagelor)
 Limfocite - Limfocite B(realizeaza raspunsul imun umoral)
- Limfocite T(raspunsul imun de tip celular)
-Limfocite T CD4/ T helper (secreta cytokine sau interleukine)
-Limfocite T CD8 - Limfocite citotoxice
- Limfocite T supresoare
-Limfocite NK
Numararea manuala a leucocitelor- Tehnica de lucru
 Recoltarea sangelui
Se foloseste o pipeta Potain cu capacitate de 11 volume.

 Diluarea hematiilor
Se foloseste solutie Turk(lizeaza hematiile,iar continutul in albastru de metilen coloreaza nuclei
leucocitelor)

 Umplerea camerei de numarat(hematocitometrul de tip Burker)

 Numararea leucocitelor
Se realizeaza cu ajutorul microscopului optic cu obiectivul de 10x si se numara nucleii leucocitelor
aflate in interiorul a 50 de patrate mari . Se calculeaza numarul de leucocite/patrat.
Suprafata patrat: 1/25mm2
Adancime : 1/10mm
Volum patrat: 1/250mm3
Nr de hematii pe mm3 de sange diluat=nr mediu de eritrocite dintr-un patrat x 250
Nr de hematii/mm3 de sange= nr de hematii /mm3 de sange diluat x 10 sau x 20
Valori normale:
La nastere: 15.000-25.000/mm3 sg
La adult: 5.000-9.000/mm3 sg

Leucocitoza: Leucopenie
• Dupa efort fizic • La varstnici
• Postprandial • Unele infectii virale
• In sarcina(creste numarul de neutrofile) • Postchimioterapie/radioterapie
• La marii fumatori(creste numarul de • In contextul unor situatii care
neutrofile) genereaza pancitopenie
• In perioada de menstruatie(creste
numarul de neutrofile)
• Majoritatea infectiilor bacteriene
• Leucemii
Tehnica de lucru pentru determinarea formulei leucocitare
1. Evoluarea diferentiala automata a leucocitelor poate fi realizata de
analizatoarele hematologice(Cell-Dyn) pe baza a 5 parametri, prin citometrie de
flux cu laser de mare rezolutie.

2. Examenul frotiului de sange periferic: se foloseste microscopul optic cu

obiectivul cu imersie, se numara 100 de leucocite de pe frotiul de sange periferic
colorat May-Grunwald-Giemsa.
Valori normale:

La adult: La copii:
• neutrofile: 60-70%, • neutrofile:30-60%,
• euzinofile: 1-4%, • euzinofile:4%,
• bazofile: 0.5-1%, • bazofile:1%,
• monocite:6-10%, • monocite:4-8%,
• limfocite:25-32%. • limfocite:30-60%.
 Neutrofilele(15µ) contin numeroase enzime in granulatiile citoplasmatice cu rol important in
apararea antibacteriana. Au nucleul polilobat(normal:1 lob =5%, 2 lobi=35%, 3 lobi=40%, 4
lobi=18%, 5 lobi=2%). Cu cat neutrofilul este mai batran cu atat nucleul are mai multi lobi.

Neutrofilie: Neutropenie:
- Infectii acute cu bacterii, fungi si - Reducerea proliferarii medulare a liniei
unele virusuri. granulocitare(iradiere)
- Debutul infarctului miocardic
- Paraneoplazic. - Proliferare medulara crescuta insa cu generare de
- Dupa administrarea de cortizon sau forme imature prin deficit de vitamina B12 si folati.
derivati ai acestuia. - Infectii/inflamatii severe
- Intoxicatia cu plumb, benzen, digitala - Distrugerea masiva a neutrofilelor in
sau mercur hipersplanism, boli autoimune cu formare de
- La fumatori.
- In sarcina. anticorpi anti-leucocitari.
- Idiopatic. - Malnutritie
- Alcoolism
- Administrarea de Piramidon, Cloramfenicol si
fenilbutzona.
Bazofilele au citoplasma bazofila, nucleul in forma de S si granulatii citoplasmatice
specifice care contin : histamina, heparina, serotonina, bradykinin si SRSA.( slow
reacting substance of anaphylaxis).

