Curs 1 Tehnici de Biologie Moleculara
Curs 1 Tehnici de Biologie Moleculara
Curs 1 Tehnici de Biologie Moleculara
moleculara
CURS 1
RECOLTARE PRODUSELOR BIOLOGICE
Specimen recoltat – Tampoane de exsudat nazofaringian și faringian recoltate
conform procedurilor standard, descărcate în recipient cu mediu de transport care să
asigure viabilitatea virusurilor
Exsudat nazofaringian – Solicitați pacientului să tușească pentru a mobiliza secrețiile
către faringele posterior. Inclinați spre spate capul pacientului într-un unghi de
aproximativ 70 de grade. Tamponul se introduce cu grijă în narină si se coboară pe
planșeul inferior al acesteia până când se ajunge în nazofarinx. Tamponul se
răsucește de 2-3 ori, după care se extrage ușor. Acesta va fi imersat în recipientul cu
mediu de transport și se închide capacul etanș. În timpul acestei operațiuni pacientul
poate simți o anumită presiune sau discomfort.
Exsudatul faringian se prelevă înainte sau după 4 ore de la toaleta cavităţii bucale
sau ingestia de alimente sau lichide. Se aşează pacientul pe scaun cu faţa spre
sursa de lumină, gâtul în uşoară extensie şi ceafa sprijinită de spătar sau perete. Se
deprimă baza limbii cu apăsătorul şi, în timp ce pacientul pronunţă vocala “a”, se
şterg ferm cu tamponul amigdalele şi peretele posterior al faringelui. Atât la
introducerea cât şi la scoaterea tamponului, se evită atingerea bazei limbii şi a
palatului moale.
Ambele tampoane – nazofaringian si orofaringian – se vor introduce in același
recipient cu mediu de transport.
Stabilitate probă – eșantioanele trebuie procesate și testate cât mai repede. Daca
acest lucru nu este posibil, proba este stabilă refrigerată (2 – 8°C) maxim 5 zile15.
Probele vor fi etichetate corespunzător si vor fi insotite de Formularul de însoțire
probe recoltate de la cazul suspect de COVID-19.
Recomandări pentru determinarea adenovirusurilor ADN din lichide de puncție
Ajută la diagnosticarea infecțiilor cu adenovirus
Specimen recoltat – aspirat nazofaringian, spută, lavaj bronhoalveolar, aspirat
traheal, sânge, LCR, lichid ocular sau alte lichide punctie (8).
Recipient de recoltare – recipient steril
Volum probă – 1 mL (în funcție de specimenul recoltat)
Cauze de respingere a probei – probe transportate neconform
Stabilitate probă – la temperaturi cuprinse între 2-4oC tip de 7 zile (în funcție
de specimenul recoltat)
Polymerase chain reaction (PCR) has now become the method of choice in early and
accurate diagnosis of most infectious diseases, and has become an indispensable
research tool. With this revolutionary, yet relatively inexpensive, molecular genetics
technology, it is possible to generate millions of DNA copies from a single strand of
DNA.
PCR is the abbreviation for “polymerase chain reaction”. PCR is a method used for
amplifying DNA. In April 1983, Kary Mullis stumbled across a process that could make
unlimited numbers of copies of genes now known as PCR. Since then, PCR has become
popular as a diagnostic tool worldwide.
The name “ polymerase chain reaction” is derived from the deoxyribonucleic acid (DNA)
polymerase used to amplify a piece of DNA by in vitro enzymatic replication.
This process is known as a “chain reaction” because the original DNA template is
exponentially amplified in every cycle of replication. The PCR has been extensively
modified and is widely used in molecular biology, microbiology, genetics, diagnostics,
and clinical, forensic and environmental laboratories, besides several other application.
Biologia moleculară a revoluționat tehnologia modernă de diagnosticare în ultimele două
decenii.Reacția în lanț a polimerazei (PCR) a devenit acum metoda de alegere în
diagnosticul precoce și precis al majorității bolilor infecțioase și a devenit un
instrument de cercetare indispensabil. Cu această tehnologie de genetică moleculară
revoluționară, dar relativ ieftină, este posibil să se genereze milioane de copii ADN
dintr-o singură catenă de ADN.PCR este abrevierea pentru „reacția în lanț a
polimerazei”. PCR este o metodă folosită pentru amplificarea ADN-ului. În aprilie
1983, Kary Mullis a dat peste un proces care ar putea face un număr nelimitat de copii
ale genelor cunoscute acum ca PCR. De atunci, PCR a devenit popular ca instrument
de diagnostic la nivel mondial.Denumirea „reacție în lanț a polimerazei” este derivată
din polimeraza acidului dezoxiribonucleic (ADN) folosită pentru a amplifica o bucată
de ADN prin replicare enzimatică in vitro.Acest proces este cunoscut sub numele de
„reacție în lanț”, deoarece șablonul original de ADN este amplificat exponențial în
fiecare ciclu de replicare. PCR a fost modificat pe scară largă și este utilizat pe scară
largă în biologie moleculară, microbiologie, genetică, diagnosticare și laboratoare
clinice, criminalistice și de mediu, pe lângă alte câteva aplicații.
PCR has significantly helped in early commencement of specific interventions for disease
control, and also plays a critical role in understanding disease epidemiology, thereby
unravelling the transmission dynamics of the disease.
The results of PCR are reproducible and comparable between different laboratories, and
hence are globally accepted.
Affordability has further increased its acceptance and utility in developing countries also.
The utility of this technology was amply demonstrated during the influenza pandemic and
outbreaks of emerging viral infections such as SARS, Ebola, MERS CoV, ZIKA and
many other communicable diseases.
Apart from rapid diagnosis of infectious diseases, PCR can be used in a variety of
applications in forensic and medical areas. Likewise, it can be widely used in a variety
of research purposes in the field of molecular genetics.
PCR a ajutat în mod semnificativ la începerea timpurie a intervențiilor specifice pentru
controlul bolii și, de asemenea, joacă un rol critic în înțelegerea epidemiologiei bolii,
dezvăluind astfel dinamica transmiterii bolii.Rezultatele PCR sunt reproductibile și
comparabile între diferite laboratoare și, prin urmare, sunt acceptate la nivel
global.Accesibilitatea și-a crescut și mai mult acceptarea și utilitatea și în țările în curs
de dezvoltare.Utilitatea acestei tehnologii a fost demonstrată pe larg în timpul
pandemiei de gripă și a focarelor de infecții virale emergente, cum ar fi SARS, Ebola,
MERS CoV, ZIKA și multe alte boli transmisibile.Pe lângă diagnosticarea rapidă a
bolilor infecțioase, PCR poate fi utilizat într-o varietate de aplicații în domeniile
criminalistice și medicale. De asemenea, poate fi utilizat pe scară largă într-o varietate
de scopuri de cercetare în domeniul geneticii moleculare
Basic Lab Setup
Unidirectional workflow!
Safety Gloves, Laboratory Coat
Safety Glasses
Biohazard Container
0
Incubator (37 C ± 2 C)
Dedicated Pipettor and Screw-cap Tube Rack,
Multichannel Pipettor and Tips