Sunt implicate in reactiile de tip alergic.

Numarul lor scade dupa administrarea de preparate cortizonice si poate fi crescut

in leucemia granulocitara cronica.
Eozinofilele(15) contin in citoplasma granulatii cu fosfataza alcalina si alte hidrolaze.

Eozinofilia:
-infectii parazitare(trichineloza, echinococoza, teniaza, ascaridioza) sau cu
protozoare(plasmodium, pneumocystis).
-reactii alergice(anafilaxie, urticarie, febra fanului, astm)
-boli dermatologice(exeme, psoriasis, prurigo)
-leucemia cu eozinofile
-ereditar

Numarul de eozinofile se reduce dupa administrarea de preparate cortizonice.

Monocitele sunt cele mai mari celule sangvine(20-40µ), au nucleul reniform si cromatina in
tabla de sah, iar citoplasma este albastru -cenusie.

Monocitoza:
- Mononucleoza infectioasa
- Infectia cu virusul Epstein-Baar
- Leucemia monocitara
- Tuberculoza(limfo-monocitoza).
Limfocitele sunt cele mai mici celule sangvine(6-10µ), prezinta nucleu rotund-ovalar
care ocupa aproape toata celula si citoplasma usor bazofila. Pe frotiul de sange
periferic nu se pot deosebi limfocitele T si B.

Limfocitoza: Limfopenia:
- Leucemia limfatica-cronica. - Distrugerea maduvei hematogene secundare
- Majoritatea infectiilor virale iradierii/chimioterapiei
- Unele infectii bacteriene(sifilis, - Tratament cortizonic
tuberculoza). - Boala Cushing(hipersecretie de hormone
glucocorticoizi)
- Stres acut
Trombocitele
Trombocitele(fragmente celulare cu diametru 2-4µ) sunt desprinse din megacariocitul
rezident in maduva hematogena.

Componente:
• membrana celulara,
• sistem tubular,
• sistem dens tubular,
• granule,
• sistem canalicular de comunicare.

Intervin in mentinerea integritatii endoteliului vascular, au rol in inflamatie si functia

esentiala in hemostaza. Participarea la hemostaza se datoreaza atat fenomenelor de
aderare si agregare cat si eliberarii din granulatie si din sistemul tubular al factorilor
plachetari.
 Numararea trombocitelor-tehnica de lucru
 Recoltarea sangelui
Se foloseste o pipeta Potain pentru eritrocite(dilutia 1/200) sau pentru leucocite(1/20),in
functie de numarul trombocitelor estimate.

 Diluarea hematiilor
Se foloseste oxalat de amoniu(produce liza eritrocitelor) si NaEDTA(impiedica aglutinarea
trombocitelor).

 Umplerea camerei de numarat(hematocitometrul de tip Burker)

 Numararea trombocitelor
Se realizeaza cu ajutorul microscopului optic cu obiectivul de 40x si se numara trombocitele
pe baza refractaritatii lor, aflate in interiorul a 80 de patrate mici. Se calculeaza numarul de
trombocite/patrat.
 Valori normale: 150.000-400.000 /mm3

Trombopenie: Trombocitoza:
- Scaderea productiei medulare(deficit -Esentiala – in trombocitoza
de vitamin b12 si folati, leucemii, esentiala(boala mieloproliferativa), sau
ereditar) asociata altor mieloproliferari(policitemia
- Distrugere crescuta(hipersplenism, vera)
purpura trombotica -Secundara- asociata bolilor inflamatorii,
spelectomie, interventii chirurgicale,
trombocitopenica, sindromul
anemie/hemoragie.
hemolytic-uremic).
- Administrarea unor medicamente:
acid valproic, interferon, inhibitor de
pompa de protoni, heparina.